本發(fā)明涉及一種抗菌敷料，特別涉及一種載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法。

背景技術(shù)：

在日常生活工作中，人們?nèi)菀滓虻秱?、刮傷、碰傷、刺傷或手術(shù)需要等導(dǎo)致皮膚損傷，形成傷口，易致細(xì)菌侵入引起感染甚至化膿，給患者的身心健康帶來(lái)很大的影響。因此，在皮膚傷口護(hù)理過(guò)程中，選擇好的傷口敷料，防止傷口感染顯得尤為重要。

傷口敷料是指蓋在傷口上、有保護(hù)作用的覆蓋物，可以協(xié)助控制出血，防止感染并吸收分泌物，減少感染，促進(jìn)傷口愈合，減少疤痕。目前，傷口的護(hù)理一般采用的傳統(tǒng)敷料有藥綿、紗布、止血繃帶、止血海綿等。從臨床應(yīng)用可知，普通藥棉、紗布敷貼傷口時(shí)，肉芽組織易長(zhǎng)入敷料網(wǎng)眼中致粘連結(jié)痂，換藥時(shí)易導(dǎo)致新生組織損傷，給患者帶來(lái)痛苦。止血繃帶透氣性差，滲透液多的傷口易誘發(fā)感染，傷口愈合期較長(zhǎng)、愈合后疤痕明顯，使用不方便。

針對(duì)傳統(tǒng)敷料中的不足，近年來(lái)許多由新材料、新技術(shù)制成的功能更全面的新型傷口敷料如吸液型敷料、封閉和半封閉敷料、水凝膠型敷料等研制成功，尤其是隨著電紡絲技術(shù)的成熟和發(fā)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)電紡絲敷料的研究成為熱點(diǎn)。電紡絲是采用靜電紡絲技術(shù)將聚合物或高分子的溶液或熔體，利用高壓靜電的方法進(jìn)行噴射拉伸而獲得電紡絲，該紡絲直徑范圍一般在幾納米到幾微米，相比傳統(tǒng)的紡絲方法直徑小1～2個(gè)數(shù)量級(jí)。目前電紡絲方法主要有共紡靜電紡絲，多層電紡絲，同軸電紡絲等。在醫(yī)藥方面，由于電紡絲作為傷口敷料孔隙率高有利于細(xì)胞粘附和增殖，透氣透濕性好，對(duì)傷口滲透液有一定的吸附作用，這些優(yōu)勢(shì)為傷口的修復(fù)和愈合提供良好環(huán)境，也因此廣泛受到大家的關(guān)注。

目前應(yīng)用于電紡絲膜敷料的制備材料有殼聚糖、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚丙交酯，聚乙交酯聚、聚ε-己內(nèi)酯(PCL)、聚乙烯醇(PVA)、聚氨酯、聚丙烯酰胺、羥甲基纖維素、藻酸鹽等材料。聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)是一種無(wú)毒、無(wú)刺激性的親水性高聚物，PVA分子中含有大量的-OH基團(tuán)，可 以吸收大量的水分并形成牢固的氫鍵，具有良好的生物親和性、成纖性、成膜性、粘接性、生物降解性能，在纖維、薄膜、粘合劑和生物醫(yī)學(xué)材料等領(lǐng)域具有廣泛用途。

海藻酸鈉(sodium alginate,SA)是由-D-甘露糖醛酸(M)和-L-古洛糖醛酸(G)2種結(jié)構(gòu)單元，通過(guò)(1-4)糖苷鍵鏈接而成的線性嵌段共聚物。SA為無(wú)毒，有良好生物降解性和相容性的緩、控釋材料，且與鈣離子結(jié)合具有較好的止血作用，常用于止血敷料或滲透液吸收敷料。

鹽酸莫西沙星(moxifloxacin hydrochloride,MH)為第四代具有抗菌活性的8-甲氧基氟喹諾酮類抗菌藥。MH在體外對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、厭氧菌、抗酸菌和非典型微生物如支原體、衣原體和軍團(tuán)菌有廣譜抗菌活性。MH在體內(nèi)活性高，抗菌力強(qiáng)，半衰期長(zhǎng)，與其它抗菌藥物無(wú)交叉耐藥性，廣泛用于上、下呼吸道感染和皮膚及軟組織感染。

基于此，本發(fā)明采用共紡靜電紡絲法，探索研制一種具有良好吸收性能、透氣性能，無(wú)刺激性，不引起異物反應(yīng)，可以很好的在創(chuàng)面部位釋放藥物，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，護(hù)理簡(jiǎn)單的紡絲膜敷料。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提出一種制備對(duì)創(chuàng)面修復(fù)療效較好、毒副作用低，且見效快的傷口敷料的方法。

該制備方法包括如下步驟：

1)將質(zhì)量濃度計(jì)的8％～14％的PVA溶液和2％～3％的SA溶液，按1:4～4:1的體積比制得的混合液中加入MH制成紡絲溶液；

2)將步驟1)所得紡絲溶液進(jìn)行靜電紡絲，得到紡絲膜。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第一優(yōu)選技術(shù)方案，步驟1中所述的PVA溶液的質(zhì)量濃度為11％～13％。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第二優(yōu)選技術(shù)方案，步驟1中所述溶液的溶劑為水或水與DMSO、THF、DMF、1,2-丙二醇的混合溶液中的任何一種溶液。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第三優(yōu)選技術(shù)方案，步驟 1中所述的SA溶液的質(zhì)量濃度為2％。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第四優(yōu)選技術(shù)方案，步驟1中所述的PVA溶液和SA溶液的體積比為1:3～3:2。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第五優(yōu)選技術(shù)方案，步驟1中所述的MH的質(zhì)量是PVA和SA總質(zhì)量的0.2％～4％。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法的第六優(yōu)選技術(shù)方案，所述的MH的質(zhì)量是PVA和SA總質(zhì)量的2％～3％。

所述的載莫西沙星電紡絲膜抗菌敷料的制備方法，步驟2中所述的靜電紡絲過(guò)程中的工藝參數(shù)為：恒流泵流速為0.1～0.8ml·h-1，輸出電壓為10～18kV，紡絲時(shí)間為5～15h，接收距離為5～20cm。

所述的載莫西沙星的靜電紡絲膜抗菌敷料的制備方法制備的紡絲膜在醫(yī)用敷料中的應(yīng)用。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1)本發(fā)明應(yīng)用的載體材料聚乙烯醇是一種無(wú)毒、無(wú)刺激性的親水性高聚物，含有大量的-OH基團(tuán)，可以吸收大量的水分并形成牢固的氫鍵，同時(shí)還具有良好的成膜性。

2)本發(fā)明應(yīng)用的另一種載體材料海藻酸鈉是一種無(wú)毒，且具有良好生物降解性和相容性的緩、控釋材料。

3)本發(fā)明制備的MH/PVA/SA紡絲膜透氣性能良好，且對(duì)皮膚無(wú)刺激性。

4)本發(fā)明制備的MH/PVA/SA紡絲膜具有抗菌和促進(jìn)傷口愈合的作用。

附圖說(shuō)明

圖1：不同溶劑制備紡絲的顯微鏡圖，其中a)水，b)氯仿:水體積比為4:1，c)1，2-丙二醇:水體積比為4:1，d)DMSO:水體積比為4:1，e)四氫呋喃:水體積比為4:1，f)DMF:水體積比為4:1

圖2：2％MH/PVA/SA紡絲膜體外藥物釋放圖，其中a時(shí)間(h)，b累積釋放率(％)

圖3：不同樣品DSC圖譜，其中a)MH，b)PVA，c)SA，d)MH、PVA和SA的物理混合物，e)MH/PVA/SA紡絲膜

圖4：不同樣品的IR圖譜，其中a)MH，b)PVA/SA紡絲膜，c)MH、PVA和SA物理混合物，d)MH/PVA/SA紡絲膜

圖5：掃描電鏡圖，其中a)PVA/SA紡絲膜，b)2％MH/PVA/SA紡絲膜

圖6：MH/PVA/SA紡絲膜對(duì)金葡菌、大腸桿菌抑菌效果，其中A金葡菌，B大腸桿菌，a)PVA/SA紡絲膜，b)0.5％MH/PVA/SA紡絲膜，c)2％MH/PVA/SA紡絲膜，d)4％MH/PVA/SA紡絲膜

圖7：抑菌結(jié)果比較，其中a)金葡菌，b)大腸桿菌，1.2％MH/PVA/SA紡絲膜，2.PVA/SA紡絲膜，3.創(chuàng)口貼片，4.潔凈濾紙片

圖8：不同時(shí)間點(diǎn)刺激性照片，其中a)去除PVA/SA貼劑1h，b)去除PVA/SA貼劑24h，c)去除PVA/SA貼劑48h，d)去除MH/PVA/SA貼劑1h，e)去除MH/PVA/SA貼劑24h，f)去除MH/PVA/SA貼劑48h，g)去除紗布1h，h)去除紗布24h，i)去除紗布48h

圖9：大鼠傷口部位愈合照片，其中a)造模后1天，b)造模后3天，c)造模后8天，d)造模后11天，e)造模后14天；a未敷貼敷料，b敷貼創(chuàng)口貼，c敷貼PVA/SA紡絲膜貼劑，d敷貼2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑

圖10：傷口皮膚和正常皮膚HE染色圖，其中a)PVA/SA給藥8天，b)2％MH/PVA/SA給藥8天，c)創(chuàng)可貼處理8天，d)未處理8天，e)PVA/SA給藥14天，f)2％MH/PVA/SA給藥14天，g)創(chuàng)可貼處理14天，h)正常皮膚

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

于80℃的水浴中，用蒸餾水將PVA在磁力攪拌器上攪拌，充分溶脹，完全溶解，配制成濃度為8％、10％、12％和14％的PVA溶液，配置中發(fā)現(xiàn)PVA溶液濃度為12％時(shí)，溶液粘度較適合紡絲，制備的紡絲呈串珠狀的少且不會(huì)堵塞噴頭。

實(shí)施例2

在常溫下，用蒸餾水將SA在磁力攪拌器上攪拌，充分溶脹，完全溶解，配制成濃度為2％、2.5％和3％的SA溶液。分別移取體積比為3:2的12％PVA與 上述不同濃度的SA溶液充分?jǐn)嚢杈鶆?，在室溫下于紡絲儀上紡絲，結(jié)果列于下表1。

表1

實(shí)施例3

平行稱取五份質(zhì)量比為9:1，總質(zhì)量為0.4g的PVA與SA，精密移取4ml蒸餾水，置于80℃水浴溫度上于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢枞芙?，再冷卻后分別加入水及DMSO、THF、DMF、1,2-丙二醇有機(jī)溶劑各1ml在室溫下充分?jǐn)嚢杈鶆蚺渲瞥扇軇w積比均為4:1的紡絲溶液，于紡絲儀上紡絲，考察溶劑對(duì)紡絲形貌、直徑大小和均勻度的影響，載玻片接紡絲在顯微鏡下放大400×觀察。

如圖1所示a)、b)、f)中的紡絲直徑大小及串珠狀紡絲數(shù)量相似，紡絲表面相對(duì)較為光滑。但以氯仿:水作為溶劑的紡絲溶液其粘度較大，易堵塞噴頭；以1，2-丙二醇:水(v:v＝4:1)為溶劑制備的紡絲直徑雖小但串珠狀紡絲多，表面不光滑；d)、e)以DMSO:水(v:v＝4:1)、THF:水(v:v＝4:1)為溶劑的紡絲雖表面光滑，但紡絲棱角模糊、直徑很不均勻。而比較a)、f)可知水及DMF:水(v:v＝4:1)作為溶劑紡出的兩種紡絲形態(tài)無(wú)明顯差異，以DMF:水為溶劑的靜電紡絲溶液其噴絲速度稍快。

實(shí)施例4

配制12％PVA和2％SA體積比依次為8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、2:8的紡絲溶液，取各紡絲溶液適量在電紡儀器上，設(shè)置靜電紡絲條件高壓電14kV，恒流泵流速0.3ml·h-1，接收距離10cm紡絲，用載玻片接紡絲于400×顯微鏡下觀 察，觀察兩者體積比對(duì)紡絲的影響，結(jié)果列于表2。

表2

表3為12％PVA和2％SA體積比對(duì)紡絲溶液的PH及電導(dǎo)率的影響，由表可知隨著2％SA體積增大，紡絲溶液pH和電導(dǎo)率均增大。當(dāng)pH在6.56以下時(shí)，紡絲溶液可紡性好。經(jīng)顯微鏡下觀察，12％PVA:2％SA體積比為2:8、4:6時(shí)，噴出的為小液滴，無(wú)紡絲噴出；體積比為6:4、7:3、8:2可紡性較好，且PVA含量越高，溶液可紡性越好?？紤]SA在傷口敷料中的吸收滲透液作用，應(yīng)盡量增大SA含量。

表3

實(shí)施例5

分別稱取0.2％、0.5％、1％、2％、4％MH(MH與載體材料PVA和SA的質(zhì)量百分比)加入12％PVA和2％SA體積比為3:2的紡絲溶液中，遮光在室溫下于磁力攪拌器上攪拌6h，均勻分散溶解，再裝于注射器中。設(shè)置紡絲條件：高壓電14kV，恒流泵流速0.3ml·h^-1，接收距離10cm，于電紡儀上紡絲。

用載玻片接紡絲在400×顯微鏡下觀察，以紡絲直徑大小、均勻性和串珠狀紡絲多少為指標(biāo)，確定體積比的影響。經(jīng)靜電紡絲可知，加有4％的MH紡絲溶液噴出的全為小液滴，無(wú)法紡絲；將加有0.2％、0.5％、1％、2％的MH/PVA/SA電紡絲于400×顯微鏡下觀察可知MH的量較少時(shí)紡絲表面光滑，隨著MH量的增大，串珠狀紡絲越多，紡絲溶液可紡性變差。

實(shí)施例6

設(shè)置電壓分別為10kV、14kV、18kV，以電紡絲直徑及串珠狀紡絲多少為指標(biāo)，考察電壓對(duì)電紡絲制備的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在10kV時(shí)紡絲直徑較大且串珠狀較多；電壓越高，越容易噴出紡絲，且噴出的紡絲直徑越??；但在電壓為18kV時(shí)噴絲尖端易發(fā)生放電現(xiàn)象。

實(shí)施例7

恒流泵的流速選擇0.1ml·h^-1、0.3ml·h^-1、0.5ml·h^-1、0.8ml·h^-1，考察流速對(duì)電紡絲制備的影響。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在0.8ml·h^-1時(shí)，噴頭處的液滴較大，偶爾還有液滴噴落于液滴板上，無(wú)法紡絲；在0.5ml·h^-1時(shí)幾乎無(wú)液滴噴出，紡絲直徑較小且串珠狀紡絲較少；在0.1ml·h^-1、0.3ml·h^-1時(shí)紡絲直徑較小且均勻。

實(shí)施例8

噴頭與接收器之間的接收距離設(shè)置20cm、15cm、10cm、5cm，考察接收距離對(duì)紡絲直徑及串珠狀紡絲多少的影響。經(jīng)試驗(yàn)表明各接收距離對(duì)制備的紡絲直徑影響均較小，可知接收距離對(duì)紡絲的制備影響較少。

實(shí)施例9

設(shè)置紡絲時(shí)間為5h、10h、15h，考察噴絲時(shí)間對(duì)紡絲膜柔韌性的影響。試驗(yàn)得知紡絲時(shí)間為5h，難從收集器上撕取下紡絲膜；當(dāng)紡絲時(shí)間為15h時(shí)，紡絲膜較厚，韌性變小。

實(shí)施例10

取適量MH/PVA/SA紡絲膜，均勻剪碎成0.25cm²裝入透析袋(分子透過(guò)量為8000～12000)，置于裝有50ml經(jīng)脫氣處理的PBS(pH 7.4)的錐形瓶中，在SHZ-82恒溫汽浴振蕩器中進(jìn)行藥物體外釋放試驗(yàn)。設(shè)置溫度為(37±0.5)℃，振蕩頻率為50r·min^-1，在0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、26h各時(shí)間點(diǎn)定時(shí)取樣，每次1ml，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，同時(shí)補(bǔ)充等量同溫度的新鮮釋放介質(zhì)，取續(xù)濾液采用HPLC法測(cè)定，計(jì)算不同時(shí)間的藥物累積釋放率計(jì)算公式如下：

$Q(\%)=\frac{C_n\·V+V_i\underset{i=0}{\overset{n-i}{\mathrm{\Σ}}}{C}_i}{m_{\mathrm{drug}}}\×100\%$

公式中，Q：藥物的累積釋放量，％；n：置換釋放介質(zhì)的次數(shù)，Cn：第n個(gè)時(shí)間點(diǎn)所取樣品濃度，mg·ml^-1；V：釋放介質(zhì)體積，mL；Vi：第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)的取樣體積；Ci：第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)所取樣品濃度(V₀及C₀均為零)，mg·ml^-1；m_drug：MH/PVA/SA紡絲膜中MH的質(zhì)量，mg。

以藥物累積釋放率Q和時(shí)間t繪制釋放曲線如圖2所示。

理化性質(zhì)研究

1.差示掃描量熱分析(DSC)表征

分別取MH原料藥、PVA、SA、PVA/SA處方比例物理混合物、PVA/SA紡絲膜、MH/PVA/SA紡絲膜粉碎，精密稱取適量，以氧化鋁為參比，掃描速率為10℃·min^-1進(jìn)行DSC掃描，如圖3所示。

由DSC分析結(jié)果知，MH晶體在250℃有一個(gè)尖銳的吸熱峰為MH熔點(diǎn)，MH/PVA/SA物理混合物、MH/PVA/SA紡絲膜在250℃沒有吸熱峰，均在190℃ 和310℃左右有吸熱峰。結(jié)果顯示，MH/PVA/SA紡絲膜中MH結(jié)晶峰消失，而從c)中可知SA在245℃左右有一尖銳的放熱峰，一種可能為MH的吸熱峰與SA的放熱峰抵消，另一種可能為MH/PVA/SA紡絲膜中MH以非晶體存在于基質(zhì)中。

2.紅外光譜(IR)分析表征

分別取MH原料藥、PVA/SA紡絲膜、MH/PVA/SA三者物理混合物、MH/PVA/SA紡絲膜，以KBr為參比進(jìn)行IR分析，結(jié)果如圖4所示。

由IR圖譜知，在MH、MH/PVA/SA物理混合物中均有1707.6，1453cm^-1的特征強(qiáng)吸收峰，而在MH/PVA/SA紡絲膜中則無(wú)這個(gè)特征吸收峰，說(shuō)明MH在MH/PVA/SA紡絲膜中的存在形態(tài)發(fā)生變化。PVA/SA紡絲膜在3399.4cm^-1為寬吸收峰，MH/PVA/SA紡絲膜在3449.9cm^-1也為寬吸收峰，吸收峰明顯向高波數(shù)方向移動(dòng)。MH在1623.9、1707.6、3470.4cm^-1處的吸收峰則與MH/PVA/SA紡絲膜中的1642.8、1733.7、3449.9cm^-1處的吸收峰對(duì)應(yīng)，不同程度的向高波或低波方向移動(dòng)。以上變化可推測(cè)MH與PVA和SA之間形成了氫鍵。

3.掃描電鏡(SEM)表征

采用靜電紡絲方法，用鋁箔收集PVA/SA紡絲膜、2％MH/PVA/SA紡絲膜，將各紡絲膜在50℃下烘干后在表面噴金，用掃描電子顯微鏡(SEM)，放大倍數(shù)為5k，加速電壓為10kV，觀察其表面形態(tài)，拍攝各紡絲膜形態(tài)見圖5。

由SEM圖可知a)和b)中紡絲總體上形態(tài)相似，但前者直徑大小較后者均勻，且無(wú)紡錘體或串珠狀紡絲，紡絲之間粘連較少，推測(cè)MH藥物的加入對(duì)紡絲溶液的可紡性有一定影響。

4.穩(wěn)定性試驗(yàn)

4.1穩(wěn)定性試驗(yàn)考察項(xiàng)目

本研究按最佳處方平行制備3批2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑，采用外觀性狀、藥物含量、基質(zhì)中晶體情況為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行加速試驗(yàn)以考察貼劑穩(wěn)定性。外觀性狀：肉眼觀察顏色基質(zhì)中晶體情況：各取3份于顯微鏡下觀察藥物含量：各取3份，稱取約紡絲膜12mg置于燒杯中，加入蒸餾水于水浴溫度50℃中在磁力攪拌器上遮光攪拌2h后冷卻轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，超聲15min后加蒸餾水定容，搖勻后用0.45μml濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液在293nm處采用HPLC法測(cè)定。

4.2加速試驗(yàn)

本試驗(yàn)將2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑在溫度40℃，相對(duì)濕度(RH)75％的條件下進(jìn)行加速試驗(yàn)6個(gè)月，于1、2、3、6個(gè)月取樣進(jìn)行測(cè)定，所得結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，加速試驗(yàn)條件下2％MH/PVA/SA紡絲膜加速3個(gè)月，藥物含量降低較少，紡絲膜顏色無(wú)變化，紡絲表面無(wú)晶體析出；加速6個(gè)月后MH含量有少量下降，紡絲膜表面有少量晶體析出。

表4

透氣性能研究

以口罩無(wú)紡布作為空白對(duì)照組(厚度為0.20mm)，口罩無(wú)紡布和MH/PVA/SA兩層疊加(厚度為0.35mm)作為試驗(yàn)組，以口罩無(wú)紡布均勻涂抹MH/PVA/SA紡絲溶液經(jīng)干燥后的膜(厚度為0.30mm)作為對(duì)照組。分別將各組繃緊密封于裝足量固體氯化鈣的稱量瓶(規(guī)格為40×25mm)口上，每組設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn)，驗(yàn)3批。將各組一起置于由玻璃干燥器、有孔隔板組成的自制透氣性試驗(yàn)裝置內(nèi)，孔隔板下層放有適量飽和氯化鈉溶液(溫度為37℃時(shí)，其相對(duì)濕度為75±1％)。設(shè)置溫度為37℃，稱量計(jì)算24h內(nèi)固體氯化鈣的質(zhì)量變化，由水蒸氣透過(guò)率計(jì)算公式：

$R_{\mathrm{wvp}}=\frac{W}{A\·\mathrm{\Δp}}$

公式中，R wvp為水蒸氣透過(guò)率(g·h^-1·cm^-2mmHg^-1)，W為單位時(shí)間內(nèi)水蒸氣透過(guò)紡絲膜的重量(g·h^-1)，A為水蒸氣透過(guò)紡絲膜的面積(以稱量瓶口面積11.9cm²計(jì)算)，Δp為紡絲膜兩側(cè)蒸汽壓差(mmHg)。確保稱量瓶?jī)?nèi)有足量固體氯化鈣時(shí)，即可認(rèn)為紡絲膜內(nèi)側(cè)蒸汽壓為零，在37℃，相對(duì)75％RH條件下，紡絲 膜兩側(cè)蒸汽壓差為23.8mmHg。即有透氣性能計(jì)算公式如下：P＝R_wvp·d公式中：P為透氣性能(g·h^-1·cm^-1·3mmHg^-1)，d為紡絲膜厚度，R_wvp為水蒸氣透過(guò)率(g·h^-1·cm^-2mmHg^-1)。數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得結(jié)果見表5。

表5

附：與空白對(duì)照組比較：﹡P<0.05

由表可知，試驗(yàn)組和空白對(duì)照組、試驗(yàn)組和對(duì)照組的透氣性能均相差較大(p<0.05)，有顯著性差異。

抑菌試驗(yàn)

1.LB液體培養(yǎng)基的制備

稱取蛋白胨2g、酵母浸粉1g、氯化鈉2g，溶解在蒸餾水中，放入錐形瓶中，加蒸餾水至200ml攪拌混勻，用牛皮紙封口，在121℃高壓蒸氣滅菌30min，冷卻后放入4℃冰箱中保存。

2.LB固體培養(yǎng)基的制備

取蛋白胨5g，酵母浸粉2.5g，氯化鈉5g，溶解在蒸餾水中，放入錐形瓶中，加入2％的瓊脂粉，加蒸餾水至500ml攪拌混勻，用封口膜封口，在121℃高壓蒸氣滅菌30min，冷卻于4℃冰箱中保存。

3.金葡菌和大腸桿菌固體培養(yǎng)基的制備

將新鮮培養(yǎng)的金葡菌、大腸桿菌單個(gè)菌落接種至30ml LB培養(yǎng)液中，在37℃，200r·min-¹恒溫汽浴振蕩器中振蕩培養(yǎng)24h。將2中制備的LB固體培養(yǎng)基在微波爐中加熱溶解，待冷至不燙手但仍為液體時(shí)，在預(yù)先滅菌的操作臺(tái)中將培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)金葡菌、大腸桿菌菌液(約2ml)倒入溶解的LB固體培養(yǎng)基中，搖勻，倒至直徑90mm平皿中，每塊板厚度4±0.5mm左右。瓊脂凝固后用保鮮膜密封，于4℃冰箱中保存待用。

4.紡絲膜及創(chuàng)口貼片的制備及使用

4.1不同含量的MH/PVA/SA紡絲膜的制備：采用打孔器將PVA/SA紡絲膜、0.5％、2％、4％MH/PVA/SA紡絲膜制備成直徑為0.45cm的紡絲膜圓片(厚度約為0.3mm)，烘干，稱重待用。

4.2試驗(yàn)用創(chuàng)口貼的準(zhǔn)備：創(chuàng)口貼去背襯層，用打孔器打成直徑為0.45cm的貼片，烘干，稱重備用。

5.抑菌圈測(cè)定

5.1以0.5％、2％、4％MH/PVA/SA紡絲膜為試驗(yàn)組，以PVA/SA紡絲膜片為陰性對(duì)照組，分別置于含金葡菌、大腸桿菌菌液LB固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在37℃條件下恒溫培養(yǎng)24h，觀察抑菌情況并測(cè)量抑菌圈直徑，試驗(yàn)平行進(jìn)行3次。從圖6，表6中結(jié)果可知：采用4％、2％MH/PVA/SA紡絲膜對(duì)大腸桿菌抑菌作用較強(qiáng)，PVA/SA紡絲膜對(duì)大腸桿菌、金葡菌幾乎無(wú)抑菌作用。

表6

5.2以2％MH/PVA/SA紡絲膜為試驗(yàn)組，以PVA/SA紡絲膜為陰性對(duì)照組，以創(chuàng)口貼和濾紙片作為對(duì)照組，分別置于含金葡菌、大腸桿菌LB固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在37℃條件下恒溫培養(yǎng)24h，將該試驗(yàn)平行進(jìn)行3次，觀察抑菌情況并測(cè)量抑菌圈直徑。

從圖7可知2％MH/PVA/SA紡絲膜對(duì)大腸桿菌、金葡菌均有抑菌作用，且對(duì)大腸桿菌作用較強(qiáng)；PVA/SA紡絲膜對(duì)大腸桿菌、金葡菌則只有較弱或幾乎無(wú)抑菌作用；某創(chuàng)可貼和潔凈濾紙片對(duì)大腸桿菌和金葡菌均無(wú)抑菌作用。

刺激性試驗(yàn)

1.試驗(yàn)動(dòng)物

家兔4只，雌雄各半，體重為2.2～2.5kg，在動(dòng)物中心潔凈室中單籠飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食，黑暗光照各12h。

2.造模

破損皮膚刺激性試驗(yàn)造模：于給藥前24h用脫毛膏將兔兩側(cè)對(duì)稱脫毛共6個(gè)部位，每塊去毛面積3×3cm，用消毒小刀劃“日”字，以滲血為度，破損皮膚面積1.0×2.0cm。

3.給藥

將其隨機(jī)分為A、B組，A組單次給藥，B組多次給藥。給藥采用左右側(cè)自身對(duì)照方案，左前，右中側(cè)敷貼2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑做為試驗(yàn)組，右前，左中側(cè)敷貼PVA/SA紡絲膜貼劑作為陰性對(duì)照組，右后、左后側(cè)敷貼無(wú)菌紗布對(duì)照組。單次給藥試驗(yàn)：敷用貼劑前均用75％的乙醇消毒，敷貼5h，敷貼結(jié)束后除去受試物并用潔凈溫水清潔給藥部位。多次給藥試驗(yàn)：連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時(shí)間均為5h，每天給藥一次，連續(xù)敷貼4天，敷貼各敷料時(shí)用無(wú)刺激性膠布和繃帶加以固定，敷貼結(jié)束后除去各敷料并用溫水清潔給藥部位。

4.觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)

結(jié)果觀察：在自然光線下觀察皮膚反應(yīng)，按表7給出的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分。單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)，在去除藥物后1h、24h、48h和72h肉眼觀察并記錄敷貼部位有無(wú)紅斑和水腫等情況并評(píng)分。多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)，在每次去除藥物后1h記錄紅斑及水腫、敷貼部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)等情況并評(píng)分。末次貼敷后，在去除藥物后1h、24h、48h和72h肉眼觀察并記錄敷貼部位有無(wú)紅斑和水腫等情況。

表7

表8

6.刺激性評(píng)分及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果

所有數(shù)據(jù)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件行單因素方差分析以確定組間差異，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示。

表9

表9為單次給藥刺激性評(píng)分結(jié)果，經(jīng)計(jì)算得知紅斑、焦痂形成和水腫形成的刺激性評(píng)分均在0～0.49，為無(wú)刺激性。單因素方差分析得知，試驗(yàn)組與對(duì)照組、陰性對(duì)照組進(jìn)行比較P＞0.05，說(shuō)明試驗(yàn)組與對(duì)照組、陰性對(duì)照組均無(wú)顯著性差異。

表10

表10為多次給藥刺激性評(píng)分結(jié)果，經(jīng)計(jì)算得知紅斑、焦痂形成和水腫形成的刺激性評(píng)分均在0～0.49，為無(wú)刺激性。試驗(yàn)組與對(duì)照組、陰性對(duì)照組進(jìn)行比較P＞0.05，說(shuō)明試驗(yàn)組與對(duì)照組、陰性對(duì)照組均無(wú)顯著性差異。給藥后去除藥物1h、24h、48h，拍照，照片見圖8。

藥效學(xué)試驗(yàn)

1.試驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠12只，雌雄各半，體重為280±20g，在動(dòng)物中心潔凈室中飼養(yǎng)，用苦味酸按序號(hào)標(biāo)記，隨機(jī)將SD大鼠分成A、B兩組，自由飲水?dāng)z食，光照、黑暗各12h。

2.傷口模型的建立

于造模前24h用脫毛膏將SD大鼠背部脫毛，面積為5×4cm，脫毛后將脫毛膏洗凈以免皮膚損傷。造模時(shí)，采用12％的水和氯醛腹腔注射進(jìn)行麻醉，以75％乙醇溶液消毒后，用打孔器在大鼠脊柱兩側(cè)對(duì)稱性印記4個(gè)直徑為1cm的圓形皮膚，用消毒剪刀沿印記剪去該部位皮膚，深至真皮但不損傷皮下血管，建立4個(gè)皮膚傷口模型。

3.傷口的處理

給藥采用自身對(duì)照方案，A組SD大鼠左前側(cè)敷貼2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑作為試驗(yàn)組，右前側(cè)敷貼PVA/SA紡絲膜貼劑作為陰性對(duì)照組，左后側(cè)敷貼創(chuàng)可貼作為對(duì)照組，右后側(cè)不敷貼敷料作為空白對(duì)照組。考慮各傷口部位皮膚不同，將B組SD大鼠左前側(cè)敷貼創(chuàng)可貼，右前側(cè)不敷貼敷料，左后側(cè)敷貼2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑，右后側(cè)敷貼PVA/SA紡絲膜貼劑，再用透氣、無(wú)刺激 性膠布和繃帶加以固定，進(jìn)行自身對(duì)照治療試驗(yàn)。

4.傷口愈合情況

分別于造模后1天、3天、8天、11天、14天，觀察記錄各傷口感染和愈合情況并用相機(jī)拍照，見圖9。

從圖9可知：造模后第3天，所有創(chuàng)面均有向傷口中心愈合的趨勢(shì)，創(chuàng)面均有少量的炎性滲出物和鮮紅色的肉芽組織。造模后第8天，試驗(yàn)組和陰性對(duì)照組傷口幾乎無(wú)感染癥狀，創(chuàng)面收縮明顯，開始結(jié)痂，傷口愈合速度明顯比對(duì)照組和空白對(duì)照組快；對(duì)照組傷口感染癥狀明顯，傷口部位膿腫且有較多的滲出液，空白對(duì)照組有明顯的腫塊和發(fā)炎癥狀，皮膚表面鼠毛開始生長(zhǎng)。造模后第11天，對(duì)照組和空白對(duì)照組部位明顯有紅腫、發(fā)炎癥狀，試驗(yàn)組和陰性對(duì)照組傷口接近愈合。造模后第14天，對(duì)照組膿腫消退，而空白對(duì)照組腫塊仍未消退，且有增大趨勢(shì)；試驗(yàn)組和陰性對(duì)照組傷口幾乎痊愈。

5.傷口愈合評(píng)價(jià)指標(biāo)

分別于造模后1、3、8、11、14天，從垂直于脊柱和平行于脊柱兩個(gè)方向測(cè)量傷口直徑，用直徑的平均值來(lái)計(jì)算愈合殘留面積，并計(jì)算愈合百分率。

$\mathrm{HR}=\frac{\mathrm{AO}-\mathrm{AT}}{\mathrm{AO}}\&times;100\%$

公式中：HR(healing rate)：愈合百分率；AO(original incisional area)：原創(chuàng)面面積；AT(new area at interval time)：愈合殘留面積。(原創(chuàng)面積為0.79cm²)經(jīng)測(cè)定得各組傷口直徑并計(jì)算愈合百分率結(jié)果見表11。

表11

從表11統(tǒng)計(jì)分析得知對(duì)照組在造模后第3天和第8天比其他組愈合百分率均高，而在造模后第14天，愈合百分率情況有一定的改變。

6.傷口皮膚取材及HE染色

取正常皮膚和給藥8、14天的傷口皮膚取創(chuàng)面及周圍正常皮膚組織，浸漬于pH為7.4的4％多聚甲醛溶液中，石蠟包埋，常規(guī)切片行HE染色。將HE染色切片于200×顯微鏡下觀察創(chuàng)面肉芽組織的生長(zhǎng)及創(chuàng)面再上皮化情況并拍照比較各部位傷口皮膚及正常組織顯微結(jié)構(gòu)HE染色圖見圖10。

從圖10染色發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面第8天時(shí)創(chuàng)口貼和未敷貼創(chuàng)面有明顯的炎癥反應(yīng)，創(chuàng)面滲出物痂下軟組織有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)肉芽組織形成。2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑和PVA/SA紡絲膜貼劑敷貼處創(chuàng)面沒有明顯炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)新生肉芽組織，即出現(xiàn)大量成纖維細(xì)胞。創(chuàng)面第14天時(shí)，創(chuàng)口貼和未敷貼創(chuàng)面處仍然有少量炎癥反應(yīng)，2％MH/PVA/SA紡絲膜貼劑和PVA/SA紡絲膜貼劑敷貼處創(chuàng)面皮膚組織與正常組織相似，PVA/SA紡絲膜敷貼處其皮膚汗腺開始形成。

以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)其限制，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，參照上述實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行修改或者等同替換，這些未脫離本發(fā)明精神和范圍的任何修改或者等同替換均在申請(qǐng)待批的權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。