一種非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于診斷試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種穩(wěn)定的非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑，其特征在于凍干粉由下列組分制成：緩沖液0.005M-1M，非對稱二甲基精氨酸水解酶3uM-30uM，二硫蘇糖醇1mM-10mM，甘露醇1％-10％，葡萄糖1％-10％，pH值調(diào)至5-9，超純水加至1000ml。本發(fā)明制備得到的凍干粉劑具有更高的活性和更好的穩(wěn)定性。
【專利說明】一種非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑及制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于診斷試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種穩(wěn)定的非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑。
【背景技術(shù)】
[0002]非對稱二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine, ADMA)是一種心血管疾病的生物標(biāo)記物。該化合物在胞內(nèi)生成后會轉(zhuǎn)移至血漿內(nèi)，可抑制精氨酸產(chǎn)生一氧化氮，而一氧化氮是對內(nèi)皮細(xì)胞及心血管有益的物質(zhì)。研究表明，ADMA作為危重病的危險因子，其體內(nèi)的表達(dá)水平對急性心肌梗塞，動脈粥狀硬化、糖尿病以及肝腎功能衰竭等疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸具有重要的預(yù)測價值和臨床意義。因此，快速準(zhǔn)確檢測ADMA含量方法的建立對基礎(chǔ)研究和臨床診斷都有非常重要的意義。
[0003]目前，ADMA最主要的檢測方法包括質(zhì)譜法，高效液相色譜法和酶聯(lián)免疫法，但這些檢測方法存在測定程序復(fù)雜、耗時、樣品需要預(yù)處理以及測試儀器價格昂貴等弊端，不能應(yīng)用于臨床大流量的自動化分析。而酶學(xué)循環(huán)法的ADMA檢測試劑盒原理如下:非對稱二甲基精氨酸水解酶(Dimethylarginine Dimethylaminohydrolase, DDAH)催化組織樣本中的ADMA水解，生成L-瓜氨酸(L-citrulline) ;L_瓜氨酸在瓜氨酸水解酶(Citrullinehydrolase)和鳥氨酸氨甲酸轉(zhuǎn)移酶(Ornithline carbamoyl transferase,OCT)及其底物組成的酶循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)中不斷循環(huán)反應(yīng)，從而大大地提高反應(yīng)靈敏度，L-瓜氨酸生成量與樣本中的ADMA含量成正比，通過測循環(huán)酶反應(yīng)體系中氨的生成速率，就可以達(dá)到測定樣本中ADMA的目的。該方法可直接應(yīng)用于目前醫(yī)院檢驗科廣泛使用的臨床生化自動分析儀，無 需額外的特別處理、操作簡便、靈敏度高且成本低廉，可實現(xiàn)快速、大流量的樣本測試，使ADMA成為臨床常規(guī)檢測項目成為可能，具有極高的科學(xué)和經(jīng)濟(jì)價值。
[0004]DDAH是酶學(xué)循環(huán)法檢測早期急性心肌梗塞(Acute myocardial infarct ion, AMI)的生物標(biāo)記物一的重要工具酶。而DDAH在生物學(xué)上的功能有調(diào)節(jié)NO生成，促進(jìn)血管新生和細(xì)胞分化等，目前的研究主要集中于它在疾病代謝中所起的調(diào)節(jié)作用。而DDAH的表達(dá)純化則多用于功能研究和藥物篩選模型的實驗材料，所以DDAH的生產(chǎn)仍局限于機(jī)制研究的實驗室水平。所生產(chǎn)的DDAH穩(wěn)定性差，只能進(jìn)行低溫保存，在常溫下保存會發(fā)生降解，不能滿足產(chǎn)業(yè)化的試劑盒用酶對于常溫保存等方面的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]由于DDAH本身穩(wěn)定性不好，可以將其制備成凍干粉針劑提高其穩(wěn)定性，而DDAH在普通的凍干過程中易損失大量活性。針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性顯著提高的非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑。采用本發(fā)明的組成制備的非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑進(jìn)行一步改善了制劑的穩(wěn)定性，能顯著延長試劑的使用期限。
[0006]本發(fā)明研究人員在對非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑的研究過程中發(fā)現(xiàn)，采用本發(fā)明的處方制備的凍干粉針劑在冷凍干燥和長期保存過程中的穩(wěn)定性明顯的提高，對于該試劑的臨床使用具有重要意義。
[0007]本發(fā)明非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑由下列組分制成:非對稱二甲基精氨酸水解酶，三羥甲基氨基甲烷，二硫蘇糖醇，甘露醇，葡萄糖，鹽酸，超純水。
[0008]其優(yōu)選組分為:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種非對稱二甲基精氨酸水解酶凍干粉針劑，其特征在于粉干粉包含以下列組分:緩沖液，非對稱二甲基精氨酸水解酶，二硫蘇糖醇，甘露醇，葡萄糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，作為緩沖液體系的試劑可以是三羥甲基氨基甲烷，濃度從0.005M到1M，優(yōu)選0.01M到0.1M。但不限于三羥甲基氨基甲烷，可以是磷酸緩沖液，也可以是N-(2-羥乙基)哌嗪-N，-(2-乙基磺酸)(HEPES)緩沖液等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，非對稱二甲基精氨酸水解酶的濃度從3uM到30uM，優(yōu)選IOuM到30uM。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，二硫蘇糖醇的濃度從ImM到10禮，優(yōu)選2mM到5mM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1，甘露醇的濃度從1%到10%，優(yōu)選2%到5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1，葡 萄糖的濃度從1%到10%，優(yōu)選2%到5%。
【文檔編號】A61K9/19GK103845739SQ201210516466
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月4日
【發(fā)明者】趙志敬, 胡廣, 王學(xué)忠 申請人:紹興科銳捷生物科技有限公司, 北大工學(xué)院紹興技術(shù)研究院