一種不對稱囊泡的制備方法
【專利摘要】一種不對稱囊泡的制備方法，它涉及一種囊泡的制備方法。本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有制備不對稱囊泡的方法稀缺的問題。制備方法：使用微流控芯片將油相和水相混合，得到乳液；再將乳液和接收液混合，再使用有機溶劑和液體石蠟的混合溶液進行洗滌，再加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，靜置，再將含有不對稱囊泡的溶液加入到葡萄糖水溶液中，靜置，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存。本發(fā)明制備的不對稱囊泡形貌完整、大小均一，尺寸為100μm～150μm。本發(fā)明可獲得一種不對稱囊泡的制備方法。
【專利說明】一種不對稱囊泡的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種囊泡的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]囊泡(vesicle)是由密閉雙分子層所形成的球形或橢球形單間或多間隔室所組成。由天然磷脂所形成的囊泡稱為脂質(zhì)體(liposome)。由于囊泡與細胞膜的結(jié)構(gòu)非常相似，所以一直作為生物膜模型而得到廣泛的研究。利用這種生物膜可以和細胞膜融合的特點，泡囊在生物膜模擬、藥物的固載和靶向釋放、納米粒子的合成以及作微反應器等方面都有著重要的應用價值。不對稱囊泡是由不同分子層(leaflet)組成的泡囊結(jié)構(gòu)，因其分子層的不對稱性，在生物膜和細胞、以及生物醫(yī)藥領(lǐng)域有重要的理論價值和現(xiàn)實意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有制備不對稱囊泡的方法稀缺的問題，而提供一種不對稱囊泡的制備方法。
[0004]一種不對稱囊泡的制備方法，具體是按以下步驟完成的:
[0005]一、將span80溶解到液體石臘中，得到油相；將濃度為200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作為水相；將油相和水相分別從不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0006]步驟一中所述的span80的質(zhì)量與液體石臘的體積比為0.0lg:1mL ；
[0007]步驟一中所述的水相在微流控芯片中的流速為I μ L/min ；
[0008]步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為I μ L/min?5 μ L/min ；
[0009]二、將乳液與接收液混合，室溫下反應25min?60min，得到混合液體A ;再使用有機溶劑和液體石蠟的混合溶液對混合液體A進行洗滌3次?5次，得到洗滌后的混合液體A ；
[0010]步驟二中所述的乳液的體積與接收液的體積比為1:10 ;
[0011]步驟二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液體石蠟組成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與癸烷的質(zhì)量比為1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與液體石蠟的體積比為1:200 ;
[0012]步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑與液體石蠟的體積比為I: 10 ；
[0013]三、向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h?4h，得到含有不對稱囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液，將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液中，靜置2h?4h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存；
[0014]步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中DOPC磷脂的濃度為10mg/mL ；
[0015]步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL?Img/mL0
[0016]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0017]一、本發(fā)明利用自組裝和微流控技術(shù)制備了不對稱囊泡；利用微流控芯片產(chǎn)生油包水(W/0)的乳液，在接收液中形成聚合物的微膠囊，最后通過DOPC磷脂與微膠囊表面的分子間力完成最后組裝；
[0018]二、本發(fā)明通過對微流控反應條件的改變，可以控制微膠囊的尺寸，進而控制不對稱囊泡的尺寸；
[0019]三、本發(fā)明使用三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷和DOPC磷脂形成不對稱雙分子層的磷脂囊泡；
[0020]四、本發(fā)明利用微流控方法可以控制形成的不對稱囊泡形貌完整、大小均一；
[0021]五、本發(fā)明可以通過控制水相和油相的流速，微流控芯片的尺寸控制不對稱囊泡的尺寸；
[0022]六、本說明制備不對稱囊泡的方法操作簡單，反應時間短，可重復性好，制備的不對稱囊泡可作為藥物載體；
[0023]七、本發(fā)明制備的不對稱囊泡使用的藥品低毒、無害、綠色環(huán)保；制備的不對稱囊泡的形貌、尺寸可控，通過本發(fā)明的方法得到的不對稱囊泡可用于藥物運載和釋放等領(lǐng)域。
[0024]本發(fā)明可獲得一種不對稱囊泡的制備方法。

【具體實施方式】
[0025]【具體實施方式】一:本實施方式是一種不對稱囊泡的制備方法具體是按以下步驟完成的:
[0026]一、將span80溶解到液體石臘中，得到油相；將濃度為200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作為水相；將油相和水相分別從不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0027]步驟一中所述的span80的質(zhì)量與液體石臘的體積比為0.0lg:1mL ；
[0028]步驟一中所述的水相在微流控芯片中的流速為I μ L/min ；
[0029]步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為I μ L/min?5 μ L/min ；
[0030]二、將乳液與接收液混合，室溫下反應25min?60min，得到混合液體A ;再使用有機溶劑和液體石蠟的混合溶液對混合液體A進行洗滌3次?5次，得到洗滌后的混合液體A ；
[0031]步驟二中所述的乳液的體積與接收液的體積比為1:10 ;
[0032]步驟二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液體石蠟組成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與癸烷的質(zhì)量比為1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與液體石蠟的體積比為1:200 ;
[0033]步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑與液體石蠟的體積比為I: 10 ；
[0034]三、向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h?4h，得到含有不對稱囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液，將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液中，靜置2h?4h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存；
[0035]步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中DOPC磷脂的濃度為10mg/mL ；
[0036]步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL?Img/
mLo
[0037]本實施方式制備的不對稱囊泡保存在200mmol/L的葡萄糖水溶液中是因為不對稱囊泡在水環(huán)境中保存的時間長，且因為本實施方式制備的不對稱囊泡內(nèi)部包含200mmol/L的葡萄糖水溶液，其在等滲的葡萄糖溶液中更穩(wěn)定。
[0038]本實施方式的優(yōu)點:
[0039]一、本實施方式利用自組裝和微流控技術(shù)制備了不對稱囊泡；利用微流控芯片產(chǎn)生油包水(W/0)的乳液，在接收液中形成聚合物的微膠囊，最后通過DOPC磷脂與微膠囊表面的分子間力完成最后組裝；
[0040]二、本實施方式通過對微流控反應條件的改變，可以控制微膠囊的尺寸，進而控制不對稱囊泡的尺寸；
[0041]三、本實施方式使用三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷和DOPC磷脂形成不對稱雙分子層的磷脂囊泡；
[0042]四、本實施方式利用微流控方法可以控制形成的不對稱囊泡形貌完整、大小均
[0043]五、本實施方式可以通過控制水相和油相的流速，微流控芯片的尺寸控制不對稱囊泡的尺寸；
[0044]六、本實施方式制備不對稱囊泡的方法操作簡單，反應時間短，可重復性好，制備的不對稱囊泡可作為藥物載體；
[0045]七、本實施方式制備的不對稱囊泡使用的藥品低毒、無害、綠色環(huán)保；制備的不對稱囊泡的形貌、尺寸可控，通過本發(fā)明的方法得到的不對稱囊泡可用于藥物運載和釋放等領(lǐng)域。
[0046]本實施方式可獲得一種不對稱囊泡的制備方法。
[0047]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同點是:步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為I μ L/min?3μ L/min。其他步驟與【具體實施方式】一相同。
[0048]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二之一不同點是:步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為3 μ L/min?5μ L/min。其他步驟與【具體實施方式】一或二相同。
[0049]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同點是:步驟二中將乳液與接收液混合，室溫下反應25min，得到混合液體A。其他步驟與【具體實施方式】一至三相同。
[0050]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同點是:步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑為癸烷或己烷。其他步驟與【具體實施方式】一至四相同。
[0051]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同點是:步驟三中向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h，得到含有不對稱囊泡的溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至五相同。
[0052]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】一至六之一不同點是:步驟三中將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液中，靜置2h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存。其他步驟與【具體實施方式】一至六相同。
[0053]【具體實施方式】八:本實施方式與【具體實施方式】一至七之一不同點是:步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中有機溶劑為癸烷或己烷。其他步驟與【具體實施方式】一至七相同。
[0054]【具體實施方式】九:本實施方式與【具體實施方式】一至八之一不同點是:步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL。其他步驟與【具體實施方式】一至八相同。
[0055]【具體實施方式】十:本實施方式與【具體實施方式】一至九之一不同點是:步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL?0.5mg/mL。其他步驟與【具體實施方式】一至九相同。
[0056]采用以下試驗驗證本發(fā)明的有益效果:
[0057]試驗一:一種不對稱囊泡的制備方法，具體是按以下步驟完成的:
[0058]一、將0.0lg span80溶解到ImL液體石臘中，得到油相；將濃度為200mmol/L的鹿糖水溶液作為水相；將油相和水相分別從不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0059]步驟一中所述的水相在微流控芯片中的流速為I μ L/min ；
[0060]步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為3 μ L/min ；
[0061]二、將乳液與接收液混合，室溫下反應25min，得到混合液體A ;再使用有機溶劑和液體石蠟的混合溶液對混合液體A進行洗滌5次，得到洗滌后的混合液體A ；
[0062]步驟二中所述的乳液的體積與接收液的體積比為1:10 ;
[0063]步驟二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液體石蠟組成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與癸烷的質(zhì)量比為1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與液體石蠟的體積比為1:200 ;
[0064]步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑為癸烷；所述的癸烷和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑與液體石蠟的體積比為1:10 ;
[0065]三、向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h，得到含有不對稱囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液，將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液中，靜置2h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存；
[0066]步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中有機溶劑為癸烷；所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中DOPC磷脂的濃度為10mg/mL ；
[0067]步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL。
[0068]使用熒光顯微鏡儀器對試驗一得到的不對稱囊泡進行測試，如圖1所示；圖1為試驗一得到的不對稱囊泡的明場照片，從圖1可知囊泡形貌完整、大小均一。
[0069]試驗一制備的不對稱囊泡包裹了水相，具有載藥的功能，磷脂層包覆在囊泡表面；試驗一制備的不對稱囊泡具有載藥功能是在制備不對稱囊泡的過程中將藥物加入到濃度為200mmol/L的蔗糖水溶液作為水相，從而制備的對稱囊泡具有載藥功能；載有藥物的不對稱囊泡可以直接注射到人體中。
【權(quán)利要求】
1.一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于一種不對稱囊泡的制備方法具體是按以下步驟完成的: 一、將span80溶解到液體石蠟中，得到油相；將濃度為200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作為水相；將油相和水相分別從不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液； 步驟一中所述的span80的質(zhì)量與液體石臘的體積比為0.0lg:1mL ； 步驟一中所述的水相在微流控芯片中的流速為I μ L/min ； 步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為I μ L/min?5μ L/min ； 二、將乳液與接收液混合，室溫下反應25min?60min，得到混合液體A;再使用有機溶劑和液體石蠟的混合溶液對混合液體A進行洗滌3次?5次，得到洗滌后的混合液體A ； 步驟二中所述的乳液的體積與接收液的體積比為1:10 ; 步驟二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液體石蠟組成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與癸烷的質(zhì)量比為1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷與液體石蠟的體積比為1:200 ； 步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑與液體石蠟的體積比為1:10 ； 三、向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h?4h，得到含有不對稱囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液，將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液為保存液中，靜置2h?4h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存； 步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中DOPC磷脂的濃度為lOmg/mL ； 步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL?lmg/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為I μ L/min?3 μ L/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟一中所述的油相在微流控芯片中的流速為3 μ L/min?5 μ L/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟二中將乳液與接收液混合，室溫下反應25min，得到混合液體A。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟二中所述的有機溶劑和液體石蠟的混合溶液中有機溶劑為癸烷或己烷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟三中向洗滌后的混合液體A中加入含有DOPC磷脂的有機溶劑，混合均勻后靜置2h，得到含有不對稱囊泡的溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟三中將含有不對稱囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液中，靜置2h，去除上層的油相，即完成了不對稱囊泡的制備和保存。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟三中所述的含有DOPC磷脂的有機溶劑中有機溶劑為癸烷或己烷。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不對稱囊泡的制備方法，其特征在于步驟三中所述的含有不對稱囊泡的溶液中DOPC磷脂的濃度為0.25mg/mL?0.5mg/mL。
【文檔編號】A61K9/50GK104398492SQ201410751317
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】韓曉軍, 張旭男 申請人:哈爾濱工業(yè)大學宜興環(huán)保研究院