包含μ芋螺肽的化妝品組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及化妝品組合物，其包含作為活性物質(zhì)的化妝有效量的至少一種μ-芋螺毒素肽。其還涉及組合物，其中μ-芋螺毒素肽為精氨酸、賴氨酸多肽，CAS號：937286-43-6，分子式C92,H139,N35,O28,S6乙酸鹽(摩爾質(zhì)量2376g/mol)。其還涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物改善皮膚的機(jī)械性質(zhì)、皮膚的張力和/或硬挺度和/或彈性的用途。
【專利說明】包含μ芋螺肽的化妝品組合物

【背景技術(shù)】
[0001] 引言
[0002] 面部以及其它部位皮膚細(xì)紋和皺紋通過老化、遺傳、肌肉動作、陽光損害和重力的 組合而形成。面部以及其它皮膚表情通過強(qiáng)的肌肉收縮而成，并且隨著時間流逝，產(chǎn)生皮膚 皺紋，諸如抬頭紋、魚尾紋以及眼睛之間的垂直皺褶。皺紋主要由強(qiáng)的肌肉收縮或由在該位 置時間延長而造成的。在細(xì)胞水平上，位于張力線上的合成胞外基質(zhì)和膠原的成纖維細(xì)胞 可在肌肉收縮的作用下發(fā)揮與橫紋肌有關(guān)的特定收縮性質(zhì)。
[0003] 神經(jīng)與橫紋肌之間的接合點構(gòu)成神經(jīng)肌肉板，在其上游是被稱為運動神經(jīng)元的傳 入神經(jīng)通路。
[0004] 肌肉收縮由乙酰膽堿（一種神經(jīng)遞質(zhì)）引起。乙酰膽堿由刺激肌肉的神經(jīng)釋放。 已知面部的皮膚肌肉處于運動神經(jīng)傳入的控制之下，并且皮下組織含有健康并且扁平片狀 的橫紋肌，被稱為構(gòu)成肌肉組織的肉膜。
[0005] 目前，此類假性皺紋和年齡相關(guān)性皺紋往往用Botox(由病原性微生物肉毒桿菌 生產(chǎn)的肉毒毒素 Α)治療。Botox通過抑制乙酰膽堿釋放而起作用。這種毒素短暫地麻痹肌 肉并且抑制收縮。缺少收縮可防止皺紋，并且誘導(dǎo)光滑且再生的皮膚。此類毒素作為蛋白 酶，更具體地，靶向神經(jīng)元細(xì)胞溶質(zhì)的鋅內(nèi)肽酶而起作用：BotoxB、D和F，以及由破傷風(fēng)梭 菌病原性微生物產(chǎn)生的破傷風(fēng)毒素特異性攻擊VAMP (也稱為小突觸泡蛋白）一一種突觸囊 泡的蛋白質(zhì)；Botox A和E切割SNAP-25,并且Botox C作用于突觸融合蛋白-兩種突觸前 膜的蛋白質(zhì)（參見例如 Proc. West. Pharmacol. Soc. 43 :71_74, 2000)。
[0006] Botox局部注射于組織中，從而使組織麻痹。在眼睛或在前額處的肌肉不再運轉(zhuǎn)， 使難以顯現(xiàn)前額皺紋（如果有可能的話）。然而，鑒于用皮下注射的Botox治療必須由醫(yī) 師進(jìn)行這一事實，其由此的高成本和其極高的毒性構(gòu)成相當(dāng)大的缺點。其有效性持續(xù)3至 6個月，因此治療必須重復(fù)。
[0007] 背景
[0008] 從Lipotec名下的歐洲專利申請EP 2123673和EP 1180524可知，包含由蛋白質(zhì) SNAP25的氨基酸序列衍生的氨基酸序列的肽可通過模擬其N末端且由此干擾SNARE復(fù)合物 而與SNAP 25競爭。如果SNARE復(fù)合物失去平衡，那么突觸囊泡不能有效地釋放乙酰膽堿 并且可改變肌肉收縮。
[0009] 這些肽的作用機(jī)制與注重抑制乙酰膽堿的神經(jīng)元胞吐作用的肉毒毒素的作用機(jī) 制類似。
[0010] INSERM 名下的 El Far Oussama 和 col. In 專利申請 WO 2011/448441 描述了 VATP 酶與SNARE小突觸泡蛋白（VAMP2)之間的直接分子相互作用。具有與VATP酶亞單位的一 部分對應(yīng)的序列的可溶性肽具有干擾神經(jīng)遞質(zhì)釋放的性質(zhì)。
[0011] 在OHIO STATE RES FOUND大學(xué)的名下的專利申請WO 2009/012376涉及已在感覺 神經(jīng)元的外周突支中鑒定的阿片樣物質(zhì)受體。肽已被用作S阿片樣物質(zhì)受體激動劑。這 種與受體的結(jié)合抑制GABA從神經(jīng)末梢釋放，從而減少GABA對多巴胺能神經(jīng)元的抑制效應(yīng)。
[0012] 能夠以類似于Waglerin 1(-種蛇毒蛋白）的方式起作用、從而在后突觸膜作為 肌肉煙堿乙酰膽堿受體的拮抗劑起作用的其它肽描述于Pentapharm名下的專利申請WO 2006/047900 中。
[0013] 此外，細(xì)胞膜包含多個離子通道。作用為鈣通道抑制劑的分子例如在歐萊雅名下 的美國專利申請2008/0050318中描述。
[0014] 這些鈣通道可在人成纖維細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，參見例如J. Biol. Chem 267 ;10524? 10530,1992 和 Science 2301024 ?1026,1988。
[0015] 屬于μ -芋螺毒素或μ -芋螺肽家族且作用為鈉通道抑制劑的從海洋蝸牛毒液 分離的原始的肽已在專利申請WO 2004/099238、WO 2002/07678、US 2003/050234或WO 2007/054785中描述。電壓敏感性通道是通過形成動作電位上升而在可電興奮性細(xì)胞中產(chǎn) 生動作電位的關(guān)鍵組分。存在多種鈉離子通道類型和亞型。它們均為打開并且響應(yīng)于膜去 極化而閉合的電壓敏感性鈉通道（VSSC)。
[0016] 來自海洋蝸牛毒液的μ-芋螺肽能夠通過在例如小鼠和梭子魚的坐骨神經(jīng)和 嗅神經(jīng)中直接阻斷動作電位來阻斷VSSC。由此產(chǎn)生的藥理效應(yīng)在于阻斷電導(dǎo)，從而導(dǎo)致 ATHERIS名下的專利申請WO 2007/054785中描述的神經(jīng)肌肉系統(tǒng)的功能喪失。
[0017] 基于它們被河豚毒素（TTX)阻斷的敏感性，VGSC可分成河豚毒素敏感性（TTX-S) 和 TTX 抗性（TTX-R)種類。這些包括神經(jīng)元 TTX-S 1 型 /NavL 1、IilNavL 2111/Navl. 3、 PNl/Navl. 7 和 PN4/Navl· 6,以及骨骼肌 TTX-S ul/Navl. 4。
[0018] μ -芋螺肽靶向多種電壓敏感性鈉通道，主要阻斷Navi. 4通道。
[0019] 迄今為止，已描述或提出的這些肽對于化妝品應(yīng)用的鈉通道無抑制活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0020] 我們證實μ -芋螺肽使消除人面部上的表情皮膚皺紋的形成成為可能。它們可通 過使被認(rèn)為參與表情皺紋產(chǎn)生的皮膚收縮成纖維細(xì)胞松弛來消除微張力對皮膚的作用。
[0021] 更具體地，發(fā)現(xiàn)μ -芋螺肽CnIIIC(-種具有三個二硫橋的含23殘基的肽，電壓 門控的鈉通道（特別是肌肉亞型NaVL 4)的阻斷劑，被配制成局部用產(chǎn)品）誘導(dǎo)特異性作 用。例如，CnIIIC減少通過老化、遺傳、陽光損害和重力而形成的面部細(xì)紋和皺紋。這些面 部細(xì)紋或皺紋的特征在于孔口外周的紋溝，即鼻（鼻源性紋溝）、口腔（口周線和苦澀線）、 面部肌肉位于其周圍的前額和眼睛（魚尾紋）。
[0022] 本發(fā)明包括化妝品組合物，其包含可選擇地與化妝品可接受的載體、稀釋劑和/ 或佐劑組合的、作為活性物質(zhì)的化妝有效量的包含以下氨基酸序列、其生物活性片段、其 鹽、其組合和/或其變體的至少一種μ-芋螺毒素肽：
[0023] Xaal-Xaa2-Cys-Cys-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Cys-Xaa8-Xaa9-Xaal〇-Xaal1-Cys-Xaal2-Xaal3-Xaal4-Xaal5-Xaal6-Cys-Cys-Xaal7[SEQ ID No 1],
[0024] 并且，其中Xaal為任一 N修飾的氨基酸，
[0025] Xaa2為甘氨酸，
[0026] Xaa3為任一酸性氨基酸或其酰胺形式的任一種，
[0027] Xaa4為甘氨酸，
[0028] Xaa5為脯氨酸或3-羥基-脯氨酸，
[0029] Xaa6為任一堿性氨基酸，
[0030] Xaa7為甘氨酸，
[0031] Xaa8為任一非芳族輕基氨基酸，
[0032] Xaa9為任一非芳族輕基氨基酸，
[0033] XaalO為任一堿性氨基酸，
[0034] Xaall為任一芳族氨基酸，
[0035] Xaal2為任一堿性氨基酸，
[0036] Xaal3為任一酸性氨基酸或其酰胺形式的任一種，
[0037] XaaH為任一堿性氨基酸，或任一含硫氨基酸，
[0038] Xaal5為任一疏水性或非極性氨基酸，或任一非芳族羥基氨基酸，
[0039] Xaal6為任一堿性氨基酸，
[0040] Xaal7不存在或為任一非極性氨基酸，或酰胺基團(tuán)。
[0041] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，所述μ-芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaa3、 Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7組成的組中的至少一種氨基酸，或其任意組合。
[0042] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，所述μ-芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaa8、 Xaa9、XaalO和Xaall組成的組中的至少一種氨基酸，或其任意組合。
[0043] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，所述μ -芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaal2、 Xaal3、Xaal4、Xaal5和Xaal6組成的組中的至少一種氨基酸，或其任意組合。
[0044] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，所述μ-芋螺毒素肽中的氨基酸Xaal的 N-修飾選自包含乙酰化、甲酰化、豆蘧?；蝓０坊慕M；
[0045] Xaa3和Xaal3獨立地選自包含天冬氨酸（Asp)、天冬酰胺（Asn)、谷氨酸（Glu)、谷 氨酰胺（Gln)和焦谷氨酸（pGlu或Z)組中；
[0046] Xaa6、XaalO、Xaal2和Xaal6獨立地選自包含精氨酸（Arg)、賴氨酸（Lys)和組氨 酸（His)的組中；
[0047] Xaa8和Xaa9獨立地選自包含絲氨酸（Ser)和蘇氨酸（Thr)的組中；
[0048] Xaall選自包含苯丙氨酸（Phe)、酪氨酸（Tyr)和色氨酸（Trp)的組中；
[0049] XaaH選自包含精氨酸（Arg)、賴氨酸（Lys)和組氨酸（His)、半胱氨酸（Cys)和蛋 氨酸（Met)的組中；
[0050] Xaal5選自包含甘氨酸（Gly)、丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨酸（Leu)和異亮 氨酸（lie)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、蛋氨酸（Met)、半胱氨酸（Cys)和脯氨酸（Pro)的 組中；
[0051] Xaal7選自包含甘氨酸（Gly)、丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨酸（Leu)、異亮氨 酸（lie)、蘇氨酸（Thr)、蛋氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)和脯氨酸（Pro)的組中。
[0052] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，在所述μ -芋螺毒素肽中，Xaal為焦谷氨酸 (pGlu)。
[0053] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，在所述μ-芋螺毒素肽中，所述氨基酸序列 % pGlu-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly-Pro-Lys-Gly-Cys-Ser-Ser-Lys-Trp-Cys-Arg-Asp-His-Al a-Arg-Cys-Cys-酰胺[SEQ ID No 2]、其生物活性片段、其鹽、其組合和/或其變體。
[0054] 術(shù)語"變體"是指具有在某種程度上與天然序列肽不同的氨基酸序列（即通過保 守性氨基酸取代而與天然序列不同的氨基酸序列）的肽，由此一個或多個氨基酸被另一個 具有相同特征和構(gòu)象作用的氨基酸取代。氨基酸序列變體在天然氨基酸序列的氨基酸序列 中的某些位點具有取代、缺失、側(cè)鏈修飾和/或插入。
[0055] 在本發(fā)明組合物的一個實施方式中，所述μ -芋螺毒素肽為精氨酸、賴氨酸多肽， CAS 號：937286-43-6,分子式 C92, H139, N35, 028, S6 乙酸鹽（摩爾質(zhì)量 2376g/mol.)。
[0056] 在一個實施方式中，所述至少一種μ-芋螺毒素肽以所述組合物總重量的 0.05X 10_6wt%至IX 10_4wt%范圍內(nèi)的量存在。
[0057] 在另一個實施方式中，其以所述組合物總重量的0.05X KT4Wt%至0. lXl(T4wt% 范圍內(nèi)的量存在。
[0058] 在另一個實施方式中，其以所述組合物總重量的0. IX KT4Wt %至IX KT4Wt %范 圍內(nèi)的量存在。
[0059] 在另一個實施方式中，其以所述組合物總重量的0. 05Χ l(T2mg/kg至lmg/kg范圍 內(nèi)的量存在。
[0060] 在另一個實施方式中，其以所述組合物總重量的0. 01mg/kg至0. lmg/kg范圍內(nèi)的 量存在。
[0061] 在另一個實施方式中,其以所述組合物總重量的0. lmg/kg至lmg/kg范圍內(nèi)的量 存在。
[0062] 在實施方式中，所述至少一種μ -芋螺毒素肽以0. 05μ M至〇. 50μ M范圍內(nèi)的 摩爾濃度存在。
[0063] 在另一個實施方式中，其以0. 10μ M至〇. 30μ M范圍內(nèi)的摩爾濃度存在。
[0064] 在另一個實施方式中，其以0. 25μ M至0. 35μ M范圍內(nèi)的摩爾濃度存在。
[0065] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物還包含陽離子表面活性劑。
[0066] 令人驚訝的是，所述陽離子表面活性劑增強(qiáng)所述μ -芋螺毒素肽的皮膚滲透。
[0067] 所述陽離子表面活性劑選自可在化妝品組合物中使用的陽離子表面活性劑，如pH 依賴性伯胺、仲胺或叔胺或者永久帶電的季銨陽離子如烷基三甲基銨鹽、苯扎氯銨、雙十八 烷基二甲基溴化銨或鯨蠟硬脂醇和山?；谆@甲基硫酸鹽。
[0068] 在一個實施方式中，所述陽離子表面活性劑以所述組合物總重量的1至6wt%的 量存在。
[0069] 在另一個實施方式中，其以所述組合物總重量的3wt%至5wt%的量存在。
[0070] 可在將所述組合物涂覆到皮膚上后5分鐘觀察到抗皺效果。
[0071] 在一個實施方式中，其可從涂覆后10分鐘觀察到。
[0072] 在一個實施方式中，其可從涂覆后20分鐘觀察到。
[0073] 在一個實施方式中，其可從涂覆后20分鐘至48小時觀察到。
[0074] 用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法（如通過計算標(biāo)準(zhǔn)粗糙度參數(shù)進(jìn)行的皮膚表 面的分析）觀察到抗皺效果。
[0075] 本發(fā)明還包括本發(fā)明組合物預(yù)防和/或治療皮膚老化的內(nèi)在和外在癥狀：皺紋、 細(xì)紋、皮膚的斷紋（discontinuities)和粗糙度、皮膚下垂、皮膚斑點和/或膚色亮度喪失 的用途。
[0076] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物的用途是在皮膚的張力和/或硬挺度和/或彈 性方面改善皮膚的機(jī)械性質(zhì)。
[0077] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物的用途是改善真皮和表皮的密度，獲得或恢復(fù) 真皮和表皮的體積。
[0078] 在一個實施方式中，本發(fā)明是用于治療皺紋的美容方法，包括將本發(fā)明組合物局 部涂覆于皮膚。
[0079] 更具體地，其由將這樣的組合物涂覆至布滿皺紋的面部的區(qū)域組成。
[0080] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物適用于局部涂覆至皮膚，由此含有生理學(xué)上可 接受的介質(zhì)，即與皮膚相容的介質(zhì)。
[0081] 在一個實施方式中，所述組合物可以呈通常用于化妝品的任意表現(xiàn)形式，并且其 可以例如呈可選擇地膠凝的水溶液、洗劑類型（可選擇地兩相洗劑）的分散體、通過將脂肪 相分散于水相中（0/W乳液）或相反地將水相分散于脂肪相中（W/0乳液）而獲得的乳液， 或三重乳液（W/0/W或0/W/0乳液）或者離子型和/或非離子型的囊狀分散體。通常根據(jù) 常見方法來制備這些組合物。
[0082] 在一個實施方式中，所述組合物呈霜劑、軟膏、乳、洗劑、血清、糊劑或泡沫的形式。
[0083] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物包含一種或多種另外的活性成分，所述活性成 分選自增白劑、抗發(fā)紅劑（anti-redness agent)、遮光劑和UV有機(jī)或無機(jī)濾質(zhì)（filter)、水 合齊U、保濕劑、濕潤劑、磨砂劑、抗皺紋劑、抗老化劑、減肥劑、抗痘劑、抗炎癥劑、抗氧化劑、 自由基清除劑、美黑劑（self tanning)、脫毛劑或剃須劑、毛發(fā)生長緩和劑、緊縮劑、肽和維 生素。
[0084] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物可以包含至少一種佐劑，所述佐劑選自諸如親 水性和親脂性膠凝劑、親水性和親脂性活性劑、防腐劑、抗氧化劑、溶劑、芳香劑、填充劑、掩 蔽劑、色素、氣味吸附劑和染料的佐劑。
[0085] 所述佐劑以例如相對于所述組合物總重量的0. Olwt %至50wt %范圍內(nèi)的量存 在。
[0086] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物還可包含至少一種試劑，所述試劑選自UVA活 性的和UVB活性的有機(jī)和礦物光防護(hù)劑。
[0087] 在一個實施方式中，本發(fā)明組合物與裝置一起使用，以增強(qiáng)滲透。
[0088] 在另一個實施方式中，所述裝置為離子電泳裝置。 實施例
[0089] 下列實施例中引用為CnIIIC的產(chǎn)物為：
[0090] pGlu-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly-Pro-Lys-Gly-Cys-Ser-Ser-Lys-Trp-Cys-Arg-Asp-His-Ala-Arg-Cys-Cys-酰胺[SEQ ID No 2]
[0091] 它也被稱為精氨酸、賴氨酸多肽，CAS號：937286-43-6,分子式C92, H139, N35, 028, S6 乙酸鹽（摩爾質(zhì)量2376g/mol.)。
[0092] 它用作濃度為10 μ M的母液。
[0093] 母液以1%至3%范圍內(nèi)的量加入到最終組合物中。
[0094] 實施例1 :
[0095] 抗老化舒緩日霜成分的wt%
[0096] 棕櫚酸異丙酯：20%
[0097] 鯨蠟硬脂醇：10%
[0098] 鯨蠟醇：5%
[0099] Ceteareth-33 ：10%
[0100] 二甲聚硅氧烷：5%
[0101] 香精：0.5%
[0102] 防腐劑：0.5%
[0103] CnIIIC :0· 6ΧΚΓ4% (3%的母液）
[0104] 水：QSP100
[0105] 實施例2 :
[0106] 用于成熟皮膚的霜劑
[0107] 卡波姆：0.2%
[0108] 丙三醇：3.5%
[0109] 山梨酸鉀：0.1%
[0110] Steareth 10 ：1. 5%
[0111] 磷酸鯨蠟硬脂醇二鯨蠟酯：3. 5%
[0112] 二甲聚硅氧烷：2.0%
[0113] 硬脂酸山梨醇酯：0. 4%
[0114] 氫氧化鈉：0.2%
[0115] CnIIIC :0· 2ΧΚΓ4% (1% 的母液）
[0116] 水：QSP 100
[0117] 實施例3:
[0118] 丙烯酰二甲基牛磺酸銨/VP共聚物：0. 5%
[0119] 丙三醇：3.0%
[0120] 二丙二醇：4.0%
[0121] 硬脂醇：4.0%
[0122] 荷荷巴酯：3.0%
[0123] 山?；谆@甲基硫酸鹽（和）鯨蠟醇（和）丁二醇：4· 0%
[0124] 二甲聚硅氧烷：5.0%
[0125] 異山梨醇二甲醚：5. 0%
[0126] 苯乙醇（和）乙基己基甘油：2· 0%
[0127] CnIIIC :0· 6ΧΚΓ4% (3%的母液）
[0128] 水：QSP 100
[0129] 實施例4:
[0130] 對人的抗皺效果的量化
[0131] 原理是在對健康人志愿者的研究中通過分析投影在表面上的高對比度線的網(wǎng)絡(luò) 的變形來量化微皮膚緩解。
[0132] 在垂直于測量區(qū)中的線和皺紋的一系列剖面上量化參數(shù)。
[0133] 設(shè)想該產(chǎn)物用于每日涂覆一次。我們目的在于通過使用皮膚生物工程方法（即在 體條紋方案，in vivo fringe projection)進(jìn)行的在體評價方案評估局部用產(chǎn)品相對于安 慰劑的效果。
[0134] 所測試的組合物的濃度為0. 6mg/kg，由此為0. 6X ΚΓ4% (w/w)。
[0135] 在兩個一半的臉部上針對口周、魚尾紋和前額皺紋進(jìn)行測量。它們使用專用于表 面緩解的計量的光學(xué)系統(tǒng)來進(jìn)行。通過計算標(biāo)準(zhǔn)粗糙度的參數(shù)進(jìn)行對表面的皮膚紋理的分 析。
[0136] 該方案在8個小時的期間對30位受試者進(jìn)行雙盲、活性劑針對安慰劑試驗，在此 期間兩者均在臨床上檢查志愿者三次（T0、T2h和T8h)，并且檢查皮膚緩解的變化。該測量 使用專用于計量表面緩解的光學(xué)系統(tǒng)來進(jìn)行。該系統(tǒng)包括與投影儀相連的傳感器和與采集 軟件Optocat (法國EoTech)相連的高分辨率CO)相機(jī)一Dermatop系統(tǒng)（法國EoTech)。
[0137] 平均軸向和橫向分辨率約為10微米。
[0138] 在試驗結(jié)束時，耐受性良好。登記的志愿者表示它們對所研究的產(chǎn)品完全滿意。按 區(qū)域進(jìn)行單次采集。對初始采集（TO)的篩選的可視化允許Tn區(qū)域的正確重新定位。
[0139] 分析
[0140] 通過計算標(biāo)準(zhǔn)粗糙度參數(shù)進(jìn)行對皮膚表面的分析。從30 X 40mm的區(qū)域（12cm2)推 導(dǎo)出這些參數(shù)。在研究區(qū)域上通過分析系統(tǒng)和Toposurf Optocat來進(jìn)行對通過條紋投影 獲得的數(shù)據(jù)的分析。
[0141] 剖面參數(shù)
[0142] SPt :最大緩解幅度（mm)。
[0143] 對于魚尾紋，減小SPt意指主要皺紋的減少。該參數(shù)對于人工制品是敏感的。
[0144] SPa:平均粗糙度（mm)。其意指所研究表面的緩解的幅度的變化。該參數(shù)的下降 意指表面光滑以及皺紋和細(xì)紋的減少。
[0145] SPQ或SQ :使用平方偏差的緩解變化的平均色散（mm)。釋義與Spa相同，即使該 參數(shù)對人工制品較不敏感。
[0146] 形態(tài)參數(shù)
[0147] 在使用多重過濾器和校正多項式以除去形狀以及展平研究區(qū)域后檢測皺紋和細(xì) 紋。
[0148] 皺紋的平均面積（mm2)。該參數(shù)對應(yīng)于在研究區(qū)域中檢測的對象（線和皺紋）的 平均面積。
[0149] 皺紋的平均體積（mm3)。該參數(shù)對應(yīng)于在研究區(qū)域中檢測的對象（線和皺紋）的 平均體積。
[0150] 皺紋的平均深度（mm)。該參數(shù)對應(yīng)于在研究區(qū)域中檢測的對象（線和皺紋）的平 均深度。
[0151] 圖1、2和3中顯示了結(jié)果：
[0152] 圖1顯示了 CnIIIC對魚尾紋皺紋和皺褶的作用。
[0153] 圖2顯示了 CnIIIC對前額皺紋和皺褶的作用。
[0154] 圖3顯示了 CnIIIC對魚尾紋和前額皺紋的作用的比較。
[0155] 在各圖中：
[0156] *p〈0. 05student檢驗。支持CnIIIC相對于TO的統(tǒng)計學(xué)顯著性。
[0157] ° p〈0.05Wilcoxont。CnIIIC 統(tǒng)計地不同于安慰劑。
[0158] 顯示于圖1、2和3中的結(jié)果表明，抗皺效果是顯著的。根據(jù)臨床評價，CnIIIC顯 著地減少魚尾紋的皺紋和細(xì)紋外貌：在涂覆于前額和魚尾紋上2小時后為5 %，并且對于SA 參數(shù)，相對于安慰劑大于8%。
【權(quán)利要求】
1. 一種化妝品組合物，包含可選擇地與化妝品可接受的載體、稀釋劑和/或佐劑組合 的、作為活性物質(zhì)的化妝有效量的包含以下氨基酸序列、其生物活性片段、其鹽、其組合和/ 或其變體的至少一種y-芋螺毒素肽： Xaal-Xaa2-Cys-Cys-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Cys-Xaa8-Xaa9-Xaal〇-Xaall-Cys- Xaal2-Xaal3-Xaal4-Xaal5-Xaal6-Cys-Cys-Xaal7[SEQ ID No 1] 并且，其中Xaal為任一 N修飾的氨基酸， Xaa2為甘氨酸， Xaa3為任一酸性氨基酸或其酰胺形式的任一種， Xaa4為甘氨酸， Xaa5為脯氨酸或羥基-脯氨酸， Xaa6為任一堿性氨基酸， Xaa7為甘氨酸， Xaa8為任一非芳族羥基氨基酸， Xaa9為任一非芳族羥基氨基酸， XaalO為任一堿性氨基酸， Xaal 1為任一芳族氨基酸， Xaal2為任一堿性氨基酸， Xaal3為任一酸性氨基酸或其酰胺形式的任一種， Xaal4為任一堿性氨基酸，或任一含硫氨基酸， Xaal5為任一疏水性或非極性氨基酸，或任一非芳族羥基氨基酸， Xaal6為任一堿性氨基酸， Xaal7不存在或為任一非極性氨基酸，或酰胺基團(tuán)。
2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaa3、Xaa4、 Xaa5、Xaa6和Xaa7組成組中的至少一種氨基酸，或其任意組合。
3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaa8、Xaa9、 XaalO和Xaal 1組成的組中的至少一種氨基酸，或其任意組合。
4. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述芋螺毒素肽不包含由氨基酸Xaal2、 Xaal3、Xaal4、Xaal5和Xaal6組成的組中至少一種氨基酸，或其任意組合。
5. 如權(quán)利要求1至4所述的組合物，其中所述ii -芋螺毒素肽中氨基酸Xaal的N-修 飾選自包含乙?；?、甲?；?、豆蘧酰化或酰胺化的組； Xaa3和Xaal3獨立地選自包含天冬氨酸（Asp)、天冬酰胺（Asn)、谷氨酸（Glu)、谷氨酰 胺（Gin)和焦谷氨酸（pGlu或Z)的組； Xaa6、XaalO、Xaal2和Xaal6獨立地選自包含精氨酸（Arg)、賴氨酸（Lys)和組氨酸 (His)的組； Xaa8和Xaa9獨立地選自包含絲氨酸（Ser)和蘇氨酸（Thr)的組； Xaall選自包含苯丙氨酸（Phe)、酪氨酸（Tyr)和色氨酸（Trp)的組； Xaal4選自包含精氨酸（Arg)、賴氨酸（Lys)和組氨酸（His)、半胱氨酸（Cys)和蛋氨酸 (Met)的組； Xaal5選自包含甘氨酸（Gly)、丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨酸（Leu)和異亮氨酸 (lie)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、蛋氨酸（Met)、半胱氨酸（Cys)和脯氨酸（Pro)的組； Xaal7選自包含甘氨酸（Gly)、丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨酸（Leu)、異亮氨酸 (lie)、蘇氨酸（Thr)、蛋氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)和脯氨酸（Pro)的組。
6. 如權(quán)利要求1至5所述的組合物，其中在所述y -芋螺毒素肽中，Xaal為焦谷氨酸 (pGlu，Z)。
7. 如權(quán)利要求1至6所述的組合物，其中在所述y -芋螺毒素肽中，所述氨基酸序列 % pGlu-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly-Pr〇-Lys-Gly-Cys-Ser-Ser-Lys-Trp-Cys-Arg-Asp-His-Al a-Arg-Cys-Cys-酰胺[SEQ ID No 2]、其生物活性片段、其鹽、其組合和/或其變體。
8. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述U -芋螺毒素肽為精氨酸、賴氨酸多肽，CAS 號：937286-43-6,分子式 C92, H139, N35, 028, S6 乙酸鹽（摩爾質(zhì)量 2376g/mol.)。
9. 如權(quán)利要求1至8所述的組合物，其中所述至少一種芋螺毒素肽以所述組合物 總重量的0. 05X 10_6至1 X 10_4wt%范圍內(nèi)的量存在。
10. 如權(quán)利要求1至8所述的組合物，其中所述至少一種y -芋螺毒素肽以0. 05 y M 至0. 50 ii M范圍內(nèi)的摩爾濃度存在。
11. 如權(quán)利要求1至8所述的組合物，其中，所述組合物還包含陽離子表面活性劑。
12. 如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述陽離子表面活性劑以所述組合物總重量的 1 wt %至6wt %的量存在。
13. 根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項所述的組合物，所述組合物具有包含約20分鐘至48小 時，或更長時間的抗皺效果。
14. 根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項所述的組合物，其特征在于，所述組合物包含另外的活 性成分，所述活性成分選自增白劑、抗發(fā)紅劑、遮光劑和UV有機(jī)或無機(jī)濾質(zhì)、水合劑、保濕 劑、濕潤劑、磨砂劑、抗皺紋劑、抗老化劑、減肥劑、抗痘劑、抗炎癥劑、抗氧化劑、自由基清除 齊U、美黑劑、脫毛劑或剃須劑、毛發(fā)生長緩和劑、緊縮劑、肽和維生素。
15. 根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項所述的組合物預(yù)防和/或治療皮膚老化的內(nèi)在和外在 癥狀：皺紋、細(xì)紋、皮膚的斷紋和粗糙度、皮膚下垂、皮膚斑點和/或膚色殼度喪失的用途。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一項所述的組合物改善皮膚的機(jī)械性質(zhì)、皮膚的張力和 /或硬挺度和/或彈性的用途。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一項所述的組合物改善真皮和表皮的密度，賦予或恢復(fù) 真皮和表皮的體積的用途。
18. 用于處理皺紋的化妝方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一項所述的組合物局 部涂覆于皮膚。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15至17的任一項所述的用途，其用裝置增強(qiáng)滲透。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的用途，其中所述裝置為離子電泳裝置。
【文檔編號】A61K8/64GK104334155SQ201380024190
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月13日
【發(fā)明者】雷托·斯托克林, 讓-馬可·勒·杜薩爾, 路易斯·拉米, 貝特薩比·庫塔 申請人:艾克迪文