五味子總多糖在制備用于治療咳嗽的藥物或保健品中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及五味子總多糖在制備治療咳嗽的藥物或保健品中的新用途，具體如在制備治療鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽及消除氣道炎癥的藥物或保健品中的新用途。實(shí)驗(yàn)表明五味子總多糖能顯著減少香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠及檸檬酸煙霧刺激致急性咳嗽豚鼠的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，并能顯著減輕香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠的氣道炎癥，提示五味子總多糖可用于制備鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽及消除氣道炎癥的藥物。
【專利說明】五味子總多糖在制備用于治療咳嗽的藥物或保健品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及五味子總多糖在制備用于治療咳嗽的藥物或保健品的用途，特別是五味子總多糖在制備鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽及消除氣道炎癥的藥物或保健品中的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]咳嗽是內(nèi)科門診最常見的癥狀，見于多種呼吸系統(tǒng)及非呼吸系統(tǒng)疾病。咳嗽本身是一種防御機(jī)制，清除氣道內(nèi)過多的分泌物及防止異物誤吸入氣道。但持續(xù)長時(shí)間的咳嗽卻嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量并造成患者嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)，同時(shí)也顯著增加了個(gè)人及公共醫(yī)療衛(wèi)生支出。
[0003]按照病程來分，咳嗽包括急性咳嗽(〈3周)、亞急性咳嗽(3~8周)和慢性咳嗽(> 8周)。目前咳嗽的治療一般都是采用中樞性鎮(zhèn)咳藥、周圍性鎮(zhèn)咳藥及祛痰藥等進(jìn)行治療，一般都能收到較好的療效。但仍有部分急慢性咳嗽即使采用可待因等中樞性鎮(zhèn)咳藥物，咳嗽仍舊不能得到緩解，以致許多急性咳嗽發(fā)展成為慢性咳嗽，有的慢性咳嗽患者病程甚至達(dá)到幾十年。
[0004]多份國外流行病學(xué)研究顯示慢性咳嗽在普通人群的發(fā)病率約9%~33%，2003年一項(xiàng)英國流行病學(xué)調(diào)查顯示，慢性咳嗽在50~59歲的中年人發(fā)病率達(dá)12%，慢性咳嗽患者約占呼吸專科門診患者的20%。近年隨著大氣環(huán)境污染的逐漸加重(如PM2.5,PMlO等)，慢性咳嗽的患病率還可能繼續(xù)上升。目前的研究認(rèn)為導(dǎo)致慢性咳嗽的主要病因包括:咳嗽變異性哮喘、嗜酸粒細(xì)胞性支氣管炎、胃食管反流性咳嗽、上氣道咳嗽綜合征。對(duì)于上述病因引起的咳嗽，遵循咳嗽指南進(jìn)行相應(yīng)的治療，大部分患者咳嗽可得到明顯緩解。然而，仍有部分慢性咳嗽患者經(jīng)過系列全面的檢查后，未見明顯異常，但咳嗽癥狀持續(xù)存在，既往稱之為慢性特發(fā)性咳嗽(Chronic idiopathic cough, CIC)，其咳嗽癥狀治療不佳，且無針對(duì)性病因治療，是目前慢性咳嗽領(lǐng)域的難點(diǎn)及重點(diǎn)所在。有研究發(fā)現(xiàn)慢性特發(fā)性咳嗽以中年人多見，多以感冒為觸發(fā)因素，此后咳嗽長期存在，通常對(duì)油煙、刺激性氣味、冷空氣、香煙煙霧等異常敏感，有時(shí)甚至大笑或講話可誘發(fā)咳嗽，表現(xiàn)為咳嗽敏感性明顯增高。針對(duì)此種情況，將咳嗽敏感性增高的慢性咳嗽稱之為咳嗽高敏綜合征(Cough hypersensitivitysyndrome, CHS)?？人悦舾行援惓Ｔ龈呤锹钥人愿呙艟C合征患者共有的關(guān)鍵特征。
[0005]目前對(duì)于咳嗽高敏綜合征的患者，暫無合適的治療手段可供選擇，大多靠鎮(zhèn)咳藥物維持治療。但鎮(zhèn)咳藥物，如可待因及右美沙芬等，存在著不同程度的副作用，如便秘、鎮(zhèn)靜、呼吸抑制等，因而限制了其使用，而且部分咳嗽高敏綜合征的患者甚至使用中樞性鎮(zhèn)咳藥物，咳嗽亦不能緩解，嚴(yán)重影響日常生活質(zhì)量。 [0006]五味子味酸、甘，性溫。歸肺、心、腎經(jīng)。肺為嬌臟，惡燥，五味子甘溫而潤，潤肺止咳；久咳致腎不納氣，五味子味酸收斂，助腎納氣，治療肺陰虧虛、腎不納氣所致久咳可謂功效極大。《本草會(huì)編》記 載:“勞嗽，宜用北者；風(fēng)寒在肺，宜用南者”；《藥品化義》記載五味子……能收斂肺氣，主治虛勞久咳”；《本草求原》記載:“五味子，為咳嗽要藥，凡風(fēng)寒咳嗽、傷暑咳嗽、傷燥咳嗽、勞傷咳嗽、腎水虛咳、腎火虛咳、久咳喘促……皆用之”。張仲景明確指出:凡咳者均可加入五味子?！吨腥A人民共和國藥典》載其用于“久咳虛喘，……心悸失眠”。中醫(yī)臨床上五味子廣泛用于咳嗽后期的干咳無痰或久咳不已的肺虛咳嗽病癥。
[0007]五味子的化學(xué)成分主要為揮發(fā)油類、木脂素類、三萜類、有機(jī)酸類及多糖類，其中聯(lián)苯環(huán)辛烯木脂素類和降三萜內(nèi)酯類成分是五味子屬植物的特征性成分。五味子藥理活性廣泛，相關(guān)報(bào)道眾多，尤其是其對(duì)肝臟的保護(hù)作用及寧心安神作用方面，研究較多。
[0008]多糖類成分是五味子藥材中的一類重要成分，含量在10%左右，據(jù)報(bào)道，五味子總多糖具有保肝、提高免疫力、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、降脂減肥、抗氧化等功效。但是，五味子總多糖作為五味子藥材中含量極大的一類成分，一直未見關(guān)于其對(duì)咳嗽是否有緩解功效的文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于提供五味子總多糖的新用途，具體在于提供五味子總多糖在制備治療咳嗽的藥物或保健品中的新用途。
[0010]進(jìn)一步的，本發(fā)明提供五味子總多糖在制備用于治療急性、亞急性或慢性咳嗽的藥物或保健品中的新用途。
[0011]進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供五味子總多糖在制備用于鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽或消除氣道炎癥的藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0012]所述五味子總多糖，是從五味子藥材中提取得到的，用苯酚-硫酸法檢測，其多糖類成分含量以D-葡萄糖計(jì)，為50%~100% (質(zhì)量)。
[0013]所述的五味子可以是五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.(即北五味子)和/或華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.(即南五味子)。
[0014]所述五味子總多糖可制成藥學(xué)上可接受的劑型，所述劑型例如但不限于片劑、硬膠囊、軟膠囊、散劑、酊劑、口服液、糖漿、顆粒劑、丸劑或注射劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以采用本【技術(shù)領(lǐng)域】的常規(guī)制劑工藝將五味子總多糖制成所需的劑型。例如，可采用現(xiàn)有工藝將五味子總多糖制成顆粒劑:取五味子總多糖，與輔料淀粉、蔗糖以及崩解劑混合后，加入用水溶解的粘合劑纖維素衍生物溶液進(jìn)行混合，采用擠出制粒法將藥物制成軟粒，干燥，過篩，篩上物適當(dāng)粉碎后再過篩，直至制成均勻顆粒，將制得的顆粒進(jìn)行分裝，每袋log。
[0015]本發(fā)明的五味子總多糖采用本【技術(shù)領(lǐng)域】現(xiàn)有的常規(guī)方法從五味子藥材中提取得到，具體可以通過石油醚脫脂、水煎煮、乙醇沉淀、脫蛋白、脫色等步驟制成。
[0016]本發(fā)明針對(duì)咳嗽的臨床治療現(xiàn)狀及難點(diǎn)，采用香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠模型及檸檬酸煙霧刺激致急性咳嗽豚鼠模型進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，五味子總多糖能顯著延長香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠及檸檬酸煙霧刺激致急性咳嗽豚鼠的咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)，顯著減少香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞比例，病理切片觀察提示五味子總多糖干預(yù)后豚鼠細(xì)支氣管周炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，管腔內(nèi)滲出減輕，肺泡間隔增寬程度減輕，提示五味子總多糖對(duì)豚鼠的氣道炎癥具有顯著的抑制作用。并且五味子總多糖的作用明顯好于五味子水提取物，且呈一定量效關(guān)系，表現(xiàn)出鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽及消除氣道炎癥方面的應(yīng)用前景。對(duì)于臨床上咳嗽高敏患者，五味子總多糖具有制備成用于治療這些患者的有效藥物的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1，為實(shí)施例一豚鼠肺組織和氣道病理切片代表圖(HEX200)，
[0018]圖2，為五味子總多糖不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)檸檬酸煙霧刺激豚鼠咳嗽次數(shù)的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明并不限于此。
[0020]具體實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:純白Hartly豚鼠，普通級(jí)，雄性，體重300±50g，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(SCXK(粵)2008-0002)。豚鼠飼養(yǎng)在相對(duì)清潔、安靜、恒溫(23±3°C )、恒濕(55±15% )環(huán)境中，日夜周期為12:12小時(shí)/天,分籠飼養(yǎng),5只/籠,可自由獲得食物和水。
[0021 ] 具體實(shí)施例中所用的藥物、試劑、及儀器:
[0022]I)五味子總多糖，其制備過程為:
[0023]將五味子藥材粉碎，粉碎后用石油醚脫脂，然后用8倍量水煎煮3次，所得煎煮液進(jìn)行濃縮，濃縮液用80%乙醇沉淀、過濾、沉淀酶法脫蛋白、活性炭脫色，用80%乙醇反復(fù)洗滌后進(jìn)行干燥，得五味子總多糖，經(jīng)檢測，以D-葡萄糖計(jì)，其多糖含量為89% ； [0024]2)五味子水提取物，其制備過程為:
[0025]五味子藥材粉碎一8倍量水煎煮2h，共煎煮3次一煎煮液濃縮，干燥一五味子水提取物；
[0026]3)0.9%氯化鈉注射液:東莞普濟(jì)藥業(yè)有限公司。戊巴比妥鈉:美國Merck公司?？纱?國藥集團(tuán)工業(yè)股份有限公司?！凹t玫”牌過濾嘴香煙:廣州中煙工業(yè)有限公司。其它常規(guī)試劑:廣州化學(xué)試劑廠。
[0027]4)實(shí)驗(yàn)儀器:PM型單腔非限制型小動(dòng)物體描儀(1.0L):美國Buxco公司；數(shù)碼攝影一體化系統(tǒng):日本Nikon公司；0.6mX 0.6mX Im香煙煙霧染毒箱:本實(shí)驗(yàn)室自制；A1003電子天平:德國Satorius公司；MDF-U53V-80°C低溫冰箱:日本三洋公司；3_18K SIGMA高速冷凍離心機(jī):美國Beckman公司；22G靜脈留置針:蘇州醫(yī)療器械有限公司；AnkeTGL-16B型普通高速離心機(jī):上海安?？茖W(xué)儀器廠；400型臺(tái)式低溫離心機(jī):德國Heraeus公司；XW80A型旋渦振蕩器:上海精密儀器儀表有限公司；DK8A恒溫水浴鍋:上海精宏試驗(yàn)儀器有限公司。
[0028]【具體實(shí)施方式】中所有數(shù)據(jù)用“均值土標(biāo)準(zhǔn)差”表示，各組間比較采用SPSS13.0進(jìn)行單因素方差分析，方差齊用最小顯著差異法(LSD)，方差不齊或非正態(tài)的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)，P < 0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0029]實(shí)施例一:五味子總多糖對(duì)香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高豚鼠的藥理作用
[0030]1.1煙熏方法:豚鼠于實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性安靜飼養(yǎng)一周后，置于自制香煙染毒箱內(nèi)，每次點(diǎn)燃10根香煙于煙熏槽內(nèi)(烤煙型，焦油含量12mg，煙氣煙堿含量1.lmg，煙氣一氧化碳含量15mg)，通過三通閥將香煙煙霧打入染毒箱內(nèi)，自香煙燃完開始計(jì)時(shí)。每次熏煙20分鐘，每天熏煙2次，每二次熏煙間隔時(shí)間大于6小時(shí)，連續(xù)熏煙14天。
[0031]1.2 實(shí)驗(yàn):[0032]豚鼠完全隨機(jī)分成正常組、模型組、溶劑對(duì)照組(0.5(%的PEG400)、可待因組、水提取物高劑量組(劑量500mg/kg豚鼠/天，藥物濃度50mg/mL)、總多糖高劑量組(劑量500mg/kg豚鼠/天，藥物濃度50mg/mL)、總多糖中劑量組(劑量250mg/kg豚鼠/天,藥物濃度25mg/mL)、總多糖低劑量組(劑量125mg/kg豚鼠/天,藥物濃度12.5mg/mL)。
[0033]除正常組外，其余各組動(dòng)物均采用上述1.1中的煙熏方法刺激。除正常組及可待因組外，其余各組豚鼠從煙熏第一天開始，于每天的第二次煙熏前2小時(shí)經(jīng)口給予相應(yīng)的藥物或溶劑，連續(xù)14天?？纱蚪M于檸檬酸咳嗽敏感性檢查前I小時(shí)，經(jīng)口給藥(30mg/kg豚鼠，可待因濃度3mg/mL)。正常組正常飼養(yǎng)，不作任何處理。第15天將豚鼠置于體描箱內(nèi)，適應(yīng)2min后，霧化0.4mol/L檸檬酸水溶液進(jìn)行咳嗽激發(fā)，IOmin后霧化結(jié)束，繼續(xù)觀察lOmin，記錄自霧化開始的20min內(nèi)豚鼠咳嗽次數(shù)及咳嗽潛伏期。
[0034]咳嗽激發(fā)實(shí)驗(yàn)24h后，3%戊巴比妥鈉溶液(lmL/kg)腹腔注射麻醉動(dòng)物，心臟取血10mL。取6mL0.lmol/L預(yù)冷的PBS緩沖液，分3次進(jìn)行肺泡灌洗，統(tǒng)一灌洗左肺，每次反復(fù)灌洗3次,得肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)。將所得BALF震蕩混懸，抽取0.5mL，用紅細(xì)胞裂解液充分裂解，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取10 μ L上清液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算BALF炎癥細(xì)胞總數(shù)(細(xì)胞總數(shù)/mL=(四大格細(xì)胞總數(shù)/4) X IO 4/mL);抽取0.5mL后剩余的BALF于3000rpm離心10min,沉淀用ImLPBS混懸，取IOOyL制作細(xì)胞涂片，自然風(fēng)干，浸泡于10%中性甲醛中過夜固定，取出后依次進(jìn)行流水沖洗lOmin、蘇木素染色15sec、流水沖洗lmin、I %鹽酸酒精脫色2sec、流水沖洗lOmin、伊紅染色5sec、流水沖洗lOmin、烘干，得中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下連續(xù)隨機(jī)抽取20個(gè)400倍視野進(jìn)行連續(xù)計(jì)數(shù)，每張涂片連續(xù)計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，計(jì)算其中中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的比例。
[0035]豚鼠抽取BALF后，從心臟注入50mLPBS進(jìn)行灌洗，從氣管注入2.5mL4%多聚甲醛，然后剪取一塊右下肺組織及 一段氣管，10%中性甲醛固定24h以上。取出已固定好的肺組織，依次進(jìn)行乙醇梯度脫水、生物透明劑處理、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、梯度酒精水化、雙蒸水短暫漂洗，最后進(jìn)行HE染色后，中性樹膠封片，進(jìn)行病理觀察。
[0036]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與正常組比較，各實(shí)驗(yàn)組豚鼠氣道阻力未見明顯差異，提示本實(shí)驗(yàn)建模方法未造成豚鼠氣道阻力增加，有別于慢性阻塞性肺疾病動(dòng)物模型。
[0037]各實(shí)驗(yàn)組豚鼠檸檬酸激發(fā)咳嗽次數(shù)見表1。結(jié)果表明，與模型組比較，總多糖(高、中劑量組)均顯示出顯著減少咳嗽次數(shù)的活性，而低劑量對(duì)咳嗽次數(shù)的抑制雖未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有減少的趨勢，表現(xiàn)出一定的劑量相關(guān)性；與模型組比較，水提取物高劑量組豚鼠咳嗽次數(shù)無顯著差異。
[0038]表1各實(shí)驗(yàn)組對(duì)香煙煙霧刺激致咳嗽敏感性增高模型豚鼠的咳嗽次數(shù)影響(.7±λ.) (η = 7 ~10)
【權(quán)利要求】
1.五味子總多糖在制備用于治療咳嗽的藥物或保健品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物或保健品為用于治療急性、亞急性或慢性咳嗽的藥物或保健品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物或保健品為用于鎮(zhèn)咳、緩解咳嗽或消除氣道炎癥的藥物或保健品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的五味子總多糖提取自五味子，所述五味子為五味子Schisandra chinensis (Turcz.)Baill.、華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，以D-葡萄糖計(jì)，所述的五味子總多糖其中的多糖含量為50~100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述五味子總多糖制成藥學(xué)上可接受的劑型。
7.根據(jù)權(quán) 利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述劑型為片劑、硬膠囊、軟膠囊、散劑、酊劑、口服液、糖漿、顆粒劑、丸劑或注射劑。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK103977019SQ201410209951
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月16日
【發(fā)明者】賴克方, 鐘山, 甘振勇, 劉曉東, 聶怡初, 鐘南山 申請人:廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院, 廣州呼吸疾病研究所, 呼吸疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室