一種多糖鐵復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種多糖鐵復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法。具體步驟為：在反應(yīng)罐中加入糖漿溶液攪拌，冷卻；加入三氯化鐵溶液攪拌，加入氫氧化鈉溶液，生成棕紅色凝膠；加入氫氧化鈉溶液所得沉淀物加入沉淀劑洗滌兩次，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。本發(fā)明制備方法反應(yīng)步驟少，反應(yīng)條件溫和，重現(xiàn)性很好，工藝條件可靠，不需要制冷設(shè)備；反應(yīng)中沒(méi)有廢氣體產(chǎn)生，減少了工業(yè)化生產(chǎn)中反應(yīng)罐內(nèi)壓力過(guò)大而又可能產(chǎn)生的爆炸性危險(xiǎn)。本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度高，精密度好，專(zhuān)屬性、耐用性強(qiáng)，滿(mǎn)足線(xiàn)性要求，方法準(zhǔn)確、靈敏且簡(jiǎn)便。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種多糖鐵復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法，特別涉及一種多糖鐵復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]貧血是一種常見(jiàn)病，其類(lèi)型大致可分為缺鐵性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和失血性貧血。導(dǎo)致貧血的主要原因是機(jī)體可利用鐵含量不足或利用障礙、骨髓造血功能減弱，這些因素均可導(dǎo)致紅細(xì)胞生成減少。
[0003]缺鐵性貧血是世界上最常見(jiàn)的兒童營(yíng)養(yǎng)缺乏病之一，不僅影響兒童生長(zhǎng)發(fā)育，而且影響免疫、腦功能、智力發(fā)育等，我國(guó)小兒缺鐵性貧血患病率為57.6%，目前國(guó)內(nèi)外主要用鐵劑治療。缺鐵性貧血研究顯示，缺鐵性貧血嬰幼兒的智能發(fā)育障礙，補(bǔ)鐵后可恢復(fù)正常。
[0004]多糖鐵復(fù)合物是一種低分子多糖和鐵的有機(jī)復(fù)合物，其鐵元素含量為40—46%，具有穩(wěn)定的高水溶性，能以分子形式完整地吸收，其吸收率高。多糖鐵復(fù)合物不含游離鐵離子，因此對(duì)胃腸粘膜無(wú)腐蝕和刺激作用。多糖鐵復(fù)合物在體內(nèi)以分子形式存在，結(jié)構(gòu)與腸粘膜細(xì)胞中的鐵蛋白核心 極為相似，能很容易地被小腸粘膜細(xì)胞吸收，其通過(guò)胃腸粘膜吸收閥調(diào)節(jié)血漿濃度，不易致急性中毒。多糖鐵復(fù)合物可防治缺鐵性貧血，也可用于預(yù)防嬰幼兒、兒童、青少年、婦女(尤其是孕婦)等特殊人群的缺鐵性貧血。
[0005]目前公開(kāi)的生產(chǎn)多糖鐵的制備工藝，對(duì)生產(chǎn)產(chǎn)率的提高方面還不夠理想，因此有必要對(duì)多糖鐵復(fù)合物的工藝進(jìn)行研究和改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的在于公開(kāi)一種多糖鐵復(fù)合物的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0007]本發(fā)明目的是通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)的:
[0008]A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在10-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?；?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，加熱升溫至55-85°C，充分?jǐn)嚢?，恒?0分鐘以上；
[0009]B.加入等體積的無(wú)水乙醇，離心固液分離,所得沉淀物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0010]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物制備方法中，反應(yīng)罐可以是夾層反應(yīng)罐。
[0011]優(yōu)選為是夾層搪玻璃反應(yīng)罐或者夾層鈦反應(yīng)罐。
[0012]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的制備工藝，其特征在于該方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0013]A:將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?；?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘，然后加熱升溫至75_85°C，恒溫90分鐘以上；
[0014]B.加入等體積的無(wú)水乙醇，離心固液分離，所得沉淀物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0015]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的制備工藝，其特征在于該方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0016]A.將90~100重量份糖漿和90~100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25°C ;加入90~100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?，?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220~250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120~160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至55~65°C，攪拌15~30分鐘，然后加熱升溫至76~81°C，恒溫90分鐘以上； [0017]B.加入等體積的乙醇，離心固液分離，所得沉淀物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0018]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的優(yōu)選制備工藝方法如下:
[0019]A.將97.75重量份糖漿和97.75重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25°C ;加入93重量份三氯化鐵和194重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢柙?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入244重量份的15%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將123重量份的15%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至60°C，攪拌22分鐘，然后加熱升溫至80。。，恒溫105分鐘；
[0020]B.加入等體積的無(wú)水乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0021]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的優(yōu)選制備工藝方法如下:
[0022]A.將92.50重量份糖漿和92.50重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在20°C，加入91重量份三氯化鐵和205重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢柙?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入225重量份的13%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將150重量份的13%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至62°C，攪拌25分鐘，然后加熱升溫至78°C，恒溫95分鐘；
[0023]B加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0024]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的優(yōu)選制備工藝方法如下:
[0025]A.將95重量份糖漿和91重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在18°C;加入98重量份三氯化鐵和192重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?，?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入225重量份的17%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將122重量份的17%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至56°C，攪拌18分鐘，然后加熱升溫至77°C，恒溫115分鐘；
[0026]B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
[0027]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的優(yōu)選制備工藝方法如下:
[0028]B步驟的干燥可以為烘干或者噴霧干燥。烘干的優(yōu)選溫度為60°C以下。
[0029]噴霧干燥優(yōu)選為加入純化水或蒸餾水配合10%_15%的溶液，噴霧干燥。
[0030] 以上方案中的糖漿是一種多糖的混合液，可以為市售糖漿，可以用淀粉為原料，經(jīng)酶法分解轉(zhuǎn)化為葡萄糖和多糖的混合液。
[0031]所有本發(fā)明的糖漿也可以是低聚糖，可以采用李志達(dá)的《雙酶協(xié)同作用酶解淀粉制取麥芽低聚糖的工藝研究》中提到的工藝，該文章發(fā)表在1994年12月的《中國(guó)糧油學(xué)報(bào)》。第49頁(yè)2.2實(shí)驗(yàn)方法:“稱(chēng)取1009木薯(或玉米)淀粉，加水200ml于500ml反應(yīng)容器中，攪拌成淀粉漿，加人適量5%Na2Co3調(diào)節(jié)pH6.2~6.3，再加入適量5%CaCI2溶液，于80~90°C水浴上加熱、攪拌，當(dāng)漿料溫度上升至淀粉糊化前適當(dāng)溫度加人a-淀粉酶，邊加熱邊攪拌:繼續(xù)升溫至液化溫度(70 土 2V )，恒溫?cái)嚢鑃min (累計(jì)約15min)，則液化反應(yīng)結(jié)束；冷卻至50°C，調(diào)節(jié)5.03，再加入a-淀粉酶和枝切酶(異淀粉酶或普魯蘭酶)，攪拌糖化6h，取樣測(cè)定糖化液DE值(30 土 I)，判斷反應(yīng)終點(diǎn)。迅速升溫至95°C 5~IOmin將酶滅活、過(guò)濾，濾液加脫色劑脫色，過(guò)濾，濃縮得固形物70%糖漿或噴霧干燥得粉劑?！?br> [0032]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法包括如下含量測(cè)定和/或鑒別方法中的一種或幾種。
[0033]A.鑒別:
[0034]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物30_50mg，加水4_6ml使溶解，加氨試液，應(yīng)無(wú)沉淀析出?’另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物70-90mg，加水10-30ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng);
[0035]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.2-0.4g，加水20-40ml使溶解，加鹽酸6_10ml，水浴加熱8-12分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀；
[0036]B.含量測(cè)定:
[0037]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.2-0.4g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水20_40ml溶解后，加鹽酸8-12ml，置水浴中加熱4-6分鐘，放冷，加碘化鉀試液10_30ml，密塞，在暗處放置10-20分鐘，加水40-60ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液
2.8-3.2ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
[0038]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測(cè)定方法:
[0039]A.鑒別:
[0040]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物40mg,加水5ml使溶解,加氨試液,應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物80mg，加水20ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)；
[0041]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.3g，加水30ml使溶解，加鹽酸8ml，水浴加熱10分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀；
[0042]B.含量測(cè)定:
[0043]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.3g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水30ml溶解后，加鹽酸10ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液20ml，密塞，在暗處放置15分鐘，加水50ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg 的 Fe。
[0044]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測(cè)定方法:
[0045]A.鑒別:
[0046]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物35mg,加水4.2ml使溶解,加氨試液,應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物85mg，加水12ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾 過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)；
[0047]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.25g，加水38ml使溶解，加鹽酸7ml，水浴加熱9分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀；
[0048]B.含量測(cè)定:
[0049]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.23g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水25ml溶解后，加鹽酸9ml，置水浴中加熱4分鐘，放冷，加碘化鉀試液15ml，密塞，在暗處放置12分鐘，加水45ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2.9ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
[0050]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法:
[0051]A.鑒別:
[0052]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物45mg,加水5.5ml使溶解,加氨試液,應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物75mg，加水28ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)；
[0053]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.35，加水25ml使溶解，加鹽酸9ml，水浴加熱11分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀；
[0054]B.含量測(cè)定:
[0055]取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.35g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水35ml溶解后，加鹽酸11ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液25ml，密塞，在暗處放置18分鐘，加水55ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3.1ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg 的 Fe。
[0056]所述本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物為氫氧化鐵與淀粉經(jīng)水解生成的單糖和低聚糖制成的絡(luò)合物，按干燥品計(jì)算，含鐵應(yīng)為40.0%—46.0%。
[0057]本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的制備方法反應(yīng)步驟少，反應(yīng)條件溫和，多糖鐵復(fù)合物合成反應(yīng)容易掌握，只要按所述的配料和操作條件進(jìn)行反應(yīng)即可達(dá)到收率。生產(chǎn)多糖鐵復(fù)合物的工藝流程簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，重現(xiàn)性很好，工藝條件可靠，不需要制冷設(shè)備，具有可操作性；且反應(yīng)中沒(méi)有廢氣體產(chǎn)生,減少了工業(yè)化生產(chǎn)中反應(yīng)罐內(nèi)壓力過(guò)大而又可能產(chǎn)生的爆炸性危險(xiǎn)，也不涉及有毒的化學(xué)試劑。本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的制備方法通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)篩選，確定使用夾層反應(yīng)罐，加入特定濃度、特定濃度的三氯化鐵水溶液、糖漿后，用自來(lái)水冷卻至室溫；在60-90分鐘范圍內(nèi)，加入特定濃度特定量的氫氧化鈉水溶液。使用高速離心機(jī)能夠增加收率,提高產(chǎn)率,雜質(zhì)較少。通過(guò)特定條件的限定,本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物的收率更高。本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物含量測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)表明，本方法準(zhǔn)確度高，精密度好，專(zhuān)屬性、耐用性強(qiáng)，滿(mǎn)足線(xiàn)性要求，方法準(zhǔn)確、靈敏且簡(jiǎn)便。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物工藝制備的復(fù)合物均有明顯的升高缺鐵性貧血小鼠的血紅蛋白及紅細(xì)胞的作用，能有顯著改善鐵缺鐵性貧血的功能。
[0058]下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
[0059]實(shí)驗(yàn)例I本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物制備方法操作過(guò)程與工藝條件實(shí)驗(yàn)
[0060]1.配料:
[0061]計(jì)劃產(chǎn)量:33 kg ;
[0062]I)原料A:三氯化鐵溶液(32%)
[0063]稱(chēng)取三氯化鐵93 kg于溶解罐中，加純化水194 kg，溶解，備用。
[0064]2)原料B:氫氧化鈉溶液(15%)
[0065]稱(chēng)取氫氧化鈉(固堿)57 kg于溶解釜中，加入310 kg純化水，溶解，備用。
[0066]3)原料C:糖漿(固含量25%)
[0067]稱(chēng)取糖漿(固含量50%) 97.75 kg于溶解釜中，加97.75 kg純化水，溶解，備用。
[0068]2.反應(yīng)過(guò)程
[0069]I)將配制好的糖漿溶液加入1000L反應(yīng)罐中，開(kāi)啟攪拌，攪拌10~15分鐘，使其混合均勻，并通入自來(lái)水冷卻；
[0070]2)將配制好的三氯化鐵溶液加入1000L反應(yīng)罐中；
[0071]3)使用氣動(dòng)泵連續(xù)加入配制好的氫氧化鈉溶液三分之二(加入速度控制在60~90分鐘)，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠(如沒(méi)有生成凝膠，繼續(xù)補(bǔ)加氫氧化鈉溶液，直到生成凝膠為止)停止加入，取樣測(cè)PH值；撤去冷凝水，繼續(xù)攪拌40~60分鐘；
[0072]4)剩余的氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入，繼續(xù)攪拌40~60分鐘；
[0073]5)加熱升溫至60°C，取樣并用自來(lái)水稀釋?zhuān)?0分鐘后無(wú)渾濁現(xiàn)象則加熱升溫至80°C，否則繼續(xù)攪拌，直至符合要求再加熱升溫至80°C ；
[0074]6) 80°C恒溫90~120分鐘，直至PH值穩(wěn)定在12 ；
[0075]7)停止加熱，通入冷卻水，冷卻至室溫，停止攪拌，將反應(yīng)液730L轉(zhuǎn)移至醇沉罐中。
[0076]3.多糖鐵復(fù)合物原料藥的粗制
[0077]3.1第一次粗制:
[0078]向反應(yīng)液中加入乙醇717 kg，使含醇量達(dá)50%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，得泥狀多糖鐵復(fù)合物粗品100~140 kg ；[0079]3.2第二次粗制
[0080]將第一次多糖鐵復(fù)合物粗品用100~133 kg純化水溶解，攪拌均勻，再加入乙醇301 kg，使含醇量達(dá)70%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，得泥狀多糖鐵復(fù)合物粗品100~140 kg ；
[0081]4.多糖鐵復(fù)合物原料藥的精制:
[0082]將所得多糖鐵復(fù)合物粗品加入100-120 kg純化水溶解，攪拌均勻，再加入乙醇365kg，使含醇量達(dá)75%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，收集泥狀多糖鐵復(fù)合物純品175~190 kg ；
[0083]5.噴霧干燥
[0084]將多糖鐵復(fù)合物純品加入純化水，按多糖鐵復(fù)合物的折干量，配成10~15%的多糖鐵復(fù)合物溶液，利用高速離心噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥。得多糖鐵復(fù)合物原料藥成品，33 kg。
[0085]6.生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制檢查
[0086]6.1反應(yīng)升溫至60°C時(shí)，取樣用自來(lái)水稀釋?zhuān)?0分鐘后應(yīng)無(wú)渾濁，通過(guò)此實(shí)驗(yàn)判斷反應(yīng)液中已無(wú)凝膠。
[0087]6.2噴霧干燥出 來(lái)的半成品，按照多糖鐵復(fù)合物半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)。
[0088]本發(fā)明制備方法通過(guò)實(shí)驗(yàn)，在第一次加入堿液時(shí)對(duì)堿液的量、濃度及加入的堿液速度進(jìn)行了控制，改變聚合物的結(jié)構(gòu)和組成，并影響凝膠的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，該反應(yīng)中多糖鐵復(fù)合物主要是通過(guò)大聚合物與多糖發(fā)生反應(yīng)，如加入過(guò)快或過(guò)量則生成固相沉淀物，其在后期的縮聚反應(yīng)中不會(huì)發(fā)生脫質(zhì)子反應(yīng)。本發(fā)明制備方法通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明反應(yīng)通入冷卻水進(jìn)行保護(hù)能更穩(wěn)定地生成多糖鐵復(fù)合物；使用高速離心機(jī)進(jìn)行固液分離，提高分離效果；反應(yīng)時(shí)間充分，保證了絡(luò)合生成多糖鐵復(fù)合物收率；升溫過(guò)程采取在55-65°C恒溫15-30分鐘，不易使物料溶解而出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。
[0089]本發(fā)明制備方法反應(yīng)步驟少，反應(yīng)條件溫和，重現(xiàn)性很好，工藝條件可靠，不需要制冷設(shè)備；反應(yīng)中沒(méi)有廢氣體產(chǎn)生，減少了工業(yè)化生產(chǎn)中反應(yīng)罐內(nèi)壓力過(guò)大而又可能產(chǎn)生的爆炸性危險(xiǎn)。
[0090]實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明制備方法所得多糖鐵復(fù)合物抗缺鐵性貧血的作用比較實(shí)驗(yàn)
[0091]1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> [0092]通過(guò)低鐵飼料喂養(yǎng)與失血造模的方法復(fù)制缺鐵性貧血小鼠動(dòng)物模型，來(lái)考察本發(fā)明制備方法所制備多糖鐵復(fù)合物的藥效學(xué)作用.[0093]2.材料與方法
[0094]2.1.材料
[0095]2.1.1 藥物:
[0096]采用實(shí)施例1所述制備方法制備的多糖鐵復(fù)合物給藥組3組，分別為高劑量組，中劑量組和低劑量組。均由天然藥物研究室提供。
[0097]力蜚能，德國(guó)許瓦茲制藥集團(tuán)美國(guó)分公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)435260101
[0098]各給藥組每日灌胃給藥前用2%的CMC-Na配成不同濃度的混懸藥液。模型組和正常對(duì)照組灌胃給2%的CMC-Na。
[0099]2.1.2.動(dòng)物:
[0100]昆明種小鼠，11-13.5g,雄性，120只
[0101]2.1.3 飼料:
[0102]①一般動(dòng)物飼料。②低鐵飼料:按低鐵飼料配方配制(其中玉米淀粉54%，奶粉40%，豆油5%，食鹽1%)
[0103]2.1.4.儀器:
[0104]F-820型全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，由日本貝斯特公司生產(chǎn)；SysnexDB_l樣杯(內(nèi)涂溶血抑制劑)
[0105]2.1.5.試劑:
[0106]Sysnex溶血素，稀釋液，蒸餾水
[0107]2.2.實(shí)驗(yàn)方法:
[0108]2.2.1.缺鐵性貧血小鼠模型的復(fù)制:
[0109]取健康小鼠92只，8只作為正常對(duì)照，飼喂一般飼料，飲用自來(lái)水。另112只小鼠飼養(yǎng)在不銹鋼籠中，飼喂低鐵飼料及飲用蒸餾水.連續(xù)喂服低鐵飼料3天后，除正常對(duì)照組外，每只小鼠由尾靜脈放血10滴，放血后繼續(xù)飼喂低鐵飼料及飲用蒸餾水.于放血五天后，除正常對(duì)照組外，每只小鼠由尾靜脈放血15滴，此次放血24h后取血測(cè)血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞〔RBC〕.小鼠Hb由正常12.23±0.79下降至8.23±1.94，并且與正常組小鼠比較有統(tǒng)計(jì)意義，同時(shí)動(dòng)物出現(xiàn)精神萎靡，皮毛蓬松、不活躍等癥狀，證明缺鐵性貧血模型已建成。
[0110]2.2.2.對(duì)缺鐵 性貧血小鼠的作用:
[0111]將上述64只缺鐵性貧血的小鼠進(jìn)行篩選，Hb在11.00以下的全部入選。將入選的缺鐵性貧血的小鼠根據(jù)數(shù)據(jù)隨機(jī)分為6組，分別為力蜚能組(力蜚能組107mg/kg)，模型組(2%的CMC-Na組)，3個(gè)多糖鐵組(高劑量組為107mg/kg，中劑量組為53.5mg/kg，低劑量組為26.8mg/kg)。除正常對(duì)照組飼喂一般飼料外，其余各組繼續(xù)飼喂低鐵飼料。各組小鼠分別灌胃給予上述藥物，給藥體積0.5ml/20g, I次/d,連續(xù)9d,力蜚能組和五個(gè)多糖鐵組每日給藥前現(xiàn)用現(xiàn)配，模型組及正常對(duì)照組每天給予同體積的2%的CMC-Na.于第8天取血測(cè)Hb, RBC,結(jié)果采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
[0112]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0113]實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表:
[0114]表1多糖鐵復(fù)合物對(duì)缺鐵性貧血小鼠血紅蛋白及紅細(xì)胞的影響
[0115]
【權(quán)利要求】
1.一種多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在10-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?；?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，加熱升溫至55-85 0C，充分?jǐn)嚢?，恒?0分鐘以上； B.加入等體積的無(wú)水乙醇，離心固液分離，所得沉淀物再加入40%-80%的乙醇洗滌二次，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
2.如權(quán)利要求1所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于反應(yīng)罐是夾層反應(yīng)罐。
3.如權(quán)利要求2所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于反應(yīng)罐是夾層搪玻璃反應(yīng)罐或者夾層鈦反應(yīng)罐。
4.如權(quán)利要求1至3任一所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法的A步驟為:將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?；?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘， 然后加熱升溫至75_85°C，恒溫90分鐘以上。
5.如權(quán)利要求4所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25°C ;加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?，?0-90分鐘范圍內(nèi)，連續(xù)加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘，然后加熱升溫至76-81°C，恒溫90分鐘以上； B.加入等體積的無(wú)水乙醇，離心固液分離，所得沉淀物再加入40%-80%的乙醇洗滌二次，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
6.如權(quán)利要求5所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: A.將97.75重量份糖漿和97.75重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在15-25°C;加入93重量份三氯化鐵和194重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢瑁辉?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入244重量份的15%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將123重量份的15%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至60°C，攪拌22分鐘，然后加熱升溫至80°C，恒溫105分鐘； B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
7.如權(quán)利要求5所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: A.將92.50重量份糖漿和92.50重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在20°C ;加入91重量份三氯化鐵和205重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢柙?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入225重量份的13%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將150重量份的13%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至62°C，攪拌25分鐘，然后加熱升溫至78°C，恒溫95分鐘； B.加入等體積的無(wú)水乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
8.如權(quán)利要求5所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: A.將95重量份糖漿和91重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應(yīng)罐中，反應(yīng)溫度控制在18°C ;加入98重量份三氯化鐵和192重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分?jǐn)嚢?，?5分鐘內(nèi)，連續(xù)加入225重量份的17%氫氧化鈉溶液，在加入過(guò)程中，反應(yīng)液逐漸變稠，最后生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢；將122重量份的17%氫氧化鈉溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)罐中，先加熱升溫至56°C，攪拌18分鐘，然后加熱升溫至77°C，恒溫115分鐘； B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉淀，第二次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉淀，干燥，即得多糖鐵復(fù)合物。
9.如權(quán)利要求5至8任一所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法B步驟中的干燥為烘干或噴霧干燥。
10.如權(quán)利要求9所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法B步驟中的烘干溫度在60°C以下。
11.如權(quán)利要求9所述的多糖鐵復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法B步驟中的干燥為加入純化水或蒸餾水配合10%-15%的溶液，噴霧干燥。
12.如權(quán)利要求5-8、10-11任一所述的多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法: A.鑒別: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物30-50mg，加水4-6ml使溶解，加氨試液，應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物70-90mg，加水10-30ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)； 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.2-0.4g，加水20-40ml使溶解，加鹽酸6-10ml，水浴加熱8-12分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀； B.含量測(cè)定: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.2-0.4g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水20-40ml溶解后，加鹽酸8-12ml，置水浴中加熱4-6分鐘，放冷，加碘化鉀試液10-30ml，密塞，在暗處放置10-20分鐘，加水40-60ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液.2.8-3.2ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
13.如權(quán)利要求12所述的多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法: A.鑒別: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物40mg，加水5ml使溶解，加氨試液，應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物80mg，加水20ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)； 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.3g，加水30ml使溶解，加鹽酸8ml，水浴加熱10分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀； B.含量測(cè)定: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.3g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水30ml溶解后，加鹽酸10ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液20ml，密塞，在暗處放置15分鐘，加水50ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
14.如權(quán)利要求12所述的多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法: A.鑒別: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物35mg，加水4.2ml使溶解，加氨試液，應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物85mg， 加水12ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)； 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.25g，加水38ml使溶解，加鹽酸7ml，水浴加熱9分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀； B.含量測(cè)定: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.23g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水25ml溶解后，加鹽酸9ml，置水浴中加熱4分鐘，放冷，加碘化鉀試液15ml，密塞，在暗處放置12分鐘，加水45ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2.9ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
15.如權(quán)利要求12所述的多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法: A.鑒別: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物45mg，加水5.5ml使溶解，加氨試液，應(yīng)無(wú)沉淀析出；另取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物75mg，加水28ml滴加鹽酸并加熱使成淡黃色溶液，放冷后，加過(guò)量的氨試液，產(chǎn)生紅棕色沉淀，濾過(guò)，沉淀用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)； 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.35，加水25ml使溶解，加鹽酸9ml，水浴加熱11分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調(diào)至堿性，過(guò)濾，濾液滴加堿性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉淀； B.含量測(cè)定: 取本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物0.35g，精密稱(chēng)定，置碘量瓶中，加水35ml溶解后，加鹽酸I Iml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液25ml，密塞，在暗處放置18分鐘，加水55ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3.1ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當(dāng)于5.585mg的Fe。
16.如權(quán)利要求12-15所述的多糖鐵復(fù)合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于本發(fā)明多糖鐵復(fù)合物為氫氧化鐵與淀粉經(jīng)水解生成的單糖和低聚糖制成的絡(luò)合物，按干燥品計(jì)算，含鐵應(yīng)為 40.0%—46 .0%。
【文檔編號(hào)】A61P7/06GK103641875SQ201310590326
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】王京端, 展莜林, 姜作玲, 張朋言 申請(qǐng)人:青島國(guó)風(fēng)藥業(yè)股份有限公司