專利名稱：一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種鹽酸小檗堿，尤其是涉及一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑及其制備方法。
背景技術：
小檗堿是從毛蓖科黃連等植物根莖中提取的一種季胺類異喹啉生物堿，英文名Berberine，又稱黃連素，臨床主要用于腸道感染，還可廣泛地應用于各種心血管疾病。近年國內(nèi)外研究結(jié)果表明，小檗堿對糖尿病有確切療效，是DB領域研究最熱的中藥單體， 但是至今未被廣泛應用于臨床。這主要是因為小檗堿屬于季銨型生物堿，易被胃腸道中的粘蛋白吸附而影響吸收，難以達到發(fā)揮藥理作用的有效濃度，其體內(nèi)的血藥濃度水平很低，又不宜肌肉注射和靜脈給藥，否則易引起過敏性休克及藥疹等不良反應。國內(nèi)外市場上主要是傳統(tǒng)劑型，如片劑或膠囊，這些劑型由于肝臟的首過效應和生物利用度低，病人用藥次數(shù)頻繁，耐受性差。因此目前改善小檗堿的口服吸收是擴大臨床應用的瓶頸。固體脂質(zhì)納米粒SLN (solid lipid nanoparticles, SLN)是近年正在發(fā)展的新一代亞微粒給藥系統(tǒng)，以固態(tài)的天然或合成的類脂(如卵磷脂、三酰甘油等)為載體，將藥物包裹于類脂核中制成粒徑約為50 IOOOnm的固體膠粒給藥體系。SLN與乳劑、脂質(zhì)體相似，使用生理相容耐受性好、無生物毒性的脂質(zhì)作為基質(zhì)。同時，具備納米粒的物理穩(wěn)定性高、促進吸收、提高生物利用度，節(jié)約資源，控釋以及良好的靶向性，運載藥物通過生物屏障，降低不良反應等優(yōu)勢，又兼具了脂質(zhì)體、乳劑的毒性低、能大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點，是一種極有發(fā)展前景的新型給藥載體，尤其是在中藥領域，很多學者都在探討通過這一輸送系統(tǒng)，主要是使中藥活性成分能更好的吸收，使它們能夠跨過生物膜，進而增強生物利用度，使活性成分的量在作用部位(肝、腦、腎、心臟等)更多或用量減少，因而達到增效減毒的目的。固體脂質(zhì)納米粒的制備方法有高壓乳勻法、乳化沉淀法、微乳法及溶劑擴散法。溶劑擴散法即將藥物與脂質(zhì)、乳化劑溶于有機溶劑中構成油相，將表面活性劑溶于水中構成水相，加熱至同等溫度，在機械攪拌下將油相緩慢注入到水相中，繼續(xù)攪拌將有機溶劑蒸發(fā)，冷卻，過濾即得初分散體，加入凍干保護劑后冷凍干燥，即得固體脂質(zhì)納米粒。此法簡便易行，可操作性強，易于工業(yè)化生產(chǎn)。與小梁喊相關的已有報道的納米化劑型有中國專利CN200810200546. 6公開一種超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法；中國專利CN200610104418. 2公開一種鹽酸黃連素納米乳劑及其制備方法；中國專利CN 01100295. 6公開一種納米復方黃連素制劑藥物及其制備方法；前兩者一個是脂質(zhì)體，一個是乳劑，后者是復方，即多種藥物的混合體，而不是針對小檗堿這一單一有效成分，針對性不強
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有的小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑存在吸收困難、體內(nèi)生物利用度低等缺點，提供方法簡單、生產(chǎn)成本低、便于攜帶運輸、適于任何給藥途徑的一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑。本發(fā)明的另一目的在于提供一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法。所述一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，按質(zhì)量比的原材料組成為
鹽酸小檗堿I
固體脂質(zhì)、 I、
乳化劑5 15
表而活性劑I 3所述固體脂質(zhì)可選自單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、硬脂酸、三肉豆蘧酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、棕櫚酸棕櫚酯、山崳酸甘油酯(C0MPRIT0L888)等中的至少一種；所述乳化劑可選自卵磷脂、蛋黃卵磷脂、吐溫-80、辛酸奎酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、三辛酸甘油酯、月桂酸聚乙二醇甘油酯(GELUCIRE44/14)等中的至少一種；所述表面活性劑可采用泊洛沙姆188等；所述一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，包括以下步驟I)將固體脂質(zhì)和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質(zhì)完全溶解后加入鹽酸小檗堿，溶解后得油相；2)將步驟I)所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去;3)將步驟2)所得的物料探頭超聲，冷卻后，采用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙海?)將步驟3)所得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙杭尤雰龈杀Ｗo劑，冷凍干燥即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，呈納米粒凍干粉。在步驟I)中，所述將固體脂質(zhì)和乳化劑加入有機溶劑后，可在溫度80°C，轉(zhuǎn)速為300r/min恒溫磁力攪拌器攪拌；所述有機溶劑可選自丙酮、氯仿與無水乙醇的的混合溶劑。在步驟2)中，所述水相的溫度可為80°C ;所述含表面活性劑的水相中的水體積可為油相的2倍；所述攪拌的條件可為恒溫攪拌2h。在步驟3)中，所述微孔濾膜可采用0. 45 y m微孔濾膜。在步驟4)中，所述凍干保護劑的加入量按質(zhì)量百分比可為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙旱?0% 15% ;所述凍干保護劑可選自甘露醇、海藻糖、葡萄糖等中的任一種。本發(fā)明所述鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒的基質(zhì)為生理相容性的可生物降解的脂質(zhì)材料，無毒、無刺激性，所加組分均為藥劑學上廣泛應用的輔料。藥物與固體脂質(zhì)的比例通過實驗優(yōu)化得到，鹽酸小檗堿屬難溶性藥物，很難與水溶性或脂溶性的輔料相容，為了得到較滿意的結(jié)果，除了加入起到穩(wěn)定粒子作用的卵磷脂外，還可加入具有增溶作用的乳化劑即吸收促進劑辛酸奎酸聚乙二醇甘油酯，可提高小檗堿在油相中的溶解度，又使油相與水相有一定的互溶性，能夠在納米粒表面形成一層乳化膜，將小檗堿包裹其中，延緩藥物的泄露，促進吸收。本發(fā)明采用表面活性劑吸附于脂質(zhì)納米粒表面，以使脂質(zhì)納米粒達到緩釋的目的。鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米初分散體攪拌后，使用探頭超聲措施，有效減小納米粒粒徑，使其分散均勻。凍干法是一條可在較長時間內(nèi)增加SLN化學和物理穩(wěn)定性的可行途徑，凍干保護劑的加入可以降低水的滲透活性、結(jié)晶作用，對于SLN的聚集和獲得產(chǎn)品干燥后更好的再分散性是十分必要的，凍干后的固體狀態(tài)的納米?？蛇m用于任何給藥途徑，也可進一步用任意比例的水分稀釋成穩(wěn)定的任意濃度的納米初分散體，并制成各種相應劑型，如丸劑、片劑或膠囊等。本發(fā)明提供一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑及其制備方法，經(jīng)文獻檢索，用溶劑擴散法將小檗堿制成固體脂質(zhì)納米粒并通過體內(nèi)藥物代謝動力學來闡明其體內(nèi)行為尚
未見報道，制成的小檗堿固體脂質(zhì)納米?？纱龠M吸收，提高生物利用度，增強藥效。中國專利CN200810200546. 6、CN200610104418. 2前者是脂質(zhì)體，后者是乳劑；中國專利CN 01100295. 6是復方，即多種藥物的混合體，而不是針對小檗堿這一單一有效成分，針對性不強。另外，處方組成、制備方法及給藥途徑與本發(fā)明有顯著差異。
圖I為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒凍干粉。圖2為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒透射電鏡照片。在圖2中，標尺為50mm。圖3為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒粒徑測定結(jié)果。在圖3中，橫坐標為粒徑Size(d, nm),縱坐標為數(shù)量百分比Number (%)。圖4為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒電位測定結(jié)果。在圖4中，橫坐標為電壓ZetaPotential (mV),縱坐標為總計數(shù)。圖5為X衍射結(jié)果。在圖5中，橫坐標為衍射角0 (degree)，縱坐標為衍射強度Intensity (a. u),曲線 a 為 KB,曲線 b 為 BBR,曲線 c 為 BBR-SLN0圖6為H1NMR結(jié)果。在圖6中，橫坐標為化學位移(ppm)，縱坐標為峰強度(rel)；上曲線為BBR，中曲線為KB，下曲線為SLN。圖I為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒體內(nèi)血藥濃度-時間曲線。在圖I中，橫坐標為時間Time (h)，縱坐標為濃度C (ng/mL);標記 為BBR，標記■為BBR-SLN。
具體實施例方式將鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒通過下列實施例進一步說明本發(fā)明的技術方案，但本發(fā)明的保護范圍，不局限于此。實施例I鹽酸小檗堿IOmg
單硬脂酸甘油酯60mg
卵鱗脂60mg
泊洛沙姆20mg
按上述處方稱取鹽酸小檗堿、單硬脂酸甘油酯加入丙酮10mL，于80°C加熱溶解；卵磷脂加入乙醇lmL，超聲IOmin溶解；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例2
鹽酸小檗堿IOmg
三棕櫚酸甘油酯60mg
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、三棕櫚酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的丙酮和乙醇混合溶液中，于80°C加熱溶解；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例3
鹽酸小檗堿IOmg
山崳酸酸討油酯90mg
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的丙酮和乙醇混合溶液中，于80°C加熱溶解作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例4鹽酸小檗堿IOmg
二棕櫚酸甘油酯60mg
卵磷脂60mg
LabrasolI OOiaL
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、三棕櫚酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I I配比的氯仿和乙醇混合溶液中于80°C加熱溶解作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙骸！?br>
實施例5
鹽酸小檗堿IOmg
單硬酯酸甘油酯90mg
LabrasolI OOpL
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例6
鹽酸小檗堿IOmg
山i#酸貨油酯IOOmg
卵磷脂50mg
吐溫80100叫
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、山崳酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒混懸液。實施例7鹽酸小檗堿IOmg
單硬酯酸y-油酯60mg
山箭酸甘油酯60mg
卵磷脂50mg
泊洛沙姆30mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；?懸液。實施例8
鹽酸小檗堿IOmg
三棕櫚酸甘油酯90mg
GELUCIRE44/1450 mg
卵磷脂50mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗堿、三棕櫚酸甘油酯、GELUCIRE44/14、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶于20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恒溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。取上述制得的任一混懸液適量，按I份加入10份甘露醇的比例，溶解后凍干，即可制得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒凍干粉。本發(fā)明制得的鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒初分散體外觀呈淡黃色液體，凍干后為淡黃色粉末(圖1)，為評價其質(zhì)量特征，采用投射電鏡觀察納米粒形態(tài)；納米激光粒度儀測其粒徑、電位；HPLC測定包封率及載藥量；X衍射檢測納米顆粒狀態(tài)；核磁共振氫譜(1HNMR)進行結(jié)構確證。研究發(fā)現(xiàn)，電鏡下觀察鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒呈類圓形，形態(tài)規(guī)整，大小均一(圖2)，粒徑在50 150nm之間(圖3)，電位7. 87mV (圖4)，包封率為58%，載藥量
4.2%，經(jīng)X衍射檢查，納米粒中小檗堿的晶體衍射峰完全消失，表明小檗堿是以非晶態(tài)結(jié)構(無定形)分散在納米粒中，這能夠更好地促進藥物的溶解與吸收(圖5)。H1NMR譜表明，小檗堿固體脂質(zhì)納米粒譜圖中包含空白脂質(zhì)及藥物特征譜，且在相同化學位移處有疊加現(xiàn)象，說明藥物已被包裹進脂質(zhì)(圖6 )。固體脂質(zhì)納米粒凍干粉放置半年后復溶后，平均粒徑比原來分散體大I. 5倍，電位無變化，說明納米粒穩(wěn)定，可長期保存。大鼠體內(nèi)藥物代謝動力學試驗雄性SD大鼠16只，隨機分2組，每組8只，禁食不禁水12h后分別灌胃給予小檗堿原藥(50mg/kg)和小檗堿固體脂質(zhì)納米粒(50mg/kg)，在給藥前及給藥后 0. 083，0. 17，0. 25，0. 5，0. 75，I, 2，3，4，6，8，10，12，24h 眼眶取血 0. 5mL,置肝素鈉抗凝管中，3500r/min，離心IOmin分離血漿，乙腈去蛋白，LC/MS/MS測其血藥濃度，分別繪制血藥濃度-時間曲線(圖7)，DAS2. 0計算藥動學參數(shù)(表I)。結(jié)果表明，與小檗堿原藥組相比，小檗堿固體脂質(zhì)納米粒組血藥濃度Cmax和曲線下面積AUC顯著增加，平均駐留時VRT(O-t)延長，并具有顯著差異(P<0. 05)。說明小檗堿固體脂質(zhì)納米?？纱龠M小檗堿吸收，提高其生物利用度。表I小檗堿固體脂質(zhì)納米粒單次口服給藥藥代動力學參數(shù)
權利要求
1.一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，其特征在于按質(zhì)量比的原材料組成為 鹽酸小檗堿 I; 固體脂質(zhì) 5 15 ; 乳化劑5 15 ; 表面活性劑 I 3。
2.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，其特征在于所述固體脂質(zhì)選自單硬脂酸甘油酷、雙硬脂酸甘油酷、三硬脂酸甘油酷、三月桂酸甘油酷、硬脂酸、三肉豆蓮酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酷、棕櫚酸棕櫚酯、山崳酸甘油酯中的至少ー種。
3.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，其特征在于所述乳化劑選自卵磷脂、蛋黃卵磷脂、吐溫-80、辛酸奎酸聚こニ醇甘油酷、三辛酸甘油酷、月桂酸聚こニ醇甘油酯中的至少ー種。
4.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，其特征在于所述表面活性劑采用泊洛沙姆188。
5.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 1)將固體脂質(zhì)和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質(zhì)完全溶解后加入鹽酸小檗堿，溶解后得油相； 2)將步驟I)所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去； 3)將步驟2)所得的物料探頭超聲，冷卻后，采用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙海? 4)將步驟3)所得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙杭尤雰龈杀Ｗo劑，冷凍干燥即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，呈納米粒凍干粉。
6.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述將固體脂質(zhì)和乳化劑加入有機溶劑后，在溫度80°C，轉(zhuǎn)速為300r/min恒溫磁力攪拌器攪拌。
7.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述有機溶劑選自丙酮、氯仿與無水こ醇的的混合溶剤。
8.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述水相的溫度為80°C;所述含表面活性劑的水相中的水體積可為油相的2倍；所述攪拌的條件可為恒溫攪拌2h。
9.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述微孔濾膜采用0. 45 y m微孔濾膜。
10.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述凍干保護劑的加入量按質(zhì)量百分比為鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米粒混懸液的10% 15% ;所述凍干保護劑可選自甘露醇、海藻糖、葡萄糖中的任ー種。
全文摘要
一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑及其制備方法，涉及一種鹽酸小檗堿。提供方法簡單、生產(chǎn)成本低、便于攜帶運輸、適于任何給藥途徑的一種鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑及其制備方法。按質(zhì)量比的原材料組成為鹽酸小檗堿1；固體脂質(zhì)5～15；乳化劑5～15；表面活性劑1～3。將固體脂質(zhì)和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質(zhì)完全溶解后加入鹽酸小檗堿，溶解后得油相；所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去；所得的物料探頭超聲，冷卻后，采用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?；所得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米?；鞈乙杭尤雰龈杀Ｗo劑，冷凍干燥即得鹽酸小檗堿固體脂質(zhì)納米制劑，呈納米粒凍干粉。
文檔編號A61P31/00GK102949375SQ20121049567
公開日2013年3月6日 申請日期2012年11月28日 優(yōu)先權日2012年11月28日
發(fā)明者楊叔禹, 薛梅, 李學軍 申請人:廈門大學附屬第一醫(yī)院