專(zhuān)利名稱(chēng)：提高喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物活性閉環(huán)率的液體膠束制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠提高 喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物活性閉環(huán)率的膠束制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
喜樹(shù)堿是上個(gè)世紀(jì)60年代從我國(guó)的喜樹(shù)中分離出來(lái)的一鐘抗癌藥物活性分子。由于其水溶性差及毒副作用大等問(wèn)題，通常在活性的非敏感位點(diǎn)修飾上一些取代官能團(tuán)用以提高藥效及水溶性。目前已有兩種喜樹(shù)堿類(lèi)的衍生物伊立替康(CPT-Il)及拓?fù)涮婵?Topotecan)被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)入臨床，已被廣泛用于胃癌、食道癌、胰腺癌及結(jié)腸癌等方面的治療。但是幾乎所有的喜樹(shù)堿類(lèi)藥物都面臨著一個(gè)嚴(yán)峻的問(wèn)題-自身結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性。如附圖I中所示，喜樹(shù)堿類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)中有一個(gè)內(nèi)酯環(huán)，它在中性以及堿性的條件下很容易發(fā)生開(kāi)環(huán)水解，文獻(xiàn)中已經(jīng)明確指出，喜樹(shù)堿類(lèi)的抗癌藥物，只有閉環(huán)形式才是有效的，一旦開(kāi)環(huán)則將失去原有的抗腫瘤活性，并會(huì)導(dǎo)致一些不可避免的毒副作用。而在生理?xiàng)l件下，喜樹(shù)堿類(lèi)化合物的閉環(huán)率僅占10 %左右，所以如何提高喜樹(shù)堿類(lèi)藥物的活性閉環(huán)率是其能否成功應(yīng)用的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。本發(fā)明針對(duì)喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物活性閉環(huán)率低的問(wèn)題，將其制成膠束制劑，可顯著提高其平衡閉環(huán)率。該方法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，能夠有效降低藥物的全身反應(yīng)，有望用于不同階段的腫瘤治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能夠提高喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物活性閉環(huán)率的液體膠束制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提出液體膠束制劑，以聚乙二醇為親水嵌段，聚酯或聚醚為疏水嵌段的兩親性嵌段共聚物為載體材料，藥物喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物為活性成分，水為主體的分散介質(zhì)為溶媒，三者一起共同構(gòu)成；其中，載體材料含量占液體膠束制劑重量的O. 1_40%，所載藥物占液體膠束制劑重量的O. 001-10 %。這一液體膠束制劑能夠有效防止所載的喜樹(shù)堿及其衍生物的內(nèi)酯環(huán)開(kāi)環(huán)，保護(hù)藥物的活性。本發(fā)明中，所述的液體膠束制劑，其中的嵌段共聚物載體材料在制劑中以膠束形
式存在。本發(fā)明中，所述的嵌段共聚物，可以為ABA或BAB型的三嵌段共聚物，AB型的二嵌段共聚物，A-g-B或B-g-A型的接枝共聚物，A(B)n或B(A)n型的多臂共聚物，以及(AB)n型多嵌段共聚物，其中，η為1-8，A為聚乙二醇，B為脂肪族聚酯、聚氨基酸或聚醚。本發(fā)明所述的嵌段共聚物中，所述聚酯嵌段選自聚DL-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、聚原酸酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚ε-烷基取代己內(nèi)酯、聚δ -戊內(nèi)酯、聚酰胺酯、聚丙烯酸酯、聚碳酸酯、聚醚酯中的任何一種，或者上述各類(lèi)脂肪族聚酯的任何形式的共聚物。
本發(fā)明所述的嵌段共聚物中，所述聚醚嵌段選自聚丙醚、聚正丁醚、聚異丁醚、聚戊醚、聚異戊醚中的任何一種，或者上述各類(lèi)脂肪族聚醚的任何形式的共聚物。本發(fā)明所述的嵌段共聚物，包括
(a)10-90 wt %的聚乙二醇的親水性A聚合物嵌段，該親水性A聚合物嵌段平均分子量可為400至20000 ；
(b )90-10 wt %的疏水性B聚合物嵌段，該疏水性B聚合物嵌段分子量可為500-20000。本發(fā)明所述的嵌段共聚物，其聚合物末端可接有功能端基，端基可以是親水的羥基、氣基、竣基、咪唑基、醒基、氰1基、硝基中的任何一種；也可以是疏水的燒基、固醇、燒氧 基、芳香基、芳雜環(huán)基、酸胺酷基、齒素原子、二氣甲基、酷基、疏基、稀丙基中的任何一種。本發(fā)明所述的嵌段共聚物，可以通過(guò)端基進(jìn)行交聯(lián)共聚。
本發(fā)明所述的嵌段共聚物，是上述任意一種嵌段共聚物，也可以是上述兩種或兩種以上嵌段共聚物的混合物，其中包括不同端基的嵌段共聚物的混合物。本發(fā)明中，共聚物在制劑中的重量百分含量為O. I-40%ο本發(fā)明中，所載藥物藥物喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物，可選自喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿、9-硝基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿、7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、拓?fù)涮婵?、伊立替康、魯比替康、依喜替康、貝羅替康、Karenitecin、吉咪替康、吉馬替康之一,或其中幾種的組合。本發(fā)明中，所載藥物在制劑中的重量百分比介于O. 001-10 wt%之間。本發(fā)明中，所述的喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物的有效閉環(huán)形式為20 %-80 %。本發(fā)明中，所述的溶媒可以為純水、緩沖溶液、體液、組織培養(yǎng)液或其他不以有機(jī)溶劑為主體的溶劑介質(zhì)。本發(fā)明的液體膠束制劑，其pH值介于pH 2-8。本發(fā)明的液體膠束制劑的制備方法，可選自下列之一
(I)先配制一定濃度的聚合物溶液，加入適合量的藥物，充分溶解即可。(2)先通過(guò)過(guò)量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，旋蒸鋪膜除去有機(jī)溶劑后，加入一定量的溶媒，攪拌溶解后過(guò)濾。(3)先通過(guò)過(guò)量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，旋蒸鋪膜除去有機(jī)溶劑后，固體殘余物于-20°C或以下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，使用前加入溶媒溶解、體內(nèi)注射。(4)先通過(guò)少量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，通過(guò)透析去除溶劑及不溶藥物，得到載藥膠束制劑。(5)先通過(guò)少量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，再滴入溶媒中，揮發(fā)去除溶劑并過(guò)濾去不溶物。上述方法中嵌段聚合物載體材料在制劑中以膠束形式存在。上述方法中所述的共聚物，可以為ABA或BAB型的三嵌段共聚物、AB型的二嵌段共聚物、A-g-B或B-g-A型的接枝共聚物、A(B)n或B(A)n型的多臂共聚物、以及(AB)n型多嵌段共聚物。其中，η為1-8，A為聚乙二醇，B為脂肪族聚酯或聚醚。上述方法中所述的嵌段共聚物，所述聚酯嵌段選自聚DL-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、聚原酸酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚ε-烷基取代己內(nèi)酯、聚δ -戊內(nèi)酯、聚酰胺酯、聚丙烯酸酯、聚碳酸酯、聚醚酯中的任何一種或者上述各類(lèi)脂肪族聚酯的任何形式的共聚物。上述方法中所述的嵌段共聚物，所述聚醚嵌段選自聚丙醚、聚正丁醚、聚異丁醚、聚戊醚、聚異戊醚中的任何一種或者上述各類(lèi)脂肪族聚醚的任何形式的共聚物。上述方法中所述的嵌段共聚物，其中
(a)聚乙二醇的親水性A聚合物嵌段含量為10-90wt %，聚乙二醇平均分子量為400至 20000 ；
(b)疏水性B聚合物嵌段含量為90-10wt %，該疏水性B聚合物嵌段分子量為500-20000。上述方法中所述的嵌段共聚物，其聚合物末端可接有功能端基，端基可以是親水的輕基、氣基、竣基、咪唑基、醒基、氛基、硝基中的任何一種；也可以是疏水的燒基、固醇、燒氧基、芳香基、芳雜環(huán)基、酰胺酯基、鹵素原子、三氯甲基、酯基、巰基、烯丙基中的任何一種。
上述方法中所述的嵌段共聚物，可以通過(guò)端基進(jìn)行交聯(lián)共聚。上述方法中所述的共聚物，是上述任意一種嵌段共聚物，也可以是上述兩種或兩種以上嵌段共聚物的混合物，其中包括不同端基的嵌段共聚物的混合物。上述方法中所述的載體材料，嵌段共聚物在制劑中的重量百分含量介于O. 1_40%。上述方法中所述的液體膠束制劑，所載藥物選自喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿、9-硝基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿、7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、拓?fù)涮婵怠⒁亮⑻婵?、魯比替康、依喜替康、貝羅替康、Karenitecin、吉咪替康、吉馬替康之一或其組合。上述方法中所述的液體膠束制劑，所載藥物的重量百分比介于O. 001-10 wt%2間。上述方法中所述的喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物的有效閉環(huán)形式為20 %-80 %。上述方法中所述的液體膠束制劑，溶媒可以為純水、緩沖溶液、體液、組織培養(yǎng)液或其他不以有機(jī)溶劑為主體的溶劑介質(zhì)。上述方法中所述的液體膠束制劑，其pH值介于pH 2-8。本發(fā)明所述的液體制劑可用于制備治療腫瘤的藥物制劑。所述腫瘤可以是腦腫瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、直腸癌、睪丸癌、頭頸部癌等原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤
坐寸ο本發(fā)明所述的能有效提高喜樹(shù)堿及其衍生物內(nèi)酯環(huán)閉環(huán)率的液體膠束制劑，可通過(guò)靜脈注射、皮下注射、肌肉注射及瘤內(nèi)注射進(jìn)行給藥。本發(fā)明的膠束制劑能夠顯著提高喜樹(shù)堿類(lèi)藥物的活性閉環(huán)率，增強(qiáng)藥效，有效降低藥物的全身反應(yīng)，可用于不同階段的腫瘤治療。


圖I喜樹(shù)堿類(lèi)藥物的開(kāi)閉環(huán)轉(zhuǎn)換。圖2聚合物膠束粒徑表征。圖3羥基喜樹(shù)堿及拓?fù)涮婵翟赑123溶液中的平衡閉環(huán)率。圖4羥基喜樹(shù)堿在不同聚合物膠束溶液中的平衡閉環(huán)率。圖5拓?fù)涮婵翟诓煌酆衔锬z束溶液中的平衡閉環(huán)率。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1-10 :不同聚合物載體材料的合成 實(shí)施例I
在500 ml三口燒瓶中加入30g雙羥基聚乙二醇(1500)，油浴加熱至130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯59 g，乙交酯7g，26 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至140 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PLGA-PEG-PLGA類(lèi)膠束載體材料。該材料經(jīng)H1NMR檢測(cè)分子量為1670-1500-1670，GPC檢測(cè)分子量分布系數(shù)(#/# )為I. 23。實(shí)施例2
在500 ml三口燒瓶中加入30g單甲氧基封端PEG (MPEG, 1500), 130 °〇真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯31 g，乙交酯7. 5g，13 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)， 100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒入80 °C熱水中，充分沉降后棄去上部水份，得MPEG-PLGA類(lèi)載體材料，經(jīng)核磁檢測(cè)分子量為1500-1820，GPC檢測(cè)分子量分布系數(shù)(#/# )為I. 28。實(shí)施例3
在500 ml三口燒瓶中加入30 g雙羥基聚乙二醇(1500)，120 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯25.17 g，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，加入環(huán)己內(nèi)酯48 g，26 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空10分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)18小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒入80 °C熱水中，充分沉降后棄去上部水份，得PCLA-PEG-PCLA類(lèi)載體材料，經(jīng)核磁檢測(cè)分子量為1800-1500-1800。實(shí)施例4
在500 ml三口燒瓶中加入30g單甲氧基封端PEG (MPEG, 1500), 130 °〇真空除水4小時(shí)，通IS氣冷卻至70 °C ,加入丙交酯30g,己內(nèi)酯10 g, 13 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PEG-PCLA類(lèi)載體材料。實(shí)施例5
在500 ml三口燒瓶中加入30 g雙羥基聚乙二醇(1500)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入己內(nèi)酯58.84 g，乙交酯3. 16 g，26 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100°C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PCGA-PEG-PCGA類(lèi)膠束載體材料。核磁檢測(cè)分子量為1500-1500-1500。實(shí)施例6
在500 ml三口燒瓶中加入30 g單甲氧基封端PEG(MPEG，1500)，130 °〇真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯15 g，乙交酯7. 5g，13 mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PEG-PCGA類(lèi)載體材料。實(shí)施例7
在500 ml三口燒瓶中加入30g雙羥基聚乙二醇(1500)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入己內(nèi)酯60g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PCL-PEG-PCL類(lèi)膠束載體材料。實(shí)施例8 在500 ml三口燒瓶中加入30g雙羥基聚乙二醇(1500)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯60g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PLA-PEG-PLA類(lèi)膠束載體材料。實(shí)施例9
在 500 ml 三口燒瓶中加入 30 g F127 (Mw 12600, 30wt%PE0), 130 1真空除水 4 小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯60g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得PLA-PE0-PP0-PE0-PLA類(lèi)膠束載體材料。實(shí)施例10
取2 g端基分別為醛基及羥基的PEG (1500)，120°C真空除水2小時(shí)，通氬氣冷卻至70°C，加入丙交酯2. 3 g，2 mg辛酸亞錫，100 °C抽真空20分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，注入100 ml蒸餾水，充分溶解后于截留分子量為3500的透析袋中透析，冷凍干燥后得產(chǎn)品。經(jīng)核磁檢測(cè)分子量為1500-1700。實(shí)施例11-23 :聚合物載體材料的不同端基修飾 實(shí)施例11
取20 g聚合物材料PLGA-PEG-PLGA，加入5 g 丁二酸酐，2 ml吡啶，共溶于200 ml 二氯甲烷中，回流48小時(shí)。懸蒸除去部分有機(jī)溶劑和吡啶后，冷卻析出未反應(yīng)的丁二酸酐，過(guò)濾去濾液。再次旋蒸除去大部分有機(jī)溶劑，用10倍過(guò)量乙醚沉淀，過(guò)濾得產(chǎn)品，真空干燥，得雙端基為羧基的載體材料。實(shí)施例12
取20 g聚合物材料P123 (Mw 5800, 30 wt% ΡΕ0)，加入5 g 丁二酸酐，2 ml吡啶，共溶于200 ml 二氯甲烷中，回流48小時(shí)。懸蒸除去部分有機(jī)溶劑和吡啶后，冷卻析出未反應(yīng)的丁二酸酐，過(guò)濾去濾液。再次旋蒸除去大部分有機(jī)溶劑，用10倍過(guò)量乙醚沉淀，過(guò)濾得產(chǎn)品，真空干燥，得雙端基為竣基的載體材料。實(shí)施例13
取20 g實(shí)例2中合成的聚合物材料MPEG-PLGA (Mw 1500-1820)，加入5 g 丁二酸酐，2 ml吡啶，共溶于200 ml 二氯甲烷中，回流48小時(shí)。懸蒸除去部分有機(jī)溶劑和吡啶后，冷卻析出未反應(yīng)的丁二酸酐，過(guò)濾去濾液。再次旋蒸除去大部分有機(jī)溶劑，用10倍過(guò)量乙醚沉淀，過(guò)濾得產(chǎn)品，真空干燥，得單端基為羧基的載體材料。實(shí)施例14
取20 g聚合物材料P85 (Mw 4600，50 wt% ΡΕ0), 130 1真空除水4小時(shí)，加入50 ml乙腈成溶液，緩慢滴入4倍聚合物羥基過(guò)量的CDI乙腈溶液中，反應(yīng)過(guò)夜。后將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移出并緩慢滴入乙二胺中，反應(yīng)4小時(shí)，得雙端基為氨基的膠束載體材料。實(shí)施例15
取20 g實(shí)例I中合成的聚合物材料PLGA-PEG-PLGA( 1670-1500-1670)，130 °C真空除水4小時(shí)，加入50 ml乙腈成溶液，緩慢滴入4倍聚合物羥基過(guò)量的⑶I乙腈溶液中，反應(yīng)過(guò)夜。后將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移出并緩慢滴入乙二胺中，反應(yīng)4小時(shí)，得雙端基為氨基的膠束載體材料。實(shí)施例16
取20 g實(shí)例2中合成的聚合物材料MPEG-PLGA (Mw 1500-1820)，130 1真空除水4小時(shí)，加入50 ml乙腈成溶液，緩慢滴入4倍聚合物羥基過(guò)量的CDI乙腈溶液中，反應(yīng)過(guò)夜。后將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移出并緩慢滴入乙二胺中，反應(yīng)4小時(shí)，得單端基為氨基的膠束載體材料。實(shí)施例17
取實(shí)例I中合成的聚合物材料PLGA-PEG-PLGA( 1670-1500-1670) 15 g，加入tV-Boc-組氨酸3. Og, I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHC1) 3. 5g，4- 二甲氨基嘧啶(DMAP) 2.6 g，二氯甲烷150 ml，常溫下反應(yīng)48小時(shí)。懸蒸除去部分溶劑，用乙醚沉 淀，進(jìn)一步用80 °C洗滌，除去殘余的未反應(yīng)物和催化劑，冷凍干燥。得雙端基為氨基酸(組氨酸)的膠束載體材料。實(shí)施例18
取實(shí)例2中合成的聚合物材料MPEG-PLGA (Mw 1500-1820) 15 g，加入Hoc-組氨酸
3.Og, I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHCl) 3. 5g，4_ 二甲氨基嘧啶(DMAP) 2. 6 g，二氯甲烷150 ml，常溫下反應(yīng)48小時(shí)。懸蒸除去部分溶劑，用乙醚沉淀，進(jìn)一步用80 °C洗滌，除去殘余的未反應(yīng)物和催化劑，冷凍干燥。得單端基為氨基酸(組氨酸)的膠束載體材料。實(shí)施例19
取聚合物F68 (Mw 8400，80 wt% PE0)15 g，加入AlBoc-組氨酸 3. 0g，I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHCl) 3. 5g，4-二甲氨基嘧啶(DMAP) 2. 6 g，二氯甲烷150 ml，常溫下反應(yīng)48小時(shí)。懸蒸除去部分溶劑，用乙醚沉淀，進(jìn)一步用80 °C洗滌，除去殘余的未反應(yīng)物和催化劑，冷凍干燥。得雙端基為氨基酸(組氨酸)的膠束載體材料。實(shí)施例20
取聚合物PLGA-PEG-PLGA 15 g溶解于二氯甲烷，慢慢滴加入丙烯酰氯(4 mL)的二氯甲烷溶液(50 mL)，以三乙胺(4 mL)作為縛酸劑，在冰浴下滴加8小時(shí)，后常溫?cái)嚢璺磻?yīng)48h。用冰乙醚沉淀，真空干燥，得雙端基為烯丙基修飾的膠束載體材料。實(shí)施例21
取聚合物MPEG-PLGA 15 g溶解于二氯甲烷，慢慢滴加入丙烯酰氯(4 mL)的二氯甲烷溶液(50 mL)，以三乙胺(4 mL)作為縛酸劑，在冰浴下滴加8小時(shí)，后常溫?cái)嚢璺磻?yīng)48h。用冰乙醚沉淀，真空干燥，得雙端基為烯丙基修飾的膠束載體材料。實(shí)施例22
取聚合物F127 (Mwl2600, 70 wt% ΡΕ0) 15 g溶解于二氯甲烷，慢慢滴加入丙烯酰氯(4 mL)的二氯甲烷溶液(50 mL)，以三乙胺(4 mL)作為縛酸劑，在冰浴下滴加8小時(shí)，后常溫?cái)嚢璺磻?yīng)48h。用冰乙醚沉淀，真空干燥，得雙端基為烯丙基修飾的膠束載體材料。實(shí)施例23
取實(shí)例20-22中合成的聚合物材料，溶于磷酸鹽緩沖液，加入交聯(lián)劑APS及TEMED，得端基交聯(lián)的膠束載體材料。
實(shí)施例24-27 :親水段的分子量及比例 實(shí)施例24
在500 ml三口燒瓶中加入10 g雙羥基聚乙二醇(1500)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯90g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得親水段比例為10 %的膠束載體材料。實(shí)施例25
在500 ml三口燒瓶中加入45 g雙羥基聚乙二醇(1500)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯5 g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得親水段比例為90 %的膠束載體材料。
實(shí)施例26
在500 ml三口燒瓶中加入30 g雙羥基聚乙二醇(400)，130 1真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯60g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得親水段分子量為400的膠束載體材料。實(shí)施例27
在500 ml三口燒瓶中加入30 g雙羥基聚乙二醇(50000)，130 °〇真空除水4小時(shí)，通氬氣冷卻至70 °C，加入丙交酯60g，26mg辛酸亞錫(含少量甲苯)，100 °C抽真空30分鐘，通氬氣，升溫至130 °C反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，趁熱將產(chǎn)物倒出，冷卻后把產(chǎn)物溶于二氯甲烷，乙醚沉淀。得親水段分子量為50000的膠束載體材料。實(shí)施例28-37 不同的包載藥物 實(shí)施例28
將5 mg喜樹(shù)堿與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙猓吹冒d喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例29
將5 mg喜樹(shù)堿與10 g Pluronic聚合物(P85，P123)共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例30
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例31
將5 mg輕基喜樹(shù)喊與10 g Pluronic聚合物P84 (Mw4200, 40 wt%PE0)共溶于100ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例32
將5 mg拓?fù)涮婵蹬c5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例33
將5 mg拓?fù)涮婵蹬c10 g Pluronic聚合物(F68，F(xiàn)127)共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例34
將5 mg伊立替康與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例35
將5 mg伊立替康與10 g Pluronic聚合物P123共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例36
將5 mg 9-硝基喜樹(shù)堿與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例37
將5 mg 9-硝基喜樹(shù)堿與10 g Pluronic聚合物P103共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例38-39 :包載藥物的重量百分比 實(shí)施例38
將I mg喜樹(shù)堿與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙猓吹冒d喜樹(shù)堿的重量百分比為O. 001%膠束制劑。實(shí)施例39
將10 g伊立替康與5 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的重量百分比為10%膠束制劑。實(shí)施例40-41 :載體材料在膠束制劑中的重量百分比 實(shí)施例40
將5 mg喜樹(shù)堿與I g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于99 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得載體材料的重量百分比為I %的膠束制劑。實(shí)施例41 :載體材料在膠束制劑中的重量百分比
將5 mg喜樹(shù)堿與40 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于60 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得載體材料的重量百分比為40 %的膠束制劑。實(shí)施例42-44 :不同制備方法 實(shí)施例42
將 10 mg 拓?fù)涮婵蹬c I g Pluronic 聚合物(F68，F(xiàn)127, P84, P85, P123)共溶于 10 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載拓?fù)涮婵档哪z束制劑。實(shí)施例43
將 10 mg 喜樹(shù)堿與 I g Pluronic 聚合物(F68，F(xiàn)127，P84，P85，P123)溶于 20 ml 無(wú)水乙醇中，充分溶解后，旋蒸鋪膜出去絕大部分乙醇，后馬上加入10 ml磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)攪拌溶解半小時(shí)，過(guò)濾得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例44
將 10 mg 喜樹(shù)堿與 I g Pluronic 聚合物(F68，F(xiàn)127，P84，P85，P123)溶于 20 ml 無(wú)水乙醇中，充分溶解后，旋蒸鋪膜出去絕大部分乙醇，取出固體殘余物，于_20°C或以下儲(chǔ)存?zhèn)溆?，使用前加?0 ml磷酸鹽緩沖液溶解、體內(nèi)注射。
實(shí)施例45-48 :不同溶媒 實(shí)施例45
將5 mg喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml生理鹽水中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例46
將5 mg喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml組織培養(yǎng)液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例47
將5 mg喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例48
將10 mg喜樹(shù)堿與I g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0溶于20 ml無(wú)水乙醇中，充分溶解后，旋蒸鋪膜出去部分乙醇，后馬上加入10 ml磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)攪拌溶解半小時(shí)，過(guò)濾得以水性介質(zhì)為主體溶媒的包載喜樹(shù)堿的膠束制劑。實(shí)施例49-52 :包載藥物的活性閉環(huán)率 實(shí)施例49
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g不同種類(lèi)聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，調(diào)節(jié)PH至pH7. 4，經(jīng)HPLC測(cè)定藥物平衡閉環(huán)率，結(jié)果見(jiàn)圖4。實(shí)施例50
將5 mg拓?fù)涮婵蹬c20 g不同種類(lèi)聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙猓{(diào)節(jié)PH至pH7. 4，經(jīng)HPLC測(cè)定藥物平衡閉環(huán)率，結(jié)果見(jiàn)圖5。實(shí)施例51
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與I g不同種類(lèi)聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，調(diào)節(jié)pH至pH7. 4，經(jīng)HPLC測(cè)定藥物平衡閉環(huán)率，為19. I %。實(shí)施例52
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與40 g不同種類(lèi)聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，調(diào)節(jié)pH至pH7. 4，經(jīng)HPLC測(cè)定藥物平衡閉環(huán)率，為75 %。實(shí)施例53-57 :混合載體材料 實(shí)施例53
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0及10 g聚合物PLGA-PEG-PLGA共溶于100 ml生理鹽水中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙猓吹冒d喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。實(shí)施例54
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0及10 g聚合物MPEG-PLGA共溶于100ml生理鹽水中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙猓吹冒d喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。實(shí)施例55
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0及10 g聚合物端羧基修飾的ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。實(shí)施例56將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g聚合物PEG-PCL及10 g聚合物端羧基修飾的PEG-PCL共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。實(shí)施例57
將5 mg輕基喜樹(shù)堿與10 g端氨基修飾的聚合物PEG-PLA及10 g聚合物端羧基修飾的PEG-PLA共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。實(shí)施例58
將5 mg羥基喜樹(shù)堿與10 g端烯丙基修飾的聚合物ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0及10 g聚合物端羧基修飾的ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0共溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中，室溫?cái)嚢柚寥咳芙?，即得包載喜樹(shù)堿的混合膠束制劑。
權(quán)利要求
1.一種液體膠束制劑，其特征在于，以聚乙二醇為親水嵌段、聚酯或聚醚為疏水嵌段的兩親性嵌段共聚物為載體材料，藥物喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物為活性成分，水為主體的分散介質(zhì)為溶媒，三者一起共同構(gòu)成；其中，嵌段聚合物載體材料以膠束形式存在；載體材料含量占液體膠束制劑重量的O. 1_40%，所載藥物占液體膠束制劑重量的O. 001-10 % ;液體膠束制劑pH值為2-8。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于，所述共聚物為ABA或BAB型的三嵌段共聚物，AB型的二嵌段共聚物，A-g-B或B-g-A型的接枝共聚物，A (B) n或B (A) n型的多臂共聚物，或者(AB)n型多嵌段共聚物，其中η為1-8，A為聚乙二醇，B為脂肪族聚酯、聚氨基酸或聚醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的液體膠束制劑，其特征在于，所述的共聚物中，聚酯嵌段選自聚DL-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、聚原酸酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚ε-烷基取代己內(nèi)酯、聚S-戊內(nèi)酯、聚酰胺酯、聚丙烯酸酯、聚碳酸酯、聚醚酯中的任何一種，或者上述各類(lèi)脂肪族聚酯的任何形式的共聚物；所述聚醚嵌段選自聚丙醚、聚正丁醚、聚異丁醚、聚戊醚、聚異戊醚中的任何一種，或者上述各類(lèi)脂肪族聚醚的任何形式的共聚物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于，所述的共聚物中，包括 (a)聚乙二醇的親水性A聚合物嵌段含量為10-90wt %，聚乙二醇平均分子量為400至 20000 ； (b)疏水性B聚合物嵌段含量為90-10wt %，該疏水性B聚合物嵌段分子量為500-20000。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于，所述的共聚物，其聚合物末端接有功能端基，所述端基是親水的羥基、氨基、羧基、咪唑基、醛基、氰基、硝基中的任何一種；或者是疏水的燒基、固醇、燒氧基、芳香基、芳雜環(huán)基、酸胺酷基、齒素原子、二氣甲基、酷基、疏基、稀丙基中的任何一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于所載藥物選自喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿、9-硝基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿、7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、拓?fù)涮婵?、伊立替康、魯比替康、依喜替康、貝羅替康、Karenitecin、吉咪替康、吉馬替康之一，或其中幾種組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于所述的喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物的有效閉環(huán)形式為20 %-80 %。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑，其特征在于所述溶媒為純水、緩沖溶液、體液、組織培養(yǎng)液或其他不以有機(jī)溶劑為主體的溶劑介質(zhì)。
9.一種如權(quán)利要求I所述液體膠束制劑的制備方法，其特征在于選自下列之一 (1)先配制一定濃度的聚合物溶液，加入適合量的藥物，充分溶解； (2)先通過(guò)過(guò)量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，旋蒸鋪膜除去有機(jī)溶劑后，加入一定量的溶媒，攪拌溶解后過(guò)濾； (3)先通過(guò)過(guò)量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，旋蒸鋪膜除去有機(jī)溶劑后，固體殘余物于_20°C或_20°C以下儲(chǔ)存?zhèn)溆茫褂们凹尤肴苊饺芙?、體內(nèi)注射； (4)先通過(guò)少量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，通過(guò)透析去除溶劑及不溶藥物，得到載藥膠束制劑； (5)先通過(guò)少量有機(jī)溶劑共溶聚合物與藥物，再滴入溶媒中，揮發(fā)去除溶劑并過(guò)濾去不溶物。
10.一種如權(quán)利要求I所述的液體膠束制劑在制備治療腫瘤藥物制劑中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤，其類(lèi)別為腦腫瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、直腸癌、睪丸癌、頭頸部癌等原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物制劑通過(guò)靜脈注射、皮下注射、肌肉注射或瘤內(nèi)注射進(jìn)行給藥。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種能夠提高喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物活性閉環(huán)率的膠束制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明以?xún)捎H性共聚物為載體材料，以膠束形態(tài)物理負(fù)載活性劑量的喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物的藥物分子，以水性介質(zhì)為主要溶媒三種共同組成。其中載體材料的主體結(jié)構(gòu)以聚乙二醇為親水段、以聚酯、聚氨基酸或聚醚為疏水段，藥物分子為喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿、9-硝基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿、7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿、拓?fù)涮婵?、伊立替康、魯比替康、依喜替康、貝羅替康、Karenitecin、吉咪替康、吉馬替康等的一種或多種。這種膠束制劑能夠顯著提高喜樹(shù)堿類(lèi)藥物的活性閉環(huán)率，增強(qiáng)藥效，能夠有效降低藥物的全身反應(yīng)，可用于不同階段的腫瘤治療。
文檔編號(hào)A61K47/34GK102961332SQ201210515169
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月5日
發(fā)明者丁建東, 慈天元, 常廣濤, 俞麟 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)