專利名稱：腫瘤早期診斷用隱形造影材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米造影材料，尤其是涉及一種具有高特異性靶向功能的納米造影材料及其制備方法。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤(癌癥)是嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病之一，到目前為止，人類還沒(méi)有找到治療各種惡性腫瘤的有效方法。公認(rèn)的降低癌癥死亡率的方法是，早發(fā)現(xiàn)、早治療，在癌細(xì)胞擴(kuò)散前對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行有效治療。目前，各類惡性腫瘤的主要診斷技術(shù)只能發(fā)現(xiàn)尺寸大于I厘米的腫瘤，對(duì)更小的腫瘤卻無(wú)能為力，如磁共振成像(MRI) [Biomaterials,2011 ；32 :5167-5176]、計(jì)算機(jī)X射線斷層成像(CT)和正電子發(fā)射斷層成像(PET)。醫(yī)學(xué)造 影劑能提高這些診斷技術(shù)的檢測(cè)靈敏度與空間分辨率，為了實(shí)現(xiàn)對(duì)各種惡性腫瘤的早期檢測(cè)與診斷，需要發(fā)展各類高性能的醫(yī)學(xué)造影劑[Nat. Nanotechnol. ,2010 ；5 :815-821]。第一種商用MRI造影劑是德國(guó)Schering公司H. J. Weinmenn研制開發(fā)的Gd-DTPA,它是二乙三胺五乙酸(DTPA)與 Gd(III)的配合物[Angew.Chem. Int. Edit. ,2010 ；49 1231-1233]。隨后，研究較多的是超順磁性造影劑。超順磁性造影劑的磁矩和磁化率均遠(yuǎn)大于人體組織結(jié)構(gòu)，也遠(yuǎn)大于順磁性螯合物，但因其水溶性極小，只能采用勻漿或膠體的形式給藥。由于此類造影劑多具有趨肝、脾腫瘤的性能且腎毒性小，故倍受人們的重視，工作重點(diǎn)是選擇適當(dāng)?shù)妮d藥介質(zhì)、配方、劑型和制備方法，并進(jìn)行性質(zhì)試驗(yàn)[Biomaterials, 2011 ；32 =4584-4593]。中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所高明遠(yuǎn)研究員課題組用FeCl3 6H20成功地制備了尺寸形貌可控的磁性納米晶體材料，還深入探索了以FeCl3 6H20為單一原料制備Fe3O4納米晶體的機(jī)理，該磁性納米晶體可以很好地應(yīng)用于磁共振成像[Angew. Chem. Int. Ed.,2005 ；44 :123-126];隨后，他們采用“一鍋反應(yīng)法”合成了共價(jià)鍵結(jié)合的磁性MPEG_C00H(monocarboxyl-terminated poly (ethylene glycol))納米晶體，活體大鼠 MRI 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MPEG修飾的磁性納米顆粒具有非常好的生物相容性，作為MRI造影劑具有很大的潛能[Adv. Mater.，2005 ；17 =1001-1005];用一步反應(yīng)制備出的表面修飾有羧基PEG的磁性納米微粒不僅具有優(yōu)異的MRI造影功能，而且表現(xiàn)出較長(zhǎng)的血液循環(huán)時(shí)間和低生物毒性[Adv.Mater.，2006 ；18 :2553-2556]。東南大學(xué)顧寧教授課題組制備了一種具有PLA/PVA雙層聚合物外殼(厚度為50-70nm)的包膜微泡，并成功用其包埋12nm的超順磁性氧化鐵納米粒子(SPION)，顯著提高了包膜微泡的磁化率，體內(nèi)MRI實(shí)驗(yàn)證明了其作為造影劑的良好效果[Biomaterials, 2009 ；30 :3882-3890]。具有超順磁性的納米顆粒由于其獨(dú)特的磁學(xué)和電學(xué)性能、具有大的比表面積、高的化學(xué)穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，在MRI造影劑領(lǐng)域表現(xiàn)出誘人的應(yīng)用前景。近幾年，有研究將靶分子(能靶向作用于癌細(xì)胞的化合物，如單克隆抗體、葉酸和半乳糖胺等配體)與超順磁性氧化鐵納米粒子(SPION)結(jié)合，提高了 SPION對(duì)腫瘤組織的靶向性。例如，東華大學(xué)史向陽(yáng)教授課題組采用熱分解法成功地制備了表面鍍有硅的超順磁性氧化鐵核殼型納米粒子(Fe3O4OSiO2 NPs)，然后將其表面氨化、共價(jià)偶聯(lián)順磁性釓復(fù)合物(Gd-DTPA，DTPA :二乙三胺五乙酸)與精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸寡肽(RGD)，體內(nèi)MRI實(shí)驗(yàn)表明該多功能Fe3O4OSiO2 (Gd-DTPA) -RGD納米粒子能特異性靶向表面表達(dá)有a v 0 3整合素的癌細(xì)胞[Biomaterials, 2011 ；32 :4584-4593]。西班牙薩拉戈薩大學(xué)Miguel-Sancho教授課題組在三甘醇中高溫?zé)峤庖阴１F，制備了水溶性的SPI0N，并在SPION表面偶聯(lián)了一種模型抗體，用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)了抗體-SPION復(fù)合物的免疫反應(yīng)，該研究表明，在SPION表面嫁接一種針對(duì)癌細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體，可以制得一種對(duì)腫瘤組織具有靶向性的MRI造影劑[Chem. Mater. ,2011 ；23 :2795-2802]。新加坡國(guó)立大學(xué)康燕堂教授課題組通過(guò)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法(ATRP)在SPION表面偶聯(lián)了聚甲基丙烯酸縮水甘油酯-聚乙二醇甲基丙烯酸酯共聚物(P(GMA-co-PEGMA) )，PEGMA起到穩(wěn)定納米粒子、延長(zhǎng)其體內(nèi)循環(huán)時(shí)間的作用，通過(guò)GMA來(lái)嫁接能靶向癌細(xì)胞的配體葉酸，從而制得一種能主動(dòng)靶向作用于腫瘤組織的MRI造影劑[Langmuir，2012 ；28 :563-571]。天津大學(xué)常津教授課題組用偶聯(lián)有配體葉酸的聚合物磷脂包裹SPI0N，并進(jìn)一步評(píng)估了其作為靶向型MRI造影劑的效果[Pharmacol. Res. , 2011 ；64 :410-419]。這些研究都通過(guò)祀分子(單克隆抗體或配 體)與SPION的結(jié)合，在提高SPION對(duì)腫瘤組織的靶向性方面做出了貢獻(xiàn)，對(duì)惡性腫瘤的早期診斷具有重要的科學(xué)意義與社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。計(jì)算機(jī)X射線斷層成像(CT)利用人體不同組織對(duì)X射線的透過(guò)率的不同，可以對(duì)人體和組織進(jìn)行成像[Nature Medicine，1996 ;2 :473-475]。CT造影劑的使用更是極大地增加了祀組織與周圍組織的區(qū)分度[Physics in Medicine and Biology, 2002 ；47:3369-3385]。目前的X射線造影劑有包入脂質(zhì)體的碘造影劑[Academic Radiology,2003 ；10 :475-483],鏑-DTPA-右旋糖苷聚合體[Academic Radiology, 2002 ；9 :784-792]，PEG 包裹的碘聚合物[Advanced Drug Delivery Reviews, 2002 ;54 :235-252],突光溴化物[Academic Radiology, 1994 ;I : 151-153],以及連接到聚乙烯殼的碘[AcademicRadiology, 1999 ；6 :61-65]等，其中，基于有機(jī)小分子碘的造影劑的應(yīng)用更為普遍。這是因?yàn)榈饩哂休^高的X射線吸收系數(shù)[Advanced Drug Delivery Reviews, 1999 ；37 159-173] 然而，這些含碘物質(zhì)由于迅速被腎臟清除而使得造影時(shí)間很短，具有腎毒性，而且，X射線會(huì)誘導(dǎo)含碘物質(zhì)電離出碘離子，造成毒性。隨著納米材料技術(shù)和生物納米技術(shù)的發(fā)展，新型基于納米顆粒的CT造影劑有望改善上述缺點(diǎn)[Small，2007 ；3 =333-341]。納米顆粒的尺寸小(I IOOnm),可以進(jìn)入微米尺寸內(nèi)徑的毛細(xì)血管[Journal of Artificial Organs,2005 ；8 :77-84],因此能更多地進(jìn)入組織；而且，由于癌變組織部位毛細(xì)血管的通透性增強(qiáng)[American Journal of Pathology, 2000 ; 156 :1363-1380],納米顆粒可以通過(guò)滲漏作用更多地沉積在癌變組織上，從而更好地對(duì)癌變區(qū)域成像[CT理論與應(yīng)用研究，2009 ；18 15-25]。另外，正電子發(fā)射斷層成像(PET)已廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤的診斷，對(duì)腫瘤患者的診斷價(jià)值也越來(lái)越引起關(guān)注。近20年來(lái)，核素18氟標(biāo)記的2-(氟-18)-2-脫氧葡萄糖(FDG)正電子發(fā)射斷層成像(PET)檢查方法漸漸發(fā)展起來(lái)。FDG-PET可以顯示病灶的代謝特征，有助于區(qū)別病灶的良惡性質(zhì)，且對(duì)腫瘤的分期也有一定的幫助[中華結(jié)核和呼吸雜志，2005 ；28 =221-224]。文獻(xiàn)報(bào)道18F-FDG PET顯像較99m锝-亞甲基二磷酸鹽顯像更靈敏[Radiology, 1999 ；212 :803-809]。相對(duì)于MRI、CT和PET等成像模式而言，光學(xué)成像具有無(wú)輻射、低成本的特點(diǎn)，尤其是近紅外熒光成像，可以部分實(shí)現(xiàn)對(duì)深層組織和器官的探測(cè)和成像，在光學(xué)成像方面具有特定的優(yōu)勢(shì)[Nature Methods, 2009 ;6 :465-469]。光學(xué)成像的核心是突光素造影劑,主要面臨的問(wèn)題包括深層次光的傳輸和采集以及熒光素造影劑的發(fā)光量子效率、抗漂白性、良好的生物相容性和靶向性[Biomaterials，2009 ；30 :5592-5600]。含四吡咯基團(tuán)的近紅外熒光染料(如酞菁)是近年來(lái)關(guān)注的焦點(diǎn)，因具有良好的光物理行為使其在近紅外探針?lè)矫婢哂休^好的應(yīng)用前景[J. Am. Chem. Soc.，2009 ；131 =2432-2433]。在熒光素造影劑的設(shè)計(jì)中，靶向性是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，最為常見(jiàn)的是利用細(xì)胞表面的受體設(shè)計(jì)主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞的給藥系統(tǒng)[高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2011 ；32 :1010-1012]。根據(jù)上述醫(yī)學(xué)造影材料的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，合成對(duì)腫瘤組織具有靶向性的造影材料、減小造影劑的用藥劑量、降低毒性和制備成本是研究的主要趨勢(shì)。目前，靶向造影材料的制備一般是通過(guò)在造影劑上結(jié)合靶分子(單克隆抗體或配體)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的特異性。然而，正常的細(xì)胞表面也存在著非特異性抗原或者受體，這些抗原或受體也能與靶分子(單克隆抗體或配體)結(jié)合，從而影響了各種診斷技術(shù)的檢測(cè)靈敏度與空間分辨率， 因此，發(fā)展出具有更高特異性靶向功能的造影劑是目前迫切需要解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種腫瘤早期診斷用隱形造影材料及其制備方法，所述的隱形造影材料能高特異性靶向輸送至腫瘤部位。一種腫瘤早期診斷用隱形造影材料，由可生物降解的納米球、包埋于所述納米球內(nèi)部的醫(yī)學(xué)造影劑、連接于所述納米球表面的PH敏感型高分子和靶分子構(gòu)成。所述的pH敏感型高分子在pH5. 0 6. 0范圍內(nèi)易于發(fā)生轉(zhuǎn)變，由線形伸展?fàn)顟B(tài)變成收縮狀態(tài)，使得所述的靶分子能夠暴露出來(lái)，同時(shí)對(duì)細(xì)胞具有較小的毒性，所述的PH敏感型分子優(yōu)選為異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物和異丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物中的至少一種，分子量范圍為2k-1000k。本發(fā)明的上述腫瘤早期診斷用隱形造影材料特異性靶向腫瘤細(xì)胞的原理如圖I所示。在正常生理?xiàng)l件下，機(jī)體的PH值在7. 3 7. 4之間，所述的納米球表面的靶分子隱藏在線形伸展?fàn)顟B(tài)的PH敏感型高分子之中，不能與正常細(xì)胞的非特異性抗原或受體發(fā)生相互作用，故該隱形造影材料不能被正常細(xì)胞非特異性攝?。欢谀[瘤組織環(huán)境下，PH值約為5. 5，pH敏感型高分子會(huì)發(fā)生相轉(zhuǎn)變而收縮，使納米球表面的靶分子暴露出來(lái)，與腫瘤細(xì)胞表面的抗原或受體發(fā)生特異性相互作用，隱形造影材料被腫瘤細(xì)胞攝取，從而實(shí)現(xiàn)將造影劑高精準(zhǔn)地靶向輸送至腫瘤部位，提高了檢測(cè)靈敏度與空間分辨率，降低造影劑的用藥劑量、毒副作用和成本。所述的醫(yī)學(xué)造影劑的作用是用來(lái)提高成像分辨率，本領(lǐng)域人員熟知的MRI造影齊U、CT造影劑、PET造影劑或熒光素造影劑都能應(yīng)用于本發(fā)明，為了使得所述的造影劑能順利地包埋于可生物降解納米球(簡(jiǎn)稱納米球)內(nèi)部，造影劑粒徑優(yōu)選為15nm以下。所述的MRI造影劑為具有MRI造影功能的材料，優(yōu)選為T2類MRI造影劑和T1類MRI造影劑，所選材料需要具有良好的水溶性，所述的T2類MRI造影劑進(jìn)一步優(yōu)選為超順磁性氧化鐵納米粒子(SPION)，所述的T1類MRI造影劑進(jìn)一步優(yōu)選為有較大的有效磁矩的Gd3+、Dy3+、Mn2+或Fe3+等小分子順磁性造影劑，或與適當(dāng)?shù)呐潴w形成穩(wěn)定的螯合物的大分子順磁性造影劑,如Gd-DTPA配合物、Gd-DOTA配合物和Gd2O3納米粒子中的至少一種，其中，DTPA為二乙三胺五乙酸，DOTA為1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-N，N'，N"，N-四乙酸。所述的CT造影劑是一種具有CT造影功能的材料，所選材料需要具有良好的水溶性，優(yōu)選為具有CT造影功能的納米粒子或小分子化合物，進(jìn)一步優(yōu)選為金納米顆粒、金納米棒、金納米籠子、碘海醇和BaSO4中的至少一種。所述的PET造影劑為能提高PET成像分辨率的一類化合物，優(yōu)選為18F-FDG (2-(氟-18)-2-脫氧葡萄糖)、64Cu、124I和94C中的至少一種。所述的熒光素造影劑為能提高近紅外光學(xué)分子成像的近紅外熒光染料，優(yōu)選為酞
里冃o所述的納米球作為載體，包埋造影劑實(shí)現(xiàn)緩釋、控釋的作用，對(duì)人體毒害性小，可生物降解的無(wú)毒的天然大分子或人工合成高分子都可以應(yīng)用于本發(fā)明，所用材料優(yōu)選為蛋白質(zhì)、寡肽、多糖、聚醚類或聚酯類高分子中的至少一種，進(jìn)一步優(yōu)選為白蛋白和殼聚糖；所述的造影材料一般通過(guò)靜脈注射的方式使用，粒徑不能太大，所述的納米球的粒徑優(yōu)選為500nm以下，同時(shí)為了在所述的納米球表面連接上所述的pH敏感型高分子和靶分子，粒徑不能太小，所述的納米球的粒徑進(jìn)一步優(yōu)選為50-200nm。所述的靶分子為與腫瘤細(xì)胞有特異性相互作用的化合物，能靶向作用于癌細(xì)胞，優(yōu)選為單克隆抗體、葉酸或半乳糖胺中至少一種。本發(fā)明中，納米球表面所述的pH敏感型高分子與靶分子的數(shù)目比為0. 2-5. 0，此時(shí)，在正常的細(xì)胞組織中，所述的靶分子能夠隱藏在所述的PH敏感型高分子之中，在腫瘤組織環(huán)境中，所述的靶分子能夠暴露出來(lái)。本發(fā)明還提供了所述的腫瘤早期診斷用隱形材料的制備方法，包括如下步驟(I)制備包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球；(2)通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)將所述的靶分子連接到步驟⑴中得到的可生物降解納米球的表面上，得到中間體；(3)在步驟⑵得到的中間體的表面上，采用活性自由基聚合技術(shù)合成所述的pH敏感型高分子，得到所述的腫瘤早期診斷用隱形材料。步驟(I)中包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球可以通過(guò)超聲乳化法或者脫溶劑法制備，其中超聲乳化法又包括油包水法、水包油法和w/0/w復(fù)乳法，下面分別進(jìn)行介紹。油包水法用溶解了親水性醫(yī)學(xué)造影劑和親水性膜材的水溶液作為水相，用溶解了油溶性乳化劑的有機(jī)溶劑作為油相，將水相與油相混合攪拌進(jìn)行粗分散后，再用超聲波細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行乳化，獲得油包水型納米乳液，再在磁力攪拌下向所得納米乳液中加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，除去過(guò)量的交聯(lián)劑和乳化劑即可獲得。水包油法用溶解了疏水性醫(yī)學(xué)造影劑和疏水性膜材的有機(jī)溶劑作為油相，用溶解了水溶性乳化劑的水溶液作為水相，將油相與水相混合攪拌進(jìn)行粗分散后，再用超聲波細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行乳化，獲得水包油型納米乳液，再在磁力攪拌下向所得納米乳液中加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，除去過(guò)量的交聯(lián)劑和乳化劑即可獲得包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球。W/0/W復(fù)乳法用溶解了親水性醫(yī)學(xué)造影劑的水溶液作為水相，用溶解了疏水性膜材和油溶性乳化劑的有機(jī)溶劑作為油相，將水相與油相混合攪拌進(jìn)行粗分散后，再用超聲波細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行乳化，獲得油包水型納米乳液，再將所得油包水型納米乳液加入溶有水溶性乳化劑的水相中進(jìn)行超聲乳化，從而獲得w/0/w型納米乳液，再在磁力攪拌下向所得W/0/W型納米乳液中加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，除去過(guò)量的交聯(lián)劑和乳化劑即可獲得包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球。脫溶劑法將水溶性醫(yī)學(xué)造影劑和納米球材料寡肽或蛋白質(zhì)溶于NaCl水溶液中，然后滴加乙醇，滴加過(guò)程持續(xù)磁力攪拌，當(dāng)溶液變成乳白色懸濁液后加入戊二醛交聯(lián)固化納米球，除去過(guò)量的交聯(lián)劑即可獲得包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球。步驟(2)中所述的共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)為靶分子末端的官能團(tuán)與納米球表面的官能團(tuán)形成共價(jià)化學(xué)鍵的反應(yīng)，例如在EDAC (I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺)的催化下，羧基和氨基形成酰胺基團(tuán)的化學(xué)反應(yīng)。當(dāng)納米球的材料含有羧基時(shí)(如聚谷氨酸、聚天門冬氨酸、含有谷氨酸和天門冬 氨酸的多肽和蛋白質(zhì)、以及含有羧基的多糖等)，可以選擇含有氨基的單克隆抗體或半乳糖胺等配體作為靶分子，然后用EDAC和NHS (N-羥基丁二酰亞胺)活化納米球表面的羧基，再滴加帶有末端氨基的靶分子溶液，使活化的羧基與靶分子的氨基共價(jià)反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵；當(dāng)納米球的材料含有氨基時(shí)(如聚賴氨酸、聚精氨酸、含有賴氨酸和精氨酸的多肽和蛋白質(zhì)、以及含有氨基的多糖等)，可以選擇含有羧基的單克隆抗體或葉酸等配體作為靶分子，然后采取以上方法活化靶分子的羧基后使之嫁接于納米球表面上；對(duì)于既不含有羧基、又不含有氨基的可生物降解材料(如聚醚類和聚酯類高分子)，可以采用共聚法使之帶有一些氨基或者羧基，制作成納米球之后采用以上相同方法可使靶分子嫁接于納米球表面上。步驟(3)所述的活性自由基聚合技術(shù)(又稱為可控聚合)是本領(lǐng)域中比較成熟的技術(shù)，在本發(fā)明中可以按照以下步驟進(jìn)行首先，利用EDAC的催化在步驟⑵得到的納米球表面偶聯(lián)4-氯甲基苯甲酸(CBA)，然后將二乙基二硫代氨基甲酸鈉(NaDC)固定至所述的CBA上的芐位甲基上，最后通過(guò)紫外線引發(fā)單體異丙基丙烯酰胺(NIPAM)、丙烯酸(AA)或甲基丙烯酸(MAA)在納米球表面的活性自由基接枝聚合反應(yīng)。其中，高分子發(fā)生相轉(zhuǎn)變而收縮的PH點(diǎn)可以通過(guò)AA(或MAA)與NIPAM之間的摩爾比控制，當(dāng)所述的摩爾比在I : I 50范圍內(nèi)，可以控制所述的PH敏感型高分子在pH5. 0 6. 0范圍內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)變。高分子的嫁接密度可以通過(guò)納米球表面CBA的偶聯(lián)量控制，而納米球表面CBA的偶聯(lián)量可以通過(guò)CBA的初始濃度和反應(yīng)時(shí)間來(lái)控制；高分子的鏈長(zhǎng)長(zhǎng)度(分子量)可以通過(guò)合成時(shí)單體的濃度和聚合反應(yīng)時(shí)間來(lái)控制。步驟(3)還可以通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)，例如，通過(guò)羧基官能團(tuán)與氨基官能團(tuán)的反應(yīng)將PH敏感型高分子共價(jià)偶聯(lián)至步驟(2)得到的納米球表面之上。首先，pH敏感型高分子的合成方法采用以AIBN為引發(fā)劑的自由基聚合法，此時(shí)采用嵌段共聚法使pH敏感型高分子的一端具有數(shù)個(gè)丙烯胺(或丙烯酸)，從而使得熱敏型高分子的末端具有數(shù)個(gè)氨基(羧基)。然后，在EDAC的催化下，利用羧基與氨基的反應(yīng)將pH敏感型高分子共價(jià)偶聯(lián)至納米球表面之上。同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在(I)通過(guò)pH敏感型高分子的作用，提高了對(duì)造影材料對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向功能；
(2)降低了造影劑的用量，減少了毒副作用和制造成本。


圖I為本發(fā)明所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料特異性靶向癌細(xì)胞的機(jī)理圖；圖2為實(shí)施例I中利用活性自由基接枝聚合技術(shù)在可生物降解納米球表面合成異丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物(PNIPAM-MAA)的反應(yīng)示意圖；圖3為實(shí)施例I中所制備的白蛋白納米球的透射電鏡照片；圖4為實(shí)施例I中所制備的白蛋白納米球(a)和表面偶聯(lián)有pH敏感型聞分子的白蛋白納米球(b)的透射電鏡照片對(duì)比圖； 圖5為實(shí)施例6中所制備的腫瘤早期診斷用隱形造影材料被肝癌細(xì)胞H印G2攝取的定量分析圖；圖6為實(shí)施例11中所制備的腫瘤早期診斷用隱形造影材料被宮頸癌細(xì)胞HeLa攝取的定量分析圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I(I)具有MRI造影功能的超順磁性氧化鐵納米粒子(SPION)的制備將FeCl3 6H20 (5. 4g, 20mmol)和油酸納(18. 3g, 60mmol)溶于 40mL 乙醇、30mL 去離子水和70mL正己烷的混合溶劑中，加熱至70°C反應(yīng)4h，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，除去下層水相，上層油相用30mL去離子水洗滌三次，將正己烷蒸發(fā)之后獲得油酸鐵復(fù)合物的固體。將油酸鐵復(fù)合物(18g,20mmol)和油酸(2. 8g, IOmmol)溶于1_十八燒烯(30g)之中，再將混合物加熱至320°C (升溫速率為3. 3°C /min)，在氬氣保護(hù)下反應(yīng)Ih之后，室溫冷卻溶液，再加入乙醇(250mL)，離心(6000rpm)十分鐘即可獲得粒徑約為14nm的單分散的SPI0N，最后將所得SPION真空干燥，低溫保存(0-4°C )。(2)可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑SPION的包埋配制pH10. 8的IOmM NaCl水溶液，再用該溶液配制濃度為20mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)水溶液，然后向2. OmL BSA水溶液中加入2. OmL無(wú)水乙醇，磁力攪拌IOmin后以2. OmL/min的滴加速度添加4. OmL乙醇(總乙醇添加量與BSA水溶液的體積比為3. 0)，滴加過(guò)程持續(xù)磁力攪拌，乙醇滴加結(jié)束后立即加入8%的戊二醛水溶液(戊二醛-BSA質(zhì)量比為0. 24)交聯(lián)固化24h，然后加入I. OmL甘氨酸(40mg/mL)來(lái)中和過(guò)量的戊二醛，反應(yīng)2. Oh后，對(duì)樣品進(jìn)行離心(20，000Xg，20min)，所得樣品用IOmM NaCl水溶液洗滌兩次，最后冷凍干燥48h即可獲得可生物降解的白蛋白納米球。將第一步制得的MRI造影劑SPION分散至20mg/mL的BSA水溶液中，采用上述同樣方法即可制得包埋有造影劑SPION的白蛋白納米球。(3)白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)在EDAC (I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺)的催化下，利用葉酸的羧基與白蛋白納米球表面的氨基之間的化學(xué)反應(yīng)，在白蛋白納米球表面偶聯(lián)能夠特異性靶向作用于腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等組織的配體葉酸。具體制備方法簡(jiǎn)述如下用磷酸緩沖液(PBS)作溶劑配制500ii g/mL的葉酸溶液，將50mg EDAC溶于IOmL葉酸溶液(冰浴)，然后加入90mL溶于PBS的包埋有SPION的白蛋白納米球懸濁液(5. Omg/mL)，將混合液置于室溫下磁力攪拌，反應(yīng)24小時(shí)，對(duì)樣品進(jìn)行離心(20，000Xg，20min)，所得樣品用PBS洗滌兩次，最后冷凍干燥48h即可獲得表面偶聯(lián)有配體葉酸、且內(nèi)部包埋有SPION的白蛋白納米球。(4)白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成采用活性自由基接枝聚合技術(shù)(可控聚合)在白蛋白納米球(包埋有SPION、且表面偶聯(lián)有配體葉酸)的表面合成一種PH敏感型高分子，即異丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物(PNIPAM-MAA)，如圖2所示。配制5mg/mL的CBA溶液，將50mg EDAC溶于IOmL CBA溶液(冰浴)，然后加入90mL白蛋白納米球懸濁液(5. Omg/mL)，將混合液置于室溫下磁力攪拌，反應(yīng)24小時(shí)，對(duì)樣品進(jìn)行離心(20，000Xg，20min)，將所得樣品分散于IOOmL超純水中，加入3. Og NIPAM和200mg MAA,在400W紫外燈(紫外光波長(zhǎng)300_500nm，峰值350nm)下照射1-5小時(shí)，將所得復(fù)合納米粒子離心、洗滌、凍干，從而制得一種腦癌、腎癌、乳癌、肺 癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。圖3為實(shí)施例I中所制備的白蛋白納米球的透射電鏡照片；圖4為實(shí)施例I中所制備的白蛋白納米球(a)和表面偶聯(lián)有pH敏感型聞分子的白蛋白納米球(b)的透射電鏡照片對(duì)比圖，(b)中納米球表面的印跡圈是納米球表面成功偶聯(lián)PH敏感型高分子的證據(jù)。實(shí)施例2(I)具有MRI造影功能的順磁性Gd-DTPA配合物的制備取3g Gd2O3和7. 3g DTPA混合，加水40mL，加熱并攪拌回流16h，待反應(yīng)物全部溶解后溫度降至室溫，用濾膜濾去雜質(zhì)后，加入120mL丙酮，析出白色凝膠狀沉淀，以丙酮洗滌3次，烘干至恒重，收率為80%。在配合物的合成中，選擇金屬氧化物為原料，分離時(shí)可以將未反應(yīng)的Gd2O3過(guò)濾除去。(2)可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DTPA配合物的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例I相同，即可制得一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例3(I)具有CT造影功能的金納米顆粒的制備第一步，配制IOmM的NaBH4水溶液、IOmM的HAuCl4 3H20水溶液和75mM的CTAB水溶液，將0. 125mL的HAuCl4 3H20水溶液加入4. 375mL的CTAB水溶液混合均勻，然后加A 0. 500mL冰浴的NaBH4水溶液，倒置混合2h制成5mL金種子液。第二步，配制6. 258mM的L-抗壞血酸水溶液，取9. 587mL的L-抗壞血酸水溶液加入0. 213mL的75mM的CTAB水溶液，然后再加入0. 2mL的IOmM的HAuCl4 *3H20水溶液，溫和攪拌，制成IOmL的生長(zhǎng)液，當(dāng)生長(zhǎng)液的顏色從橙色變?yōu)闊o(wú)色，立即加入5 y L的金種子液，倒置混合直至混合液顏色慢慢變紅。最后，將混合液靜置24h。(2)可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑金納米顆粒的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例I相同，即可制得一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例4將實(shí)施例I步驟(I)中MRI造影劑SPION改為PET造影劑，選18F-FDG作為醫(yī)學(xué)造影劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑18F-FDG的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例I相同，即可制得一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢 癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例5將實(shí)施例I步驟(I)中MRI造影劑SPION改為熒光素造影劑，選含四吡咯基團(tuán)的近紅外熒光染料酞菁作為醫(yī)學(xué)造影劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)熒光素造影劑酞菁的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例I相同，即可制得一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作熒光素造影劑。實(shí)施例6將實(shí)施例I步驟(3)中白蛋白納米球表面偶聯(lián)的靶分子改為半乳糖胺，在EDAC的催化下，利用半乳糖胺的氨基與白蛋白納米球表面的羧基之間的化學(xué)反應(yīng)，在白蛋白納米球表面偶聯(lián)能夠特異性靶向作用于肝癌的配體半乳糖胺。具體制備方法簡(jiǎn)述如下用PBS作溶劑配制500 u g/mL的半乳糖胺溶液，將50mg EDAC溶于IOmL半乳糖胺溶液(冰浴)，然后加入90mL溶于PBS的包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的白蛋白納米球懸濁液(5. Omg/mL)，將混合液置于室溫下磁力攪拌，反應(yīng)24小時(shí)，對(duì)樣品進(jìn)行離心(20，000Xg，20min)，所得樣品用PBS洗滌兩次，最后冷凍干燥48h即可獲得表面偶聯(lián)有配體半乳糖胺、且內(nèi)部包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的白蛋白納米球。其他步驟與實(shí)施例I相同，即可制得一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。所制腫瘤早期診斷用隱形造影材料被肝癌細(xì)胞HepG2攝取的定量分析見(jiàn)圖5，其中，SPION-AN-GAL-PM代表內(nèi)部包埋有造影劑SPI0N、表面偶聯(lián)有靶分子GAL和pH敏感型高分子PNIPAM-MAA (PM)的白蛋白納米球(AN) ;SPION-AN代表僅包埋有造影劑SPION的白蛋白納米球(AN)。如圖5所示，IfepG2細(xì)胞在pH5. 5時(shí)攝取SPION-AN-GAL-PM的量比pH7. 4時(shí)攝取SPION-AN-GAL-PM的量要明顯高得多、也明顯高于pH5. 5時(shí)攝取SPION-AN的量。該結(jié)果表明，SPION-AN-GAL-PM在pH5. 5時(shí)能被肝癌細(xì)胞大量特異性攝取，而在pH7. 4時(shí)由于靶分子隱藏于高分子之中而只能被肝癌細(xì)胞少量攝取，這就說(shuō)明PH敏感型高分子能防止靶分子被正常細(xì)胞非特異性攝取。實(shí)施例7將實(shí)施例2中白蛋白納米球表面偶聯(lián)的靶分子改為半乳糖胺，具體制備方法與實(shí)施例6相同，其他步驟與實(shí)施例2相同，即可制得一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例8將實(shí)施例3中白蛋白納米球表面偶聯(lián)的靶分子改為半乳糖胺，具體制備方法與實(shí)施例6相同，其他步驟與實(shí)施例3相同，即可制得一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。
實(shí)施例9將實(shí)施例4中白蛋白納米球表面偶聯(lián)的靶分子改為半乳糖胺，具體制備方法與實(shí)施例6相同，其他步驟與實(shí)施例4相同，即可制得一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例10將實(shí)施例5中白蛋白納米球表面偶聯(lián)的靶分子改為半乳糖胺，具體制備方法與實(shí)施例6相同，其他步驟與實(shí)施例5相同，即可制得一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作突光素造影劑。實(shí)施例11
將實(shí)施例I步驟(5)中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例I相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。所制腫瘤早期診斷用隱形造影材料被宮頸癌細(xì)胞HeLa攝取的定量分析見(jiàn)圖6，其中，SPION-AN-FA-PA代表內(nèi)部包埋有造影劑SPI0N、表面偶聯(lián)有靶分子FA和pH敏感型高分子PNIPAM-AA (PA)的白蛋白納米球(AN)，SPION-AN代表內(nèi)部包埋有造影劑SPION的白蛋白納米球(AN)。如圖6所示，HeLa細(xì)胞在pH5. 5時(shí)攝取SPION-AN-FA-PA的量比pH7. 4時(shí)攝取SPION-AN-FA-PA的量要明顯高得多、也明顯高于pH5. 5時(shí)攝取SPION-AN的量。該結(jié)果表明，SPION-AN-FA-PA在pH5. 5時(shí)能被宮頸癌細(xì)胞大量特異性攝取，而在pH7. 4時(shí)由于靶分子隱藏于高分子之中而只能被宮頸癌細(xì)胞少量攝取，這就說(shuō)明PH敏感型高分子能防止靶分子被正常細(xì)胞非特異性攝取。實(shí)施例12將實(shí)施例2中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例2相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例13將實(shí)施例3中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例3相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例14將實(shí)施例4中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例4相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例15
將實(shí)施例5中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例5相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作熒光素造影劑。實(shí)施例16將實(shí)施例6中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例6相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例17將實(shí)施例7中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸 (AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例7相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例18將實(shí)施例8中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例8相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例19將實(shí)施例9中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例9相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例20將實(shí)施例10中pH敏感型高分子合成時(shí)的單體甲基丙烯酸(MAA)改為丙烯酸(AA)，從而在白蛋白納米球表面合成一種pH敏感型高分子異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA)，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件均與實(shí)施例10相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作熒光素造影劑。實(shí)施例21將實(shí)施例I中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑的包埋方法如下配制0.2% (w/v)的殼聚糖溶液，溶劑為1% (w/v)的醋酸，將醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例I相同)分散至殼聚糖溶液中，用氫氧化鈉將該溶液的PH值調(diào)至4. 7-4. 8 ;配制0. 3% (w/v)的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液；在磁力攪拌下，向0. 5mL的上述殼聚糖溶液中加入0. ImL的TPP溶液，從而制得離子交聯(lián)的包埋了醫(yī)學(xué)造影劑的殼聚糖納米球。其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例I相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例22將實(shí)施例2中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例2相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例2相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例23將實(shí)施例3中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例3相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例3相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例24將實(shí)施例4中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例4相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例4 相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例25將實(shí)施例5中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例5相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例5相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作熒光素造影劑。實(shí)施例26將實(shí)施例11中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例11相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例11相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T2加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例27將實(shí)施例12中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例12相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例12相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例28將實(shí)施例13中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例13相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例13相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例29將實(shí)施例14中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例14相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例
14相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例30
將實(shí)施例15中可生物降解的白蛋白納米球改為殼聚糖納米球，其制備以及對(duì)醫(yī)學(xué)造影劑(與實(shí)施例15相同)的包埋方法與實(shí)施例21相同，其他實(shí)驗(yàn)方法與條件與實(shí)施例
15相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作熒光素造影劑。實(shí)施例31將實(shí)施例2中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例2相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。
實(shí)施例32將實(shí)施例7中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例7相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例33將實(shí)施例12中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例12相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例34將實(shí)施例17中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例17相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例35將實(shí)施例22中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例22相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例36將實(shí)施例27中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成已經(jīng)商業(yè)化的Gd-DOTA配合物，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd-DOTA配合物的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例27相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例37
將實(shí)施例2中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法如下將6. Ommol GdCl3. 6H20加入30mL的DEG中，持續(xù)磁力攪拌，在硅油油浴中140_160°C加熱lh，然后加入30mL含有7. 5mmol NaOH的DEG溶液，在反應(yīng)物完全溶解后，將油浴溫度升溫至180°C，在快速攪拌下反應(yīng)4h?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例2相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作T1加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例38將實(shí)施例7中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法與實(shí)施例37相同?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與 實(shí)施例7相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例39將實(shí)施例12中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法與實(shí)施例37相同。可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例12相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例40將實(shí)施例17中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法與實(shí)施例37相同?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例17相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例41將實(shí)施例22中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法與實(shí)施例37相同?？缮锝到獾臍ぞ厶羌{米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例22相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例42將實(shí)施例27中的MRI造影劑Gd-DTPA配合物改成Gd2O3納米粒子，具體制備方法與實(shí)施例37相同?？缮锝到獾臍ぞ厶羌{米球的制備及其對(duì)MRI造影劑Gd2O3納米粒子的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例27相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作Tl加權(quán)的MRI造影劑。實(shí)施例43
將實(shí)施例3中制備金納米顆粒的還原劑NaBH4改為檸檬酸鈉，具體制備方法如下在IOOmL的圓底燒瓶中加入50mL超純水，在快速磁力攪拌下加入2. 5mL的5mM HAuCl4溶液，在沸水裕中加熱，然后加入0. 5、0. 625、I. 0或2. OmL的檸檬酸鈉溶液(I % )，反應(yīng)在沸水浴中持續(xù)lOmin，最后在室溫下攪拌降溫，即可獲得粒徑分別為38、35、16、14nm的金納米顆粒。更大的金納米顆粒(IOOnm)可以14nm的金納米顆粒為種子進(jìn)行合成，具體制備方法如下取0. 75mL的14nm的金納米顆粒加入97. 25mL超純水中，然后加入I. OmL的I % (w/v)的HAuCl4 *3H20溶液，在室溫下快速攪拌，加入0. 22mL的I %檸檬酸鈉，再加入I. OmL的0. 03M對(duì)苯二酚，攪拌過(guò)夜，從而制得IOOnm的金納米顆粒?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)上述五種不同粒徑的金納米顆粒的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例3相同，即可制得另外四種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診 斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例44 將實(shí)施例8中制備金納米顆粒的還原劑NaBH4改為檸檬酸鈉，具體制備方法與實(shí)施例43相同?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)所制五種不同粒徑的金納米顆粒的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例8相同，即可制得另外四種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例45將實(shí)施例3中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例3相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例46將實(shí)施例8中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例8相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例47將實(shí)施例13中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例13相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例48將實(shí)施例18中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例18相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。
實(shí)施例49將實(shí)施例23中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例23相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例50將實(shí)施例28中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑碘海醇，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)CT造影劑碘海醇的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例28相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。
實(shí)施例51將實(shí)施例3中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例3相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例52將實(shí)施例8中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例8相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例53將實(shí)施例13中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例13相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例54將實(shí)施例18中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例18相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例55將實(shí)施例23中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例23相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例56將實(shí)施例28中CT造影劑金納米顆粒換為已經(jīng)商業(yè)化的CT造影劑硫酸鋇混懸劑，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)CT造影劑硫酸鋇的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例28相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例57將實(shí)施例4中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例4相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例58將實(shí)施例9中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例9相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。
實(shí)施例59將實(shí)施例14中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例14相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例60將實(shí)施例19中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例19相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例61將實(shí)施例24中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例24相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例62將實(shí)施例29中PET造影劑18F-FDG換為64Cu,可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)PET造影劑64Cu的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例29相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例63將實(shí)施例4中PET造影劑18F-FDG換為1241，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例4相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例64將實(shí)施例9中PET造影劑18F-FDG換為1241，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例9相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例65
將實(shí)施例14中PET造影劑18F-FDG換為124I，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例14相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例66將實(shí)施例19中PET造影劑18F-FDG換為1241，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例19相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例67將實(shí)施例24中PET造影劑18F-FDG換為124I，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例24相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例68將實(shí)施例29中PET造影劑18F-FDG換為124I，可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)PET造影劑124I的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例29相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例69將實(shí)施例4中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例4相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例70將實(shí)施例9中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例9相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例71
將實(shí)施例14中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例14相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例72將實(shí)施例19中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例19相同，即可制得另一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例73將實(shí)施例24中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的殼聚糖納米球的制備 及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例24相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例74將實(shí)施例29中PET造影劑18F-FDG換為94Tc,可生物降解的殼聚糖納米球的制備及其對(duì)PET造影劑94Tc的包埋、殼聚糖納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、殼聚糖納米球表面pH敏感型高分子的合成與實(shí)施例29相同，即可制得另一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作PET造影劑。實(shí)施例75將實(shí)施例3中制備金納米顆粒改為金納米籠子，具體制備方法如下將3mL0. 75mM的HAuCl4與3mL 0. 03M的HMT (六亞甲基四胺)混勻，溶液顏色由淺黃變?yōu)橥该?，然后，加?mL 0. 3M的PVP (聚乙烯吡咯烷酮)和IOOyL 0. OlM的AgN03，溫和攪拌之后加入50uL 0. 08M抗壞血酸，將混合溶液攪拌10s，室溫靜置12h之后離心洗滌，即可得到金納米籠子?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)上述金納米籠子的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例3相同，即可制得另外一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例76將實(shí)施例8中制備金納米顆粒改為金納米籠子，具體制備方法與實(shí)施例75相同，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)上述金納米籠子的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例8相同，即可制得另外一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例77將實(shí)施例3中制備金納米顆粒改為金納米棒，具體制備方法如下配制20mL含有
0.25mM HAuCl4和0. 25mM檸檬酸鈉溶液，邊攪拌邊加入0. 6mL冰浴的0. IM NaBH4溶液，加入NaBH4后溶液會(huì)迅速變?yōu)樽仙?，金納米粒子形成。在合成該金納米粒子后2-5h內(nèi)，該金納米粒子可作為金納米種子。配制IOmL含有0. 25mM HAuCl4和0. IM CTAB (十六烷基三甲基溴化銨)的生長(zhǎng)溶液，加入0. 05mL的0. IM新制抗壞血酸溶液，然后再加入0. 025mL的3. 5nm金納米種子，靜置反應(yīng)48h,即可制得金長(zhǎng)徑比(aspect ratio)為3. 0的金納米棒?？缮锝到獾陌椎鞍准{米球的制備及其對(duì)上述金納米棒的包埋、白蛋白納米球表面配體葉酸的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分 子的合成與實(shí)施例3相同，即可制得另外一種腦癌、腎癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌等腫瘤早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。實(shí)施例78將實(shí)施例8中制備金納米顆粒改為金納米棒，具體制備方法與實(shí)施例77相同，可生物降解的白蛋白納米球的制備及其對(duì)上述金納米棒的包埋、白蛋白納米球表面配體半乳糖胺的偶聯(lián)、白蛋白納米球表面PH敏感型高分子的合成與實(shí)施例8相同，即可制得另外一種肝癌早期診斷用隱形造影材料，可用作CT造影劑。
權(quán)利要求
1.一種腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，由可生物降解納米球、包埋于所述的可生物降解納米球內(nèi)部的醫(yī)學(xué)造影劑、連接于所述的可生物降解納米球表面的靶分子和pH敏感型高分子構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的PH敏感型高分子為在pH5. O 6. O范圍內(nèi)發(fā)生收縮的高分子化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的pH敏感型高分子為異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物和異丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物中的至少一種，分子量范圍為2k-1000k。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的醫(yī)學(xué)造影劑為MRI造影劑、CT造影劑、PET造影劑或熒光素造影劑，所述的醫(yī)學(xué)造影劑的粒徑為15nm以下。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的MRI造影劑選自超順磁性氧化鐵納米粒子、順磁性Gd-DTPA配合物、Gd-DOTA配合物和Gd2O3納米粒子中的至少一種； 所述的CT造影劑選自碘海醇、硫酸鋇、金納米顆粒、金納米棒和金納米籠子中的至少一種； 所述的PET造影劑選自18F-FDG、64Cu、124I和94C中的至少一種； 所述的熒光素造影劑為酞菁。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的可生物降解納米球的材料選自寡肽、蛋白質(zhì)、多糖、聚醚類、聚酯類高分子中的至少一種，所述的可生物降解納米球的粒徑為500nm以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的靶分子選自單克隆抗體、葉酸或半乳糖胺中至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料，其特征在于，所述的PH敏感型高分子與靶分子的數(shù)目比為0. 2-5. O。
9.一種權(quán)利要求I 8任一所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)制備包埋有醫(yī)學(xué)造影劑的可生物降解納米球； (2)通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)將所述的靶分子連接到步驟(I)中得到的可生物降解納米球的表面上，得到中間體； (3)在步驟(2)得到的中間體的表面上，采用活性自由基聚合技術(shù)合成所述的pH敏感型高分子，得到所述的腫瘤早期診斷用隱形材料。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料的制備方法，其特征在于，步驟⑶替換為 將pH敏感型高分子通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)連接到步驟(2)得到的中間體的表面上，得到所述的腫瘤早期診斷用隱形造影材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種腫瘤早期診斷用隱形造影材料及其制備方法，采用可生物降解納米球包埋醫(yī)學(xué)造影劑、在納米球的表面偶聯(lián)與腫瘤細(xì)胞有特異性相互作用的靶分子、并接枝pH敏感型高分子。納米球表面的靶分子在正常生理?xiàng)l件下隱藏在pH敏感型高分子之中，不能與正常細(xì)胞的非特異性抗原或受體發(fā)生相互作用，故該隱形造影材料不能被正常細(xì)胞非特異性攝??；而納米球表面的靶分子在腫瘤組織環(huán)境下由于高分子收縮而暴露出來(lái)，與腫瘤細(xì)胞表面的抗原或受體發(fā)生特異性相互作用，從而實(shí)現(xiàn)將隱形造影材料高精準(zhǔn)地靶向輸送至腫瘤部位，降低醫(yī)學(xué)造影劑的用藥劑量、毒副作用和成本。
文檔編號(hào)A61K49/14GK102743768SQ20121023083
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2012年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月3日
發(fā)明者吳愛(ài)國(guó), 沈折玉 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院寧波材料技術(shù)與工程研究所