一種腸黏膜TGF-β誘生劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種腸黏膜TGF-β誘生劑。其組成為：白頭翁提取物1～5重量份、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物5～10重量份；或者白頭翁提取物1～5重量份、沸石氧化鋅復(fù)合物5～10重量份。與飼料中單獨添加白頭翁提取物或蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物相比，本發(fā)明的腸黏膜TGF-β誘生劑顯著提高腸黏膜修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)。白頭翁提取物和蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物在提高腸黏膜損傷修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)上存在顯著交互作用，兩者有正的協(xié)同組合效應(yīng)。本發(fā)明的腸黏膜TGF-β誘生劑通過各成分的協(xié)同效應(yīng)，大大增強了誘生效果，能大大提高腸黏膜修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)。
【專利說明】—種腸黏膜TGF-β誘生劑【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及誘生劑，尤其涉及一種腸黏膜TGF-β誘生劑。
【背景技術(shù)】
[0002]幼齡動物，如仔豬和犢牛，腸黏膜發(fā)育不完全，由于大量應(yīng)激因素(出生、生存環(huán)境、斷奶、日糧變化、疾病等)的存在，腸黏膜極易受到損傷，研究腸黏膜的生長調(diào)節(jié)與修復(fù)，是幼齡動物營養(yǎng)的重要研究內(nèi)容。近年來，人們在臨床和動物試驗上對腸道黏膜營養(yǎng)與修復(fù)進(jìn)行了廣泛研究，但尚未取得突破性進(jìn)展。在畜牧生產(chǎn)上，因斷奶應(yīng)激等造成的仔豬、犢牛等胃腸道黏膜損傷，目前仍然是困擾和影響動物高效生產(chǎn)的難題之一。
[0003]腸道不僅是營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的重要場所，而且是營養(yǎng)物質(zhì)代謝的重要器官。消化道黏膜上皮細(xì)胞構(gòu)成了一道防御腔內(nèi)有害物質(zhì)的巨大屏障，其生物作用的基礎(chǔ)之一就是粘膜層的完整性與上皮細(xì)胞的不斷更新。消化道粘膜自身存在著完善的再生及修復(fù)機制，幾乎每48-72小時消化道粘膜上皮就更新一次。生理情況下作為全身分化最快的組織，消化道粘膜上皮細(xì)胞始終處于產(chǎn)生、遷移、脫落的平衡狀態(tài)。如果受到細(xì)菌、病毒及寄生蟲等的感染，或攝入有害物質(zhì)的侵害，其粘膜完整性受到損傷，以細(xì)胞分化和遷移相聯(lián)合的修復(fù)機制馬上開始運轉(zhuǎn)。其中主要是通過受傷粘膜鄰近區(qū)域或粘膜下具有活力的上皮細(xì)胞遷移所致，部分則是依靠上皮細(xì)胞的分化和增殖來完成。這一修復(fù)過程受多種因素調(diào)節(jié)，其中粘膜自分泌和旁分泌的多種生物因子對于粘膜上皮細(xì)胞的分化、增殖及遷移十分重要。
[0004]轉(zhuǎn)化生長因子β (TGFii)屬于調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的TGFii超家族，體內(nèi)多種細(xì)胞均可產(chǎn)生。TGF-β對腸上皮細(xì)胞的增殖分化和腸黏膜損傷修復(fù)有著重要作用，目前在哺乳動物至少發(fā)現(xiàn)有TGFeiJGe2JGFi^TGFe eie2四個亞型。外源性TGFii能明顯促進(jìn)腸粘膜損傷模型中損傷區(qū)域邊緣粘膜細(xì)胞的移行，應(yīng)用TGFi3 i的單克隆抗體可以阻斷這一效應(yīng)。YanakaA等將豚鼠胃粘膜體外置于1.25molL/NaCI溶液中10分鐘，造成胃粘膜損傷模型，觀察粘膜修復(fù)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用TGFii抗體后，修復(fù)過程延退；應(yīng)用重組人TGFii后，粘膜則可以復(fù)原。TGF-βΙ可促進(jìn)受損腸黏膜中上皮細(xì)胞遷移和膠原合成，提高細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積，促進(jìn)腸黏膜重建。新生小鼠口服TGF-β I或富含TGF-β的牛奶乳清提取物，顯著抑制了口服抗原應(yīng)激造成的免疫反應(yīng)。TGF-β可阻止TNF-a、IFN-Y等細(xì)胞因子、隱孢子蟲(C parvum)等對腸上皮細(xì)胞緊密連接的損傷,保護(hù)腸黏膜屏障功能。Howe et al.(2005)以人T84結(jié)腸上皮細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)TGF-β I阻止了 enterohemorrhagic E.co7i感染細(xì)胞引起的緊密連接通透性增加，提高了緊密連接蛋白表達(dá)。
[0005]目前，雖已有通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)的TGF-β產(chǎn)品，但成本很高，應(yīng)用口服TGF-β來修復(fù)腸黏膜不切合生產(chǎn)應(yīng)用實際。開發(fā)腸黏膜TGF-β誘生劑，通過營養(yǎng)調(diào)節(jié)的方式，來促進(jìn)腸黏膜損傷修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)，具有現(xiàn)實的應(yīng)用價值和廣闊的市場前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種腸黏膜TGF-β誘生劑。[0007]—種腸黏膜TGF- β誘生劑組成為:白頭翁提取物I~5重量份、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。所述的蒙脫石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。
[0008]另一種腸黏膜TGF- β誘生劑組成為:白頭翁提取物I~5重量份、沸石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。所述的沸石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。
[0009]本發(fā)明通過將白頭翁提取物和蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物進(jìn)行復(fù)配來獲得具有顯著誘生效果的腸黏膜TGF-β誘生劑。與飼料中單獨添加白頭翁提取物或蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物相比，本發(fā)明的腸黏膜TGF-β誘生劑顯著提高腸黏膜修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)。復(fù)方中的蒙脫石或者沸石對白頭翁提取物有控釋作用。白頭翁提取物和蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物在提高腸黏膜損傷修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)上存在顯著交互作用，白頭翁提取物和蒙脫石/沸石氧化鋅復(fù)合物有正的協(xié)同組合效應(yīng)。本發(fā)明的腸黏膜TGF-β誘生劑通過各成分的協(xié)同效應(yīng)，大大增強了誘生效果，能大大提高腸黏膜修復(fù)過程中TGF-β表達(dá)。
[0010]
【具體實施方式】
[0011]一種腸黏膜TGF-β誘生劑組成為:白頭翁提取物I~5重量份、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。
[0012]另一種腸黏膜TGF-β誘生劑組成為:白頭翁提取物I~5重量份、沸石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。
[0013]所述的白頭翁提取物為毛茛科植物白頭翁Pulsatilla chinensis (Bge.) Regel根的提取粉。白頭翁提取物可市場采購，如西安海佳生物科技有限公司，西安金綠生物工程技術(shù)有限公司，鄭州伊尹植物提取物科技有限公司等。
[0014]所述的蒙脫石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。所述的沸石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。
[0015]本發(fā)明結(jié)合以下實例作進(jìn)一步的說明。
[0016]實施例1
予頁備:根據(jù)文獻(xiàn) “ZnO/montmorillonite for photocatalytic and photochemicaldegradation of methylene blue”(見:Fatimah, I, Wang, SB, ffulandari, D.App1.Clay Sc1.2011，53，553-560.)的方法制備蒙脫石氧化鋅復(fù)合物。按重量百分比計，蒙脫
石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的含量為30%。
[0017]取白頭翁提取物100公斤、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物500公斤混合后拌勻，即得一種腸黏膜TGF-β誘生劑。在仔豬飼料中的添加量為0.1~0.4%。
[0018]選用128頭平均體重為6 kg的21日齡“杜X長X大”斷奶仔豬，隨機分成4組:對照組；白頭翁提取物組；蒙脫石氧化鋅復(fù)合物組；腸黏膜TGF-β誘生劑組。每組4個重復(fù)，每個重復(fù)8頭仔豬。試驗期為14 d。仔豬自由采食和飲水，從7日齡開始誘食并哺乳至21日齡斷奶，按常規(guī)程序?qū)ψ胸i進(jìn)行免疫和飼養(yǎng)管理。
[0019]與對照組，白頭翁提取物組或蒙脫石氧化鋅復(fù)合物組相比，腸黏膜TGF-β誘生劑組仔豬在斷奶后3天、7天和10天腸黏膜中TGFP P TG β2、TGFP3的表達(dá)顯著提高(/Χ0.05)。白頭翁提取物和蒙脫石氧化鋅復(fù)合物在提高腸黏膜中TGF β P TG β 2、TGF β 3表達(dá)上存在顯著交互作用Ο°〈0.05)。[0020]與對照組相比，腸黏膜TGF-β誘生劑組仔豬斷奶后腹瀉率顯著降低(/Χ0.05)，斷奶后3天、7天和10天腸黏膜中TGFβ I的表達(dá)分別提高了 35%0°〈Ο.05)，94%0°〈Ο.05)和71%0°<0.05)。仔豬28和35日齡絨毛高度分別提高了 18%和14%(Ρ〈0.05)，血漿D -乳酸含量分別降低了 32%和27% Ο°〈0.05)，血漿二胺氧化酶活性分別降低了 25%和21%(/Χ0.05)。結(jié)果提示，斷奶仔豬飼糧中添加腸黏膜TGF-β誘生劑，可顯著提高仔豬斷奶后腸黏膜TGF β表達(dá)，促進(jìn)腸黏膜修復(fù)，從而改善腸黏膜形態(tài)，降低腸黏膜通透性，緩解仔豬斷奶后腹瀉。
[0021]實施例2
予頁備:根據(jù)文獻(xiàn) “Preparation of zinc oxide - montmori I 1nite hybrids，，(見:Khaorapapong, N., N.Khumchoo, M.0gawa.Mater.Lett.2011, 65:657 - 660)的方法制備蒙脫石氧化鋅復(fù)合物。按重量百分比計，蒙脫石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的含量為5%。
[0022]取白頭翁提取物500公斤、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物1000公斤混合后拌勻，即得一種腸黏膜TGF-β誘生劑。
[0023]試驗將400羽21日齡的AA肉雞分為5個處理組，熱中性組(thermoneutralzone)、熱應(yīng)激組、白頭翁提取物組(熱應(yīng)激+白頭翁提取物)、蒙脫石氧化鋅組(熱應(yīng)激+蒙脫石氧化鋅)、腸黏膜TGF- β誘生劑組(熱應(yīng)激+腸黏膜TGF- β誘生劑)，每個處理組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)20羽。熱中性組雞舍溫度為22° C。熱應(yīng)激處理組每天08:00至18:00雞舍溫度為33° C，18:00至次日08:00雞舍溫度為22° C。飼養(yǎng)試驗持續(xù)21 d。
[0024]與熱中性組相比，熱應(yīng)激組肉雞料重比升高，空腸絨毛高度降低，電阻值降低，熒光素標(biāo)記葡聚糖(FD4)通透性升高，表明熱應(yīng)激損傷了腸黏膜，使腸黏膜形態(tài)和腸屏障功能受損。
[0025]在熱應(yīng)激處理中添加腸黏膜TGF-β誘生劑，使肉雞腸黏膜中TGF^、TG32、TGF β 3的表達(dá)顯著提高(7X0.05)。白頭翁提取物和蒙脫石氧化鋅復(fù)合物在提高腸黏膜中TGF β P TG β 2、TGF β 3表達(dá)上存在顯著交互作用Ο°〈0.05)。
[0026]與熱應(yīng)激組相比，添加腸黏膜TGF-β誘生劑組肉雞腸黏膜TGFi3 i表達(dá)提高了65%0°<0.05)，絨毛高度提高了 27%(P〈0.05)，熒光素標(biāo)記葡聚糖(FD4)通透性降低了 20%(7X0.05)。結(jié)果提示，熱應(yīng)激肉雞飼糧中添加腸黏膜TGF-β誘生劑，可顯著提高肉雞腸黏膜TGFii表達(dá)，促進(jìn)腸黏膜修復(fù)，從而改善熱應(yīng)激肉雞的腸黏膜形態(tài)，改善腸上皮屏障功倉泛。
[0027]實施例3
予頁備:根據(jù)文獻(xiàn)“Ultraviolet resistance and antimicrobial properties ofZnO-supported zeolite filled isotactic polypropylene composites，，(見:Jiang, J.,Li, G., Ding, Q., Mai, K.C., Polym.Degrad.Stabi1.2012，97，833-838.)的方法制備沸石氧化鋅復(fù)合物。按重量百分比計，沸石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的含量為20%。
[0028]取白頭翁提取物200公斤、沸石氧化鋅復(fù)合物600公斤混合后拌勻，即得一種腸黏膜TGF-β誘生劑。
[0029]選用96頭平均體重為5.7 kg的21日齡“杜X長X嘉”斷奶仔豬，隨機分成4組:對照組；白頭翁提取物組；沸石氧化鋅復(fù)合物組；腸黏膜TGF-β誘生劑組。每組3個重復(fù)，每個重復(fù)8頭仔豬。試驗期為14 d。[0030]與對照組，白頭翁提取物組或沸石氧化鋅復(fù)合物組相比，腸黏膜TGF-β誘生劑組仔豬腸黏膜中TGF β PTG β 2、TGF β 3的表達(dá)顯著提高Ο°〈0.05)。白頭翁提取物和沸石氧化鋅復(fù)合物在提高腸黏膜中TGFii表達(dá)上存在顯著交互作用(/Χ0.05)。
[0031]與對照組相比，腸黏膜TGF-β誘生劑組仔豬斷奶后腹瀉率顯著降低0°〈0.05)，斷奶后腸黏膜中TGF β i表達(dá)提高了 65% (/X0.05)，絨毛高度提高了 20%(P〈0.05)，熒光素標(biāo)記葡聚糖(FD4)通透性降低了 27% 0°〈0.05)。結(jié)果提示，斷奶仔豬飼糧中添加腸黏膜TGF-β誘生劑，可顯著提高仔豬斷奶后腸黏膜TGF β表達(dá)，促進(jìn)腸黏膜修復(fù)，從而改善腸黏膜形態(tài)，降低腸黏膜通透性 ，緩解仔豬斷奶后腹瀉。
【權(quán)利要求】
1.一種腸黏膜TGF-β誘生劑，其特征在于其組成為:白頭翁提取物1~5重量份、蒙脫石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腸黏膜TGF-β誘生劑，其特征在于，所述的蒙脫石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。
3.一種腸黏膜TGF-β誘生劑，其特征在于其組成為:白頭翁提取物1~5重量份、沸石氧化鋅復(fù)合物5~10重量份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種腸黏膜TGF-β誘生劑，其特征在于，所述的沸石氧化鋅復(fù)合物中氧化鋅的重量百分含量為5~30%。
【文檔編號】A61P1/00GK103784522SQ201410038175
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】胡彩虹, 肖堪, 宋澤和, 柯亞露, 焦樂飛 申請人:浙江大學(xué)