專利名稱：一種麥冬多糖的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種麥冬多糖及其制備方法，屬于中藥制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
麥冬為百合科植物Ophiopogon japonicus (L. f) Ker-gawl.的干燥塊根。麥冬在我國(guó)有著悠久的藥用歷史，主要含有麥冬主要化學(xué)成分為留體皂苷、多糖，還有高異黃酮類、氨基酸等，這些成分共同起作用使麥 冬具有廣泛的藥理作用，主要表現(xiàn)為抗心肌缺血和心肌梗塞作用；免疫調(diào)節(jié)作用；降低血糖作用；抗腫瘤作用等。而大部分研究表明起主要作用的是麥冬皂苷和多糖，國(guó)內(nèi)外對(duì)麥冬的活性成分的提取工藝和藥效研究始終非?；钴S，特別是對(duì)于麥冬皂苷的報(bào)道多見(jiàn)，但是今年來(lái)隨著分離、分析手段的提高，對(duì)于麥冬多糖的研究也取得了較大的進(jìn)展。麥冬多糖為麥冬的活性成分。研究表明麥冬多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能及增強(qiáng)化療藥物抗腫瘤作用，對(duì)腫瘤有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)表明，麥冬多糖能誘生腫瘤壞死因子和干擾素-Y，對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷和抑制作用。腫瘤壞死因子是由激活的巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生的多功能蛋白分子，在機(jī)體內(nèi)起著重要的生理作用。在體內(nèi)腫瘤壞死因子可以通過(guò)三種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用直接殺傷腫瘤細(xì)胞；作用于腫瘤血循環(huán)，導(dǎo)致腫瘤組織血供減少,從而影響腫瘤的生長(zhǎng)；激活機(jī)體免疫系統(tǒng)的抗腫瘤作用。同時(shí)，腫瘤壞死因子還可介導(dǎo)炎性過(guò)程，減少網(wǎng)膜組織間皮細(xì)胞溶纖維蛋白活性，進(jìn)而使網(wǎng)膜表面纖維蛋白增多，減少組織外滲。干擾素是細(xì)胞在受到刺激物作用后合成并釋放出的蛋白性淋巴因子，其作用為直接抗病毒作用；增強(qiáng)主要組織相容性抗原和腫瘤相關(guān)抗原的表達(dá)；增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NK)的細(xì)胞毒作用；增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒作用；直接的抗細(xì)胞增值作用和抗血管生成作用。同時(shí)麥冬多糖能增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞活性，提高了機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，而有利于抗腫瘤作用的發(fā)揮。其次，麥冬多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，可以用于糖尿病等。麥冬多糖具有顯著增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系的功能，麥冬多糖可明顯增加巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)。麥冬多糖能促進(jìn)抗體和補(bǔ)體的形成，可以顯著增加血清補(bǔ)體和血清IgG的含量。專利200710040543. 6公開(kāi)了一種麥冬多糖的制備方法，其提純方法為
A)取干燥麥冬塊根，壓扁，用8-12倍量水提3次，合并水提液，并將其減壓濃縮至
O.5-lg/ml,加入75%-95%乙醇至含醇量達(dá)60%_80%，靜置過(guò)夜，傾去上清液，沉淀重復(fù)醇沉I次，冷凍干燥，得淡黃色麥冬粗多糖粉末；
B)將麥冬粗多糖粉末用15倍水溶解，采用超濾方法分離，其中超濾膜的材料選自醋酸纖維膜、聚砜、聚酰胺或磺化聚砜；超濾膜的形狀采用平板式、中空纖維式、管式或卷式；超濾壓力為O. 1-0. 3Mpa，超濾膜的截留分子量指標(biāo)為10000 ；
C)麥冬多糖的純化，超濾后的濃縮液通過(guò)型號(hào)為D-301、D-355、D-315或D-345的大孔弱堿性陰離子交換樹(shù)脂，用水洗脫，收集4-8倍柱體積的洗脫部分，合并，干燥，即得麥冬多Hmdg-I0
此提純方法僅采用了多次水煮醇沉、冷凍干燥、制備粗多糖，超濾膜的截留分子量為10000，純化采用陰離子交換樹(shù)脂，與本專利采用截留分子量5kd膜不同。專利申請(qǐng)201110326803. 2公開(kāi)了一種麥冬多糖的制備方法
A)該麥冬多糖為包含阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖的雜多糖，其中半乳糖和葡萄糖的比例為1:1-3,阿拉伯糖含量為1-10%,重均分子量為2-10萬(wàn)。B)該多糖制備方法為水提取，濃縮，去蛋白，醇沉，離子交換層析，冷凍干燥； 此專利申請(qǐng)?jiān)谒岬幕A(chǔ)上采用了離子交換層析的分離純化，但所含雜質(zhì)仍然比較
多，麥冬多糖的分子量分布未確定。上述授權(quán)或公開(kāi)的專利所采用的麥冬多糖提取工藝，麥冬多糖含量均未達(dá)到《中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求》(國(guó)食藥監(jiān)注[2007]743號(hào))關(guān)于“有效陳份制成的注射齊U，主成分含量應(yīng)不少于90%。多成份制成的注射劑，所測(cè)成分應(yīng)大于總固體量的80%”的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種過(guò)程簡(jiǎn)單、操作方便的麥冬多糖提取、分離純化方法，所制得的麥冬多糖純度高、溶解性好、分子量分布均一，可用于制備麥冬多糖注射劑。為臨床提供一種新的藥用物質(zhì)。本發(fā)明的麥冬多糖提取工藝，采用膜分離工藝，用5kDa膜包，去除高分子、難溶性多糖及雜質(zhì)，，得到高純度均一麥冬多糖。本發(fā)明所述的麥冬多糖的分離、純化方法，包括以下步驟
(1)醇提使用75°/Γ95%的乙醇，加熱回流提取2 4次，每次提取2 4小時(shí)，乙醇與麥冬的重量比為1:4 8，濾過(guò)，將麥冬晾干；
(2)水提向上述晾干的麥冬中加入其6 10倍重量的純化水，加熱，回流提取2飛次，每次2 4小時(shí),得水提液；
(3)醇沉將上述過(guò)柱流出液減壓濃縮至相對(duì)密度I.02 I. I的液體，加入乙醇使含醇量達(dá)85%以上，室溫放置10 24小時(shí)，離心，取沉淀，沉淀用無(wú)水乙醇或丙酮洗滌，減壓干燥，得粗多糖提取物；
(4)膜分離將上述粗多糖用注射用水20 50倍溶解，加入活性炭O.
煮沸，保持微沸30分鐘，離心，濾過(guò)，濾過(guò)液用5kDa膜包超濾，收集透過(guò)液，濃縮,加乙醇沉淀，沉淀用乙醇洗滌，減壓干燥，得麥冬多糖；
本發(fā)明所具有的技術(shù)優(yōu)勢(shì)為
I.麥冬多糖分離、純化技術(shù)可靠，操作步驟簡(jiǎn)單，條件易于控制，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。2.本發(fā)明所得麥冬多糖分子量分布范圍固定，重均分子量小于5000道爾頓，重復(fù)性好。3.所制得的麥冬多糖純度高、安全性好，為首次發(fā)明制備分子量小于5000的均一麥冬多糖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :(1)醇提使用85%的乙醇，加熱回流提取2次，每次提取2小時(shí)，乙醇與麥冬的重量比為1:6，濾過(guò)，將麥冬晾干；
(2)水提向上述晾干的麥冬中加入其8倍重量的純化水，加熱，回流提取4次，每次 3小時(shí)，得水提液；
(3)醇沉將上述水提液減壓濃縮至相對(duì)密度I.02 I. I的液體，加入乙醇使含醇量達(dá)85%以上，室溫放置12小時(shí)，離心，取沉淀，沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，減壓干燥，得粗多糖提取物；
(4)膜分離將上述粗多糖用注射用水30倍溶解，加入活性炭I%，加熱煮沸，保持微沸30分鐘，離心，濾過(guò)，濾液用5kDa膜包超濾，將截留液加乙醇沉淀，沉淀用乙醇洗滌，減壓干燥，得麥冬多糖；
上述麥冬多糖，苯酚硫酸法測(cè)定，麥冬多糖純度95. 2%，分子量分布小于5000道爾 頓。實(shí)施例2:
(1)醇提使用75%的乙醇，加熱回流提取3次，每次提取3小時(shí)，乙醇與麥冬的重量比為1:4，濾過(guò)，將麥冬晾干；
(2)水提向上述晾干的麥冬中加入其6倍重量的純化水，加熱，回流提取2次，每次 2小時(shí)，得水提液；
(3)醇沉將上述水提液減壓濃縮至相對(duì)密度I.02 I. I的液體，加入乙醇使含醇量達(dá)85%以上，室溫放置10小時(shí)，離心，取沉淀，沉淀用無(wú)水丙酮洗滌，減壓干燥，得粗多糖提取物；
(4)膜分離將上述粗多糖用注射用水20倍溶解，加入活性炭O.I %，加熱煮沸，保持微沸30分鐘，離心，濾過(guò)，濾液用5kDa膜包超濾，收集透過(guò)液，濃縮，加乙醇沉淀，沉淀用乙醇洗滌，減壓干燥，得麥冬多糖；
上述麥冬多糖，經(jīng)測(cè)定，苯酚硫酸法測(cè)定，麥冬多糖純度96. 2%，分子量分布小于5000道爾頓，淀粉、蛋白含量檢測(cè)為陰性。實(shí)施例3:
(1)醇提使用95%的乙醇，加熱回流提取4次，每次提取4小時(shí)，乙醇與麥冬的重量比為I: 8，濾過(guò)，將麥冬晾干；
(2)水提向上述晾干的麥冬中加入其10倍重量的純化水，加熱，回流提取5次，每次 4小時(shí)，得水提液；
(3)醇沉將上述水提液減壓濃縮至相對(duì)密度I.02 I. I的液體，加入乙醇使含醇量達(dá)85%以上，室溫放置24小時(shí)，離心，取沉淀，沉淀用無(wú)水乙醇或丙酮洗滌，減壓干燥，得粗多糖提取物；
(4)膜分離將上述粗多糖用注射用水50倍溶解，加入活性炭3%，加熱煮沸，保持微沸30分鐘，離心，濾過(guò)，濾液用5kDa膜包超濾，收集透過(guò)液，濃縮，加乙醇沉淀，沉淀用乙醇洗滌，減壓干燥，得麥冬多糖；
上述麥冬多糖，經(jīng)測(cè)定，苯酚硫酸法測(cè)定麥冬多糖純度96. 8%，分子量分布小于5000道爾頓，淀粉、蛋白含量檢測(cè)為陰性。實(shí)施例4 :苯酚硫酸法測(cè)定麥冬多糖中總糖的含量實(shí)驗(yàn)方法精密稱取標(biāo)準(zhǔn)單糖或單糖混合物lOOmg，配制成濃度為O. lmg/ml的溶液，分別取O. 2ml, O. 4ml, O. 6ml, O. 8ml, I. Oml,依次補(bǔ)加蒸懼水至lml。以蒸懼水為對(duì)照，分別向其中加入6%的苯酚O. 5ml，濃硫酸2. 5ml，充分振蕩搖勻后，冷卻至室溫，490nm處測(cè)定吸光度值，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式。準(zhǔn)確稱取適量麥冬多糖樣品配成濃度為O. lmg/ml的溶液，按同法處理后，根據(jù)多糖樣品的吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出麥冬多糖樣品的總糖含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖為對(duì)照品
￥高I麥冬多糖含量(重量百分比％)—
實(shí)施例I所的樣品95. 2_
實(shí)施例2所的樣品96.2_ 實(shí)施例3所的樣品|96. 8—
實(shí)施例6 :分子量分布范圍檢測(cè)
試驗(yàn)方法采用高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄V H方法二)測(cè)定。儀器與試藥島津LC-IOAVP高效液相色譜儀(手動(dòng)進(jìn)樣)；檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器SHODEX RI-201H，檢測(cè)器溫度35 V ; GPC專用軟件大連依利特EC2000。供分子量測(cè)定用右旋糖酐分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)買(mǎi)，D3、D4、D5、D6、D7、D8、D2000,分子量依次為 7100、10000、21400、41100、84110、133800、2000000，批號(hào)分別為140640-2000-01、140641-2000-01、140642-2000-01、140643-2000-01、140644-2000-01、140645-2000-01、140646-2000-01);水為娃哈哈純凈水
色譜條件
色譜柱為測(cè)多糖專用色譜柱，Shodex KS-805 ;流動(dòng)相水；柱溫45 °C ;流速
I. Oml/min,檢測(cè)器溫度35°C。方法試驗(yàn)
供試品溶液的制備取提取的多糖原料適量，加水制成每I ml中約含2 mg的溶液，振搖，室溫放置過(guò)夜，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的葡聚糖對(duì)照品D3 D8和D2000，各10mg，分置2ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。(每Iml中含各葡聚糖對(duì)照品5mg。)
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及樣品測(cè)定
取上述右旋糖酐系列對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣20ul，記錄洗脫峰的保留時(shí)間，由GPC專用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以相應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。該方法的標(biāo)準(zhǔn)校正曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)O. 9994。(標(biāo)準(zhǔn)曲線同前面麥冬藥材)
分子量測(cè)定法
精密移取供試品溶液20ul，注入高效液相色譜儀，可獲得供試品溶液的歸一化色譜圖，記錄洗脫峰的保留時(shí)間，根據(jù)GPC專用軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線及供試品的保留時(shí)間，采用GPC專用軟件計(jì)算樣品各組分的重均分子量、數(shù)均分子量及其分子量分布，結(jié)果三批樣品分子量分布范圍均小于5000道爾頓。實(shí)施例7 :麥冬多糖對(duì)肝癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)及免疫器官的影響 試驗(yàn)材料I、供試品
麥冬多糖注射液，規(guī)格4ml 12mg,由實(shí)施例1、2、3制備的麥冬多糖配制。2、對(duì)照品和試劑
市售人參多糖注射液，規(guī)格2ml :6mg，批號(hào)20090502,由山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。注射用環(huán)磷酰胺，規(guī)格0. 2g，批號(hào)10051521，由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。O. 9 %氯化鈉注射液，規(guī)格250ml，批號(hào)1003154204,由山東魯抗辰欣有限公司 提供。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)條件
昆明種小鼠115只，SPF級(jí)，雌性，用于試驗(yàn)時(shí)17-23kg，試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)2d。動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境，室溫19 26V’濕度40%_70%，日溫差蘭4°C，換氣次數(shù)8-10次/h，晝夜明暗交替時(shí)間12h/12h，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK (魯)20050055。動(dòng)物用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，每日上下午各給予一次顆粒鼠飼料。飼養(yǎng)籠具兩周更換一次，料盒和水瓶每周更換一次，更換的籠具、料盒、水瓶需進(jìn)行消毒處理。鼠飼料由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)滬飼審(2008) 04002。4、主要儀器設(shè)備
FA1004N型電子天平，由上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；
JY2001型電子分析天平，由上海精密科學(xué)儀器有限公司提供 HEMAVET-950型全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，由Drew Scientific公司提供 試驗(yàn)方法
I、給藥劑量及給藥頻率
麥冬多糖注射液，人參多糖注射劑市售iv，人參多糖注射劑市售im均設(shè)高、中、低三個(gè)劑量，分別為24、12、6mg/kg。環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組劑量為20mg/kg。模型組給予生理鹽水。本試驗(yàn)小鼠給藥時(shí)間為9天，每天一次。2、動(dòng)物分組
昆明種小鼠115只，按體重隨機(jī)分為11組麥冬多糖、人參多糖市售iv、人參多糖市售im均分為高、中、低劑量組，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性組，模型對(duì)照組。3、藥物配制
麥冬多糖高、中、低劑量分別取2、1、0. 5ml麥冬多糖注射液，加生理鹽水各稀釋至5ml,濃度分別為 I. 2、0· 6、0· 3 mg/ml。人參多糖市售(iv)高、中、低劑量分別取2、1、0. 5ml市售人參多糖注射液，加生理鹽水各稀釋至5ml，濃度分別為I. 2、O. 6、O. 3 mg/ml。人參多糖市售(im)低劑量取O. 6ml市售人參多糖注射液,加生理鹽水稀釋至
I.2ml,濃度為 I. 5mg/ml。環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組取一支注射用環(huán)磷酰胺，加生理鹽水稀釋至200ml，濃度為lmg/ml。
4、試驗(yàn)過(guò)程
取瘤源肝癌小鼠3只，腹部消毒，用無(wú)菌消毒注射器抽取肝癌腹水，用生理鹽水按I :
2.5稀釋后備用。昆明種小鼠115只，逐一腋下碘酒、酒精消毒，腋下皮下接種上述制備的肝癌瘤液
O.2ml/ 只。
接種24h后，小鼠稱重，按體重隨機(jī)分為11組麥冬多糖注射液、人參多糖市售iv、人參多糖市售im高、中、低劑量組，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性組，模型對(duì)照組，每組10 11只。麥冬多糖注射液，人參多糖市售iv高、中、低劑量組，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組，模型對(duì)照組尾靜脈注射相應(yīng)藥物，給藥體積均為O. 2ml/10g，人參多糖市售im高、中劑量組肌注給予人參多糖注射原液，給藥體積分別為O. 08,0. 04ml/10g,人參多糖市售im低劑量組肌注給予相應(yīng)藥物，給藥體積為O. 04ml/10g。每日給藥I次，連續(xù)給藥9d。第9天給藥后，禁食不禁水12h，稱重，摘眼球取血，解剖，稱取瘤重及胸腺、肝、脾重量，計(jì)算抑瘤率及對(duì)免疫器官重量的影響。觀察對(duì)小鼠體重、免疫學(xué)指標(biāo)及肝腎功能的影響，包括紅細(xì)胞數(shù)目(WBC)，紅細(xì)胞數(shù)目(RBC)，血小板數(shù)目(PLT)，中性粒細(xì)胞數(shù)目(NE)，淋巴細(xì)胞數(shù)目(LY)，單核細(xì)胞數(shù)目(MO)，胸腺、脾臟、肝臟相對(duì)重量，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，尿素氮(BUN)。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
各個(gè)指標(biāo)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS13. O進(jìn)行給藥組與模型對(duì)照組的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。試驗(yàn)結(jié)果
小鼠皮下接種肝癌細(xì)胞，接種后麥冬多糖注射液、人參多糖市售iv連續(xù)9天尾靜脈注射給予荷瘤小鼠，人參多糖市售im連續(xù)9天肌肉注射給予荷瘤小鼠。麥冬多糖注射液與模型對(duì)照組比較，24、6mg/kg能減輕肝癌小鼠瘤重，具有明顯的抑瘤作用。與環(huán)磷酰胺組比較，各組脾臟系數(shù)均增大，白細(xì)胞均有明顯升高，12、6 mg/kg可增大胸腺系數(shù)，24mg/kg可明顯升高紅細(xì)胞。人參多糖市售與模型對(duì)照組比較,iv (24、12、6mg/kg)及im (24mg/kg)能減輕肝癌小鼠瘤重，具有明顯的抑瘤作用。與環(huán)磷酰胺組比較，各組胸腺系數(shù)均增大，白細(xì)胞均有明顯升高，iv (6mg/kg)可使脾臟系數(shù)增加，iv、im ( 24、6mg/kg)可明顯升高紅細(xì)胞。與人參多糖市售im (24mg/kg)抑瘤率比較，麥冬多糖注射液高(24、6mg/kg)、人參多糖市售iv (24、6mg/kg)抑瘤率明顯升高,抑瘤效果明顯優(yōu)于人參多糖市售im (24mg/kg)。試驗(yàn)結(jié)論
麥冬多糖注射液與模型對(duì)照組比較，24、6mg/kg能減輕肝癌小鼠瘤重，具有明顯的抑瘤作用。與環(huán)磷酰胺組比較，各組脾臟系數(shù)均增大，白細(xì)胞均有明顯升高，12、6 mg/kg可增大胸腺系數(shù)，24mg/kg可明顯升高紅細(xì)胞。人參多糖市售與模型對(duì)照組比較,iv (24、12、6mg/kg)及im (24mg/kg)能減輕肝癌小鼠瘤重，具有明顯的抑瘤作用。與環(huán)磷酰胺組比較，各組胸腺系數(shù)均增大，白細(xì)胞均有明顯升高，iv (6mg/kg)可使脾臟系數(shù)增加，iv、im ( 24、6mg/kg)可明顯升高紅細(xì)胞。與人參多糖市售im (24mg/kg)抑瘤率比較，麥冬多糖注射液抑瘤率明顯升高，抑瘤效果明顯優(yōu)于人參多糖市售im (24mg/kg)0
麥冬多糖提取物對(duì)肝癌荷瘤小鼠瘤重的影響
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與模型組比較，*表示/7 ( O. 05，**轟示P ( O. 01 ;與麥冬多糖市售im(24mg/kg)比較，Δ 表示/7 ( O. 05，ΔΔ 表示/7 ( O. 01
麥冬多糖提取物對(duì)肝癌荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響
權(quán)利要求
1.一種麥冬多糖，特征在于該麥冬多糖重均分子量小于5000道爾頓。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述，其特征在于該麥冬多糖總多糖含量>90%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述，其特征在于該麥冬多糖制備關(guān)鍵步驟在于采用膜分離方法，去除大分子物質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述，該麥冬多糖采用以下方式制備(I)醇提使用75% 95%的乙醇，加熱回流提取21次，每次提取2 4小時(shí)，乙醇與麥冬的重量比為I: Γ8，濾過(guò)，將麥冬晾干；(2)水提向上述晾干的麥冬中加入其6 10倍重量的純化水，加熱，回流提取2飛次，每次2 4小時(shí)，得水提液；(3)醇沉將上述水提液減壓濃縮至相對(duì)密度I. 02 I. I的液體，加入乙醇使含醇量達(dá)85%以上，室溫放置10 24小時(shí)，離心，取沉淀，沉淀用無(wú)水乙醇或丙酮洗滌，減壓干燥，得粗多糖提取物；(4)膜分離將上述粗多糖用純化水20 50倍溶解，加入活性炭O. I % 3 %，加熱煮沸，保持微沸30分鐘，離心，濾過(guò)，濾液用5kDa膜包超濾，收集濾過(guò)液，濃縮，加乙醇沉淀，沉淀用乙醇洗滌，減壓干燥，得麥冬多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述，由該麥冬多糖制備注射液具有增強(qiáng)免疫能力及抑瘤作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種麥冬多糖及其制備方法。該方法為選取麥冬經(jīng)醇提、水提、醇沉后，離心取沉淀得麥冬粗多糖，取粗多糖用水溶、加活性炭煮沸、膜分離、再醇沉，離心，取沉淀，干燥，得麥冬多糖，本工藝生產(chǎn)具有技術(shù)可靠、操作步驟簡(jiǎn)單、條件易于控制的特點(diǎn)，適用于大規(guī)模生產(chǎn)；所制得的麥冬多糖分子量分布范圍固定，重均分子量小于5000道爾頓，總多糖含量>90%；用其制備麥冬多糖注射液具有增強(qiáng)免疫及抑瘤作用。
文檔編號(hào)A61P37/04GK102875689SQ201210379080
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月9日
發(fā)明者馬河, 郭琪, 粱大連 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所