一種α-1,4-葡聚糖及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從金銀花中提取的多糖、其制備方法和在制備治療阿爾茲海默癥的藥物中的用途。具體而言，本申請(qǐng)涉及一種從金銀花中提取的α-1,4-葡聚糖，所述制備方法包括：首先從金銀花中提取粗多糖，再醇沉、脫蛋白、多種柱層析純化得所述α-1,4-葡聚糖。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明，所述α-1,4-葡聚糖可顯著抑制阿爾茲海默癥的關(guān)鍵發(fā)病因子Aβ42的聚集并能抑制Aβ42的聚集誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性，有望成為治療阿爾茲海默癥的潛在多糖藥物。
【專利說(shuō)明】—種α -1, 4-葡聚糖及其制備方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中草藥提取多糖,更具體地說(shuō),涉及一種從金銀花(Flos Lonicerae)中提取得到的α-1，4-葡聚糖、其制備方法以及其在制備治療阿爾茲海默癥的藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著糖化學(xué)與糖生物學(xué)的深入發(fā)展，植物多糖作為一類重要的生物活性物質(zhì)，通過(guò)大量研究已被證實(shí)具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化及抗感染等多種生物活性，且對(duì)機(jī)體的毒副作用小。因此，具有生物活性的多糖已日益受到重視。
[0003]目前，以糖類為基礎(chǔ)的藥物研究和開(kāi)發(fā)已逐漸成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界的前沿課題。而糖類物質(zhì)，尤其是中草藥來(lái)源的多糖物質(zhì)基于生物功能廣泛，毒副作用小、資源豐富等諸多優(yōu)勢(shì)，也受到各國(guó)研發(fā)人員的極大重視，具有潛在廣泛的應(yīng)用前景。
[0004]金銀花作為一種重要的傳統(tǒng)中藥，為藤蔓植物忍冬的干燥花蕾,據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，其性寒，味甘，有清熱解毒、疏風(fēng)散熱之功效，臨床上主要用于治療風(fēng)熱感冒、癰腫癤毒、熱毒血痢、痔漏便血等。金銀花富含多種活性成分且組成復(fù)雜，藥理研究表明這些化合物具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及解熱抗炎、保肝利膽、抗?jié)兊榷喾N生物活性。
[0005]多糖物質(zhì)作為金銀花藥效的重要組成部分，目前研究較少?，F(xiàn)有的幾項(xiàng)對(duì)于金銀花多糖的研究?jī)H限于對(duì)其粗多糖的提取[H]及抑菌抗氧化生物活性等的初步篩選[4_6]。金銀花多糖在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用，尚無(wú)報(bào)道。阿爾茨海默病(Alzheimer’ sdisease, AD)亦稱為早老性癡呆，是一種慢性進(jìn)行性的神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為漸進(jìn)性的記憶能力下降，認(rèn)知功能障礙以及失去生活獨(dú)立自理能力。隨著人口老齡化的不斷加劇，AD的發(fā)病率也逐年升高，已成為最重要的公眾關(guān)注的健康問(wèn)題之一 [7]。
[0006]β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein, A β )在腦內(nèi)的異常表達(dá)和沉積是目前認(rèn)為引發(fā)AD的核心環(huán)節(jié)[8]。在AD患者中，由于AD相關(guān)基因突變、金屬離子濃度增加及pH改變等因素，導(dǎo)致腦內(nèi)微環(huán)境改變，從而引發(fā)淀粉樣蛋白的構(gòu)象發(fā)生變化，即由α -螺旋轉(zhuǎn)變?yōu)橐子诰奂衫w維狀的β -折疊，從而可干擾Ca2+穩(wěn)態(tài)、引發(fā)氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)Tau蛋白過(guò)度磷酸化和導(dǎo)致神經(jīng)元丟失等級(jí)聯(lián)神經(jīng)毒性，而最終導(dǎo)致癡呆[9]。因此，基于Αβ的神經(jīng)毒性，以Αβ為作用靶點(diǎn)，尋找減少Αβ形成、抑制Αβ聚集和加速Αβ降解的藥物是目前治療AD藥物的研究熱點(diǎn)[1°]。
[0007]我們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，中藥金銀花來(lái)源的多糖可在體外顯著抑制A β 42聚集，并在人神經(jīng)瘤母細(xì)胞水平上抑制A β 42聚集誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，具有潛在的治療阿爾茲海默癥的作用。
[0008][I]張玉，馬力，陳文.醇析水提法提取金銀花多糖[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25(11):1118-1120.
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[0010][3]趙鵬，李穩(wěn)宏，朱驟海，等.響應(yīng)面法優(yōu)化金銀花多糖超聲提取工藝研究[J].食品科學(xué)，2009，30 (20): 151-154
[0011][4]李爾春.金銀花多糖的分離純化與生物活性研究[D].西安:陜西師范大學(xué)，2009.
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0018]本發(fā)明利用一種簡(jiǎn)單有效的多糖提取工藝和方法，以金銀花為原料獲得了一種α -1, 4-葡聚糖，藥理實(shí)驗(yàn)表明，所述α -1, 4_葡聚糖在100 μ g/ml的濃度下，在體外可完全抑制A β 42的聚集，并在細(xì)胞水平上抑制A β 42聚集引發(fā)的細(xì)胞毒性，因此，所述α -1, 4-葡聚糖有望開(kāi)發(fā)成為一種治療阿爾茲海默癥的糖類藥物。
[0019]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種α-1,4-葡聚糖，其結(jié)構(gòu)式如下:
[0020]

【權(quán)利要求】
1.一種α-1，4-葡聚糖，其結(jié)構(gòu)式如下:
其中，X和y為整數(shù)且x+y=14 ； η為正整數(shù)；所述a-1，4-葡聚糖的重均分子量范圍為:10-100kDa。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的α-1, 4-葡聚糖，其重均分子量范圍為15至80kDa。
3.—種以金銀花為原料制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的α-1，4-葡聚糖的方法，所述方法包括以下步驟: a.多糖提取:干燥的金銀花經(jīng)乙醇脫脂、水提、過(guò)濾，將所得濾液濃縮，再經(jīng)15%三氯乙酸脫蛋白，中和、透析、濃縮、醇沉、離心、真空干燥，得水提金銀花粗多糖； b.多糖純化:將所述水提金銀花粗多糖先用DEAE纖維素陰離子柱進(jìn)行初步分級(jí)，水洗脫得中性多糖組分，進(jìn)而用凝膠色譜柱純化，得α -1, 4-葡聚糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，所述方法包括以下步驟: a.多糖提取:干燥的金銀花經(jīng)75%_95%乙醇脫脂，干燥，加入去離子水，加熱條件下提取，過(guò)濾，殘?jiān)俅斡萌ルx子水提取，如此反復(fù)提取2-6次，濾液合并，加熱濃縮，濃縮液經(jīng)終濃度為15%的三氯乙酸在4°C下脫蛋白，離心，上清液經(jīng)中和，透析，再濃縮，加入3倍于濃縮液體積的75%-95%乙醇，離心得沉淀，沉淀經(jīng)真空干燥得水提金銀花粗多糖； b.多糖純化:取金銀花粗多糖，水溶解，離心，上清液通過(guò)DEAE纖維素陰離子柱進(jìn)行分離，以蒸餾水洗脫，硫酸-苯酚檢測(cè)，收取合并洗脫液，濃縮冷凍干燥得水洗脫組分，進(jìn)而采用G150凝膠色譜柱分離，純化得α -1, 4-葡聚糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，所述方法包括以下步驟: a.多糖提取:干燥的金銀花經(jīng)95%乙醇脫脂7-10天，室溫自然干燥，干燥后的金銀花加入20倍重量的去離子水，100°C下提取2-6次，每次5-7h，濾液合并，加熱濃縮，濃縮液經(jīng)終濃度為15%的三氯乙酸在0-4 °C下脫蛋白，離心，上清液經(jīng)中和，透析，再濃縮，加入3倍于濃縮液體積的95%乙醇，離心得沉淀，沉淀經(jīng)真空干燥得水提金銀花粗多糖； b.多糖純化:取金銀花粗多糖，加入10倍重量的水中溶解，離心，上清液通過(guò)DEAE纖維素陰離子柱進(jìn)行分離，以蒸餾水洗脫，硫酸-苯酚檢測(cè)，收取合并洗脫液，濃縮冷凍干燥得水洗脫組分，將水洗脫組分溶于0-0.2mol/LNaCl溶液，離心后通過(guò)G150凝膠色譜柱分離，純化得α-1,4-葡聚糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的α-1，4-葡聚糖在制備治療由β_淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)損傷的藥物中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中，所述由β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)損傷為阿爾茲海默癥。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK104177510SQ201310190825
【公開(kāi)日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月21日
【發(fā)明者】丁侃, 王培培 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所