一種抗hbv的藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗HBV的藥物組合物及其應(yīng)用，該組合物由活性成分和輔料制備而成，其特征在于：所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。本發(fā)明具有較強的抗HBV的生物活性，并且不會產(chǎn)生耐藥性，為治療乙肝提供了新的候選藥物。
【專利說明】一種抗HBV的藥物組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種抗病毒藥物，尤其涉及一種抗HBV的藥物組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]乙型病毒性肝炎病毒(HBV)是引起乙型病毒性肝炎罪魁禍首。慢性乙型病毒性肝炎治療的目的是在肝臟發(fā)生明顯損傷之前抑制HBV的復(fù)制。治療的初期目標是抑制病毒復(fù)制，阻止肝臟損傷；治療的遠期目標是清除病毒，阻止疾病向肝硬化以及肝癌的發(fā)展，延長生存期。抗病毒治療還用于防止肝移植后、化療或免疫抑制治療時乙型病毒性肝炎病毒的再復(fù)制。因為目前所有的抗病毒藥物不能有效的清除HBV DNA，所以實現(xiàn)長期清除HBV的目標幾乎不可能實現(xiàn)。慢性乙型病毒性肝炎的治療有兩種方式:免疫調(diào)節(jié)和抑制病毒。肝移植可用于對藥物治療無效的終末期肝病患者。
目前市場上治療乙型病毒性肝炎的方法主要有注射干擾素類藥物、服用阿德福韋酯，恩替卡韋等核苷類似物類藥物以及注射乙型病毒性肝炎疫苗三種方式。但上述三種方式均存在比較大的缺點，長期服用干擾素會造成患者出現(xiàn)流感感樣癥狀、并可能使患者出現(xiàn)消化道癥狀、脫發(fā)等不良反應(yīng)。嚴重者還能抑制骨髓導(dǎo)致白細胞、血小板減少，這樣就會導(dǎo)致患者的凝血功能下降。而服用阿德福韋酯，恩替卡韋等核苷類似物類則會導(dǎo)致乳酸性酸中毒和重度的脂肪性肝腫大，且很多患者服用半年左右就會耐藥，而且還不能隨時停藥，否則可能會導(dǎo)致病情迅速惡化，甚至轉(zhuǎn)化為肝硬化、肝癌。雖然乙型病毒性肝炎疫苗能夠抑制HBV的復(fù)制，其安全性和耐受性都很好，但是還不足以打破乙型病毒性肝炎的免疫耐受狀態(tài)進而清除HBV，仍需輔 以抗乙型病毒性肝炎藥物的治療。
[0003]雷公藤(Tripterygium willfordii Hook, f.)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物,其藥用部位是該植物的根及根莖。雷公藤藥材中最重要的有效且毒性大的成分是雷公藤甲素，而雷公藤乙素(Tripdiolide，又名雷公藤羥內(nèi)酯、雷公藤內(nèi)酯二醇)是有效卻毒性低的二萜內(nèi)酯成分。通過檢索國內(nèi)外文獻，尚沒有發(fā)現(xiàn)雷公藤乙素具有抗乙型病毒性肝炎病毒活性的文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有乙型病毒性肝炎治療藥物毒副作用大，治療過程中易出現(xiàn)耐受性等不足，本發(fā)明通過對天然藥物進行研究，提供一種植物源性的抗HBV的藥物。該治療藥物以雷公藤乙素為活性成分，其用于乙型病毒性肝炎患者治療時，療效確切，毒副作用小，且雷公藤乙素的安全性和耐受性均較好，具有十分廣泛的醫(yī)療應(yīng)用前景。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
一種抗HBV的藥物組合物，由活性成分和輔料制備而成，所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。
[0005]優(yōu)選地，如上所述抗HBV的藥物組合物，其中所述的活性成分由雷公藤乙素組成。[0006]進一步優(yōu)選地，如上所述抗HBV的藥物組合物，其中所述的藥物組合物為口服制劑，所述的口服制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑。
[0007]本發(fā)明通過體外試驗研究證明，雷公藤乙素在體外抗乙型病毒性肝炎病毒(HBV)的效果很顯著。因此，本發(fā)明還提供一種制藥用途，即:雷公藤乙素或/和其衍生物在制備抗HBV的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選的方案為:雷公藤乙素作為唯一活性成分在制備抗HBV的藥物中的應(yīng)用。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的含有雷公藤乙素的藥物組合物具有如下突出的優(yōu)勢:
(1)有較強的抗乙型病毒性肝炎病毒的生物活性，并且不會產(chǎn)生耐藥性；
(2)為治療乙肝提供了新的候選藥物，可以單獨作為防治乙肝的藥物使用，具有非常重要的臨床意義。
【具體實施方式】
[0009]HBV是一種引起急性和慢性壞死炎癥性肝病及肝細胞癌的DNA病毒。HBV具有特異嗜肝性、非細胞損傷與裂解、易發(fā)展為慢性等特征。H印G2.2.15細胞是能夠表達HBV抗原和分泌完整HBV顆粒的肝胚瘤細胞系，也是目前用來研究HBV復(fù)制及篩選抗乙肝藥物最為合適的細胞模型系統(tǒng)。本發(fā)明采用H印G 2.2.15細胞的培養(yǎng)，MTT比色法檢測藥物對細胞的毒性，ELISA檢測上清HBs Ag及HBe Ag，從而證實了雷公藤乙素具有抗HBV的藥效。具體試驗過程如下:
UHepG2.2.15細胞培養(yǎng)
細胞培養(yǎng)液為MEN培養(yǎng)液，每IOOmL含胎牛血清10mL，3% (W/V)的谷氨酰胺溶液lmL，G418 380 μ g/mL，慶大霉素50U/mL ;細胞消化液為0.25% (W/V)的胰酶溶液，用Hanks液配制。
細胞培養(yǎng)方法:將H印G 2.2.15細胞解凍后，接種入25cm2培養(yǎng)瓶，濃度為I X IO5個/mL，待細胞長滿后，加0.25% (W/V)的胰酶溶液37°C消化3-5min。加培養(yǎng)液吹打，I: 3傳代，每天收集上清，連續(xù)2周，冷藏待檢。
2、藥物的細胞毒性試驗
用MTT法測定藥物的細胞毒性，96孔板每孔加濃度為3 X IO5個細胞/mL的H印G 2.2.15細胞100 μ L，37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一天后，換用含藥培養(yǎng)液，每個濃度4孔，將雷公藤乙素用DMEM培養(yǎng)液稀釋成(200 μ g/mL, 100 μ g/mL, 50 μ g/mL, 25 μ g/mL),每3天換同濃度含藥培養(yǎng)液，370C 5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)8天。向每孔細胞中加入5 μ g/mL MTT 10 μ L，每孔中存留有上清100μ L，37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，酶標儀570/630nm波長測定OD值。細胞抑制百分率=[(細胞對照OD值-藥物作用組OD值)/細胞對照OD值]X 100%。按Reed-Muench法計算最大無毒濃度(TCO)。每個濃度雷公藤乙素進行兩批實驗,每批進行3組平行實驗。表1顯示雷公藤乙素對IfepG2.2.15細胞有低毒作用，它的最大無毒劑量是100 μ g/mL。
表1雷公藤乙素對HepG2.2.15細胞的毒性作用
【權(quán)利要求】
1.一種抗HBV的藥物組合物，其特征在于:由活性成分和輔料制備而成，所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗HBV的藥物組合物，其特征在于:所述的活性成分由雷公藤乙素組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述抗HBV的藥物組合物，其特征在于:所述的藥物組合物為口服制劑，所述的口服制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑。
4.雷公藤乙素或/和其衍生物在制備抗HBV的藥物中的應(yīng)用。
5.雷公藤乙素作為唯一活性成分在制備抗HBV的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/20GK103989688SQ201410199848
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年5月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月13日
【發(fā)明者】于法周 申請人:于法周