核因子－κB多肽抑制劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物領(lǐng)域，具體設(shè)及用于預(yù)防和治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的核因 子一ΚΒ多膚抑制劑。
【背景技術(shù)】：
[0002] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是臨床最常見的炎性關(guān)節(jié)病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發(fā)病在我國(guó)約為0.4%dRA可發(fā)生于任何年 齡，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系密 切，男女之比約1:3"RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，此區(qū)性、對(duì)稱性、多 滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病?；颊叱手部或腕部 疼痛及腫脹(特別是腕背部的腫脹)為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對(duì)癥治療雖可W 緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時(shí)可W出現(xiàn)明顯的 晨僵，通?？蛇_(dá)1小時(shí)W上，并不斷加重;同時(shí)出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。
[0003] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜 炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜血管增生，形成血管繫，導(dǎo)致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯 軟骨并引起骨質(zhì)損害。對(duì)其周圍的肌腔、初帶、腫銷W及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響 關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)崎形而出現(xiàn)功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系 統(tǒng)性疾病。
[0004] 目前治療RA的藥物分為兩大類:控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明，故當(dāng) 今并無堪稱控制疾病的藥?？刂瓢Y狀的抗風(fēng)濕藥分為四類:一、非醬體類抗炎藥，通常稱為 一線藥，運(yùn)類藥物種類繁多，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)已多達(dá)數(shù)十種。二、類固醇激素，激素是一個(gè)非常好的 止痛抗炎藥，但長(zhǎng)期單獨(dú)使用不能改善病情，反而帶來許多副作用，激素作為二線慢作用藥 起效前的過渡性用是可W的，但用量要小，時(shí)間不宜過長(zhǎng)。在病情較重，伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的 患者，短期治療沖擊，并聯(lián)合二線藥治療時(shí)必須的。Ξ、慢作用抗風(fēng)濕藥，通常稱為二線藥， 所謂慢作用藥包括抗追藥、金鹽、青霉胺和柳氮艦胺化晚，它們治療RA起效慢，長(zhǎng)期作用對(duì) RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制劑:常用有甲氨噪嶺、環(huán)憐酷胺、 硫挫嚷嶺、雷公藤、青風(fēng)藤等。
[0005] 核因子-KB是一種廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子，與關(guān)節(jié)炎中炎癥的發(fā)生，軟骨 損傷，細(xì)胞遷移W及血管繫的形成都有重要的關(guān)系。W核因子-KB為作用祀點(diǎn)，可能成為治 療關(guān)節(jié)炎等疾病的新途徑。非醬體類抗炎藥，糖皮質(zhì)激素、糖胺聚糖W及新型蛋白酶體抑制 劑等發(fā)現(xiàn)都可抑制核因子-KB的激活。另外，核因子-KB誘騙性寡脫氧核巧酸和siRNA干擾治 療也取得了可喜的成就。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的核因子一KB多膚抑制劑問世，用于治 療RA。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有核因子-KB括抗劑的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種分子量小的核因子-KB 多膚括抗劑，可w避免產(chǎn)生抗原反應(yīng)，更加適用于臨床的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種核因子一KB多膚抑制劑1，其序列為KPARGDGFPAAM，及 在治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[000引有益結(jié)果：
[0009] 本發(fā)明中的核因子一ΚΒ多膚抑制劑1序列KPARGDGFPAAM，可W祀向抑制核因子一 ΚΒ，抑制核因子一ΚΒ受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效 果。
[0010] 發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)獲知核因子一ΚΒ多膚抑制劑能夠抑制膠原型大鼠類風(fēng)濕關(guān) 節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治療類風(fēng)濕型 關(guān)節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量少成本降低。說明本發(fā)明設(shè)計(jì)的核因子一ΚΒ多膚抑制劑 1科學(xué)、合理、可行有效，能作為治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 本發(fā)明多膚由上海吉爾合成。
[001^ 實(shí)施例1
[0013] 多膚在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0014] 構(gòu)建膠原型小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究多膚對(duì)小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritiS，CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動(dòng)物，SPF級(jí)DBA/1小鼠90只（由上 海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（Sino-化itish SIPPR Lab.Animal Ltd)提供，動(dòng)物生產(chǎn) 許可證號(hào)碼:SCXK(滬）2008-0016),雄性，7-8周齡，體重為18-22g，隨機(jī)分成9組，分別是正 常對(duì)照組，模型對(duì)照組，多膚低中高3個(gè)劑量組(0.2,0.4,0.8mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì)照組（甲氨 蝶嶺Img/kg)。除正常組外，第0天各實(shí)驗(yàn)組建立小鼠 CIA模型，方法是雞軟骨Π 型膠原kn) 用0. lmol/1醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4°C冰箱過夜。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天用Π 型膠原與含4mg/ml Myeobaeterium tuberculosis shain H37Rv的完全弗氏膠原（CFA)等體積充分乳化，待 DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內(nèi)每只注射乳化劑50μ1進(jìn)行致敏，21d后用4mg/ml的Π 型膠 原（cn)與不完全弗氏膠原（IFA)等體積充分乳化后W相同劑量的乳化劑于尾部進(jìn)行再次 免疫。造模第30d起皮下注射給藥:多膚3個(gè)劑量組(0.2，0.4，0.8mg/kg):每日兩次，連續(xù)10 天；陽(yáng)性藥對(duì)照組（甲氨蝶嶺Img/kg):每五天一次，連續(xù)3次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組(生 理鹽水）：連續(xù)10天。分別于造模后第21天至第70天每3天稱量體重、關(guān)節(jié)評(píng)分、分別檢測(cè)左 右后足足踩直徑來觀察藥物對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎的影響。在第70d，脫白處死小鼠。
[0015] 關(guān)節(jié)炎評(píng)價(jià)指標(biāo)如下：
[00W 1)關(guān)節(jié)評(píng)分
[0017]四肢:按0-4五級(jí)評(píng)分:0 =無紅斑或紅腫；1 =輕微的紅斑或腫脹，其中的一個(gè)前/ 后趾關(guān)節(jié)有紅斑或腫脹;2 =多于一只趾出現(xiàn)紅斑或腫脹；3 =踩或腕關(guān)節(jié)下的足爪腫脹;4 =包括踩關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。小鼠四只足分別評(píng)分，最高評(píng)分為16分。
[0018]分別于造模后第21天至第70天每3天進(jìn)行關(guān)節(jié)評(píng)分，并記錄結(jié)果。
[0019] 2)現(xiàn)慢足踩直徑
[0020]分別于造模前和造模后第21天至第70天每3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠左、右足踩內(nèi) 側(cè)到外側(cè)的直徑和足踩厚度，并記錄結(jié)果。
[0021] 試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)量資料w數(shù)學(xué)平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(mean + SD)表示，用SPSSll .0軟件 進(jìn)行各給藥組與對(duì)照組之間進(jìn)行t檢驗(yàn)，表中*表示p<0.05，**表示p<0.01。
[0022] 結(jié)果:造模后小鼠與正常小鼠相比較，在小鼠尾部皮內(nèi)注射含滅活的結(jié)核分枝桿 菌完全弗氏膠原和膠原等體積混合的乳化劑，21天后尾部皮內(nèi)注射不完全弗氏膠原和膠原 等體積混合的乳化劑左后，免疫后第27天，CIA小鼠足爪紅腫，關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分增高，模型組 第45-60天為腫脹高峰，模型組自第35天開始體重幾乎不增加，后期還略微有下降。多膚在 膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用見表1。由表可知，多膚在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān) 節(jié)炎動(dòng)物模型都能發(fā)揮體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體結(jié)果如下：
[0023] 多膚對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎足爪腫脹度的影響，陽(yáng)性對(duì)照組、多膚高、中、低劑量組 足爪腫脹度與模型組比較，均有極顯著性差異(P<〇.01)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多膚對(duì) 小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹度的影響，陽(yáng)性對(duì)照組、多膚高、中、低劑量組關(guān)節(jié)腫脹度與模 型組比較，均有極顯著性差異(P<〇.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多膚對(duì)膠原型關(guān)節(jié)炎小 鼠臨床評(píng)分的影響，多膚低、中、高劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組(P<〇.01)，與模型 對(duì)照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0024] 表1多膚對(duì)膠原型類小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0027] *表示pi<0.05，**表示pKO.Ol.[0028] 結(jié)論:多膚對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
[0025]
[0026]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 核因子一 KB多肽抑制劑，其特征在于其序列為KPARGDGFPAAM。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核因子一!cB多肽抑制劑在制備治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥 物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制核因子－κB，能預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為KPARGDGFPAAM是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【IPC分類】C07K7/08, A61K38/10, A61P19/02
【公開號(hào)】CN105585616
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610069330
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請(qǐng)人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2016年2月1日