神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA的新用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥及基因工程領(lǐng)域，提供了BRSK2的siRNA的新用途，即作為胰腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的增敏劑。本發(fā)明還提供了一種抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物主要包括BRSK2的siRNA和絲裂霉素。本發(fā)明還涉及該藥物組合物的應(yīng)用。本發(fā)明的藥物組合物能夠明顯抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的存活，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡。而且BRSK2在人腦和胰腺組織中高豐量特異性表達(dá)，尤其在胰腺癌組織中比癌旁組織中表達(dá)量更高，故本發(fā)明的siRNA有高度的特異性。本發(fā)明為尋找有效的治療胰腺癌的藥物提供一種全新的、特異的、高效的、低副作用的方法和途徑。
【專利說明】神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA的新用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥及基因工程領(lǐng)域，提供了神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA的新用途。本發(fā)明還涉及了含有siRNA與化療藥物的藥物組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]胰腺癌是由胰腺癌上皮惡變形成的惡性腫瘤，雖然其發(fā)病率僅排名惡性腫瘤的第13位，但是其致死率卻在惡性腫瘤中位列第8位。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)，全世界每年有216 000多人確診為胰腺癌。在我國(guó)該癌癥發(fā)病率原很低，但近年也呈現(xiàn)逐年增多的趨勢(shì)，近年來已經(jīng)升至第5位。即使現(xiàn)在有化療、放療、手術(shù)等多種治療方法，胰腺癌的生存率仍然不到5%。因?yàn)樵诔霈F(xiàn)初級(jí)癥狀時(shí)就已經(jīng)伴有轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，所以被確認(rèn)為胰腺癌時(shí)往往已經(jīng)是臨床晚期。因此只有10%的患者能夠接受手術(shù)，而輔助療法基本已經(jīng)無能為力。造成胰腺癌的死亡率基本上與其發(fā)生率持平，五年生存率僅有5%。[0003]AMP-活性相關(guān)激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)是一個(gè)高度保守的絲氨酸蘇氨酸激酶，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)能量下降時(shí)，AMPK經(jīng)由其上游的激酶激活其催化區(qū)域的172位絲氨酸的磷酸化而被活化，因此又被稱為能量變化感應(yīng)器。根據(jù)AMPK激酶結(jié)構(gòu)域氨基酸的保守性，Manning等人將BRSK1，BRSK2, AMPK等13個(gè)激酶歸于AMPK亞家族。BRSK2是由 申請(qǐng)人:最早克隆出來的一個(gè)基因，剛開始認(rèn)為其只在腦中表達(dá)，故起名為腦特異表達(dá)激酶2 (Brain-specific kinase 2，BRSK2)，后來發(fā)現(xiàn)其不僅僅存在于腦里，在胰腺中也有表達(dá)。
[0004]BRSK2是 申請(qǐng)人:利用重要結(jié)構(gòu)域同源篩選策略EST電子克隆技術(shù)，首先克隆并提交的新基因。前期對(duì)BRSK2的研究主要集中在它們?cè)谏窠?jīng)極化、突觸形成以及遞質(zhì)釋放等過程中起到的應(yīng)用。小鼠中BRSK2的同源基因被命名為SAD-A以及SAD-B，單突變BRSK2的動(dòng)物模型表型正常，但是雙突變BRSK2的模型動(dòng)物在出生后兩個(gè)小時(shí)就死亡，解剖發(fā)現(xiàn)動(dòng)物的大腦皮層比正常的要薄得多，并且神經(jīng)元缺乏軸突以及樹突。一個(gè)可能的機(jī)制是SAD通過磷酸化Tau，引起MAPs與微管蛋白結(jié)合不緊密，造成微管蛋白不能正常形成，最終對(duì)軸突形成造成影響。另外有研究表明，人的BRSK2是新的突觸小泡和活動(dòng)機(jī)制相關(guān)蛋白激酶，通過磷酸化其活動(dòng)區(qū)蛋白和小泡引發(fā)因子RM1，達(dá)到調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的功能。最新研究表明，除了在神經(jīng)系統(tǒng)的中心起到調(diào)節(jié)神經(jīng)極化、軸突樹突形成等起到作用，BRSK2還能特異地定位于肌肉神經(jīng)節(jié)點(diǎn)處，控制神經(jīng)遞質(zhì)在周圍神經(jīng)系統(tǒng)的釋放。
[0005]DNR是一種重要的蒽環(huán)類抗癌藥物，分子式C27H29N010，通常稱為柔紅霉素。中文別名:正定霉素，柔毛霉素，紅比霉素，紅保霉素，佐柔比星，紅比脘。外文名=Daunorubicin, Daunomycin, Daunoblastin, Rubidomycin, Rubomycin, Ondena, Cerubidine.外文縮寫:DNR, DRB, DM, F.1.6339, NSC-82151, 13057R.P,本發(fā)明中也簡(jiǎn)稱為 DAU?；瘜W(xué)名:(1S,3S) -3-乙酸基-1,2,3,6,11-/K氧-3,5,12-二羥基-10-甲氧基-6,11- 二氧-1-1 蔡基-3-氨基-2，3，6-三去氧-a-L來蘇六吡喃糖甙。DNR藥物為橙紅色針狀結(jié)晶，易溶于水，其水溶液相當(dāng)穩(wěn)定，在0°C能保存3周，其活力不變，不溶于氯仿、丙酮、乙醚、苯。是Str.peucetius或Str.coeruleorubidus菌種所產(chǎn)生的抗生素,是從我國(guó)河北正定縣土壤中得到的放線菌菌株，故亦名正定霉素。
[0006]阿霉素(DOX)分子式為C27H29N011，分子量 543.49，化學(xué)名稱:(2R, 4S) ~4~ (3-Amino-2,3,6-trideoxy-a -L-lyxo-hexopyranosyloxy)-2-hydroxyacetyl-l, 2, 3, 4-tetrahydro-2, 5, 12-trihydroxy-7-methoxynaphthacene_6，11-dione。通常為桔紅色的凍干粉劑。阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜較廣，對(duì)多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。主要適用于急性白血病，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病及粒細(xì)胞白血病均有效，主要的毒性反應(yīng)有，白細(xì)胞和血小板減少，不同程度的毛發(fā)脫落，心臟毒性，惡心、食欲減退，藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死。
[0007]絲裂霉素，英文名=Mitomycin,分子式:C15H18N405,分子量:334.33，CAS號(hào):50-07-7。結(jié)構(gòu)如下:
[0008]
【權(quán)利要求】
1.神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的SiRNA的一種用途，其特征在于，神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA是胰腺癌細(xì)胞對(duì)藥物的增敏劑。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物是柔紅霉素、絲列霉素或者阿霉素。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA的序列如SEQ ID NO I或者SEQ ID NO 3所示。
4.一種增強(qiáng)體外胰腺癌細(xì)胞對(duì)絲裂霉素敏感性的方法，其特征在于，在胰腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在對(duì)胰腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入絲裂霉素之前，加入神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA。
6.一種抑制胰腺癌細(xì)胞增殖的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA和絲裂霉素。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA與絲裂霉素的比值不多于1:50，摩爾比。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物含有藥學(xué)上有效量的神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的抑制劑和藥學(xué)上有效量的絲裂霉素以及藥學(xué)上可接受的載體。
9.權(quán)利要求6所述的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于，將該藥物組合物用于抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，在胰腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入神經(jīng)分化相關(guān)基因BRSK2的siRNA和絲裂霉素，能夠明顯促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡進(jìn)程。
【文檔編號(hào)】A61K31/713GK103536933SQ201210238706
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月10日
【發(fā)明者】余龍, 王穎黎, 袁健, 郭澤坤, 李如偉 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)