專利名稱：一種金針菇甾醇提取物脂質(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于納米醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及從食用菌中提取的水不溶性有效部位及其有效成分加工的制劑，確切地說是一種金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑。
背景技術(shù)：
金針燕(Flammulina velutipes (ff. Curt. :Fr.) Singer)，又名金錢菌、樸蕈、冬燕、毛柄金錢菌，屬真菌門(Eumycota),擔(dān)子菌亞門(Basidiowyeotina),層菌綱(Hymenomycetes)，傘菌目(Agaricales), 口蘑科(Tricholomataceae),小火焰菌屬(Flammulina)、或金錢菌屬(Collybia),是古今中外著名的食用菌之一 {參％ .郭美英主編，《中國金針菇生產(chǎn)》，北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2000·)。
金針菇富含糖類、蛋白質(zhì)、膳食纖維和礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)。近些年來，學(xué)者們已從金針菇中分離得到許多種蛋白質(zhì)和多糖類活性物質(zhì)，這些物質(zhì)具有抗腫瘤，抗病毒，抗蟲，抗真菌，抗人的免疫缺陷病毒(HIV)，降低血清膽固醇，降低血壓，提高機(jī)體免疫力，以及保護(hù)肝臟等廣泛藥理活性。已經(jīng)報道的蛋白質(zhì)類成分主要包括真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白，金針菇毒素，火 素，火燕蛋白原，酶，凝集素，以及Flammulin、Velutin、Flammin和Velin等四種核糖體失活蛋白等。多糖類成分包括PA3DE、PA5DE, EA3> EA5, EAf^P EA7, SFAl, FVP2，胞外多糖，盧-葡聚糖，木甘露聚糖以及甘露巖藻半乳聚糖等(參見Yaqi Wang, Li Bao,Xiaoli Yang， e tc. Bioac ti ve sesqui terpenoids from the solid cul ture of theedible mushroom flammulina velutipes growing on cooked rice[J]. Food Chemistry,2012，132(3): 1346-1353· Hui-Hsin Chang, Kuang-Yang Hsieh，Chen-Hao Yeh，etc·Oral administration of an enoki mushroom protein fve activates innate andadaptive iwmuni ty and induces anti-tumor activity against murine hepatocellularcarcinoma [J]· International Inmunopharmacology, 2010, 10: 239-246· ) 0除此之外，留醇、脂肪酸、黃酮、萜類以及核苷等小分子物質(zhì)也被從中發(fā)現(xiàn)。目前關(guān)于這些小分子物質(zhì)的生物活性報道主要集中在抗菌、抗氧化方面(參見 '方玉梅，張春生，譚萍，etc·金針菇黃酮類化合物的抗氧化性作用[J].食品研究與開發(fā)，2012，33(3): 15-18 ； K K Tereshina, A S. Memorskaya. Adaptation of flammulinavelutipes to hypothermia in natural environments the role of lipids andcarbohydrates [J]. Microbiology，2005，74 (3): 279-283. ) 0留醇(Sterol)是一類重要的三胳類(Triterpenes)化合物，它們廣泛存在于植物，動物和真菌當(dāng)中。根據(jù)來源不同，留醇可分為動物留醇和植物留醇(Plant sterols,PS)。膽固醇是動物體內(nèi)的主要留醇，其中游離膽固醇有穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用。植物留醇是植物細(xì)胞膜的重要組成部分，與膽固醇類似，自由植物留醇有助于穩(wěn)定植物細(xì)胞膜中的磷脂雙層，它們結(jié)構(gòu)與膽固醇相似，但在C-24位有一個甲基或乙基基團(tuán)。在高等植物中，最常見的PS是豆甾醇(Stigmasterol)、々-谷甾醇{β -sitosterol)和菜油留醇(Campesterol)，它們有一個共同特點(diǎn)是在留核的C_5，6位有一個雙鍵，這種植物留醇稱為Phytosterols。在十字花科植物中主要存在另外一種甾醇-菜籽甾醇(Brassicasterol)。飽和PS,也稱為植物甾燒醇(Phytostanols),是在甾
核中沒有雙鍵的。在過去的15年里，植物留醇(PS)已經(jīng)被證明具有降低血清總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇濃度的功效，被納入功能性食品的范疇。許多臨床研究顯示，Γ3克/天PS的劑量能夠顯著降低血漿LDL膽固醇的濃度。植物留醇還可用于輔助治療，與他汀類藥物聯(lián)合使用的效果超過他汀類藥物加倍劑量的效果?，F(xiàn)在已經(jīng)有40多個關(guān)于PS產(chǎn)品的專利，超過 15 個 PS 產(chǎn)品行銷全世界(參見( . Garcia-Lla tas, Μ. T. Rodriguez-Estrada.Current and new insights on phytosterol oxides in plant sterol-enrichedfoodfjj. Chem Phys Lipids, 2011, 164(6): 607-624.) 0關(guān)于植物甾醇降低膽固醇作用的確切機(jī)制尚不清楚，目前認(rèn)為存在以下幾種可能(1)由于植物留醇比膽固醇具有更強(qiáng)的疏水性，因此植物留醇可以取代膽固醇進(jìn)入混合微粒(Mixed micelles)中。這種取代作用使微粒中的膽固醇含量下降,從而減少膽固醇的吸收。(2)植物留醇可以減緩膽固醇在腸上皮細(xì)胞中的酯化速度。由于酯化后的固醇·易于進(jìn)入乳糜微粒中，而未酯化的固醇則較難進(jìn)入乳糜微粒，因此植物留醇可以減少乳糜微粒中膽固醇的總量。(3)植物甾醇可能通過ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette, ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)體家族影響膽固醇的吸收。ABCG作為ABC的一個亞族，其中兩個基因ABCG5和ABCG8與人體對留醇的選擇性吸收有關(guān)，也與膽汁中固醇的分泌有關(guān){參％·.周曉星，蘇宜香.植物甾醇降膽固醇作用的研究現(xiàn)狀[J].國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊，2007，34(2): 101-105·)。目前已經(jīng)從金針菇的子實體以及菌絲體中得到17種包括麥角留類和豆留類的甾醇化合物(2覽，24/P) -ergosta-7, 22-diene_3盧，5 σ，6 σ，9 σ -tetrol (I)，(22Ε, 24/P)-ergosta-7, 22-diene_3β ,5 α ,ββ -triol (2), (245) -ergosta-7-ene-3β ,5a ,ββ -triol (3), 5 σ , 8 σ -epidioxy- (22/ , 2AR) -ergosta-6, 22-diene_3/ _ol (4) , 5 σ , 8 σ -epidioxy- (2451) -ergost-6-ene~3β _ol (5), (22/ , 24/P) -ergosta-5, 7, 9(11), 22-tetraene-3/ -oI (6), (2451) -ergosta-7-ene-3β ~o\ (7), ergosta-5, 8, 22-triene-3/ -ol (8)，ergosterol (9), ergosta-5, 7-diene-3/ -oI (10), ergosta-7, 22-diene-3/ -ol (11)，ergosta-30 -D-glucopyranoside (12), ergosta-7, 22-diene_5，6-epoxy-3_ol (13),5 a -stigmastan-3, 6-dione (14)，(24/P) -stigmast-4-ene-3_one (15)，ergosta-4, 6, 8 (I4), 22-tetraene-3-one (16), ergosta-8(14)-ene~3β -ol (17)。上述的化合物9 (ergosterol,麥角甾醇)是金針燕所含甾醇類物質(zhì)的主要成分之一，在植物界也廣泛存在，其抗腫瘤活性已經(jīng)得到了多次實驗的證實，作用機(jī)制亦部分被揭示。Takaku等從姬松鸞中分離出ergosterol,400和800 mg · kg4的劑量連續(xù)20 d 口服給予肉瘤180小鼠，可以顯著抑制腫瘤的生長，而且還沒有化療藥物通常所引起的如體重、附睪脂肪組織、胸腺、脾臟重量和白細(xì)胞數(shù)降低等副作用。進(jìn)一步研究表明，ergosterol能夠直接抑制基底膜誘導(dǎo)的新生血管形成，因此它是通過直接抑制實體瘤誘導(dǎo)的血管生成來發(fā)揮抑瘤活性的{參見..Takeshi Takaku, Yoshiyuki Kimura, HiromichiOkuda. Isolati on of an antitumor compound from agaricus blazei muri11 and itsmechanism of action [J]. Biochemical and Molecular Action of Nutrients, 2001,131 (5): 1409-1413.)。Yazawa等從Polyporus醇提物中分離出ergosterol,它對5%糖精鈉(SodiumSaccharin)、0· 01%N_ 丁基-N-(4-輕基丁基)亞硝胺(BHBN)、3%DL_ 色氛酸(Trp)、2% 丁基化羥基苯甲醚(BHA)等誘導(dǎo)的Wistar大鼠膀胱癌，有很好的治療作用{參UasuharuYazawa, Masami Yoko ta, Kiyoshi Sugiyama. An ti tumor promo ting effect of an activecomponent of polyporus, ergosterol and re la ted compounds on rat urinary bladdercarcinogenesis in a short-term test with concana valin A[J], Bi ol. Pharm. Bull.,2000, 23(11): 1298-1302.)。P21是細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制因子(Cyclin-dependent kinase inhibitor,CDKI )的一種，屬于細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)節(jié)因子，它可通過抑制細(xì)胞周期素依賴性激酶(Cyclin-dependent kinase, CDK) CDK2、CDK4的活性，使細(xì)胞不能跨越G期檢查點(diǎn)，從而阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)行，抑制細(xì)胞增殖，是腫瘤預(yù)防和治療一個靶點(diǎn)。張嫻等發(fā)現(xiàn)ergosterol在5(T200可以抑制!fepG2細(xì)胞增殖，機(jī)制可能與增高Ρ21 mRNA和蛋白表達(dá)相關(guān)。在 ergosterol 作用 48 h 和 72 h 后，100、200 μ g *mL 1 組 P21 mRNA 的表達(dá)明顯增高。24h后P21蛋白已經(jīng)有升高趨勢,48 h、72 h后明顯升高,提示P21可能是ergosterol的作用靶點(diǎn)。{參％ .張嫻，黃羽’曾星·麥角留醇對肝癌細(xì)胞H印G2增殖及P21表達(dá)的影響 /77-中藥藥理與臨床,2011，27(5): 26-29.)
高虹等人采用小鼠S180移植瘤實驗研究了巴西燕子實體中ergosterol的體內(nèi)抗腫瘤活性。結(jié)果表明，巴西燕子實體中提取的ergosterol在劑量10、50和100 mg · kg—1 · cf1時的瘤重抑制率分別為62. 75%,76. 61%和79. 18%，說明ergosterol有較強(qiáng)的抑瘤活性，并且認(rèn)為其抑瘤活性不是通過細(xì)胞毒作用發(fā)揮，而是通過抑制腫瘤血管增生來扼殺腫瘤(參見·.高虹，史德芳，楊德，etc.巴西菇麥角留醇抗腫瘤活性及作用機(jī)理初探/77.中國食用菌，2011, 30(6): 35-39. ) 然而，室溫條件下游離的植物留醇在水和油中的溶解度均很小，在人體內(nèi)的吸收率亦很低，約為 2% 5% (參見-.I. Rudkowska. Plant sterols and stanols for heal thyageing [J]· Maturi tas, 2010，66(2): 75 -似.)。為了擴(kuò)寬植物甾醇的應(yīng)用范圍，提高其溶解度是當(dāng)務(wù)之急。目前主要有兩種方法，其一是利用留核上重要的活性基團(tuán)——C-3位羥基，可與脂肪酸化合形成留醇酯，植物留醇酯比游離植物留醇在油中的溶解度增加約10倍；其二是利用乳化劑的乳化增溶作用和高壓均質(zhì)技術(shù)，使植物留醇在水相中分散成納米級的分散體，增加它的溶解度。脂質(zhì)體(Liposome)是一種將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層的超微型球狀載體制齊U。它們由天然或合成的磷脂和膽固醇制成，與脂質(zhì)單層結(jié)構(gòu)不同，它們是雙層結(jié)構(gòu)，分為親水性基團(tuán)和疏水性基團(tuán)。雙層脂質(zhì)的親水性基團(tuán)伸向水相(外部和內(nèi)部)，疏水性基團(tuán)則伸向另一端，形成一個薄膜狀的內(nèi)核。脂質(zhì)體的這一特點(diǎn)使得親水性和疏水性藥物都能夠被包封，親水性藥物包埋在內(nèi)部水相中，水難溶性和油溶性藥物駐留在脂雙層中。脂質(zhì)體的大小取決于材料組成和制備方法，直徑從50 nm左右至超過I μπι。1971年,Rymen等人開始將脂質(zhì)體用作藥物載體，通過減低毒性提高藥效以改善藥物治療指數(shù)。由于具有納米粒徑，良好的生物相容性，生物可降解性，疏水性和親水性，低毒性和免疫原性等許多優(yōu)點(diǎn)，在所有納米藥物平臺中，脂質(zhì)體是最早建立起來的平臺之一。時至今日，脂質(zhì)體對腫瘤治療已經(jīng)產(chǎn)生了重大影響，美國FDA已批準(zhǔn)多個配方用于癌癥治療(參見A Yang, C. Jin,Y. Jiang，etc. Liposome based deli very systems in pancreatic cancer treatment:From bench to bedside [J], Cancer Treat Rev, 2011, 37(8): 633-642.)。經(jīng)過四十多年的發(fā)展，脂質(zhì)體的應(yīng)用范圍從腫瘤化療和真菌感染延伸至疫苗和最近的基因治療。盡管脂質(zhì)體在基因治療中還處于基礎(chǔ)研究階段，但它具有低毒，低免疫反應(yīng)，低致癌性，攜帶基因大小類型不受限制，易于制備和質(zhì)量控制等顯著優(yōu)勢，在未來基因治療中具有廣闊的發(fā)展前景(參見-X Zheng, J. Lu, L. Deng, etc. Preparation and characterizationof magnetic cationic liposome in gene delivery [J]· Int J Pharm, 2009，366(1-2):211-217.)。盡管作為藥物載體有上述優(yōu)勢，但由于在血液里面循環(huán)時間短，體內(nèi)穩(wěn)定性和靶向性差，是未經(jīng)修飾脂質(zhì)體的缺點(diǎn)(圖1A)。為了增加脂質(zhì)體在目標(biāo)組織和細(xì)胞內(nèi)的積累，在脂質(zhì)體表面附加配體(抗體以及它們的片段，葉酸，肽類或轉(zhuǎn)鐵蛋白等基團(tuán))能夠識別和綁定特定的細(xì)胞(圖1B)。然而，大多數(shù)的免疫脂質(zhì)體仍在肝臟等部位的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細(xì)胞中迅速被消除。聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)常用于修飾納米粒子以達(dá)到增加穩(wěn)定性和延長循環(huán)時間。聚乙二醇化脂質(zhì)體(又稱為隱形脂質(zhì)體)不僅可以減少巨噬細(xì)胞的吞噬，還可以穩(wěn)定和延長體內(nèi)循環(huán)時間，通過EPR效應(yīng)選擇性地積聚在腫瘤部位，來增強(qiáng)一些配方的治療效果(圖1C)。為制備長循環(huán)免疫脂質(zhì)體，抗體可以被連接到脂質(zhì) 體的表面，或接枝聚乙二醇鏈的遠(yuǎn)端。其中后者是更好的抗體目標(biāo)耦合方法，因為沒有PEG鏈帶來的干擾(圖1D)。除了包封藥物，脂質(zhì)體還可以裝載帶磁性納米粒以增強(qiáng)磁靶向性，和(或)膠體金、銀納米?；驘晒夥肿佑糜谠\斷和微觀分析(圖1E)。磁性脂質(zhì)體當(dāng)進(jìn)入體內(nèi)后，在體外磁場的作用下引導(dǎo)藥物在體內(nèi)定位集中和定向移動，靶向給藥效果更好。腫瘤部位的PH值，溫度，血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性或間質(zhì)壓力均不同于正常組織，pH敏感脂質(zhì)體和熱敏脂質(zhì)體能使藥物大量聚集在目標(biāo)組織，如圖I所示(參見'Vladimir P. Torchilin.Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers [J]. Nature ReviewsDrug Discovery 2005，4: 145-160.)。金針菇留醇提取物是將金針菇子實體粉碎后用醇溶液提取，通過濃縮、萃取、皂化反應(yīng)、結(jié)晶等步驟得到的不皂化物。研究證明，該提取物具有體外抑制人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人胃腺癌細(xì)胞(SGC)、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)和人肺腺癌細(xì)胞(A549)等腫瘤細(xì)胞生長的活性，可用于制備抗腫瘤藥物(參見·.金針菇中具有抗腫瘤作用的不皂化提取物及其制法和用途[P]，專利申請?zhí)?201110364098. 5)。它主要包含ergosterol,22, 23-dihydroergosterol, ergosta-5, 8, 22-triene~3-ol 和 ergost-8 (14) -ene-3β -οI等四種成分。它易溶于乙醚、氯仿以及熱乙醇等有機(jī)溶劑，室溫下極難溶于水和油，具備植物甾醇的一般性質(zhì)。目前尚未有以金針菇留醇提取物為原料藥，制備成脂質(zhì)體制劑，以達(dá)到提高該提取物溶解度和生物利用度的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種金針菇留醇提取物的脂質(zhì)體制劑，將難溶于水的金針菇甾醇提取物制備成脂質(zhì)體制劑，提高它的溶解度，改善它在體內(nèi)的生物利用度極低的缺點(diǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供這種金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
一種金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑，它是包含具有抗腫瘤作用的金針菇留醇提取物的脂質(zhì)體，它主要由以下質(zhì)量組分組成金針菇留醇提取物I份；磷脂1(Γ20份；膽固醇0. 5^2份；肉豆蘧酸異丙酯f 10份；膽酸鈉f 10份。所述的金針菇留醇提取物是將金針菇子實體用醇溶液提取，通過濃縮、萃取、皂化反應(yīng)、結(jié)晶等步驟得到(參見專利申請?zhí)朇N 201110364098.5)。它主要包括ergosterol，22, 23-dihydroergosterol, ergosta-5, 8, 22-triene-3/ -οI 和 ergost-8 (14) -ene-3β -οI等四種成分，其中前面二種成分含量較高。所述的一種金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)在圓底燒瓶中按上述配方稱取金針菇留醇提取物和磷脂，倒入無水乙醇，乙醇的用量為每克金針菇留醇提取物加無水乙醇2(Γ40毫升，在4(T60°C下超聲促使金針菇甾醇提取物和磷脂溶解；
(2)將步驟(I)所得的混合物蒸發(fā)，使每克金針菇留醇提取物用量蒸發(fā)至:TlO毫升， 加入上述配方量的膽固醇、肉豆蘧酸異丙酯和膽酸鈉，再加入無水乙醇，無水乙醇加入的量為每克金針菇留醇提取物用量加5(Γ100毫升，超聲溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使完全揮去乙醇，在圓底燒瓶壁上形成固態(tài)殘留物；
(3)加入蒸餾水或磷酸鹽緩沖液水合，加入的量為每克金針菇留醇提取物用量添加100^200毫升，直至圓底燒瓶壁上的固態(tài)殘留物被洗脫，水合后即得金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑。一種上述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體，它是將上述脂質(zhì)體溶液滴入支撐劑水溶液中，或?qū)⒅蝿┘尤胨鲋|(zhì)體中，通過冷凍干燥法、噴霧干燥法或烘干法制成前體脂質(zhì)體。上述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體，將其加入水中，攪拌，即恢復(fù)得到金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑。上述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體，所述的支撐劑是甘露醇、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、葡萄糖或海藻糖，或者是它們的混合物。上述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體的制備方法，其進(jìn)一步包括下述步驟將上述脂質(zhì)體溶液滴入支撐劑水溶液中，或?qū)⒅蝿┘尤胨鲋|(zhì)體中，通過冷凍干燥法、噴霧干燥法或烘干法制成前體脂質(zhì)體。上述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體的制備方法，其中所述支撐劑選自甘露醇、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、葡萄糖、海藻糖及其混合物。本發(fā)明的脂質(zhì)體的外觀呈淺黃色澄清透明狀，平均粒徑為108 nm，包封率為(71. 3土 O. 1)%。該脂質(zhì)體制劑極大地提高了水難溶性藥物金針菇留醇提取物的溶解度，有利于改善其在體內(nèi)生物利用度極低的缺點(diǎn)，而且制備方法簡單，易于工業(yè)化大生產(chǎn)。所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體還可以加入支撐劑干燥制成前體脂質(zhì)體，制成各種劑型。有益效果
本發(fā)明具有以下的有益效果
1、本發(fā)明解決了金針菇留醇提取物溶解度低的問題，極大地增大藥物的溶解度，提高了藥物的生物利用度；
2、本發(fā)明采用的配方和方法簡單可行，無需特殊設(shè)備，便于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。


圖I為脂質(zhì)體的發(fā)展過程示意圖。(A)早期傳統(tǒng)的脂質(zhì)體，溶于水的藥物(a)包封在內(nèi)部水相中，親脂性藥物(b)鑲嵌在脂質(zhì)雙層膜當(dāng)中；(B)抗體免疫脂質(zhì)體，抗體共價偶聯(lián)在膜的活性磷脂上(C)，或疏水基團(tuán)經(jīng)過初步修飾后固定在脂質(zhì)膜上(d);(C)連接有保護(hù)性聚合物(如PEG)的長循環(huán)脂質(zhì)體，可以阻斷脂質(zhì)體表面與吞噬蛋白(f)相互作用；(D)長循環(huán)免疫脂質(zhì)體同時附有保護(hù)聚合物和抗體，它們可以連接到脂質(zhì)體表面(g)，或更好的鏈接在接枝聚合物鏈的末端(h);(E)新一代脂質(zhì)體，表面可以通過不同的方式被修改(分別或同時)。比如保護(hù)性聚合物(i)，保護(hù)性聚合物和靶向配體，如抗體(j)，附帶診斷標(biāo)記(k),納入帶正電荷脂質(zhì)(I),與DNA絡(luò)合產(chǎn)生Iipoplex結(jié)構(gòu)(m),納入對刺激敏感的脂質(zhì)(η)，附帶對刺激敏感的聚合物(O)，附加細(xì)胞穿透肽(P)，連上病毒成分(q)，除了藥物，脂質(zhì)體還可裝載磁性微粒(r)以增強(qiáng)磁靶向性，和(或)膠體金、銀納米?；驘晒夥肿?S)用于微觀分析。圖2為實施例5制備的金針菇甾醇提取物脂質(zhì)體制劑的透射電鏡照片(X500 k)。圖3為實施例5制備的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖。
圖4為實施例5制備的金針菇甾醇提取物脂質(zhì)體制劑平均血藥濃度-時間曲線圖(η=5) ο
具體實施例方式 以下所列實施例有助于本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例I金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑
在圓底燒瓶中按下表稱取金針菇甾醇提取物、磷脂，溶于20 mL無水乙醇中，在40°C下超聲促使金針菇留醇提取物和磷脂溶解；蒸去大部分乙醇至3毫升，加入膽固醇、肉豆蘧酸異丙酯和膽酸鈉，再加入無水乙醇50 mL，超聲溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使完全揮去乙醇，在圓底燒瓶壁上形成固態(tài)殘留物；加入蒸餾水水合，直至圓底燒瓶壁上的固態(tài)殘留物被洗脫，水合后即完成。
組分I質(zhì)量/體積
金針菇留醇提取物
磷脂_JLOg_
膽固醇_O- 5g
1 異丙酯 ig
膽酸納_Ig_
蒸餾水IlOOmL實施例2金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑前體
在圓底燒瓶中按下表稱取金針菇甾醇提取物、磷脂，溶于20 mL無水乙醇中，在40°C下超聲促使金針菇留醇提取物和磷脂溶解；蒸去大部分乙醇至3毫升，加入膽固醇、肉豆蘧酸異丙酯和膽酸鈉，再加入無水乙醇50 mL，超聲溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使完全揮去乙醇，在圓底燒瓶壁上形成固態(tài)殘留物；加入蒸餾水水合，直至圓底燒瓶壁上的固態(tài)殘留物被洗脫，即得到金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑。然后加入過100目篩的蔗糖粉末，置_20°C冰箱中放置2h后，冷凍干燥，粉碎，即得粉末狀的金針菇留醇提取脂質(zhì)體制劑前體。將金針菇留醇提取脂質(zhì)體制劑前體加水?dāng)嚢?，即恢?fù)成金針菇留醇提取脂質(zhì)體制劑。
組分I質(zhì)量/體積
金針菇留醇提取物Ilg
權(quán)利要求
1.一種金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑，其特征是它是包含具有抗腫瘤作用的金針菇甾醇提取物的脂質(zhì)體，它主要由以下質(zhì)量組分組成金針菇留醇提取物I份；磷脂1(Γ20份；膽固醇O. 5^2份；肉豆蘧酸異丙酯f 10份；膽酸鈉f 10份。
2.一種制備權(quán)利要求I所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的方法，其特征是包括以下步驟 (1)在圓底燒瓶中按上述配方稱取金針菇留醇提取物和磷脂，倒入無水乙醇，乙醇的用量為每克金針菇留醇提取物加無水乙醇2(Γ40毫升，在4(T60°C下超聲促使金針菇甾醇提取物和磷脂溶解； (2)將步驟(I)所得的混合物蒸發(fā)，使每克金針菇留醇提取物用量蒸發(fā)至:TlO毫升，加入上述配方量的膽固醇、肉豆蘧酸異丙酯和膽酸鈉，再加入無水乙醇，無水乙醇加入的量為每克金針菇留醇提取物用量加5(Γ100毫升，超聲溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使完全揮去乙醇，在圓底燒瓶壁上形成固態(tài)殘留物； (3)加入蒸餾水或磷酸鹽緩沖液水合，加入的量為每克金針菇留醇提取物用量添加100^200毫升，直至圓底燒瓶壁上的固態(tài)殘留物被洗脫，水合后即完成。
3.—種權(quán)利要求I所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體，其特征是它是將權(quán)利要求I所述脂質(zhì)體溶液滴入支撐劑水溶液中，或?qū)⒅蝿┘尤胨鲋|(zhì)體中，通過冷凍干燥法、噴霧干燥法或烘干法制成前體脂質(zhì)體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體，所述的支撐劑是甘露醇、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、葡萄糖或海藻糖，或者是它們的混合物。
5.一種權(quán)利要求3所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體的制備方法，其特征是將權(quán)利要求2制得的脂質(zhì)體制劑滴入支撐劑水溶液中，或?qū)⒅蝿┘尤胨鲋|(zhì)體制劑中，通過冷凍干燥法、噴霧干燥法或烘干法制成前體脂質(zhì)體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金針菇留醇提取物脂質(zhì)體制劑的前體脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述的支撐劑選自甘露醇、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、葡萄糖或海藻糖，或者是它們的混合物。
全文摘要
一種金針菇甾醇提取物脂質(zhì)體制劑，它是包含具有抗腫瘤作用的金針菇甾醇提取物的脂質(zhì)體，主要由以下質(zhì)量組分組成金針菇甾醇提取物1份；磷脂10~20份；膽固醇0.5~2份；肉豆蔻酸異丙酯1~10份；膽酸鈉1~10份。本發(fā)明的脂質(zhì)體的外觀呈淺黃色澄清透明狀，平均粒徑為108nm，包封率為(71.3±0.1)%。該脂質(zhì)體制劑極大地提高了水難溶性藥物金針菇甾醇提取物的溶解度，有利于改善其在體內(nèi)生物利用度極低的缺點(diǎn)，而且制備方法簡單，易于工業(yè)化大生產(chǎn)。所述的金針菇甾醇提取物脂質(zhì)體還可以加入支撐劑干燥制成前體脂質(zhì)體，制成各種劑型。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61K36/06GK102940606SQ20121038594
公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月12日
發(fā)明者徐希明, 易承學(xué), 余江南 申請人:江蘇大學(xué)