葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑及其制備方法，每個膠束含有質量分數(shù)0.01-30％的姜黃素或多西紫杉醇，70-99.99％的H40-聚(丙交酯-乙交酯)-MPEG/PEG-FA；H40-聚(丙交酯-乙交酯)-MPEG/PEG-FA為多聚枝脂肪酯H40與丙交酯、乙交酯的聚合產(chǎn)物先羧基官能化再與葉酸修飾的聚乙二醇或葉酸修飾的甲氧基聚乙二醇縮合反應制得。本發(fā)明利用自組裝技術采用生物可降解的H40-聚(丙交酯-乙交酯)-MPEG/PEG-FA為載體，制成葉酸受體靶向的聚合物單分子膠束制劑，以提高抗癌藥的水中溶解度，促進載藥膠束對葉酸受體高表達的腫瘤細胞的靶向性，提高藥物療效，降低藥物的毒副作用。
【專利說明】葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及葉酸受體介導的自組裝單分子膠束，特別涉及葉酸受體介導的自組裝 單分子膠束制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 現(xiàn)階段多數(shù)抗癌藥物在水中溶解度極低，在體內被快速代謝，口服吸收差，因此限 制了其在臨床的應用。
[0003] 專利CN 102274163A公開了一種姜黃素納米膠束制劑及其制備方法。該制劑由姜 黃素與兩親性嵌段共聚物組成，將姜黃素與兩親性嵌段共聚物混合溶解于有機溶劑中，旋 轉蒸發(fā)除去有機溶劑，得到的含藥物薄膜真空干燥過夜除去殘留的有機溶劑后，加入水相， 超聲分散并聯(lián)合35C -38C恒溫振蕩，得到膠束溶液，高速離也后，上清即為姜黃素納米膠 束制劑。本發(fā)明采用改良的薄膜分散法法制備姜黃素納米膠束，提高了姜黃素在水中溶解 度，制劑載藥量可達8%，膠束粒徑在IOOnm W下，其結構穩(wěn)定、粒徑小、低毒、安全性好、體 內循環(huán)時間長、易于保存等。但是其選用的兩親性嵌段共聚物為甲氧基聚己二醇-聚乳酸 兩嵌段共聚物，其形成的膠束易受體內血液的稀釋，濃度會降到臨界膠束濃度W下，W至于 膠束被破壞。
【發(fā)明內容】
[0004] 本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術的不足，提供一種葉酸受體介導的自組裝單 分子膠束制劑及其制備方法。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術方案：
[0006] 葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑，每個膠束含有質量分數(shù)0. 01-30 %的姜 黃素或多西紫杉醇，70-99. 99%的H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA。
[0007] 所述膠束的粒徑在20-200皿之間。其中H40為多聚枝脂肪醋（Bollom⑩H40,瑞 典柏斯巧精細化學品有限公司），聚（丙交醋-己交醋）分子量為500-10000。H40-聚（丙 交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA為多聚枝脂肪醋H40與丙交醋、己交醋的聚合產(chǎn)物先駿基官 能化再與葉酸修飾的聚己二醇或葉酸修飾的甲氧基聚己二醇縮合反應制得。
[0008] -種上述葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，步驟為：
[0009] 將藥物姜黃素或多西紫杉醇與H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA溶于有 機溶劑中，攬拌，然后滴加到水中，攬拌、旋蒸除去有機溶劑形成膠束。所述的有機溶劑可用 丙麗，丙麗的用量為丙麗的體積（mL)與藥物的質量（mg)比為0.5-100:1。
[0010] 另一種葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，步驟為：將藥物姜黃 素或多西紫杉醇與H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA溶于有機溶劑中，攬拌后放入 透析袋中，用水透析除去有機溶劑，凍干，用水攬拌復溶，得膠束制劑。所述的有機溶劑可用 丙麗，丙麗的用量為丙麗的體積（mL)與藥物的質量（mg)比為0.5-100:1。
[0011] 上述的H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA的制備方法為：
[0012] (I)將丙交醋、己交醋、H40及適量催化劑辛化亞錫，于高溫120-14(TC、N2保護下， 攬拌反應22-2化，得H40-聚（丙交醋-己交醋）-OH ;
[001引 似將所得的H40-聚（丙交醋-己交醋）-0H、玻巧酸酢及DMAP于溶劑中，室溫攬 拌22-2化，即得H40-聚（丙交醋-己交醋）-COOH ;
[0014] 0)葉酸、DCC饑N' -二環(huán)己基碳二亞胺）與N服(N-輕基玻巧醜亞胺）加入到 DMSO(二甲基亞諷）中，于室溫下避光攬拌1她，即葉酸活性醋溶液；
[0015] (4) PEG與葉酸活性醋在溶劑DMSO中，通過形成醜胺鍵結合成陽G-FA ;
[0016] (5)將一定比例的冊-PEG-FA或MPEG-OH與H40-聚（丙交醋-己交醋）-COOH 在催化劑DCC作用下，于二氯甲焼中，室溫避光反應22-2化，得到H40-聚（丙交醋-己交 醋）-MPEG/PEG-FA。
[0017] 上述步驟（1)所述的原料重量份比為丙交醋50-99份、己交醋50-99份、H40為 1-10份，催化劑辛化亞錫質量為丙交醋、己交醋總重的0. 01-0. 05%。
[001引步驟（2)中H40-聚（丙交醋-己交醋）-0H、玻巧酸酢及DMAP的摩爾比例為 0.2-0. 4 :0.8-1. 2 :0.8-1. 2。溶劑為四氨巧喃，用量為四氨巧喃的體積（mL)與H40-聚（丙 交醋-己交醋）-OH的質量（mg)比為2-4 :15-25。
[001引步驟（3)葉酸、DCC與N服的摩爾比為1:1-2:1-2。DMSO的用量為DMSO的體積 (血）與葉酸的質量（g)比為35-50 ;1。
[0020] 步驟（4)陽G、葉酸活性醋摩爾比為1 ;1-2。DMSO的體積與陽G的質量比為1-2 ; 40 (ml/mg)。
[0021] 步驟巧)冊-PEG-FA/M陽G-0H、H40-聚（丙交醋-己交醋）-COOH及催化劑的摩爾 比為15-25 ;1 ;15-25。二氯甲焼的用量為二氯甲焼的體積（mL)與H40-聚（丙交醋-己交 醋）-COOH的質量（g)比為3-5:1-2。
[0022] 其中H40為多聚枝脂肪醋；聚（丙交醋-己交醋）分子量為500-10000, MPEG或 PEG是分子量為400-5000的聚己二醇；FA為葉酸祀向分子。
[0023] 本發(fā)明利用自組裝技術采用生物可降解的H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/ PEG-FA為載體，制成葉酸受體祀向的聚合物單分子膠束制劑，W提高抗癌藥的水中溶解度， 促進載藥膠束對葉酸受體高表達的腫瘤細胞的祀向性，提高藥物療效，降低藥物的毒副作 用。
[0024] 本發(fā)明的有益效果是，采用自組裝可降解高分子材料H40-聚（丙交醋-己交 醋）-MPEG/PEG-FA為載體材料，增加了藥物的水中溶解度。同時，制劑在體外可持續(xù)釋放1 天、3天或6天左右，達到了緩釋的目的，減少了用藥次數(shù)，提高了生物利用度。同時，解決了 現(xiàn)有普通膠束在體內易分解的問題，增加了制劑的體內穩(wěn)定性，降低了制劑的全身毒副作 用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[00幼圖1自組裝材料H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA合成路線圖。
[0026] 圖2 (a)為自組裝材料H40-聚（丙交醋-己交醋）的核磁（雨1時圖譜。
[0027] 圖2化）為自組裝材料H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA的核磁（Hnmr)圖 譜。
[0028] 圖3為葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的粒徑分布圖。
[0029] 圖4A為葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的外觀圖；B為自制姜黃素十二焼 基賴酸軸混息液的外觀照片。
[0030] 圖5為姜黃素單分子膠束制劑的體外釋放曲線。
【具體實施方式】
[0031] 下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應該說明的是，下述說明僅 是為了解釋本發(fā)明，并不對其內容進行限定。
[0032] 實施例1
[0033] 自組裝材料H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/PEG-FA合成：
[0034] 1、H40-聚（己交醋-D, k丙交醋）的合成
[003引于25ml的圓底燒瓶中，加入SOOmg的H40,丙交醋、己交醋（丙交醋、己交醋投料 質量比為65/35)，共含30mmol的駿基），W及適量催化劑辛酸亞錫溶液（用量為H40質 量的1% )，混合均勻，旋蒸除去有機溶齊U。在12(TC、馬保護、轉速為50化pm條件下，反應 2化。用二氯甲焼溶解所得產(chǎn)物，除去不溶物，W甲醇重結晶，真空干燥，得H40-聚（己交 醋-D, k丙交醋）。
[0036] 2、H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-COOH的合成
[0037] 將所得產(chǎn)物H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）1. 5g，玻巧酸酢47mg，及57mg DMAP 加入到含55mg H己胺和IOml四氨巧喃的50ml圓底燒瓶中，室溫攬拌2化即得。
[0038] 3、冊-PEG-FA 的合成 [003引葉酸活性醋的合成
[0040] 將8ml二甲基亞諷與625 U 1 H己胺混合均勻，避光攬拌過夜（1化）。將200mg FA、 94mg DCC和52mg N服加入到上述混合溶液中，于室溫下避光攬拌1她，經(jīng)0. 22um的微孔濾 膜，得澄清液，即葉酸活性醋溶液。
[0041] 冊-PEG-FA 的合成
[004引 將所得葉酸活性醋溶液486 U l、42mg冊-PEG-NH2、1. 5ml二甲基亞諷及Iml H己 胺，置于IOml安流瓶中，室溫反應16h。將所得溶液于透析袋（截留分子量為1，000)中用 水透析2d,貿(mào)也除去不溶物，凍干，即得冊-PEG-FA。
[004引 4、H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-PEG-FA材料的合成
[0044] 將所得H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-C00H溶液IOml與62mg DCC、37mg DMAP，溶 于6ml無水二氯甲焼中，得混合溶液。取570mg mPEG和52mg冊-PEG-FA,溶于3ml無水二氯 甲焼中，混合均勻，將其逐滴滴加到上述混合溶液中，室溫避光攬拌2化。離也，取上清，旋蒸 除去有機溶劑。二甲基亞諷復溶，除去不溶物，于透析袋（截留分子量為8, 000-14, 000)中 用二甲基亞諷透析2d后，換水透析2d，凍干，即得H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-PEG-FA
[0045] 實施例2 :
[0046] 溶劑揮發(fā)法制備葉酸受體介導的自組裝單分子膠束
[0047] 將2mg姜黃素或多西紫杉醇與上述自組裝的H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/ PEG-FA約IOmg溶于2ml丙麗中，攬拌化后，滴加入2ml水中，攬拌2化，除去有機溶劑溶劑 形成膠束。
[004引 實施例3 :
[0049] 透析法制備葉酸受體介導的自組裝單分子膠束
[0050] 將2mg姜黃素或多西紫杉醇與IOmg自組裝的H40-聚（丙交醋-己交醋）-MPEG/ PEG-FA溶于5ml二甲基甲醜胺中，攬拌化后，放入透析袋中，用水透析除去有機溶劑，凍干， 復溶，得膠束制劑。
[00川效果測試
[00閲 1、H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-PEG-FA的核磁共振譜圖表征
[0053] 使用C"二甲基亞諷（DMS0-d6)或気代二甲基亞諷（DMS0-d6)為溶劑，完全溶 解待測樣品H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）或H40-聚（己交醋-D，k丙交醋）-MPEG/ PEG-FA5-10mg，加入核磁管內約4cm的高度，300MHz核磁共振波譜儀炬ruker)進行掃描，其 結果如圖2所示。
[0054] 2、單分子膠束粒徑是通過W下實驗測定的：
[0055] 用貝克曼粒徑測定儀測微球的粒徑大小及其分布，觀察其粒徑分布情況。
[005引 （1)實驗樣品
[0057] 根據(jù)本發(fā)明實施例2-3方法制備的膠束。
[00則 似實驗儀器
[0059] 貝克曼粒徑測定儀。.
[0060] 做實驗方法
[0061] 取樣品適量，稀釋到適合的濃度，用貝克曼粒徑測定儀測膠束的粒徑大小及其分 布，觀察其粒徑分布情況，結果如圖3所示。
[0062] 3、膠束的體外釋放曲線的測定：
[006引 （1)實驗樣品
[0064] 根據(jù)本發(fā)明實施例2-3方法制備的膠束。
[00財 似實驗試劑
[0066] 含0. 1 %吐溫80的生理鹽水。
[0067] (3)實驗儀器
[006引恒溫振蕩儀、離也機、高相液相色譜儀。
[0069] (4)實驗條件
[0070] 溫度；37°C，轉速；100巧m。
[00川 妨實驗方法
[0072] 取含藥膠束Iml置10血離也管中，加入適量含0. 1 %吐溫80的生理鹽水，置于恒 溫水浴搖床中，在37C、IOOrpm振蕩速度下進行膠束的體外釋放度測定，圖5是實施例2所 得姜黃素單分子膠束制劑的體外釋放曲線。
[0073] 4、溶血性考察
[0074] 取新鮮Wista大鼠血漿，加入肝素抗凝，于1，O(K)巧m離也IOmin收集紅細胞，棄去 上清并用生理鹽水洗涂沉淀的紅細胞，至上清不顯紅色為止，并用生理鹽水配置成2% (V/ V)的紅細胞混息液（4C保存，并限當日使用）。
[00巧]取2. 5mL的紅細胞息液，加入2. 5mL不同自組裝材料濃度梯度的空白單分子膠束 巧驚U，所得混合物37C恒溫振蕩水浴中賠育比后，4, 000巧m離也lOmin，取上清液在541皿 處測定吸光度值。另取2. 5血紅細胞息液，加入同樣體積的生理鹽水和蒸觸水，分別做為陰 性對照和陽性對照，W下式計算溶血率，其結果見表1。
[0076] 表1紅細胞中血紅素釋放百分比
【權利要求】
1. 葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑，其特征是，每個膠束含有質量分數(shù) 0. 01-30 %的姜黃素或多西紫杉醇，70-99. 99 %的H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/ PEG-FA。
2. 根據(jù)權利要求1所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑，其特征是，H40-聚 (丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA為多聚枝脂肪酯H40與丙交酯、乙交酯的聚合產(chǎn)物先羧基 官能化再與葉酸修飾的聚乙二醇或葉酸修飾的甲氧基聚乙二醇縮合反應制得。
3. 根據(jù)權利要求1所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑，其特征是，所述膠 束的粒徑在20-200nm之間。
4. 一種葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征是，步驟為： 將藥物姜黃素或多西紫杉醇與H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA溶于有機溶 劑中，攪拌，然后滴加到水中，攪拌、旋蒸除去有機溶劑形成膠束； 或者將藥物姜黃素或多西紫杉醇與H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA溶于有機 溶劑中，攪拌后放入透析袋中，用水透析除去有機溶劑，凍干，用水攪拌復溶，得膠束制劑； 姜黃素或多西紫杉醇與H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA的質量比為0.01-30 : 70-99. 9。
5. 根據(jù)權利要求4所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征 是，H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA的制備步驟為 ： (1) 將丙交酯、乙交酯、H40及適量催化劑辛化亞錫，于高溫120-140°C、N2保護下，攪拌 反應22-24h，得H40-聚（丙交酯-乙交酯）-OH ; (2) 將所得的H40-聚（丙交酯-乙交酯）-0H、琥珀酸酐及DMAP于溶劑中，室溫攪拌 22-24h，即得H40-聚（丙交酯-乙交酯）-COOH ; ⑶葉酸、DCC與NHS加入到DMSO中，于室溫下避光攪拌18h，即葉酸活性酯溶液； (4) PEG與葉酸活性酯在溶劑DMSO中，通過形成酰胺鍵結合成PEG-FA ; (5) 將HO-PEG-FA或MPEG-OH與H40-聚（丙交酯-乙交酯）-COOH在催化劑DCC作用 下，于二氯甲烷中，室溫避光反應22-24h，得到H40-聚（丙交酯-乙交酯）-MPEG/PEG-FA。
6. 根據(jù)權利要求5所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征 是，步驟（1)所述的原料重量份比為丙交酯50-99份、乙交酯50-99份、H40為1-10份，催 化劑辛化亞錫質量為丙交酯、乙交酯總重的0. 01-0. 05%。
7. 根據(jù)權利要求5所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征 是，步驟⑵中H40-聚（丙交酯-乙交酯）-0H、琥珀酸酐及DMAP的摩爾比例為0. 2-0.4: 0. 8-1. 2 ：0. 8-1. 2〇
8. 根據(jù)權利要求5所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征 是，步驟⑶葉酸、DCC與NHS的摩爾比為1:1-2:1-2。
9. 根據(jù)權利要求5所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特征 是，步驟⑷PEG、葉酸活性酯摩爾比為1 :1-2。
10. 根據(jù)權利要求5所述的葉酸受體介導的自組裝單分子膠束制劑的制備方法，其特 征是，步驟（5) H0-PEG-FA/MPEG-0H、H40-聚（丙交酯-乙交酯）-COOH及催化劑的摩爾比為 15-25 ：1 ：15-25〇
【文檔編號】A61P35/00GK104224714SQ201410483558
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月19日 優(yōu)先權日:2014年9月19日
【發(fā)明者】翟光喜, 楊春芬, 趙麗艷 申請人:山東大學