胞內(nèi)酶用于釋放共價連接的生物活性物的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及對胞內(nèi)酶進行靶向以釋放共價連接的生物活性物，這導(dǎo)致產(chǎn)生生物活性物之間的協(xié)同效應(yīng)。本發(fā)明涉及直接共價連接或通過共價分子連接物連接的生物活性物的用途，所述直接共價連接或通過共價分子連接物連接的生物活性物與單獨(即，不是共價連接的)給藥所述生物活性物時相比，當(dāng)通過胞內(nèi)酶釋放為游離的生物活性物形式時，具有增強的治療活性。此外，本發(fā)明描述了向有此需要的患者給藥具有增強治療活性的相連的生物活性物形式的生物活性物的方法。因此，本發(fā)明還涉及治療患者一些疾病的方法。
【專利說明】胞內(nèi)酶用于釋放共價連接的生物活性物的用途
[0001]優(yōu)先權(quán)
[0002]本申請要求2011年3月18日提交的美國臨時專利申請61/454，314的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，在此將61/454，314的全部內(nèi)容并入本申請作為參考。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及對胞內(nèi)酶進行靶向以釋放共價連接的生物活性物，這生物活性物之間產(chǎn)生了協(xié)同效應(yīng)。本發(fā)明還涉及直接共價連接或通過共價分子連接物(linker)連接的生物活性物的用途，所述直接共價連接或通過共價分子連接物連接的生物活性物與單獨(即，不是共價連接的)給藥所述生物活性物時相比，當(dāng)通過胞內(nèi)酶釋放為游離的生物活性物形式時，具有增強的治療活性。此外，本發(fā)明描述了向有此需要的患者給藥具有增強治療活性的相連的生物活性物(linked biocative)形式的生物活性物的方法。因此，本發(fā)明還涉及治療患者一些疾病的方法。
【背景技術(shù)】
[0004]聯(lián)合療法(或多療法(polytherapy))是指使用不止一種藥物或不止一種療法治療單一病癥，而復(fù)方用藥(poly`pharmacy)是指使用不止一種藥物治療多種不同的病癥(SBaron(ed.)Medical Microbiology.4th edition., University of Texas Medical Branchat Galvestonl996) 0例如，在一些抗HIV/AIDS的抗病毒方法中，使用稱為高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)的聯(lián)合療法。該治療方案通常由屬于至少兩類抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的至少三種藥物的聯(lián)用(或雞尾酒(cocktail))組成。例如，常用的方法是將兩種核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NARTIs)與蛋白酶抑制劑或非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)組合。在使用多種藥物的情況下，非常期望的結(jié)果是協(xié)同作用即藥物組合的超累加作用(super-additiveeffect)，所述超累加作用提供的結(jié)果大于從分開給藥的各個藥物的總和可預(yù)期的作用(Tallarida, Drug Synergism和Dose-Effect Data Analysis, Chapman和 Hall/CRC2000)。至少期望的是，所給藥的藥物具有累積作用，即與它們分開給藥時所具有的作用相同。
[0005]然而，所述方法經(jīng)常失敗。即，一些聯(lián)合療法不是有效的，并因此顯示次加性作用(即，低于累積作用)或甚至低于就分開的任一種藥物所觀察到的作用。此外，一些藥物盡管與具體的病癥具有明確的理論關(guān)聯(lián)，但單獨給藥時卻具有最小的作用或無作用?？杉俣ǘ喾N理由來解釋復(fù)雜系統(tǒng)中一種或多種藥物失敗的原因，例如患者的生理環(huán)境。撇開病因?qū)W，明確需要使作用最大化(潛在地通過協(xié)同作用)的可選擇的藥物遞送策略。具體地，需要這樣的疾病治療方法，所述方法使用胞內(nèi)酶釋放相連的生物活性物，這樣產(chǎn)生的效力高于當(dāng)將所述生物活性物一起給藥但不是共價連接時所觀察到的效力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明涉及靶向胞內(nèi)酶以釋放共價連接的生物活性物的方法，這在生物活性物之間產(chǎn)生了協(xié)同作用。本發(fā)明部分是基于以下的發(fā)現(xiàn):如果將一些生物活性物通過連接物基團(linker group)共價連接(相連的生物活性物)，隨后在給藥后，通過作用于連接物基團的胞內(nèi)酶的作用在靶向的疾病中釋放成游離的生物活性物，則這些生物活性物是有效的。這些相連的生物活性物被發(fā)現(xiàn)是血漿穩(wěn)定的，并且在它們到達靶向病變組織前，不會從連接物基團上游離出生物有效量的所述生物活性物。更具體地，當(dāng)所述相連的生物活性物的連接物基團通過一種或多種胞內(nèi)酶的活性酶法斷裂時，觀察到該效力。該效力可為協(xié)同性的，即所述應(yīng)答大于所述生物活性物的組合。在一些情況下，當(dāng)兩種生物活性物被共價連接成相連的生物活性物時,任一種生物活性物的相關(guān)副作用低于單獨給藥所述生物活性物時的副作用。這是由于通過在靶向細胞內(nèi)部表達的并且作用在將生物活性物共價連接在一起的連接物基團上的一種或多種胞內(nèi)酶的活性，單獨的生物活性物僅可被釋放在所述靶向細胞內(nèi)。
[0007]因此，本發(fā)明一個方面描述了增加至少兩種生物活性物的一種或多種細胞內(nèi)生物活性的方法，所述方法包括:(a)選擇第一生物活性物；(b)選擇第二生物活性物，其可與(a)的生物活性物相同或不同；(c)選擇連接物基團，所述連接物基團共價連接所述(a)的生物活性物和所述(b)的生物活性物，其中所述連接物基團包含至少一個用作胞內(nèi)酶的功能性底物的鍵(linkage);和(d)`用所述(C)連接物基團連接所述(a)和(b)生物活性物。在一些實施方案中，胞內(nèi)酶在發(fā)生病變的細胞類型中比相同細胞類型的非病變狀態(tài)以較高的水平表達。
[0008]本發(fā)明另一個方面描述了(一種或多種)胞內(nèi)酶在治療疾病中的用途，所述胞內(nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物的連接物基團中包含的鍵斷裂。在一些實施方案中，所述連接物基團可被胞內(nèi)酶酶法斷裂或水解并因此導(dǎo)致生物活性物(一種或多種)釋放以及協(xié)同作用。在一些實施方案中，需要多種酶來實現(xiàn)所述生物活性物的釋放?？捎糜诒景l(fā)明的酶的非限制性實例為酰胺酶、蛋白酶、巰基還原酶、脂肪酶和酰胺水解酶。在一些實施方案中，通過一種或多種酶進行的多次斷裂最終使生物活性物之間的鍵斷裂或水解或使所述生物活性物從所述連接物上游離出來。
[0009]本發(fā)明另一個方面為(一種或多種)胞內(nèi)酶在治療疾病中的用途，所述胞內(nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物的連接物基團中包含的鍵斷裂，其中所述酶為能夠?qū)B接于生物活性物的脂肪酰胺進行加工的任意酶。
[0010]本發(fā)明另一方面為(一種或多種)胞內(nèi)酶在治療疾病中的用途，所述胞內(nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物的連接物基團中包含的鍵斷裂，其中所述酶為脂肪酰胺水解酶。
[0011]本發(fā)明另一方面為(一種或多種)胞內(nèi)酶在治療疾病中的用途，所述胞內(nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物的連接物基團中包含的鍵斷裂，其中所述生物活性物(一種或多種)可為不同或相同的化學(xué)實體。相連的生物活性物的非限制性實例包括水楊酸酯連ω 3脂肪酸、煙酸連ω 3脂肪酸、富馬酸酯連ω 3脂肪酸、ω 3脂肪酸連ω 3脂肪酸和環(huán)氧合酶抑制劑連ω3脂肪酸，其中所有這些相連的生物活性物在血漿中都是穩(wěn)定的。
[0012]本發(fā)明另一方面為(一種或多種)胞內(nèi)酶在治療疾病中的用途，所述胞內(nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物的連接物基團中包含的鍵斷裂，其中可根據(jù)所述細胞的狀態(tài)來選擇所述(一種或多種)胞內(nèi)酶。例如，本發(fā)明一個方面包括選擇被下述胞內(nèi)酶斷裂的連接物基團，所述胞內(nèi)酶具有針對治療而靶向的疾病有關(guān)聯(lián)的表達模式。在一些實施方案中，根據(jù)胞內(nèi)酶的組織特異性表達選擇連接物基團，其中所述連接物基團包含作為所述胞內(nèi)酶的底物的鍵。在一些實施方案中，如果存在包含針對所選擇的酶的底物的連接物基團，則測定一些酶在疾病或組織環(huán)境中的功能。
[0013]本申請部分是基于發(fā)現(xiàn):一些治療劑當(dāng)被以相連的生物活性物形式遞送到表達一些酶的具體環(huán)境時，它們是有效的。因此，當(dāng)用于治療疾病的兩種或更多種生物活性物被分開給藥或當(dāng)被共同給藥但不是以相連的生物活性物形式連接在一起時對所述疾病具有較小的作用或無作用。在一些實施方案中，這些作用是由水解所述連接物基團以使其有效的胞內(nèi)酶產(chǎn)生的。在本發(fā)明的不同方面中，不同的疾病得以治療。在一些方面中，所治療的疾病為炎癥疾病。在一些方面中，所述疾病為包括脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)(包括但不限于血脂障礙和甘油三酯血癥)、心血管疾病、代謝疾病(包括但不限于II型糖尿病)、腎病、癌癥、神經(jīng)變性疾病、自身免疫性疾病、敗血癥性休克、病毒感染和不當(dāng)免疫發(fā)育障礙的那些。
[0014]同樣，這些生物活性物的藥學(xué)相關(guān)活性直到所述生物活性物之間的連接物基團或連接物被胞內(nèi)酶斷裂才可被觀察到。因此，本發(fā)明另一個方面為胞內(nèi)酶抑制劑用于確定相連的生物活性物對特異性胞內(nèi)酶就治療疾病的功效具有依賴性的用途。在一個方面中，根據(jù)疾病將相連的生物活性物給藥于`患者，并且如果觀察到陽性反應(yīng)，則獲取患者組織并就被懷疑過表達或較多功能的一些胞內(nèi)酶的增加的表達或功能對所述患者組織測試。之后，可根據(jù)所述酶來選擇連接物基團并用在生物活性物之間以增加所述生物活性物的治療作用。
[0015]本發(fā)明另一個方面為治療疾病，其中根據(jù)與疾病或組織類型相關(guān)的具體酶的表達或功能對生物活性物組合和連接各生物活性物的連接物基團進行修整以適配患者。
[0016]本發(fā)明另一個方面為在患有某些疾病的個體中抑制、預(yù)防或治療疾病的方法，所述方法包括向所述患者給藥被胞內(nèi)酶選擇性水解的相連的生物活性物。此外，本發(fā)明包括給藥生物活性物的方法。生物活性物可通過含有鍵的連接物基團連接，并且根據(jù)靠近具體酶的底物的連接物基團(從而使所述酶斷裂連接物基團)來選擇所述生物活性物。
[0017]本發(fā)明另一個方面為選擇ω-3脂肪酸作為生物活性物組分之一。在一些實施方案中，ω-3脂肪酸為所述生物活性物組分。在其它實施方案中，二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)或這兩者的組合可為所述生物活性物組分。
[0018]結(jié)合下面的描述對本發(fā)明的詳細內(nèi)容進行闡述?，F(xiàn)在描述的是示例性方法和物質(zhì)，但與本申請描述的那些方法和物質(zhì)相似或等同的方法和物質(zhì)可用在本發(fā)明的實施或測試中。通過所述描述和通過權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會顯而易見。在說明書和隨附權(quán)利要求中，除非上下文給出明確的相反指示，單數(shù)形式也包括復(fù)數(shù)。除非另有定義，本申請使用的所有科技術(shù)語的含義與本發(fā)明所述【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。將說明書中引用的所有專利和出版物的全部內(nèi)容并入本申請作為參考。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1說明了相連的生物活性物的體外水解。
[0020]圖2-6說明了相連的生物活性物在體外測定中的協(xié)同作用。
[0021]圖7A和7B說明了巰乙胺自二-脂肪酸相連的生物活性物的釋放。[0022]圖8說明了使用重組MAGL水解化合11-1。
[0023]圖9A-D說明了在已被過表達有FAAH-1或FAAH-2的C0S-7細胞中，化合物1_1的水解。
[0024]發(fā)明詳述
[0025]本發(fā)明涉及對胞內(nèi)酶進行靶向以釋放相連的生物活性物，這在生物活性物之間產(chǎn)生了協(xié)同作用。本發(fā)明還涉及直接共價連接或通過共價分子連接物連接的生物活性物的用途，所述直接共價連接或通過共價分子連接物連接的生物活性物與單獨(即，不是共價連接的)給藥所述生物活性物時相比，當(dāng)通過胞內(nèi)酶釋放為游離的生物活性物形式時，具有增強的治療活性。此外，本發(fā)明描述了向有此需要的患者給藥具有增強治療活性的相連的生物活性物形式的生物活性物的方法。因此，本發(fā)明還涉及治療患者一些疾病的方法。
[0026]因此，本發(fā)明一個方面描述的是增加至少兩種生物活性物的一種或多種細胞內(nèi)生物活性的方法，所述方法包括:(a)選擇第一生物活性物；(b)選擇第二生物活性物，所述第二生物活性物可與(a)的生物活性物相同或不同；(c)選擇包含在所述(a)的生物活性物和所述(b)的生物活性物之間`的連接物基團中的連接物，其中所述鍵為胞內(nèi)酶的功能性底物；和(d)用所述(C)連接物基團連接所述(a)和(b)生物活性物。在一些實施方案中，胞內(nèi)酶在發(fā)生病變的細胞類型中比相同細胞類型的非病變狀態(tài)以較高的水平表達。
[0027]本發(fā)明提供適當(dāng)?shù)?一種或多種)胞內(nèi)酶在治療病癥中的用途，所述適當(dāng)?shù)陌麅?nèi)酶使連接兩種或更多種生物活性物分子的連接物基團或鍵斷裂。
[0028]本發(fā)明還提供用被胞內(nèi)酶選擇性水解的相連的生物活性物治療受一些疾病困擾的個體的方法。生物活性物可被包含鍵的連接物基團連接起來并且基于具體的酶會斷裂所述連接物基團或連接物的觀察結(jié)果來選擇所述生物活性物。本發(fā)明一個實施方案包括選擇被下述胞內(nèi)酶斷裂的連接物基團，所述胞內(nèi)酶具有與被靶向治療的疾病有關(guān)聯(lián)的表達模式。此外，對連接物基團的這種選擇可通過胞內(nèi)酶的組織特異性表達來確定。并且，本發(fā)明包括測定一些酶在病癥和組織環(huán)境中的功能性來選擇適當(dāng)?shù)倪B接物基團，而不是測定表達水平。
[0029]此外，本發(fā)明提供根據(jù)與病癥或組織環(huán)境相關(guān)的酶的表達或功能狀態(tài)用生物活性物進行治療的方法。
[0030]此外，本發(fā)明提供進行疾病治療的個體化用藥方法。本發(fā)明該方面的一個實施方案為胞內(nèi)酶抑制劑用于確定相連的生物活性物對特異性胞內(nèi)酶就治療疾病的功效具有依賴性的用途。此外，本發(fā)明包括治療疾病的方法，其中根據(jù)與疾病或組織類型相關(guān)的具體酶的表達或功能對生物活性物組合和連接各生物活性物的連接物基團進行修整以適配患者。
[0031]定義
[0032]以下定義在本申請通篇中使用:
[0033]本申請中使用的冠詞是指一個或不止一個(即，是指至少一個)所述冠詞的語法客體。舉例而言，要素是指一種要素或不止一種要素。
[0034]除非另有說明，用在本申請中的術(shù)語和/或意指“和”或“或”中的任一種情況。
[0035]用在本申請中的術(shù)語“生物活性物”或“多種生物活性物”是指在疾病治療中有用的一種或多種化學(xué)實體，其中所述實體中的至少一種選自以下:ω3脂肪酸、可在體內(nèi)被轉(zhuǎn)化成ω 3脂肪酸的脂肪酸和硫辛酸(lipoic acid)。[0036]用在本申請中的術(shù)語“連接物基團”是指共價連接第一生物活性物和第二生物活
性物的分子實體。連接物基團的非限制性代表性實例包括在下式中定義的基團:
[0037]
【權(quán)利要求】
1.使用胞內(nèi)酶在特定靶向組織中增強相連的生物活性物的有效性以用于治療有此需要的患者的疾病的方法，其中所述相連的生物活性物在被所述胞內(nèi)酶斷裂后表現(xiàn)出了兩種生物活性物之間的協(xié)同作用，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述協(xié)同作用。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述胞內(nèi)酶選自絲氨酸水解酶、巰基還原酶、磷酸酯酶、肽酶、溶血磷脂酶、磷酸二酯酶和糖苷酶。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述酶為絲氨酸水解酶。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述酶為脂肪酰胺水解酶。
5.權(quán)利要求2的方法，其中所述酶為巰基還原酶。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述酶在發(fā)生病變的細胞類型中比相同細胞類型的非病變狀態(tài)以較高的水平表達。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述相連的生物活性物的生物活性物選自ω-3脂肪酸、降膽固醇藥、貝特類藥物、降血脂藥、抗糖尿病藥、抗癲癇藥、抗青光眼藥、抗高血壓藥、抗炎藥、抗抑郁藥、抗癌藥、免疫抑制劑、治療骨質(zhì)疏松的藥物、治療多發(fā)性硬化癥的藥物、抗病毒藥、抗氧化劑、治療CAN的藥物、治療神經(jīng)變性的藥物，其中至少一種所述生物活性物為ω-3脂肪酸。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物活性劑為DHA。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物活性劑為ΕΡΑ。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物活性劑為水楊酸酯。
11.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物活性劑為煙酸。
12.權(quán)利要求7的方法，其中所述生物活性劑為富馬酸酯。
13.權(quán)利要求7的方法，其中所述相連的生物活性物包含兩種ω-3脂肪酸。
14.權(quán)利要求的方法1，其中所述疾病選自器官移植排斥；由器官移植導(dǎo)致的復(fù)氧損傷、關(guān)節(jié)的慢性炎癥性疾病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和與骨再吸收相關(guān)的骨疾??；炎癥性腸病、回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、巴雷特氏綜合征、克羅恩病；哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、慢性阻塞性氣道疾病、囊性纖維化?。唤悄I養(yǎng)不良、沙眼、盤尾絲蟲病、葡萄膜炎、交感性眼炎、眼內(nèi)炎、齦炎、牙周炎、尿毒癥并發(fā)癥、腎小球腎炎、腎變??；硬化性皮炎、銀屑病、濕疹、神經(jīng)系統(tǒng)的慢性脫髓鞘病、多發(fā)性硬化癥、AIDS-相關(guān)的神經(jīng)變性、阿爾茨海默氏病、感染性腦膜炎、腦脊髓炎、帕金森氏病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化、病毒性腦炎、自身免疫性腦炎；代謝疾病、II型糖尿病、血脂障礙、高甘油三酯血癥、青光眼、視網(wǎng)膜病、黃斑水腫、腎病、微白蛋白尿和進行性糖尿病性腎病、多發(fā)性神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、粥樣硬化性冠狀動脈病、外周動脈疾病、非酮性高血糖高滲性昏迷、單一神經(jīng)病變、自主神經(jīng)病、關(guān)節(jié)問題、念珠菌感染、糖尿病脂性漸進性環(huán)死、免疫復(fù)合物血管炎、全身性紅斑狼瘡；心肌病、缺血性心臟病、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、先兆子癇；慢性肝衰竭、腦和脊髓創(chuàng)傷、癌癥、革蘭氏陽性或革蘭氏陰性休克、出血性或過敏反應(yīng)性休克或由癌癥化療在應(yīng)答促炎癥細胞因子時誘導(dǎo)的休克、抑郁、肥胖癥、變應(yīng)性疾病、急性心血管事件、心律不齊、預(yù)防猝死、炎性肌病、皮肌炎、包涵體肌炎、多肌炎、癌癥惡病質(zhì)、肌肉萎縮病、肌營養(yǎng)不良、迪謝內(nèi)肌營養(yǎng)不良、貝克肌營養(yǎng)不良、埃-德二氏肌營養(yǎng)不良、面肩肱肌營養(yǎng)不良、肢帶型肌營養(yǎng)不良、先天性肌強直病、肌強直性營養(yǎng)不良、肝炎包括但不限于非酒精性脂肪性肝病(NASH)、脂肪肝病、肝硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬變(PBC)、慢性腎病(CKD)、IgA腎病、腎病性胱氨酸病、法布里病、戈謝病、蓬佩病、神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積癥(NCL)、尼曼匹克病和黏多糖病(MPSl)。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述疾病選自代謝疾病、II型糖尿病、血脂障礙、高甘油三酯血癥、炎癥性腸病、腎病性胱氨酸病、迪謝內(nèi)肌營養(yǎng)不良和肌萎縮性側(cè)索硬化。
16.權(quán)利要求1的方法，進一步包括測定所述胞內(nèi)酶的表達。
17.權(quán)利要求的方法1，其中 選擇用于治療所述疾病的第一生物活性物； 選擇第二生物活性物，其可與所述第一生物活性物相同或不同； 選擇包含鍵的連接物基團，其中所述鍵為所述胞內(nèi)酶的功能性底物；和 其中，所 述第一生物活性物和第二生物活性物經(jīng)所述連接物基團共價連接； 其中，所述相連的生物活性物在被所述胞內(nèi)酶斷裂后表現(xiàn)出所述兩種生物活性物之間的協(xié)同作用，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述協(xié)同作用。
18.權(quán)利要求1的方法，其中將所述相連的生物活性物給藥于需要治療所述疾病的患者。
19.權(quán)利要求17的方法，其中將所述相連的生物活性物給藥于需要治療所述疾病的患者。
20.治療疾病的方法,包括祀向在所述疾病的細胞中被上調(diào)的胞內(nèi)酶,所述方法包括: (a)選擇用于治療所述疾病的第一生物活性物； (b)選擇可與(a)所述的生物活性物相同或不同的第二生物活性物； (C)選擇包含鍵的連接物基團，其中所述鍵為所述胞內(nèi)酶的功能性底物；和(d)將(a)所述的生物活性物和(b)的所述生物活性物經(jīng)(C)的所述連接物基團連接；其中，所述相連的生物活性物在被所述胞內(nèi)酶斷裂后表現(xiàn)出所述兩種生物活性物之間的協(xié)同作用，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述協(xié)同作用。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述疾病為炎癥。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述胞內(nèi)酶為FAAH。
23.權(quán)利要求20的方法，其中所述鍵為酰氨鍵。
24.權(quán)利要求20的方法，其中所述酶在發(fā)生病變的細胞類型中比相同細胞類型的非病變狀態(tài)以較高的水平表達。
25.用于增加至少兩種生物活性物的細胞內(nèi)活性的方法，所述方法包括: (a)選擇第一生物活性物； (b)選擇第二生物活性物，所述第二生物活性物可與(a)的所述生物活性物相同或不同； (C)選擇包含在連接物基團中的鍵，所述連接物基團在(a)的所述生物活性物和(b)的所述生物活性物之間，其中所述鍵為所述胞內(nèi)酶的功能性底物；和 (d)將(a)的所述生物活性物和(b)的所述生物活性物經(jīng)(C)所述的連接物基團連接； 其中，所述相連的生物活性物在被所述胞內(nèi)酶斷裂后表現(xiàn)出所述兩種生物活性物細胞內(nèi)生物活性的增加，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述增加。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述疾病為炎癥。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述胞內(nèi)酶為FAAH。
28.權(quán)利要求25的方法，其中所述鍵為酰氨鍵。
29.權(quán)利要求25的方法，其中所述酶在發(fā)生病變的細胞類型中比相同細胞類型的非病變狀態(tài)以較高的水平表達。
30.一種設(shè)計靶向胞內(nèi)酶的相連的生物活性物的方法，所述酶在病變狀態(tài)變的細胞中是被上調(diào)的，所 述方法包括: (a)選擇第一生物活性物； (b)選擇第二生物活性物，所述第二生物活性物可與(a)的所述生物活性物相同或不同； (C)選擇包含在連接物基團中的鍵，其中所述鍵為所述胞內(nèi)酶的功能性底物；和(d)將(a)的所述生物活性物和(b)的所述生物活性物經(jīng)(C)的所述連接物基團連接；其中，所述相連的生物活性物在被所述胞內(nèi)酶斷裂后表現(xiàn)出所述兩種生物活性物之間的協(xié)同作用，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述協(xié)同作用。
31.治療疾病的方法,所述方法包括向有此需要的患者給藥治療有效量的相連的生物活性物； 其中，所述相連的生物活性物包括鍵，所述鍵在靶向病變組織中被表達的胞內(nèi)酶被斷裂; 其中，所述相連的生物活性物被胞內(nèi)酶斷裂生成了游離的生物活性物，所述游離的生物活性物表現(xiàn)出協(xié)同作用，而當(dāng)單獨給藥所述生物活性物或以非-相連的生物活性物形式給藥所述生物活性物時未觀察到所述協(xié)同作用。
【文檔編號】A61K31/01GK103648490SQ201280024126
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2012年3月16日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月18日
【發(fā)明者】M.R.吉魯塞克, J.C.米爾恩, D.卡尼, J.E.比米斯, C.B.武 申請人:凱特貝希制藥公司