一種prf前體液固化為凝膠膜的植入材料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，屬于皮膚黏膜手術(shù)用植入材料領(lǐng)域。本發(fā)明的植入材料，采用非抗凝血液樣本，經(jīng)離心機(jī)在130-460g離心力離心操作，取上層的全部黃色液體，室溫靜置30-40分鐘，用金屬壓板壓成臨床應(yīng)用的膜狀。本發(fā)明的植入材料產(chǎn)量高、無(wú)需添加凝血酶和鈣離子自然形成凝膠，規(guī)避了生物化學(xué)制劑使用危險(xiǎn)；操作簡(jiǎn)單；PRF凝膠產(chǎn)品的纖維蛋白絲粗，彈性韌性好，張力強(qiáng)，硬度大，降解慢，撕扯不易斷裂；白細(xì)胞、血小板以及兩者脫落顆粒制備過(guò)程中幾乎沒(méi)有損傷；植入體內(nèi)后緩慢釋放各種生長(zhǎng)因子和抗炎因子以促進(jìn)創(chuàng)口愈合。
【專利說(shuō)明】一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，屬于皮膚黏膜手術(shù)用植入材料領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]皮膚粘膜創(chuàng)傷愈合基本過(guò)程:第一過(guò)程炎癥反應(yīng)，早期以中性粒細(xì)胞為主，3天后則是巨噬細(xì)胞，傷口中的血液和滲出液中纖維蛋白原很快凝固形成纖維蛋白凝塊，凝塊起到保護(hù)傷口作用。第二過(guò)程傷口收縮，2-3日后邊緣的整層皮膚黏膜及皮下組織向中心移動(dòng)，于是傷口迅速縮小，直到14天左右停止。第三過(guò)程肉芽組織增生和瘢痕形成，大約3天開(kāi)始從傷口底部及邊緣長(zhǎng)出肉芽組織填平傷口。5-6天起成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原纖維，其后一周膠原纖維形成甚至活躍，以后逐漸緩慢下來(lái)。第四過(guò)程粘膜組織再生:創(chuàng)傷發(fā)生24小時(shí)內(nèi)，傷口邊緣的基底細(xì)胞即開(kāi)始增生、分化成鱗狀上皮。健康肉芽組織對(duì)皮膚黏膜再生十分重要，因?yàn)樗商峁┥掀ぴ錾璧臓I(yíng)養(yǎng)及生長(zhǎng)因子。如果肉芽組織長(zhǎng)時(shí)間不能將傷口填平，并形成瘢痕，則皮膚黏膜再生將延緩；在另一種情況下，由于感染而形成過(guò)度肉芽組織，高出黏膜表面，也會(huì)阻止黏膜再生。在組織愈合過(guò)程中，血小板和白細(xì)胞是主要的炎癥階段調(diào)節(jié)因子，這些因子對(duì)細(xì)胞繁殖和分化階段起重要的作用，是組織重建通路成功的關(guān)鍵成分。[0003]1998年，Dr Robert E.Marx體外制備高濃度血小板即定義為富含血小板血漿，(Platelet-rich plasma PRP)(Marx, R.E.et al.(1998)Platelet-rich plasma:growthfactor enhancement for bone grafts.0ral Surg.0ral Med.0ral Pathol.0ral Radiol.Endod.85,638-646)首次提出PRP能促進(jìn)創(chuàng)傷初始階段愈合。因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)PRP中含有很多生長(zhǎng)因子，例如:血小板源生長(zhǎng)因子(Platelet derived growth factor F1DGF),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(Transforming growth factor TGF-β ),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular EndotheliaGrowth Factor VEGF)等,是這些因子在再生發(fā)揮重要作用。
[0004]然而，從制備PRP血漿液到臨床應(yīng)用膜和PRP凝膠體制備和應(yīng)用都存在很多不足，I)抗凝劑、外來(lái)凝血酶和鈣離子使用，增加生物制劑使用的醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)。2)兩次離心時(shí)間合計(jì)約40分鐘，整個(gè)操作完成要60分鐘以上，操作時(shí)間長(zhǎng)。3)制備過(guò)程中提取血漿液需要較高的技巧。4)PRP血漿液體積與全血體積比懸殊，約1:15-20。全血用量大。5)由于PRP血漿液經(jīng)加入凝血酶和鈣離子再次凝結(jié)，形成的纖維蛋白絲纖細(xì)。6)兩次離心吸取血小板，使得血小板有一定損傷。7)終產(chǎn)物是纖維蛋白絲細(xì)，降解時(shí)間2-3天；PRP凝膠膜柔軟，硬度弱，張力小。
[0005]隨著近年越來(lái)越多臨床應(yīng)用對(duì)于PRP在植骨術(shù)中作用的質(zhì)疑和否定。Choukroun’s等提出的富含血小板纖維蛋白(Platelet-Rich Fibrin, P RF)是新一代濃縮血小板促進(jìn)傷口愈合并取代纖維蛋白類物質(zhì)的材料，PRF中血小板和白細(xì)胞及其脫落顆粒釋放多種細(xì)胞因子，如:血小板源生長(zhǎng)因子(Platelet derived growth factor F1DGF),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(Transforming growth factor TGF-β ),膜島素樣生長(zhǎng)因子(Insulin-likeGrowth Factor IGF-1)等,這些細(xì)胞因子在創(chuàng)面愈合過(guò)程中均勻分布并且緩慢釋放,且持續(xù)7-11天左右。
[0006]但是，現(xiàn)有技術(shù)中制備的PRF是固體凝膠，分為頭、體、尾三個(gè)部分，其中血小板和白細(xì)胞從上到下濃度逐漸增加，到白膜層達(dá)到高峰，造成各種細(xì)胞因子濃度分布及其不均勻。組織愈合過(guò)程中生長(zhǎng)因子濃度，抗感染能力，細(xì)胞增殖、分化速度直接關(guān)系到組織愈合向組織再生還是向瘢痕修復(fù)發(fā)展。
[0007]任何臨床手術(shù)都涉及到皮膚黏膜表面的創(chuàng)傷愈合過(guò)程，因此良好的再生創(chuàng)傷愈合是期盼的理想目標(biāo)。缺乏理想的促進(jìn)良性愈合的植入材料，是影響這類技術(shù)應(yīng)用和發(fā)展的重要缺陷。綜上，為克服上述不足，并達(dá)到伴有促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)面愈合再生的各種生長(zhǎng)因子逐漸釋放，促進(jìn)植入?yún)^(qū)域組織細(xì)胞增殖、分化、抗感染、降低術(shù)區(qū)疼痛和水腫的功效，提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有骨材料技術(shù)中生物制劑使用風(fēng)險(xiǎn)高，降解快，操作復(fù)雜等缺陷，而提供一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料。
[0009]本發(fā)明的一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，其具體制備步驟如下:
[0010]步驟I)用vacuette采血管獲取非抗凝血液樣本；
[0011]步驟2)將血液樣本立即放入離心機(jī)，調(diào)節(jié)離心力130_460g，室溫下離心2_4分鐘；
[0012]步驟3)從離心機(jī)中取出步驟2)條件下離心已分層的血液，吸取白膜層以上的全部黃色液體到無(wú)菌容器中；
[0013]步驟4)步驟3)室溫靜置30-40分鐘，PRF前體液凝結(jié)成固體凝膠，用金屬壓板壓成臨床應(yīng)用的膜狀。
[0014]其中步驟3)中將得到的白膜層以上黃色液體用吸管吸入和吹出反復(fù)三次效果更好。
[0015]本發(fā)明PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，另一種具體制備步驟如下
[0016]步驟I)用玻璃試管獲取非抗凝血液樣本；
[0017]步驟2)將血液樣本立即放入離心機(jī)，調(diào)節(jié)離心力130_460g，室溫下離心1_2分鐘；
[0018]步驟3)從離心機(jī)中取出步驟2)條件下離心已分層的血液，吸取白膜層以上的全部黃色液體到無(wú)菌容器中；
[0019]步驟4)步驟3)室溫靜置20-30分鐘，PRF前體液凝結(jié)成固體凝膠，用金屬壓板壓成臨床應(yīng)用的膜狀。
[0020]其中步驟3)中將得到的白膜層以上黃色液體用吸管吸入和吹出反復(fù)三次效果更好。
[0021]有益效果
[0022]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)PRP比較，采用無(wú)任何外加化學(xué)試劑抗凝的非抗凝全血，離心后分層，全血100ml可以獲得45-55ml淡黃色上層液(即PRF前體液)，產(chǎn)量高；黃色液體中無(wú)需添加凝血酶和鈣離子自然形成凝膠，規(guī)避了生物化學(xué)制劑使用危險(xiǎn)；操作簡(jiǎn)單無(wú)需復(fù)雜技巧，步驟少，省時(shí)省力；PRF凝膠產(chǎn)品的纖維蛋白絲粗，彈性韌性好，張力強(qiáng)，硬度大，降解慢，撕扯不易斷裂；白細(xì)胞、血小板以及兩者脫落顆粒制備過(guò)程中幾乎沒(méi)有損傷；植入體內(nèi)后緩慢釋放各種生長(zhǎng)因子和抗炎因子以促進(jìn)創(chuàng)口愈合；
[0023]本發(fā)明PRF前體液與現(xiàn)有技術(shù)PRF:本發(fā)明從PRF前體液到PRF凝結(jié)，因此可以根據(jù)臨床創(chuàng)傷形狀、大小需要制備不同形狀纖維蛋白膜材料；PRF中白細(xì)胞和血小板是均勻分鑲嵌在PRF纖維蛋白網(wǎng)中，植入體內(nèi)緩慢釋放各種因子，促進(jìn)創(chuàng)口愈合；此外，PRF前體液還可以與顆粒性骨材料混合，最終兩者結(jié)合形成PRF-骨材料一個(gè)整體凝膠塊，由此增加了PRF臨床應(yīng)用的途徑，擴(kuò)大了 PRF未來(lái)發(fā)展的方向。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步描述。
[0025]實(shí)施例1
[0026]用不含任何生物制劑vacuette采血管采集4ml非抗凝血液樣本，立即放入離心機(jī)中(Anke TDL-80-2D中國(guó))，調(diào)130g離心力，離心4分鐘；取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁淡黃色液體，下層為紅細(xì)胞層，中間白膜層很不清晰；將全部上層渾濁淡黃色液體移入陶瓷雙碟中混勻；室溫靜置，30分鐘左右所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度。
[0027]實(shí)施例2
[0028]用不含任何生物制劑vacuette采血管采集4ml非抗凝血液樣本，立即放入離心機(jī)中(Anke TDL-80-2D中國(guó))，調(diào)270g離心力，離心3分鐘；取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁淡黃色液體，下層為紅 細(xì)胞層，中間白膜層很不清晰；將全部上層渾濁淡黃色液體移入陶瓷雙碟中混勻；室溫靜置，30分鐘所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度，撕扯不易斷裂
[0029]實(shí)施例3
[0030]用不含任何生物制劑vacuette采血管采集4ml非抗凝血液樣本，立即放入離心機(jī)中(Anke TDL-80-2D中國(guó))，調(diào)390g離心力，離心2分鐘；取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁淡黃色液體，下層為紅細(xì)胞層，中間白膜層很不清晰；將全部上層渾濁淡黃色液體移入陶瓷雙碟中混勻；室溫靜置，35分鐘所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度，撕扯不易斷裂。
[0031]實(shí)施例4
[0032]用不含任何生物制劑vacuette采血管采集4ml非抗凝血液樣本，立即放入離心機(jī)中(Anke TDL-80-2D中國(guó))，調(diào)460g離心力，離心I分鐘；取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁淡黃色液體，下層為紅細(xì)胞層，中間白膜層很不清晰；將全部上層渾濁淡黃色液體移入陶瓷雙碟中；室溫靜置，40分鐘所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度。
[0033]實(shí)施例5
[0034]用無(wú)菌玻璃試管采非抗凝全血4ml。將血液樣本立即放入離心機(jī)中(AnkeTDL-80-2D中國(guó))，調(diào)130g離心力，離心2分鐘；立即取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁淡黃色液體，下層為紅細(xì)胞層，中間白膜層很不清晰；將全部渾濁淡黃色液體吸入陶瓷雙碟中；30分鐘左右所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度。
[0035]實(shí)施例6
[0036]用無(wú)菌玻璃試管采非抗凝全血4ml。將血液樣本立即放入離心機(jī)中(AnkeTDL-80-2D中國(guó))，調(diào)270g離心力，離心1.5分鐘；立即取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為渾濁的淡黃色液體，下層為紅細(xì)胞層，中間非常薄紗膜層；將全部淡黃色液體吸入陶瓷雙碟中；30分鐘左右所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度，撕扯不易斷裂。
[0037]實(shí)施例7
[0038]用無(wú)菌玻璃試管采非抗凝全血4ml。將血液樣本立即放入離心機(jī)中(AnkeTDL-80-2D中國(guó))，調(diào)390g離心力，離心I分鐘；立即取出已經(jīng)分層的血液樣本，上層為淡黃色液體約，下層為紅細(xì)胞層，中間白膜層；將全部白膜層以上淡黃色液體吸入陶瓷雙碟中；35分鐘左右所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度，有彈性、韌性和硬度，撕扯不易斷裂。
[0039]實(shí)施例8
[0040]用無(wú)菌玻璃試管采非抗凝全血4ml。將血液樣本立即放入離心機(jī)中(AnkeTDL-80-2D中國(guó))中，調(diào)460g離心力，離心I分鐘；立即取出已分層的血液樣本，將全部上層淡黃色液體吸入陶瓷雙碟中 ；40分鐘左右所有黃色液體止動(dòng)，液體變成渾濁固體狀態(tài)，用金屬板壓平制備成膜狀物；用鑷子膜夾起，有彈性、韌性和硬度，撕扯不易斷裂。
[0041 ] 對(duì)比例9 (PRP凝膠制備)
[0042]用含有枸櫞酸三鉀抗凝劑采血管收集抗凝血液樣本4ml，將抗凝血立即放入離心機(jī)中，首先調(diào)整離心力160g，離心20分鐘；從離心機(jī)中取出血液樣本，上層為淡黃色血漿層，下層為紅細(xì)胞，中間白膜層不清晰；吸取血漿層直至白膜層到另一支空試管中，將此試管再次放入離心機(jī)陶正離心力460g離心20分鐘，上層是黃色血漿棄除，吸出下層渾濁黃色濃縮血小板血漿液，加入凝血酶和氯化鈣，制成PRP凝膠，用金屬壓板壓平，制備成膜狀物；用鑷子將膜夾起，膜軟不易展平，硬度差，撕扯易斷裂。
[0043]對(duì)比例9與實(shí)施例6的方法比較如下表:
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，其特征是:具體方法為: 步驟I)用vacuette采血管獲取非抗凝血液樣本； 步驟2)將血液樣本立即放入離心機(jī)，調(diào)節(jié)離心力130-460g，室溫下離心2-4分鐘；步驟3)從離心機(jī)中取出步驟2)條件下離心已分層的血液，吸取白膜層以上的全部黃色液體到無(wú)菌容器中； 步驟4)步驟3)室溫靜置30-40分鐘，PRF前體液凝結(jié)成固體凝膠，用金屬壓板壓成臨床應(yīng)用的膜狀。
2.如權(quán)利要求1所述的一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，其特征是:其中步驟3)將得到的白膜層以上黃色液體后，用吸管吸入和吹出反復(fù)三次，再進(jìn)行第4)步操作。
3.—種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，其特征是:另一種方法為: 步驟I)用玻璃試管獲取非抗凝血液樣本； 步驟2)將血液樣本立即放入離心機(jī)，調(diào)節(jié)離心力130-460g，室溫下離心1-2分鐘；步驟3)從離心機(jī)中取出步驟2)條件下離心已分層的血液，吸取白膜層以上的全部黃色液體到無(wú)菌容器中； 步驟4)步驟3)室溫靜置20-30分鐘，PRF前體液凝結(jié)成固體凝膠，用金屬壓板壓成臨床應(yīng)用的膜狀。
4.如權(quán)利要求3所 述的一種PRF前體液固化為凝膠膜的植入材料，其特征是:其中步驟3)將得到的白膜層以上黃色液體后，用吸管吸入和吹出反復(fù)三次，再進(jìn)行第4)步操作。
【文檔編號(hào)】A61L27/54GK103690999SQ201310661604
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】陳智濱, 欒慶先 申請(qǐng)人:北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院