專利名稱：一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于載藥微球的制備領(lǐng)域，特別涉及一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法。
背景技術(shù)：
納米載藥系統(tǒng)是利用物理或化學(xué)的方法將藥物包被、連接或者溶解到納米載藥系統(tǒng)內(nèi)部或者被吸附到納米載體的表面，對(duì)藥物的控釋機(jī)理可以通過滲透、擴(kuò)散，也可以是通過基質(zhì)本身的降解將藥物釋放出來，因此納米載藥系統(tǒng)有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)緩釋藥物起到延長藥物作用的時(shí)間，提高藥物的利用；在不改變療效的前提下減少給藥量；提高藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性。近年來制備納米載藥顆粒的研究比較熱，同時(shí)透析法也是近年來興起的一種用于制備聚合物緩釋納米顆粒的方法，有傳統(tǒng)透析法，雙膜透析法和不同面積透析法，其制備過程簡(jiǎn)單，避免了表面活性劑的應(yīng)用，同時(shí)制備出來的納米載藥顆粒穩(wěn)定性比較好。藥物載體是納米微粒緩釋體系的重要部分，也是影響藥效的主要因素。N-乙烯基己內(nèi)酰胺(NVCL)屬于乙烯基化的內(nèi)酰胺化合物，其LCST值處于生理溫度范圍內(nèi)(3(Γ40° C)。具有良好的生物適應(yīng)性，并且其聚合物水解后沒有毒性，沒有氨基衍生物的生成，使得其系列高聚物在生物和醫(yī)藥材料中具有極其廣泛的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法，本發(fā)明的方法融合了簡(jiǎn)單易操作的合成和可重復(fù)性較好的透析的方法；本發(fā)明得到的溫敏性納米載藥微球具有較好的緩釋效果。本發(fā)明的一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法，包括(I)將酮洛芬與醋酸乙烯酯、醋酸汞和醋酸銅混合后，攪拌均勻，加入濃硫酸，70°C反應(yīng)3-5h，分離提純，得到酮洛芬乙烯酯，其中酮洛芬、醋酸乙烯酯、醋酸汞和醋酸銅的比例為 O. 05mol 150mL :0. 3g :0. 2mg ；(2)將酮洛芬乙烯酯與N-乙烯基己內(nèi)酰胺混合加入微量聚合管中，加入引發(fā)劑和溶劑，抽真空充氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至7(T80°C，恒溫反應(yīng)6lh，進(jìn)行自由基聚合反應(yīng)，即得溫敏性的酮洛芬共聚物，其中酮洛芬乙烯酯和N-乙烯基己內(nèi)酰胺的摩爾比為1:1，1:2，1:3，1:4或2:1，引發(fā)劑占總混合物質(zhì)量的O. 5 2. 5% ；(3)將上述得到的溫敏性的酮洛芬共聚物干燥，然后溶解，透析，經(jīng)預(yù)冷凍和冷凍干燥后即得到溫敏性納米載藥微球。所述步驟(I)中分離提純的方法為凝膠柱的方法提純，洗脫液與展開劑都采用體積比為9:1的石油醚和乙酸乙酯。所述步驟(2)中引發(fā)劑為偶氮二異丁腈AIBN。所述步驟(2)中的溶劑為N，N-甲基甲酰胺DMF。
所述步驟(3)中透析為在去離子水中進(jìn)行的，前3h每Ih換一次水，后21h每3h換一次水；所述步驟(3)中預(yù)冷凍溫度為-2(T-10°C，預(yù)冷凍時(shí)間24 36h，冷凍干燥溫度為-4(T-45°C，冷凍干燥時(shí)間為24 36h。溫敏性納米載藥微球在PBS緩沖液中進(jìn)行酮洛芬藥物的釋放，溫敏性納米載藥微球的藥物體外釋放是在pH=l. 2和pH=7. 4的條件下進(jìn)行的。有益.效果(I)本發(fā)明的方法融合了簡(jiǎn)單易操作的合成和可重復(fù)性較好的透析的方法；(2)本發(fā)明方法綠色、安全、便于操作和容易控制的優(yōu)點(diǎn)；(3)本發(fā)明得到的溫敏性納米載藥微球具有較好的緩釋效果。


圖I :酮洛芬乙烯酯(KVE)、N-乙烯基己內(nèi)酰胺(NVCL)、Poly (KVE-co-NVCL)的核磁共振氫譜譜圖；圖2 N-乙烯基己內(nèi)酰胺(NVCL)、酮洛芬乙烯酯(KVE)、Poly (KVE-co-NVCL)的紅外光譜；圖3 . Poly (KVE-co-NVCL)制備的納米微球的場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡圖；圖4 =Poly (KVE-co-NVCL)載藥納米微球在PBS緩沖液為pH=7. 4和pH=l. 2時(shí)的藥物釋放。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例I將O. 05mol酮洛芬與150mL醋酸乙烯酯,O. 3g醋酸萊,0. 2mg醋酸銅加入反應(yīng)瓶中，混合均勻后加入2滴濃硫酸，于70°C下反應(yīng)3飛個(gè)小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束加入3g無水醋酸鈉初步處理后，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析分離，洗脫劑和展開劑都選擇體積比為9:1的石油醚和乙酸乙酯，用I2顯色，收集到的洗脫液經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去洗脫劑，得到酮洛芬乙烯酯化合物。將500mg酮洛芬乙烯酯和IOmg AIBN加入到微量聚合管中，密封后抽真空充氮?dú)庥?0°C下反應(yīng)8小時(shí)結(jié)束，用丙酮和甲醇交替洗去單體得到酮洛芬乙烯酯均聚物。將上述得到的酮洛芬乙烯酯與N-乙烯基己內(nèi)酰胺按摩爾比1:1，1:2，1:3，1:4，2:1混合于微量聚合管中，AIBN (2%，w/w)作為引發(fā)劑，溶解到DMF (Img/μ L)中，密封后抽真空充氮?dú)?，?0°C下反應(yīng)8小時(shí)結(jié)束，用丙酮和環(huán)己烷洗去單體得到溫敏性的酮洛芬共聚物。稱取Poly (KVE-co-NVCL)于安培瓶中，用O. 4mL丙酮溶解，再把聚合物的丙酮溶液轉(zhuǎn)入到透析袋中，用I. 5L去離子水透析24h，前3h每Ih換一次水，后21h每3h換一次水。透析結(jié)束后，將透析袋內(nèi)的液體在_20°C預(yù)冷凍24h以上，置于冷凍干燥機(jī)中，在_40°C "-45°C冷凍干燥24tT36h，得到的固體存放在4°C的冰柜中待用。實(shí)施例2分別稱取約5mg的溫敏性的酮洛芬共聚物(酮洛芬乙烯酯N-乙烯基己內(nèi)酰胺=1:2，mol/mol)于兩個(gè)洗凈的透析袋中，袋中裝入ImL緩沖溶液，封口分別裝入盛有10mLpH=7. 4和pH=l. 2的PBS緩沖液的磨口錐形瓶中，在磁力轉(zhuǎn)子攪拌下，35°C進(jìn)行體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)。前15h每間隔Ih更換一次緩沖液，之后每間隔5h將錐形瓶中的IOml緩沖液全部取出，并添加IOmL新鮮的緩沖液,連續(xù)取樣10天。HPLC方法(色譜柱Dikma KromasilC18,5y ,250X4. 6mm，流動(dòng)相為甲醇/水，80:20，v/v，檢測(cè)波長為254nm，流速為lmL/min)檢測(cè)釋放物成分，用紫外分光光度法檢測(cè)并計(jì)算介質(zhì)中藥物的濃度(波長為254nm)。實(shí)施例3分別稱取約5mg溫敏性的酮洛芬共聚物(酮洛芬乙烯酯N-乙烯基己內(nèi)酰胺=1:2，mol/mol)和酮洛芬乙烯酯均聚物于兩個(gè)洗凈的透析袋中，袋中裝入ImL緩沖溶液，封口分 別裝入盛有IOmL pH=7. 4的PBS緩沖液的磨口錐形瓶中，在磁力轉(zhuǎn)子攪拌下，35°C進(jìn)行體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)。前15h每間隔Ih更換一次緩沖液，之后每間隔5h將錐形瓶中的IOml緩沖液全部取出，并添加IOmL新鮮的緩沖液,連續(xù)取樣10天。HPLC方法(色譜柱Dikma KromasilC18,5y ,250X4. 6mm，流動(dòng)相為甲醇/水，80:20，v/v，檢測(cè)波長為254nm，流速為lmL/min)檢測(cè)釋放物成分，用紫外分光光度法檢測(cè)并計(jì)算介質(zhì)中藥物的濃度(波長為254nm)。
權(quán)利要求
1.一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法，包括 (1)將酮洛芬與醋酸乙烯酯、醋酸汞和醋酸銅混合后，攪拌均勻，加入濃硫酸，70°c反應(yīng)3-5h，分離提純，得到酮洛芬乙烯酯，其中酮洛芬、醋酸乙烯酯、醋酸汞和醋酸銅的比例為O.05mol 150mL :0. 3g :0. 2mg ； (2)將酮洛芬乙烯酯與N-乙烯基己內(nèi)酰胺混合加入微量聚合管中，加入引發(fā)劑和溶齊U，抽真空充氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至7(T80°C，恒溫反應(yīng)6lh，進(jìn)行自由基聚合反應(yīng)，即得溫敏性的酮洛芬共聚物，其中酮洛芬乙烯酯和N-乙烯基己內(nèi)酰胺的摩爾比為1:1，1:2，1:3，1:4或2:1，引發(fā)劑占總混合物質(zhì)量的O. 5 2. 5% ； (3)將上述得到的溫敏性的酮洛芬共聚物干燥，然后溶解，透析，經(jīng)預(yù)冷凍和冷凍干燥后即得到溫敏性納米載藥微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝溫敏性納米載藥微球的方法，其特征在于所述步驟(I)中分離提純的方法為凝膠柱的方法提純，洗脫液與展開劑都采用體積比為9:1的石油醚和乙酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝溫敏性納米載藥微球的方法，其特征在于所述步驟(2)中引發(fā)劑為偶氮二異丁腈AIBN。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝溫敏性納米載藥微球的方法，其特征在于所述步驟(2)中的溶劑為N，N-二甲基甲酰胺DMF。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝溫敏性納米載藥微球的方法，其特征在于所述步驟(3)中透析為在去離子水中進(jìn)行的，前3h每Ih換一次水，后21h每3h換一次水。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝溫敏性納米載藥微球的方法，其特征在于所述步驟(3)中預(yù)冷凍溫度為-2(T-10°C，預(yù)冷凍時(shí)間24 36h，冷凍干燥溫度為_4(T_45°C，冷凍干燥時(shí)間為24 36h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種自組裝制備溫敏性納米載藥微球的方法，包括(1)將酮洛芬與醋酸乙烯酯、醋酸汞和醋酸銅混合后，攪拌均勻，加入濃硫酸，反應(yīng)，分離提純，得到酮洛芬乙烯酯；(2)將酮洛芬乙烯酯與N-乙烯基己內(nèi)酰胺混合加入微量聚合管中，加入引發(fā)劑和溶劑，抽真空充氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱恒溫，進(jìn)行自由基聚合反應(yīng)，即得溫敏性的酮洛芬共聚物；(3)將上述得到的溫敏性的酮洛芬共聚物干燥，然后溶解，透析，經(jīng)預(yù)冷凍和冷凍干燥后即得到溫敏性納米載藥微球。本發(fā)明的方法融合了簡(jiǎn)單易操作的合成和可重復(fù)性較好的透析的方法；本發(fā)明得到的溫敏性納米載藥微球具有較好的緩釋效果。
文檔編號(hào)A61K31/192GK102973527SQ20121059431
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者朱利民, 石萌, 權(quán)靜, 孫衎, 武晉嫻 申請(qǐng)人:東華大學(xué)