治療視網(wǎng)膜疾病的方法【專利摘要】本發(fā)明提供了治療視網(wǎng)膜疾病的方法，所述方法包括向患有所述視網(wǎng)膜疾病的對象給予有效量的神經(jīng)營養(yǎng)因子。在本發(fā)明中有用的神經(jīng)營養(yǎng)因子包括中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)和保守性多巴胺神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)。本發(fā)明還包括藥物組合物和含有MANF和CDNF的藥盒?！緦＠f明】治療視網(wǎng)膜疾病的方法[0001]相關(guān)申請交叉參考[0002]本申請要求2011年6月9日提交的美國臨時申請系列號61/495，182的優(yōu)先權(quán)，通過引用將該申請全文納入本文。[0003]關(guān)于聯(lián)邦資助的研究和開發(fā)的聲明[0004]本發(fā)明是在美國政府支持下完成的，資助號為R0-1EY-018586、R0-1EY-015289和P30EY-14801，由國家眼科研究院，國家衛(wèi)生研究院(NEI/NIH)授予，以及資助號為W81XWH-09-1-0674,由美國國防部授予。美國政府可享有本發(fā)明的某些權(quán)利。[0005]發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域[0006]本發(fā)明一般涉及視網(wǎng)膜退化疾病領(lǐng)域。更具體地，其與用神經(jīng)營養(yǎng)因子以及包括神經(jīng)營養(yǎng)因子的組合物和藥盒治療視網(wǎng)膜退化疾病的方法有關(guān)?！?br>背景技術(shù)：
】[0007]中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)和保守性多巴胺神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)是具有神經(jīng)營養(yǎng)能力的新型進(jìn)化保守性蛋白家族的兩種已知成員(Petrova等，2003;Lindholm等，2007)。該家族的第一個成員，MANF，是從小鼠I型星形膠質(zhì)細(xì)胞系(稱為腹側(cè)中腦細(xì)胞系I(VMCLl))的條件性介質(zhì)中鑒定的一種因子，其促進(jìn)培養(yǎng)的胚胎多巴胺能神經(jīng)元的存活(Petrova等，2003)。MANF也顯著減少中風(fēng)大鼠模型中缺血性皮層中的梗塞(Airavaara等,2009)并且促進(jìn)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的存活(Tadimalla等,2008)。另一方面，⑶NF首先是在計算機(jī)上鑒定然后生化表征的(Lindholm等，2007)。其在鼠和人的組織中表達(dá)，包括大腦。CDNF的單次注射拯救了黑質(zhì)中安非他明誘導(dǎo)的在多巴胺能神經(jīng)元的損失(Lindholm等，2007)。結(jié)構(gòu)分析顯示MANF和⑶NF具有N-端皂化蛋白樣脂質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域和可能負(fù)責(zé)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)應(yīng)激應(yīng)答的C-端結(jié)構(gòu)域，并且兩種蛋白都不與任意已知生長因子類似(Parkash等，2009)。⑶NF和MANF的受體和信號途徑未知。雖然這兩種蛋白被認(rèn)為是帕金森病的潛在治療方法，本發(fā)明人認(rèn)為它們是其他神經(jīng)變性疾病的潛在治療方法，包括視網(wǎng)膜退化病，如遺傳性視網(wǎng)膜疾病、年齡相關(guān)的黃斑變性和青光眼?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0008]鑒于它們的神經(jīng)營養(yǎng)能力和在神經(jīng)變性疾病中的潛在治療能力，本發(fā)明公開了神經(jīng)營養(yǎng)因子，MANF和⑶NF，用于拯救在患者視網(wǎng)膜退化疾病中的感光細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，視網(wǎng)膜退化疾病包括遺傳性視網(wǎng)膜疾病、年齡相關(guān)的黃斑變性和青光眼。[0009]具體地，本發(fā)明提供了治療視網(wǎng)膜疾病的方法，所述方法包括向患有所述視網(wǎng)膜疾病的對象給予有效量的神經(jīng)營養(yǎng)因子。需要治療的對象可以是動物，其可包括哺乳動物(例如，人)?？蛇M(jìn)行治療或由本發(fā)明的抑制的視網(wǎng)膜疾病包括神經(jīng)變性疾病，如年齡相關(guān)的黃斑變性、青光眼、遺傳性視網(wǎng)膜疾病、散發(fā)性視網(wǎng)膜疾病、其他退化視網(wǎng)膜疾病或視網(wǎng)膜損傷。[0010]可在本發(fā)明的實施方式中給予的神經(jīng)營養(yǎng)因子包括單獨或一起給予的MANF和CDNF。所述神經(jīng)營養(yǎng)因子可以是重組的或分離的因子，并且在具體有用的實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子是人神經(jīng)營養(yǎng)因子。[0011]在【具體實施方式】中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子在藥學(xué)上可接受的載劑中給予。在一些實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子注射入需要的對象的眼部，其也可使用緩釋載劑給予。[0012]本發(fā)明也提供了用于在神經(jīng)細(xì)胞中促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)的方法，所述方法包括將所述神經(jīng)細(xì)胞與神經(jīng)營養(yǎng)因子接觸，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子可包括單獨或組合的神經(jīng)營養(yǎng)因子MANF和⑶NF。神經(jīng)細(xì)胞的接觸可以在體外或體內(nèi)進(jìn)行。[0013]可由本發(fā)明的方法治療的細(xì)胞類型包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞或感光細(xì)胞。[0014]本發(fā)明也提供藥物組合物，所述組合物包括神經(jīng)營養(yǎng)因子，其可包括單獨或組合的MANF和CDNF。本發(fā)明也涉及包括神經(jīng)營養(yǎng)因子、試劑及它們的使用說明書的藥盒部分。另外，本發(fā)明可采用具有序列SEQIDNO:1、2、3或4的神經(jīng)營養(yǎng)因子。[0015]如本領(lǐng)域技術(shù)人員閱讀本公開后可判斷，本文所述的方法、組合物和藥盒能夠與藥物、醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用，以及基礎(chǔ)科學(xué)研究和方法結(jié)合使用。當(dāng)考慮附圖和詳細(xì)說明時，本發(fā)明的這些和其他的目標(biāo)、特征和優(yōu)勢會變得更為清晰。[0016]當(dāng)考慮附圖和詳細(xì)說明時，本發(fā)明的這些和其他的目標(biāo)、特征和優(yōu)勢會變得更為清晰。[0017]附圖簡要說明[0018]為了更充分理解本發(fā)明的本質(zhì)，參考以下與附圖結(jié)合的詳細(xì)說明應(yīng)該是必須的，其中:[0019]圖1顯示在Iμg和5μg的量下純化的重組人MANF蛋白的凝膠電泳圖，與標(biāo)準(zhǔn)的分子量(MW)梯度相比顯示純化的MANF蛋白的大小為約20千道爾頓(KD)。[0020]圖2顯示在5μg的量下純化的重組人⑶NF蛋白的凝膠電泳圖，與標(biāo)準(zhǔn)的分子量(MW)梯度相比顯示純化的⑶NF蛋白的大小為約18千道爾頓(KD)。[0021]圖3A-3C顯示光學(xué)顯微鏡下對照和經(jīng)MANF處理的S334ter3大鼠的視網(wǎng)膜外核層部分，以及每個的外核層厚度的定量分析的圖。圖3A顯示對照，經(jīng)PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)處理的視網(wǎng)膜。圖3B表示經(jīng)MANF處理的視網(wǎng)膜。比例尺，25μm。圖3C是在經(jīng)PBS處理和經(jīng)MANF處理的視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜外核層的厚度的定量分析示意圖。[0022]圖4A-4C顯示對照和經(jīng)⑶NF處理的S334ter3大鼠的視網(wǎng)膜外核層部分的光學(xué)顯微鏡照片，以及每個的外核層厚度的定量分析的圖。圖4A表示對照，經(jīng)PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)處理的視網(wǎng)膜。圖4B表示經(jīng)⑶NF處理的視網(wǎng)膜。比例尺，25μm。圖4C是在經(jīng)PBS處理和經(jīng)⑶NF處理的視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜外核層的厚度的定量分析示意圖。[0023]圖5A-5C顯示在對照和經(jīng)MANF處理的S334ter3大鼠(圖5A和5B)中用AlexaFluor488偶聯(lián)的PNA(花生凝集素)染色的全組織標(biāo)本包埋(wholemounted)視網(wǎng)膜的視錐外節(jié)(COS)的熒光顯微照片，以及每個的定量分析(圖5C)。圖5A表示對照，經(jīng)PBS處理的視網(wǎng)膜。圖5B表示經(jīng)MANF處理的視網(wǎng)膜。比例尺，50μm。圖5C是在經(jīng)PBS處理和經(jīng)MANF處理的視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量的定量分析示意圖。[0024]圖6A-6C顯示在對照和經(jīng)CDNF處理的S334ter3大鼠(圖6A和6B)中用AlexaFluor488偶聯(lián)的PNA染色的全組織標(biāo)本包埋視網(wǎng)膜的COS的熒光顯微照片，以及每個的定量分析(圖6C)。圖6A表示對照，經(jīng)PBS處理的視網(wǎng)膜。圖6B表示經(jīng)⑶NF處理的視網(wǎng)膜。圖6C是在經(jīng)PBS處理和經(jīng)⑶NF處理的視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量的定量分析示意圖。[0025]圖7A-7C顯示全組織標(biāo)本包埋視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的氟金反向標(biāo)記(Fluoro-Goldretralabeled)的代表性顯微照片:對照大鼠(圖7A)、除PBS處理以外還進(jìn)行視神經(jīng)擠壓之后的大鼠作為對照(圖7B)、以及除MANF處理以外還進(jìn)行視神經(jīng)擠壓之后的大鼠(圖7C)。圖7A表示未經(jīng)過視神經(jīng)擠壓的對照視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖7B表示在視神經(jīng)擠壓和PBS處理之后兩周的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。圖7C表示在視神經(jīng)擠壓和MANF處理之后兩周的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。[0026]圖8顯示W(wǎng)estern印跡探測MANF和B-肌動蛋白(上樣對照)的照片。顯示了來自在出生后I天、5天、8天、10天、12天、16天、25天、30天、40天和60天的野生型SpragueDawley大鼠視網(wǎng)膜的提取物中的MANF表達(dá)水平。[0027]圖9顯示用抗-MANF抗體探測的大鼠視網(wǎng)膜的冷凍切片的熒光顯微照片。標(biāo)尺，50μm。在所述部分上標(biāo)記的層包括視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)、感光細(xì)胞外節(jié)段(OS)、感光細(xì)胞內(nèi)節(jié)段(IS)、外核層(ONL)、內(nèi)核層(INL)、內(nèi)網(wǎng)狀層(IPL)和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(GCL)。在RPE細(xì)胞、米勒(MUller)細(xì)胞纖維和細(xì)胞體，以及GCL中顯示MANF的免疫活性。[0028]圖10顯示SEQIDNO:1的核酸序列。[0029]圖11顯示SEQIDNO:2的核酸序列。[0030]圖12顯示SEQIDNO:3的氨基酸序列。[0031]圖13顯示SEQIDNO:4的氨基酸序列。[0032]附圖中相似的附圖標(biāo)記表示這些附圖中相似的部分。[0033]優(yōu)選實施方式的詳細(xì)說明[0034]本發(fā)明涉及用于治療視網(wǎng)膜疾病的治療方法、組合物以及藥盒。[0035]本發(fā)明的幾個方面在下面描述，參考實施例僅用于說明目的。應(yīng)理解，提出大量的具體細(xì)節(jié)、關(guān)系和方式來提供對本發(fā)明的充分理解。然而，相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員容易認(rèn)識到，本發(fā)明能在沒有一個或多個具體細(xì)節(jié)或有其他方法、流程、試劑、細(xì)胞系和動物時實施。本發(fā)明不受所述行為或事件順序的限制，因為一些行為可能以不同的順序和/或同時與其他行為或事件發(fā)生。在此描述或參考的許多技術(shù)和過程為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，并且通常使用常規(guī)方法使用。[0036]除非另外定義，本文使用的所有專業(yè)術(shù)語、符號和其它科學(xué)術(shù)語或?qū)Ｓ性~匯旨在具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解的含義。在一些情況中，本文出于闡明和/或便于引用目的對具有常規(guī)理解含義的術(shù)語加以限定，本文中包括此類限定不應(yīng)理解為表示與本領(lǐng)域常規(guī)理解的有顯著差異。還會理解，術(shù)語，如在常用的詞典中定義的那些，應(yīng)該解釋為具有與它們在相關(guān)領(lǐng)域的文本中的意思相一致的意思和/或如本文另外定義。[0037]本文所用的術(shù)語僅僅用來描述具體的實施方式，而不是用于限制本發(fā)明。本文的不定冠詞“一個”、“一種”以及“該”也應(yīng)理解為包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文另有明確說明。[0038]本文使用的短語“和/或”應(yīng)理解為指相關(guān)聯(lián)元件“之一或兩者”，即，在一些情況中存在關(guān)聯(lián)性而在其它情況中無關(guān)聯(lián)的元件。[0039]本文使用的“或”應(yīng)該理解為與上述定義的“和/或”具有相同的意思。例如，當(dāng)分隔一列項目時，“和/或”或者“或”應(yīng)解釋為包括性的，即，包括至少一個，但也包括多于一個的一些元件，以及可選的額外未列出項目。僅清楚指示相反的術(shù)語例如“其中僅一個”或“確定的一個”或在權(quán)利要求中使用時，“由……組成”指包含一些元件或元件列表中確定的一個元件。一般而言，當(dāng)其之前有排他性術(shù)語時例如“任一”、“其中之一”、“僅其中之一”或“明確的其中之一”時，本文所用的術(shù)語“或”應(yīng)僅解釋為指示專一性選擇(即，“一個或另一個但非兩者”)。[0040]本文使用的術(shù)語“包含”、“含”、“有”、“具有”、“含有”或其變體是與術(shù)語“包括”相似的包括性的。[0041]本文公開的所有基因、基因產(chǎn)物(包括RNA和蛋白)以及它們相應(yīng)的名字旨在對應(yīng)于本文公開的組合物和方法可應(yīng)用的任何物種的同源物。當(dāng)公開一個具體物種的基因或基因產(chǎn)物時，該公開應(yīng)理解為僅用于示例而不應(yīng)解釋為限制，除非上下文另外明確指出。例如，本文公開的基因和基因產(chǎn)物，其在一些實施方式中與哺乳動物(包括人)的核酸和/或核酸序列相關(guān)，旨在包括來自其他動物的同源和/或直向同源和/或旁系同源基因和基因產(chǎn)物，所述其他動物包括但不限于其他哺乳動物、魚類、爬行類、兩棲類、鳥類和其他脊椎動物。[0042]在本發(fā)明的文本中，術(shù)語“多肽”和“蛋白”是等價的并且可互換使用的。它們是指任意氨基酸鏈，并且包括對其的任意翻譯后修飾(例如磷酸化或糖基化)。[0043]本文使用的術(shù)語“對象”是指任意的動物(例如，哺乳動物、鳥類、爬行類、兩棲類、魚類)，包括但不限于人、非人的靈長類、嚙齒類等，其成為具體治療的受體。通常，當(dāng)在本文中指代對象時，術(shù)語“對象”和“患者”可互換使用。另外，在本發(fā)明的方法中使用轉(zhuǎn)基因動物(例如，轉(zhuǎn)基因大鼠和小鼠)。[0044]本文使用的術(shù)語“化合物”是指神經(jīng)營養(yǎng)因子，除非另外明確說明。出于本發(fā)明的目的，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子能夠以重組DNA、RNA或蛋白的形式存在、描述和/或應(yīng)用。所述神經(jīng)營養(yǎng)因子能夠以分離的形式，如從動物(其也可以是對象)分離和純化。在一些實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子可以是多肽、多核苷酸或其片段。本文中術(shù)語“生物制劑”也可以與“化合物”互換使用來指代本發(fā)明的神經(jīng)營養(yǎng)因子。[0045]本文使用的術(shù)語“片段”是指化合物的一部分。例如，當(dāng)指代蛋白時，片段是低于所述多肽全長的多個連續(xù)的氨基酸。例如，化合物的片段可與其母化合物共享最高99%、95%,90%,85%,80%,75%,70%,65%^；60%的序列。[0046]本文使用的術(shù)語“給予”是指采用玻璃體內(nèi)、眼內(nèi)、眼睛、視網(wǎng)膜下、鞘內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)皮、皮內(nèi)、顱內(nèi)、局部等給藥方式向?qū)ο筇峁┲委熡行Я康幕瘜W(xué)或生物化合物或藥物組合物。本發(fā)明的化學(xué)或生物化合物可單獨給予，但也可根據(jù)選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實踐與其他化合物、賦形劑、填料、粘結(jié)劑、運載體或其他載劑一起給予。給藥可以是運載體或載劑的方式，如可注射溶液，包括無菌水性或非水性溶液，或鹽水溶液；乳膏；洗劑；膠囊；片劑；顆粒；粒料；粉末；懸浮液，乳劑或微乳劑；貼片；膠束；脂質(zhì)體；囊泡；植入物，包括微植入物；滴眼液；其他蛋白和肽；合成聚合物；微球；納米顆粒等。[0047]本發(fā)明的化學(xué)或生物化合物或藥物組合物也可以包含或包裝其他非毒性化合物，如藥學(xué)上可接受的運載體、賦形劑、粘結(jié)劑和填料，包括但不限于葡萄糖、乳糖、阿拉伯樹膠、明膠、甘露醇、黃原膠、刺槐豆膠、半乳糖、寡糖和/或多糖、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石、玉米淀粉、淀粉片段、角蛋白、二氧化硅膠體、馬鈴薯淀粉、尿素、葡聚糖、糊精等。具體地，可考慮在本發(fā)明的實踐中使用的藥學(xué)上可接受的運載體、賦形劑、粘結(jié)劑和填料是可使得本發(fā)明的化合物可進(jìn)行玻璃體內(nèi)遞送、眼內(nèi)遞送、眼部遞送、視網(wǎng)膜下遞送、鞘內(nèi)遞送、靜脈內(nèi)遞送、皮下遞送、透皮遞送、皮內(nèi)遞送、局部遞送的那些物質(zhì)。另外，包裝材料可以是生物學(xué)惰性的或缺少生物活性，如塑料聚合物、硅油等，并且可以由對象內(nèi)部加工而不影響與之一起包裝和/或遞送的神經(jīng)營養(yǎng)因子的功效。[0048]本發(fā)明的化合物也可以考慮通過植入載劑的方式給予，如包封細(xì)胞技術(shù)(ECT)或其他相似的未來產(chǎn)生的微植入技術(shù)。在Tao，W.等，2006、Tao,W.和Wen，R.，2007以及Sieving等，2006中描述了ECT，其通過引用納入本文。在一些實施方式中，ECT載劑可以每IxlO6個細(xì)胞每天約250ng-約800ng的速率釋放本發(fā)明的化合物。所述植入載劑也可以是任意其他相似的緩釋載劑或之后發(fā)展的載劑等。[0049]當(dāng)用于本文所述的化合物、生物制劑或藥物組合物時，術(shù)語“有效量”表示產(chǎn)生需要的治療結(jié)果所需的量。例如，有效量是治療、治愈或緩解疾病的癥狀的有效水平，因為該疾病而給予所述治療化合物、生物制劑或組合物。具體治療目標(biāo)的有效量的探求會取決于多種因素，包括治療的疾病和其嚴(yán)重程度和/或發(fā)展/進(jìn)程的階段；生物可及性，以及使用的特定化合物、生物制劑或藥物組合物的活性；給藥的途徑或方法以及對象上的引入位點；所述特定化合物或生物制劑的清除速率和其他藥代動力學(xué)性質(zhì)；治療的持續(xù)時間；感染方案；與所述特定化合物、生物制劑或組合物組合或同時使用的藥物；治療對象的年齡、體重、性別、飲食、生理和總體健康情況；以及相關(guān)科學(xué)領(lǐng)域中技術(shù)人員熟知的類似因素。根據(jù)待治療的對象的情況，在劑量上的會出現(xiàn)一些必要的變化，并且在任何情況下，醫(yī)師或其他單獨給予治療會確定單獨患者的合適劑量。[0050]本文使用的“疾病”是指疾病、病癥或狀況，或其他與健康或正常生物學(xué)活性不同的情況，并且這些術(shù)語可互換使用。所述術(shù)語是指損害正常功能的任意狀況。所述狀況可由散發(fā)性或可遺傳的遺傳異常引起。所述狀況也可由非遺傳異常引起。所述狀況也可用對象受到來自環(huán)境因素的傷害引起，例如但不限于切割、擠壓、燒傷、刺穿、拉伸、剪切、注射或另外改變對象的細(xì)胞、組織、器官或系統(tǒng)等。[0051]本文使用的“治療”或“處理”是指阻止或抑制，或嘗試阻止或抑制疾病的發(fā)展或進(jìn)程，和/或產(chǎn)生，或嘗試產(chǎn)生疾病和/或其癥狀的減少、抑制、回歸或緩解。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，可以使用各種臨床和科學(xué)方法和試驗來評價疾病的發(fā)展或進(jìn)程，并且相似地，可以使用各種臨床和科學(xué)方法和試驗來評價疾病或其癥狀的減少、回歸或緩解。另外，可以向?qū)ο蠡蚣?xì)胞培養(yǎng)物中施用治療。[0052]按照本發(fā)明的至少一個實施方式，治療在需要的患者中的視網(wǎng)膜疾病的方法包括向所述對象給予有效量的本文所述的化合物。在一個實施方式中，該化合物是神經(jīng)營養(yǎng)因子。[0053]術(shù)語“神經(jīng)營養(yǎng)因子”是指脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸及其衍生的蛋白，以及它們的片段，它們負(fù)責(zé)神經(jīng)細(xì)胞在成熟神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育中和維持期間的生長和存活。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子是中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)。在其他實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子是保守性多巴胺神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)。另外，給予的所述神經(jīng)營養(yǎng)因子可以是MANF和⑶NF的組合。如本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，MANF和CDNF可以具有同源物、直向同源物和/或旁系同源物，其會被另外考慮用于本發(fā)明。[0054]在本發(fā)明的一個實施方式中，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子是重組多肽。所述重組多肽可以是重組MANF或⑶NF蛋白。在本發(fā)明中也考慮可在本文所述的方法和藥盒中使用重組MANF和/或⑶NF多肽片段。在本文所述的方法和藥盒中還可考慮采用重組MANF和/或⑶NF全長DNA、cDNA或mRNA(或其片段)。在一些實施方式中，所述DNA、cDNA或mRNA(或其片段)可以包括于質(zhì)粒、載體等。例如，可以通過基因治療技術(shù)或包封細(xì)胞技術(shù)(ECT)的方式使用多核苷酸或其片段。另外，本發(fā)明可采用具有序列SEQIDN0:l、2、3或4的神經(jīng)營養(yǎng)因子(或其片段、重組體、嵌合體或組合)。[0055]在本發(fā)明的方法中，用藥學(xué)上可接受的運載體或載劑給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子。例如，所述藥學(xué)上可接受的運載體或載劑可以是鹽水溶液或可考慮的任意其他載劑。[0056]具體地，在一個實施方式中，以注射的方式給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子。在一些實施方式中，注射位點是對象的眼部并且可以是眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)、視網(wǎng)膜下和相似的給藥方式。在其他的實施方式中，在與眼部相鄰的區(qū)域給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子，并且可以通過注射或其他本文所述的遞送方法。[0057]也可以通過在待治療對象的眼部中植入載劑的方式給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子。所述載劑可以是微植入裝置，如包封細(xì)胞技術(shù)(ECT)或其他相似或未來的微植入技術(shù)。[0058]通過本發(fā)明所述的方法治療的視網(wǎng)膜疾病可以是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織或細(xì)胞損傷的結(jié)果。治療的視網(wǎng)膜疾病也可以是神經(jīng)變性疾病(例如，視網(wǎng)膜色素變性)。損傷或患有神經(jīng)變性疾病的組織或細(xì)胞可以是神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，如視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞或感光細(xì)胞。在一些實施方式中，治療的視網(wǎng)膜疾病包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞退化。這樣的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞退化可以由青光眼誘導(dǎo)。[0059]考慮用本文所述的治療方法治療的神經(jīng)變性疾病可以是在自然中遺傳性的或散發(fā)性的(例如，分離的，非可遺傳的情況下發(fā)生)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，神經(jīng)變性疾病也包括除了視網(wǎng)膜神經(jīng)變性疾病以外的狀況，并且本發(fā)明的方法、組合物和藥盒被考慮適用于其他這樣的疾病。這樣的疾病包括阿爾茨海默病、亨廷頓病、帕金森病、肌萎縮側(cè)索硬化、青光眼、年齡相關(guān)聽力喪失、進(jìn)行性核上性麻痹、輕度認(rèn)知障礙、癡呆、脊髓性小腦萎縮癥等。[0060]在至少一個實施方式中，在損傷或患有神經(jīng)變性疾病的位置上或在與感染或患病的位置相鄰的區(qū)域內(nèi)給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子。也可以通過載劑的方式給予所述神經(jīng)營養(yǎng)因子，所述載劑以控制(例如，時間和/或劑量依賴性)的方式釋放所述因子，例如在ECT中，如本文前述。[0061]按照本發(fā)明的另一個實施方式，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞中的神經(jīng)保護(hù)的方法包括將所述神經(jīng)細(xì)胞與神經(jīng)營養(yǎng)因子，如MANF、CDNF或其組合接觸。本文使用的術(shù)語“神經(jīng)保護(hù)”是指防止、阻止、抑制或減緩神經(jīng)破壞、神經(jīng)元退化和/或神經(jīng)元死亡。在由衰老、遺傳因素、環(huán)境變化、物理壓力或損傷、內(nèi)源或外源生物或化學(xué)因素(例如，神經(jīng)妥樂平(neuiOtropins)、維生素、酒精、藥劑、缺血等)、中風(fēng)等引起的破壞或退化之后可以引發(fā)神經(jīng)保護(hù)。[0062]本文使用的術(shù)語“接觸”是指在細(xì)胞和所述神經(jīng)營養(yǎng)因子(或含有所述神經(jīng)營養(yǎng)因子的載劑)之間指導(dǎo)產(chǎn)生空間關(guān)系的作用，所述作用在預(yù)定和特定的時間內(nèi)并且在一定條件下進(jìn)行，所述條件適于在接觸的細(xì)胞中引發(fā)需要的生物反應(yīng)，如神經(jīng)保護(hù)。在所述細(xì)胞和所述神經(jīng)營養(yǎng)因子之間的空間關(guān)系可包括直接接觸，其中所述因子在接觸的細(xì)胞的表面直接引發(fā)反應(yīng)或進(jìn)入所述細(xì)胞以進(jìn)一步發(fā)揮作用，或非直接接觸，其中所述因子通過胞外信號傳導(dǎo)引發(fā)細(xì)胞上的反應(yīng)(例如，另一種物質(zhì)的活化或修飾后與接觸的細(xì)胞互相作用)。如本文使用，生物反應(yīng)包括神經(jīng)保護(hù)反應(yīng)或由細(xì)胞產(chǎn)生的任意其他反應(yīng),該反應(yīng)造成所述細(xì)胞的疾病的阻止、抑制、減少或緩解。[0063]在本發(fā)明的【具體實施方式】中，由神經(jīng)營養(yǎng)因子接觸神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生在體外?！绑w外”可包括在細(xì)胞或阻止培養(yǎng)基中，或測試試管培養(yǎng)基中。在其他實施方式中，神經(jīng)細(xì)胞的接觸發(fā)生在體內(nèi)?！绑w內(nèi)”可包括動物模型(例如，轉(zhuǎn)基因動物如小鼠或大鼠)或本文定義的活的對象，包括人。在其他實施方式中，神經(jīng)細(xì)胞的接觸離體發(fā)生?！半x體”可包括已經(jīng)從其來源分離的或提取的來自對象的完整組織、器官或系統(tǒng)或其部分。本文使用的術(shù)語“分離的”表示所描述的物品是隔離的或分離的。分離的東西可以仍然在對象內(nèi)或在對象外存在。本文使用的術(shù)語“提取的”表示所描述的物品是從對象中移出的并且在所述對象以外存在。[0064]在本發(fā)明的一些實施方式中，可由本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的神經(jīng)細(xì)胞類型包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞或感光細(xì)胞。在一個【具體實施方式】中，可由本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的神經(jīng)細(xì)胞類型包括視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。[0065]本發(fā)明的神經(jīng)營養(yǎng)因子可以是重組或分離的神經(jīng)營養(yǎng)因子，并且也可以是重組或分離的人神經(jīng)營養(yǎng)因子。如本文使用相對于基因或其片段，或基因產(chǎn)物或其片段，術(shù)語“分離的”定義為從動物中移出的和/或純化的用于在本文所述的方法中使用。本文使用的術(shù)語“基因”是指衍生自編碼RMA或蛋白質(zhì)的染色體的多核苷酸。如本文所用，基因可以包括或不包括與特定基因相關(guān)的所有的內(nèi)含子、外顯子、啟動子區(qū)域、非編碼區(qū)域等。[0066]本發(fā)明也涉及包括神經(jīng)營養(yǎng)因子，如MANF、⑶NF或其組合的藥物組合物或藥物。根據(jù)所選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實踐，所述藥物組合物也可包括其他藥學(xué)上可接受的化合物、賦形劑、添加劑、填料、粘結(jié)劑、佐劑或運載體或載劑。如此，可以在藥物或藥物組合物的生產(chǎn)或制備中使用所述神經(jīng)營養(yǎng)因子。同時，包括所述的神經(jīng)營養(yǎng)因子的所述藥物和藥物組合物可以用于本文所述的疾病的治療。[0067]本發(fā)明也涉及包括神經(jīng)營養(yǎng)因子和其他需要的試劑的組合藥盒以實施本發(fā)明的方法。所述組合藥盒也可包括使用說明書。所述神經(jīng)營養(yǎng)因子和試劑可包括在一種或多種組合物中，并且每種神經(jīng)營養(yǎng)因子和試劑可在組合物中與合適的載劑組合，或單獨存在。所述組合藥盒可包括MANF、⑶NF或其組合，如純化的蛋白(重組或從動物中分離)或純化的核苷酸(重組或從動物中分離)。[0068]在其他實施方式中，所述組合藥盒包括標(biāo)記的對特定神經(jīng)細(xì)胞類型有特異性的生物標(biāo)志物,如感光細(xì)胞生物標(biāo)志物或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生物標(biāo)志物、參比標(biāo)準(zhǔn)和在閱讀本發(fā)明公開之后可由本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒定的另外的組分。[0069]無須贅述，可以相信本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠根據(jù)以上說明書的描述充分利用本發(fā)明。通過說明的方式，而非限制性方式提供以下實施例。雖然已經(jīng)提供了具體實施例，但是上述的說明是示例性的而非限制性的。前述的實施方式的特征中的任意一個或多個能夠以任意方式與本發(fā)明中任意其他實施方式中的一個或多個特征組合。另外，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在閱讀本說明書后將清楚了解本發(fā)明的許多變化。[0070]本申請所引用的所有出版物和專利文獻(xiàn)都通過在相關(guān)部分引用納入本文，以用于所有相同程度的目的，就好像每個單獨出版物或?qū)＠墨I(xiàn)都單獨表示。在該文獻(xiàn)中引用多種參考文獻(xiàn)，本申請并不承認(rèn)任何特定文獻(xiàn)對其發(fā)明為“現(xiàn)有技術(shù)”。實施例[0071]本文所述的方法和組合物以及相關(guān)的藥盒在下面的實施例中進(jìn)一步說明，其通過說明的方式提供并且并非旨在限定。應(yīng)該認(rèn)識到，組分的比例變化和元件替代為該領(lǐng)域技術(shù)人員熟知并且在本發(fā)明實施方式范圍內(nèi)。展示理論方面同時理解該申請并不受到所展示的理論的束縛。[0072]下面的材料和方法用于本文所示的所有方法和組合物。[0073]重組人MANF和CDNF蛋白的克隆:MANF(SEQIDNO:1)和CDNF(SEQIDNO:2)的開放閱讀框(ORF)各自通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)從人大腦cDNA克隆，并且確認(rèn)所得的克隆序列。每個ORF亞克隆到表達(dá)載體pQE30(加州瓦倫西亞的凱杰公司(Qiagen,Valencia,CA))中，其含有在閱讀框中N-端的6XHiS-標(biāo)簽編碼序列。然后，各含有MANF和⑶NF序列的表達(dá)載體在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)(XL-blue，加利福尼亞州拉霍亞的司查塔基公司(Stratagene,LaJolla,CA)),并且在天然條件下通過N1-NTA瓊脂糖柱(凱杰公司)上固定金屬親和色譜純化相應(yīng)的表達(dá)的蛋白。將洗脫的蛋白進(jìn)行緩沖液交換為磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)并且在_80°C下小份保存直至使用。合適的人MANF蛋白序列表示為SEQIDNO:3，而合適的人CDNF蛋白序列表示為SEQIDNO:4。[0074]純化的MANF和⑶NF蛋白的觀察:Iμg和/或5μg的純化的蛋白在4_12%NuPAEG膠上進(jìn)行電泳并且用考馬斯藍(lán)觀察以確認(rèn)純化和合適的分子量。在與Iμg和/或5yg樣品相鄰的一條泳道中對分子量標(biāo)記物(MW)進(jìn)行電泳。[0075]轉(zhuǎn)基因動物:如之前所述產(chǎn)生和使用攜帶鼠視紫紅質(zhì)突變S334ter的轉(zhuǎn)基因大鼠，稱為S334ter-3大鼠(Liu等，(1999))。[0076]感光細(xì)胞保護(hù)測試:向S334ter3大鼠給予MANF和PBS(對照)的單次玻璃體內(nèi)注射。具體地，向出生后(PD)第9天的大鼠的一只眼睛中注射6μgMANF，并且向相同大鼠中剩余的一只眼睛中同時注射3μLPBS作為對照。通過與10μL微量注射器(內(nèi)華達(dá)州雷諾的漢密爾頓公司(Hamilton，Reno，NV))連接的33-號針頭實施注射。在出生后21天處死動物并且如前述取得、塑料包埋和對每只眼睛進(jìn)行切片(Liu等，(1999))。對所得的半薄視網(wǎng)膜切片用甲苯胺藍(lán)進(jìn)行染色并且由光學(xué)顯微鏡檢查。使用6μg⑶NF實施相似的實驗。[0077]視錐感光細(xì)胞外節(jié)(COS)保護(hù)試驗:向S334ter3大鼠給予MANF和PBS(對照)的單次玻璃體內(nèi)注射。向出生后(PD)第20天的大鼠的一只眼睛中注射6μgMANF,并且向相同的大鼠中剩余的一只眼睛中同時注射3μLPBS作為對照。通過與10μL微量注射器(內(nèi)華達(dá)州雷諾的漢密爾頓公司(Hamilton，Reno，NV))連接的33-號針頭實施注射。在治療10天后(出生后第30天)處死動物并且收獲每只眼睛。用AlexaFluor488偶聯(lián)的PNA(花生凝集素)染色全組織標(biāo)本包埋視網(wǎng)膜，其特異性地與視錐感光細(xì)胞的外節(jié)結(jié)合，并且通過熒光顯微檢查。使用6μg⑶NF實施相似的實驗。[0078]視神經(jīng)擠壓試驗:通過用氟金反向標(biāo)記來標(biāo)記野生型SpragueDawley大鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在標(biāo)記一周后，擠壓視神經(jīng)并且隨后立即進(jìn)行6ygMANF的玻璃體內(nèi)注射。在神經(jīng)擠壓和治療兩周后，處死大鼠并且收獲視網(wǎng)膜。通過熒光顯微檢查全組織標(biāo)本包埋視網(wǎng)膜。[0079]視網(wǎng)膜的MANF蛋白表達(dá)分析:在聚丙烯酰胺凝膠上對來自出生后I天、5天、8天、10天、12天、16天、25天、30天、40天和60天的野生型SpragueDawley大鼠的視網(wǎng)膜的等量提取物進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜并且用針對MANF和β_肌動蛋白的抗體探測。分析結(jié)構(gòu)蛋白，β-肌動蛋白的表達(dá)以確保每個分析時間點上蛋白提取物的一致性加載。[0080]實施例1:重組人中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)的純化[0081]為了測試用于神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)的神經(jīng)營養(yǎng)因子，產(chǎn)生重組人MANF和⑶NF蛋白并且純化以用于進(jìn)一步的實驗。如上述的材料和方法在大腸桿菌中表達(dá)重組人MANF，純化并且觀察。圖1中所示的結(jié)果顯示觀察到Iμg和5μg的純化MANF為20kDa的單條帶。泳道I顯示分子量標(biāo)記物(MW);泳道2顯示Iyg的純化的MANF;而泳道3顯示5μg的純化MANF?！癒D”指代“千道爾頓”。[0082]實施例2:重組人多巴胺神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)的純化[0083]CDNF也被用作具有神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)的候選神經(jīng)營養(yǎng)因子。如上述的材料和方法在大腸桿菌中表達(dá)重組人CDNF，純化并且觀察。圖2中所示的結(jié)果顯示觀察到5μg的純化的⑶NF是18kDa的單條帶。泳道I顯示分子量標(biāo)記(MW);泳道2顯示5μg的純化的⑶NF?！癒D”指代“千道爾頓”。[0084]實施例3:在視網(wǎng)膜退化的嚙齒模型的視網(wǎng)膜中由MANF保護(hù)感光細(xì)胞[0085]在尋找可拯救在視網(wǎng)膜退化疾病(包括遺傳性視網(wǎng)膜疾病(例如，視網(wǎng)膜色素變性)、年齡相關(guān)黃斑變性和青光眼)中感光細(xì)胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子中，測試重組人MANF蛋白在視網(wǎng)膜退化嚙齒模型的視網(wǎng)膜中的感光細(xì)胞保護(hù)性質(zhì)。為此，使用S334ter3轉(zhuǎn)基因大鼠，由于它們特征性的累積視網(wǎng)膜感光細(xì)胞退化(Liu等，(1999))。[0086]圖3A中所述的結(jié)果顯示在出生后21天時，在PBS(對照)處理的S334ter3大鼠中，視網(wǎng)膜的外核層僅有一排核(參見圖3A中的箭頭)。圖3B中所示的結(jié)果顯示在相同動物的剩余的一只眼睛中于出生后9天的MANF單次玻璃體內(nèi)注射保護(hù)了出生后21天時的感光細(xì)胞免受退化，外核層含有3-4排的核(參見圖3B中兩個箭頭之間)。[0087]上部視網(wǎng)膜的外核層的厚度的定量分析，如圖3C所示，表明MANF處理的視網(wǎng)膜的外核層(17.47土3.96μΜ,η=5)顯著厚于對照PBS處理的視網(wǎng)膜(7.07土1.12μΜ,η=5)(平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。Ρ〈0.001(斯氏t檢驗)。[0088]實施例4:在視網(wǎng)膜退化嚙齒模型的視網(wǎng)膜中由⑶NF保護(hù)感光細(xì)胞[0089]在尋找其他能夠拯救在視網(wǎng)膜退化疾病中的感光細(xì)胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子中，測試重組人CDNF蛋白在與前述MANF研究所用的相同視網(wǎng)膜退化嚙齒模型中的感光細(xì)胞保護(hù)性質(zhì)。[0090]圖4A中所述的結(jié)果顯示在出生后21天時，在PBS(對照)處理的S334ter3大鼠中，視網(wǎng)膜的外核層僅有一排核(參見圖4A中的箭頭)。圖4B中所示的結(jié)果顯示在相同動物的剩余的一只眼睛中于出生后9天的CDNF單次玻璃體內(nèi)注射保護(hù)了出生后21天時的感光細(xì)胞免受退化，外核層含有3-4排的核(參見圖4B中兩個箭頭之間)。[0091]上部視網(wǎng)膜的外核層的厚度的定量分析，如圖4C所示，表明⑶NF處理的視網(wǎng)膜的外核層(16.6^2.87μΜ,η=6)顯著厚于對照PBS處理的視網(wǎng)膜(7.4土3.43μΜ，η=6)(平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。P〈0.001(斯氏t檢驗)。[0092]實施例5:在視網(wǎng)膜退化嚙齒模型的視網(wǎng)膜中由MANF保護(hù)視錐感光細(xì)胞的外節(jié)[0093]作為神經(jīng)營養(yǎng)因子的感光細(xì)胞保護(hù)能力的另一測試，在與本文前述相同的視網(wǎng)膜退化嚙齒模型中分析暴露于重組人MANF蛋白之后的視錐外節(jié)。[0094]圖5B所示的結(jié)果顯示在出生后20天向視網(wǎng)膜脫化嚙齒模型的眼睛中進(jìn)行MANF單次玻璃體內(nèi)注射防止視錐外節(jié)出現(xiàn)退化，如出生后30天的時間點所測，對比相同的動物用PBS(對照)處理的剩余眼睛(圖5A)。[0095]圖5C所示的結(jié)果是AlexaFluor488偶聯(lián)的PNA-陽性染色細(xì)胞的數(shù)量的定量分析，其是視錐感光細(xì)胞存在的指示。該照片顯示MANF處理的視網(wǎng)膜相比對照PBS-處理的視網(wǎng)膜(398.7±25.4μM)含有顯著較大數(shù)量的視錐感光細(xì)胞(569.5±46.5μΜ)(C，平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)。Ρ〈0.001(斯氏t檢驗)。[0096]實施例6:在視網(wǎng)膜退化嚙齒模型的視網(wǎng)膜中由CDNF保護(hù)視錐感光細(xì)胞的外節(jié)[0097]采用與實施例5中相同的實驗過程以進(jìn)一步測試重組人CDNF蛋白的感光細(xì)胞保護(hù)能力。[0098]圖6B所示的結(jié)果顯示在出生后20天向視網(wǎng)膜脫化嚙齒模型的眼睛中進(jìn)行⑶NF單次玻璃體內(nèi)注射防止視錐外節(jié)出現(xiàn)退化，如出生后30天的時間點所測，對比相同的動物用PBS(對照)處理的剩余的眼睛(圖6A)。[0099]圖6C所示的結(jié)果是AlexaFluor488偶聯(lián)的PNA-陽性染色細(xì)胞的數(shù)量的定量分析，其是視錐感光細(xì)胞存在的指示。該照片顯示⑶NF處理的視網(wǎng)膜相比對照PBS-處理的視網(wǎng)膜(412.75+40.9μM)含有顯著較大數(shù)量的視錐感光細(xì)胞(561.5+81.3μΜ)(C，平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)。P=0.012(斯氏t檢驗)。[0100]實施例7:在大鼠中視神經(jīng)擠壓之后由⑶NF對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)[0101]作為神經(jīng)營養(yǎng)因子MANF的神經(jīng)保護(hù)能力的另外測試，在大鼠中視神經(jīng)擠壓和暴露于MANF之后分析視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。[0102]圖7A-C中所示的結(jié)果顯示MANF在視神經(jīng)擠壓之后保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的能力。如圖7A所示，反向標(biāo)記的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布在對照小鼠的代表性顯微照片上。如圖7B所示，在PBS-處理的視網(wǎng)膜中(對照)，反向標(biāo)記的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大部分在視神經(jīng)擠壓2周后退化。相反，如圖7C所示，MANF處理能夠在視神經(jīng)擠壓和處理兩周后拯救許多視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。[0103]實施例8:在大鼠中感光細(xì)胞發(fā)育期間在視網(wǎng)膜中MANF蛋白的表達(dá)較高[0104]用Western印跡分析法分析的來自出生后I天、5天、8天、10天、12天、16天、25天、30天、40天和60天的野生型SpragueDawley大鼠視網(wǎng)膜的蛋白提取物中的MANF表達(dá)水平。如圖8所示，在出生后發(fā)育中檢測到高水平的MANF表達(dá)(出生后1-16天)。當(dāng)經(jīng)過出生后16天視網(wǎng)膜成熟時，其表達(dá)降低(參見圖8中從出生后25天-60天的連續(xù)表達(dá)水平降低)。[0105]實施例9:在視網(wǎng)膜上MANF的免疫活性[0106]如圖9所示，用抗-MANF抗體探測的冷凍切片證明MANF的免疫活性位于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)、米勒細(xì)胞纖維和細(xì)胞體，以及在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層中。[0107]在實施例中展示的結(jié)果一起揭示了MANF和CDNF具有對于感光細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)，以及MANF至少還在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中具有神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)。另外，MANF至少在感光細(xì)胞的發(fā)育期間具有高表達(dá)水平，并且當(dāng)感光細(xì)胞成熟時其水平降低。這些結(jié)果表明MANF和CDNF是視網(wǎng)膜退化疾病的治療劑。[0108]應(yīng)理解發(fā)明詳述部分，而非摘要部分是旨在用于解釋權(quán)利要求。摘要部分可能顯示本發(fā)明的一個或多個但不是全部發(fā)明人考慮到的示例性實施方式，并且因此，并不旨在以任意方式限制本發(fā)明和所附的權(quán)利要求。[0109]以上【具體實施方式】的描述應(yīng)該完全揭示了本發(fā)明的一般性質(zhì)，通過應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的知識，他人無需過多實驗即能很容易地就各種應(yīng)用改良和/或修改這些【具體實施方式】而不背離本發(fā)明總體理念。由于能夠?qū)Ρ景l(fā)明所述的優(yōu)選實施方式做出許多修飾、改變和變化，應(yīng)理解前述說明中提出或附圖中示出的所有事項被理解為說明目的，而不構(gòu)成限制。因此，本發(fā)明的范圍應(yīng)該由所附的權(quán)利要求及其法律對等方案確定。另外，本發(fā)明的寬度和范圍不應(yīng)局限于任何上述示例性實施方式，而相似地僅由下面的權(quán)利要求書和其等價物來限定。[0110]參考文獻(xiàn)[0111]Airavaara,M.,Shen,H.,Kuo,C.,Peranen,J.,Saarma,M.,Hoffer,B.和Wang,Y.(2009).Mesencephalicastrocyte-derivedneurotrophicfactorreducesischemicbraininjuryandpromotesbehavioralrecoveryinrats(在大鼠中中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子減少缺血性腦損傷并促進(jìn)行為恢復(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35.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，CDNF在藥學(xué)上可接受的運載體中。36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的運載體是鹽水溶液。37.如權(quán)利要求30所示的方法，其特征在于，向所述對象的眼睛給予CDNF。38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，通過注射進(jìn)行給予。39.如權(quán)利要求38所述的方法，其特征在于，所述注射是玻璃體內(nèi)注射。40.如權(quán)利要求30所示的方法，其特征在于，向與所述眼睛相鄰的區(qū)域給予CDNF。41.如權(quán)利要求30所示的方法，其特征在于，所述視網(wǎng)膜疾病是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織或細(xì)胞的損傷的結(jié)果。42.如權(quán)利要求41所示的方法，其特征在于，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)的所述組織或所述細(xì)胞是神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。43.如權(quán)利要求41所示的方法，其特征在于，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)的所述組織或所述細(xì)胞是感光細(xì)胞。44.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述視網(wǎng)膜疾病選自遺傳性疾病和散發(fā)性疾病。45.一種包括神經(jīng)營養(yǎng)因子、一種或多種試劑以及它們的使用說明書的藥盒，所述神經(jīng)營養(yǎng)因子選自MANF、⑶NF及其組合。46.如權(quán)利要求45所述的藥盒，其特征在于，所述MANF包括SEQIDNO:3的氨基酸序列或其片段。47.如權(quán)利要求45所述的藥盒，其特征在于，所述⑶NF包括SEQIDNO:4的氨基酸序列或其片段。【文檔編號】A61K38/00GK103987400SQ201280038869【公開日】2014年8月13日申請日期:2012年6月8日優(yōu)先權(quán)日:2011年6月9日【發(fā)明者】R·溫申請人:邁阿密大學(xué)