本申請(qǐng)要求以2014年2月16日提交的第14/623，150號(hào)美國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)和2014年2月14日提交的第61/939,965號(hào)美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)為依據(jù)的優(yōu)先權(quán)，并將此兩美國(guó)專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容引入到本申請(qǐng)中作為參考。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由油相(長(zhǎng)鏈甘油三酯至少10％w/v)和無需添加乙醇作為共溶劑的水相組成的、穩(wěn)定、透明、平均直徑小于100nm的水包油型納米乳組合物。本發(fā)明所述組合物制備工藝可用于制藥、食品、保健品和化妝品中活性成分載體的制備。
背景技術(shù)：
：藥物的溶解度低，則難以研發(fā)出具有生物相容性和物理穩(wěn)定性的藥物和保健品，尤其是靜脈注射和口服溶液。許多方法可用于制備難溶于水的堿性藥物靜脈注射、口服液組合物。這些方法包括：使用表面活性劑進(jìn)行膠束增溶或是制備藥物納米顆粒懸浮液；與環(huán)糊精及其衍生物制備復(fù)合物(羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBCD)和β磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBECD))；使用各種共溶劑系統(tǒng)；使用低pH溶液制備成強(qiáng)酸鹽。然而，在膠束體系中，表面活性劑易引發(fā)刺激、溶血、組胺、過敏等不良反應(yīng)；據(jù)報(bào)道，由于在水相介質(zhì)中原料藥與表面活性劑具有更高的接觸面積，原料藥在與聚合物、表面活性劑組成的納米混懸液中可能有潛在的催化降解風(fēng)險(xiǎn)。掩味和注射部位疼痛是由于游離藥物在膠束/納米混懸劑系統(tǒng)水相介質(zhì)中濃度較高所引發(fā)的另一個(gè)問題；眾所周知，共溶劑系統(tǒng)易引發(fā)沉淀、注射疼痛和靜脈炎；據(jù)報(bào)道，使用環(huán)糊精及其衍生物與親脂性藥物結(jié)合共同給藥，可能引發(fā)潛在的腎毒性和心動(dòng)過緩、血壓降低。使用強(qiáng)酸與弱堿鹽制備成低pH溶液，可能引發(fā)藥物-輔料、藥品穩(wěn)定性問題，且在與中性pH血液接觸時(shí)，可能使藥物作為游離堿沉淀，引發(fā)掩味問題、注射部位的刺激和疼痛?？傊?，每一種方法都有其固有的局限性，無論是靜脈注射、眼用、鼻用、局部給藥、經(jīng)皮給藥或口服給藥制劑，均無法將低溶解度藥物置于生物相容性載體中制備出穩(wěn)定性好、副作用低、藥動(dòng)學(xué)曲線良好的制劑。水包油型乳液，由油滴分散于水連續(xù)相組成，是一種可解決藥物溶解度和穩(wěn)定性的特殊系統(tǒng)，可用于許多藥物、食品、化妝品的制備。乳液的一種用途是傳遞活性藥物成分和活性組分，可供外用、保健、口腔、鼻腔、眼部的活性成分和藥物使用。可溶于油相的活性成分可溶解/分散于乳液的油相中，如果活性成分難溶于油相或水相，也可將其混入乳液的界面區(qū)。根據(jù)乳液的外觀與顆粒粒徑，可將其劃分為三種類型：粗乳液，微乳液和納米乳。粗乳液平均粒徑大于100nm，由于很多界面散射光經(jīng)過乳液，呈現(xiàn)混濁的乳白色。微乳液和納米乳是兩種光學(xué)透明(半透明或透明)、平均粒徑小于100nm的特殊乳液。具有光學(xué)透明的性質(zhì)是由于光經(jīng)過粒徑大于入射光波長(zhǎng)的1/4的液滴時(shí)發(fā)生散射。當(dāng)乳液中液滴平均粒徑小于100nm，特別是小于70nm時(shí)，光束可直接穿過乳液而不被散射。微乳液是熱力學(xué)穩(wěn)定體系，通過“溶解”油分子與表面活性劑、助表面活性劑和共溶劑的混合物而自發(fā)形成。然而納米乳是熱力學(xué)亞穩(wěn)體系，其形成需要外部能量將油滴分解至100nm以下。傳統(tǒng)的水包油乳液，即粗乳液，本質(zhì)上是不穩(wěn)定的系統(tǒng)，不會(huì)自發(fā)形成。形成粗乳液需要機(jī)械攪拌、均質(zhì)或超聲等形式的能量輸入，形成的粗乳液有回到相分離穩(wěn)定狀態(tài)(例如：集聚和分層)的趨勢(shì)。除了物理性質(zhì)不穩(wěn)定，由于粗乳液液滴粒徑相對(duì)較大，界面積體積比較低，對(duì)于在油或水相溶解度均低的難溶性化合物會(huì)限制粗乳液對(duì)該化合物的有效溶解；在制備眼部給藥制劑時(shí)，粗乳液的不透明性則會(huì)減少視覺清晰度。此外，包含長(zhǎng)鏈甘油三酯的口服粗乳液活性成分的釋放速率，可能會(huì)受到脂質(zhì)分解速率與程度的限制。甘油三酯乳劑在胃腸道中的消化率是pH值、脂肪酶濃度、膽鹽和乳劑表面積的函數(shù)。高表面積體積比的乳液脂質(zhì)分解速率高于低表面積體積的乳液。平均粒徑小于100nm的乳劑可避免上述缺陷，其中微乳液熱力學(xué)穩(wěn)定，雖然納米乳熱力學(xué)本質(zhì)上處于亞穩(wěn)態(tài)，由于粒徑非常小，仍可以保持很長(zhǎng)時(shí)間的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性。形成液滴粒徑小于100nm的乳劑對(duì)于相對(duì)界面積增加大有裨益。相對(duì)界面積增加可使難溶性活性成分在水相介質(zhì)中的溶解度增加，相比于粗乳液具有更快的脂質(zhì)分解消化速率，因此油滴中的活性成分具有更快的釋放速率。由于液滴粒徑小于100nm，微乳液和納米乳可幫助活性化合物穿透上皮黏膜層，如眼睛、皮膚、鼻、肺、胃腸道、腫瘤、血管和血腦屏障。微乳和納米乳顆粒粒徑均小于100nm，活性化合物的傳遞方式相近，但還是不盡相同。盡管具有微乳液熱力學(xué)穩(wěn)定性，但其體系所需表面活性劑濃度顯著高于油相，正常情況下比納米乳還要高幾倍。由于表面活性劑易引發(fā)許多無法預(yù)期的副作用，以及政府法規(guī)對(duì)許多表面活性劑的日常攝入量進(jìn)行限制，相比于納米乳，微乳在制備靜脈、眼用和口服給藥等制劑方面處于劣勢(shì)。此外，許多表面活性劑味苦，在應(yīng)用于食品/藥品時(shí)，易導(dǎo)致適口性問題；微乳系統(tǒng)的物理穩(wěn)定性經(jīng)常受稀釋、加熱、pH值改變的影響。盡管納米乳不會(huì)自發(fā)形成，僅僅保持動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性；使用水和較少的表面活性劑，借助機(jī)械剪切對(duì)油滴進(jìn)行破裂，即可獲得納米級(jí)粒徑。從毒理學(xué)和監(jiān)管的角度來看，這是一種更容易被人體接受的體系。與微乳相似，納米乳由于粒徑較小，可獲得半透明外觀而具備的優(yōu)勢(shì)。與微乳類似，納米乳有同樣高的界面積體積比，有助于難溶性化合物溶解和脂肪快速消化乳液。與微乳不同的是，納米乳在稀釋和/或pH改變時(shí)物理性質(zhì)保持穩(wěn)定。盡管納米乳與粗乳液、微乳液相比具有許多優(yōu)點(diǎn)，但依然存在動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定-顆粒粒徑由于Ostwald熟化會(huì)隨著時(shí)間推移而增大的局限性。這將導(dǎo)致其澄明度下降，接觸面面積減少。為制備平均粒徑小于100nm的穩(wěn)定納米乳，常使用短鏈甘油三酯或中鏈甘油三酯(例如：Migloyol)等低粘度油相，其缺點(diǎn)是由于油相分子量較小、水溶性較高、粘度較低，具有Ostwald熟化趨勢(shì)。使用水溶性極低的長(zhǎng)鏈甘油三酯作為油相，可提高納米乳劑的物理穩(wěn)定性。然而，由于長(zhǎng)鏈甘油三酯分子體積較大、粘度較高，當(dāng)其含量較高時(shí)，難以快速形成光學(xué)透明(透明或半透明)的納米乳。因此，為制備光學(xué)透明、含有長(zhǎng)鏈甘油三酯的納米乳，通常需要添加大量的小分子量有機(jī)溶劑(乙醇)，或相對(duì)于油相更大量的毒性表面活性劑(CremophorEL)，依此降低油相的表面張力。然而，從安全性、毒理學(xué)和監(jiān)管角度，這可能使其更不容易被人體接受。例如，由于磷脂酰膽堿(蛋黃或大豆卵磷脂)是天然無毒、生物相容性表面活性劑，目前制藥工業(yè)對(duì)于以卵磷脂為基質(zhì)的乳劑具有極大興趣。然而，由于磷脂在較低濃度具有形成液晶結(jié)構(gòu)的強(qiáng)趨勢(shì)，特別是在水相中，必須使用乙醇作為共溶劑，以此降低界面張力，從而制備出以卵磷脂為基質(zhì)且含有長(zhǎng)鏈甘油三酯的微乳/納米乳。但目前已知乙醇易引發(fā)毒副作用，如酶誘導(dǎo)、藥物-藥物相互作用或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害。因此，以長(zhǎng)鏈甘油三酯作為油相為基礎(chǔ)而制備成的乳油相含量較高、平均粒徑小于100nm(平均強(qiáng)度)，使用生物相容性的表面活性劑和較少其他表面活性劑，在水相中不使用乙醇作為共溶劑，對(duì)Ostwald熟化具有良好的穩(wěn)定性、光學(xué)半透明的納米乳還是極具挑戰(zhàn)性。該納米乳一旦制備成功將對(duì)提高產(chǎn)品的安全性、療效、穩(wěn)定性、耐受性和掩味性起重要作用。發(fā)明概述為了解決上述技術(shù)缺陷和問題，需要有以下制備澄明納米乳的技術(shù)，其油相中包含至少10％w/v長(zhǎng)鏈甘油三酯，液滴粒徑小于100nm且對(duì)Ostwald熟化保持良好的穩(wěn)定性，使用生物相容性表面活性劑和較少的其他表面活性劑(<15％)，在水相中不使用乙醇作為共溶劑。考慮上述問題，本發(fā)明提供了一種平均粒徑小于100nm、水性基質(zhì)水包油型納米乳組合物，該納米乳油相濃度高達(dá)50％，粒徑分布較小、光學(xué)透明、對(duì)Ostwald熟化保持良好的穩(wěn)定性。疏水性的治療有效成分與其他輔料一起制備成納米乳系統(tǒng)，可提高其在水性介質(zhì)中的溶解度與穩(wěn)定性，有助于活性成分的傳遞。本發(fā)明旨在提供一種性質(zhì)穩(wěn)定、光學(xué)透明的水包油型納米乳，包含由長(zhǎng)鏈甘油三酯和/或其他油類組成的油相、離子型表面活性劑和助表面活性劑、pH調(diào)節(jié)劑，在水相中不使用乙醇作為共溶劑。乳液中油相比例至少為0.5-50％w/v，油相中包含至少10％的長(zhǎng)鏈甘油三酯。離子型表面活性劑是生物相容性的可電離的表面活性劑或其衍生物(例如蛋黃或大豆卵磷脂)與藥學(xué)上可接受的助表面活性劑組合，總濃度小于25％w/v，其中表面活性劑和助表面活性劑的比例范圍為10:0.1－0.1:10、10:1－1:10、10:1－1:5或5:1－1:5；二者總濃度小于油相的100％w/w。水相包括水，不使用乙醇作為共溶劑。本發(fā)明旨在提供一種性質(zhì)穩(wěn)定、光學(xué)透明的水包油型納米乳，其中包含長(zhǎng)鏈甘油三酯、油滴平均粒徑小于100nm、水相中不使用乙醇作為共溶劑；納米乳制備方法如下：a)制備含有長(zhǎng)鏈甘油三酯的油相；b)制備含有水和pH調(diào)節(jié)劑的水相；c)將生物相容性的表面活性劑和助表面活性劑摻入油相或水相中；d)將油相分散在水相中形成粗乳液；e)對(duì)步驟d的粗乳液進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理，得到納米乳；f)調(diào)節(jié)pH值。本發(fā)明的另一目的是提供一種使用光學(xué)透明的納米乳系統(tǒng)組合物來治療人體或動(dòng)物疾病的方法，該組合物包含長(zhǎng)鏈甘油三酯、油滴粒徑小于100nm、不使用乙醇作為治療藥物的有機(jī)溶劑共溶劑，該組合可用于制藥、食品、化妝品，可通過口服，靜脈注射，皮下注射、肌內(nèi)注射、吸入、鼻用、外用、眼用和透皮等方式進(jìn)行給藥；該組合的穩(wěn)定性和純度符合適用性綱要、FDA和GMP的要求。所述方法包括：a)通過將治療活性基質(zhì)或其他基質(zhì)分散/溶解于油性載體中，制備液態(tài)的水包油型納米乳組合物；b)制備含有水和pH調(diào)節(jié)劑的水相；c)通過超聲或均質(zhì)將油相分散于水相中，形成油滴；d)將上述納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。本發(fā)明旨在提供一種使用光學(xué)透明的納米乳系統(tǒng)組合物來治療人體或動(dòng)物疾病的方法，該組合物包含長(zhǎng)鏈甘油三酯、油滴粒徑小于100nm、不使用乙醇作為治療藥物的有機(jī)溶劑共溶劑，該組合可用于藥品、食品、化妝品，也可通過口服、靜脈注射、皮下注射、肌內(nèi)注射、吸入、鼻用、外用、眼用和透皮等方式進(jìn)行給藥；該組合的穩(wěn)定性和純度符合適用性綱要、FDA和GMP的要求。所述方法包括：a)使用超聲或均質(zhì)方法將油相分散于水相中制備出液態(tài)的水包油型納米乳組合物；b)將治療活性劑或其他藥物摻入步驟a)所制備的水包油型納米乳中，混入油相中使其溶解；c)將上述納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。本發(fā)明旨在提供一種使用光學(xué)透明的納米乳系統(tǒng)組合物來治療人體或動(dòng)物疾病的方法，該組合物包含長(zhǎng)鏈甘油三酯、油滴粒徑小于100nm、不使用乙醇作為治療藥物的有機(jī)溶劑共溶劑，該組合可用于制藥、食品、化妝品，可通過口服，靜脈注射，皮下注射、肌內(nèi)注射、吸入、鼻用、外用、眼用和透皮等方式進(jìn)行給藥；該組合的穩(wěn)定性和純度符合適用性綱要、FDA和GMP的要求。所述方法包括：a)將油相分散于水相中制備出液態(tài)的水包油型粗乳液；b)將治療活性劑或其他藥物摻入步驟a)所制備的水包油型粗乳液中，混入油相中使其溶解；c)通過超聲或均質(zhì)制備出液態(tài)水包油型納米乳；d)將上述納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。附圖的簡(jiǎn)要描述圖1LCT/卵磷脂/吐溫80納米乳(實(shí)施例1)與卵磷脂粗乳液(實(shí)施例7)的顆粒粒徑分布對(duì)比圖。納米乳的平均顆粒粒徑為47nm，粗乳液的平均顆粒粒徑為177nm。圖2實(shí)施例5的透明納米乳圖3.LCT/卵磷脂/吐溫80納米乳(實(shí)施例1)在40℃/75％RH條件下貯藏5個(gè)月的顆粒粒徑分布圖。結(jié)果表明納米乳在經(jīng)過貯藏前后顆粒粒徑分布大體一致。圖4LCT/卵磷脂/吐溫80/納米乳/環(huán)孢菌素納米乳(實(shí)施例2)在40℃/75％RH條件下貯藏2個(gè)月、5個(gè)月的顆粒粒徑分布。納米乳的顆粒粒徑與光學(xué)透明度無顯著變化。貯藏前納米乳平均顆粒粒徑為38nm，在40℃貯藏5個(gè)月后為45nm。圖5.LCT/MCT/卵磷脂/吐溫80/納米乳/環(huán)孢菌素納米乳(實(shí)施例3)在40℃/75％RH條件下和冷藏條件(-2-8℃)下貯藏2個(gè)月的顆粒粒徑分布。結(jié)果表明納米乳貯藏前后顆粒粒徑分布大體一致。圖6.LCT/卵磷脂/吐溫80/納米乳/環(huán)孢菌素納米乳(實(shí)施例5)在室溫條件下和冷藏條件(-2-8℃)下貯藏12個(gè)月的顆粒粒徑分布。納米乳的顆粒粒徑與光學(xué)透明度無顯著變化。貯藏前納米乳平均顆粒粒徑為38nm，在40℃貯藏5個(gè)月后為45nm。發(fā)明詳述“乳液”一詞是指一種液體以粒徑大于膠束的液滴形式，借助或不借助乳化劑而分散于另一不互溶的液體中所形成的體系(例如脂肪分散于牛奶中)。“水包油型乳液”一詞是指由油滴分散在水連續(xù)相中形成的乳液體系。在本發(fā)明中，“乳液”一詞全部指的是水包油型乳液?！拔⑷橐骸币辉~是指由水、油和表面活性劑(S)組成的分散體系，是一種各向同性的熱力學(xué)穩(wěn)定的系統(tǒng)，該分散體系的粒徑分布大約為1－100nm，通常10－50nm。液滴粒徑通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定平均粒徑或強(qiáng)度均一平均粒徑獲得。在本發(fā)明中，“微乳液”一詞全部指的是水包油型乳液?！凹{米乳”一詞是指由水、油和表面活性劑(S)組成的分散體系，是一種熱力學(xué)亞穩(wěn)態(tài)的系統(tǒng)，該分散體系的粒徑分布大約為1－100nm，通常10－50nm。液滴粒徑通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定平均粒徑或強(qiáng)度均一平均粒徑獲得。在本發(fā)明中，“納米乳”一詞全部指的是水包油型乳液?！爸墟湼视腿ァ币辉~是指中鏈(6～12個(gè)碳原子)甘油脂肪酸酯?！伴L(zhǎng)鏈甘油三酯”一詞是指長(zhǎng)鏈(大于12個(gè)碳原子)甘油脂肪酸酯?！氨砻婊钚詣钡囊辉~通常是指兩性有機(jī)化合物，同時(shí)具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)?！半x子型表面活性劑”一詞通常是指兩性有機(jī)化合物，同時(shí)具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)，其端基可以在pH低于10的生理?xiàng)l件下電離。“助表面活性劑”一詞通常是指添加其他表面活性劑時(shí)，可進(jìn)一步降低液體表面張力的另一種表面活性劑?！肮踩軇币辉~是指添加入其他溶劑時(shí)，可進(jìn)一步降低液體表面張力的有機(jī)溶劑?！巴该鳌币辉~是指光通可過材料而不被散射的物理性質(zhì)。它遵循Snell定律；換言之，一種透明介質(zhì)允許光傳輸和圖像形成?！鞍胪该鳌币辉~是指一種透明的超集：它可使光透過，但未必遵循Snell定律；換言之，一種半透明介質(zhì)允許光的傳輸，但不允許圖像形成。“光學(xué)透明”一詞在本發(fā)明中是指的透明或半透明。本發(fā)明提供一種以水相為基質(zhì)，平均液滴粒徑(強(qiáng)度-平均，nm)小于100nm，由油相、離子型表面活性劑與助表面活性劑混合物、水相液態(tài)載體組成的水包油型納米乳。本發(fā)明的處方包括：a)長(zhǎng)鏈甘油三酯和/或其他油類組成的油相b)離子型表面活性劑與助表面活性劑混合物c)水、pH調(diào)節(jié)劑、不含乙醇的共溶劑組成的水相或者，乳液處方可能還含有為藥品、保健品、食品和化妝品中的活性成分(S)的抗氧化劑、螯合劑、滲透劑、混懸劑、防腐劑和緩沖劑。在一些實(shí)施例中，制劑還包括增溶劑、調(diào)味劑、甜味劑、增粘劑、電解質(zhì)、其他治療劑或其組合物。結(jié)合不同成分在納米乳中的組合，本發(fā)明可提供多種實(shí)施例。本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施例的納米乳組成如下：a)至少0.5-50％w/w油相其包含長(zhǎng)鏈甘油三酯，b)0.01-30％w/w的離子型表面活性劑c)0.01-30％w/w的助表面活性劑；及d)50-99％w/w的水相其中油滴的強(qiáng)度平均粒徑小于100nm，離子型表面活性劑與助表面活性劑的比例范圍是從10:0.1－0.1:10、10:1－1:10、10:1－1:5或5:1－1:5，表面活性劑/助表面活性劑混合物與油的比例小于1:1。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，在水包油型納米乳包括0.5-50w/v％的油相(油相中含有至少10％w/w的長(zhǎng)鏈甘油三酯)、0.01-30％的離子型表面活性劑、0.01-30％的助表面活性劑，不使用乙醇作為共溶劑的水相。乳液中的油相可能是來自動(dòng)物、蔬菜、藻類或人工合成的液態(tài)或固態(tài)的脂肪。動(dòng)物來源的油類或脂肪包括魚油、魚肝油、鯨油、豬油、牛油、鵝油及乳脂。植物來源的油類包括菜籽油、蓖麻油、可可脂、椰子油、咖啡籽油、玉米油、棉籽油、月見草油、葡萄籽油、亞麻籽油、鯡魚油、芥子油、橄欖油、棕櫚油、棕櫚仁油、花生油、罌粟籽油、菜籽油、米糠油、紅花油、芝麻油、大豆油、葵花籽油、棕櫚仁油、榛果油、芝麻油和麥胚油。人工合成的油類包括合成甘油三酯、分餾甘油三酯、修飾型甘油三酯、氫化甘油三酯或部分氫化和甘油三酯的混合物。乳液中優(yōu)選的油相是醫(yī)藥級(jí)油，尤其是甘油三酯，但不僅限于大豆油、紅花籽油、橄欖油、棉籽油、葵花油、魚油(含有ω-3脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA))、蓖麻油、芝麻油、花生油、玉米油、中鏈甘油三酯(如Miglyol812或810)和短鏈甘油三酯。油相中也可能包含表面活性劑和/或助表面活性劑，例如蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂和其他磷脂、丙二醇二酯、油酸或單甘酯(例如乙酰單甘油酯)。油相也可以是上述成分的混合物。優(yōu)選的脂相是大豆油、中鏈甘油三酯(MCT)、橄欖油和魚油，其中一種或多種混合物。最優(yōu)選的油相是大豆油。油類載體的優(yōu)選范圍是0.5-50％，最優(yōu)選是5-20％。表面活性劑可選擇任何藥學(xué)上可接受的離子型表面活性劑，優(yōu)選從蛋黃或大豆中提取的卵磷脂、人工合成的卵磷脂或從植物中提取純化的卵磷脂。氫化衍生物，如氫化卵磷脂(蛋黃)和氫化卵磷脂(大豆)也可用。納米乳中也可能包括對(duì)離子型表面活性劑起協(xié)同作用的助表面活性劑，其可改變表面張力使納米乳形成。助表面活性劑可選擇任何藥學(xué)上可接受的表面活性劑，不限于非離子型表面活性劑如泊洛沙姆(如泊洛沙姆188和407)、泊洛沙胺、硬脂酸聚氧乙烯酯、山梨糖脂肪酸聚氧乙烯酯或山梨糖脂肪酸酯，也可用離子型表面活性劑如膽酸和去氧膽酸或表面活性衍生化及其鹽類。外相水相不含乙醇作為助表面活性劑或共溶劑。本發(fā)明中乳劑的助表面活性劑比例占組合物的0.01-30w/v％。表面活性劑與助表面活性劑的比例為10:0.1-0.1:10、10:1-1:10、10:1-1:5或5:1-1:5。水相的優(yōu)選范圍為50-99％。乳液的處方可能包含藥品、保健品、食品和化妝品中的活性成分(S)，抗氧化劑、螯合劑、滲透劑、懸浮劑、防腐劑和緩沖劑。在一些實(shí)施例中，乳劑可能也包含增溶劑(不包括乙醇)、螯合劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、pH調(diào)節(jié)劑或彈性改性劑，如甘油，作為懸浮劑的聚合物和甜味劑等。穩(wěn)定劑可以作為pH調(diào)節(jié)劑、抗乳化劑或防泡劑，或使納米乳穩(wěn)定的添加劑。納米乳中活性成分所占比例可能為0-50％。納米乳中除了活性成分的其他成分的比例可能占到0-50％w/w。理想的乳液是平均液滴粒徑小于100nm、光學(xué)透明(透明或半透明)的穩(wěn)定系統(tǒng)。優(yōu)選的乳液平均液滴粒徑小于100nm；最優(yōu)選小于175nm。完成制備與經(jīng)過貯藏的乳液優(yōu)選pH范圍是10以下。pH調(diào)節(jié)劑可以是一種緩沖液或氫氧化鈉或是其他pH調(diào)節(jié)劑，或其結(jié)合物。本發(fā)明的乳液可通過如下步驟進(jìn)行制備：水相，將水置于容器中，加熱到約40-80℃和pH調(diào)節(jié)至1-10。油相，將油置于另一容器中，加熱到約40-80℃。將表面活性劑和助表面活性劑加入油相中，加熱到約40-80℃?；蛘?，表面活性劑和助表面活性劑也可以加入水相中。水相和油相通過高剪切混合器混合，形成粗乳液。采用超聲或高壓均質(zhì)機(jī)或微流化裝置(壓力5000-30,000psi，溫度5℃-70℃)進(jìn)行均質(zhì)，直至獲得符合液滴粒徑要求的納米乳。使用pH調(diào)節(jié)劑(例如氫氧化鈉)對(duì)納米乳進(jìn)行pH調(diào)節(jié)，獲得最終產(chǎn)物。將樣品過濾，分裝到容器中，通常用氮?dú)飧采w和封塞。該產(chǎn)品可以由無菌工藝或終端滅菌生產(chǎn)。優(yōu)選的產(chǎn)品是通過高壓蒸汽滅菌獲得無菌、穩(wěn)定的乳液。在一個(gè)實(shí)施例中，乳液在121℃條件下高壓蒸汽滅菌15-20分鐘。在另一實(shí)施例中，不經(jīng)高壓滅菌而是在無菌條件下制備乳液。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例是一種用于人類或動(dòng)物治療的納米乳(含有活性成分)的制備方法，該方法包括以下步驟：a)通過如下步驟制備一種水包油型液態(tài)納米乳組合物i)將治療活性成分或其他成分加入油相中，充分混合，直至完全溶解；ii)將含有活性成分的油相通過超聲或均質(zhì)分散于水相中，形成納米乳；b)將納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例是一種用于人類或動(dòng)物治療的納米乳(含有活性成分)的制備方法，該方法包括以下步驟：a)通過如下步驟制備一種水包油型液態(tài)納米乳組合物i)將油相通過超聲或均質(zhì)分散于水相中，形成納米乳；ii)將治療用活性成分或其他成分加入水包油型納米乳中；iii)充分混合使活性成分或其他成分溶解于油相中；b)將納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是一種用于人類或動(dòng)物治療的納米乳(含有活性成分)的制備方法，該方法包括以下步驟：a)通過如下步驟制備一種水包油型液態(tài)粗乳液組合物i)將油相分散于水相中，形成粗乳液；ii)將治療用活性成分或其他成分加入i)的水包油型粗乳液中；iii)充分混合使活性成分或其他成分溶解/分散于油相中；iv)通過超聲或均質(zhì)制備液態(tài)水包油型納米乳；b)將納米乳對(duì)人體或動(dòng)物進(jìn)行給藥。本發(fā)明通過非限制的實(shí)施例進(jìn)行描述，包括各實(shí)施例和各方面詳細(xì)描述的組合。因此，本發(fā)明還包括各實(shí)施例的各要素或其中描述的各方面的組合和子組合。在其后的描述及相應(yīng)的實(shí)例中，本發(fā)明的其他特征、優(yōu)點(diǎn)和實(shí)施例對(duì)熟練的技術(shù)人員顯明易懂。本發(fā)明針對(duì)熟練的技術(shù)人員所熟知的元素與方法進(jìn)行改進(jìn)與修飾。此外，實(shí)施例的鑒定與闡述僅用于示例性目的，并不意味著排斥或局限于本發(fā)明所述內(nèi)容。一名熟練的技術(shù)人員將能體會(huì)到本發(fā)明的各種改進(jìn)和修飾，并不會(huì)偏離本發(fā)明的精髓。實(shí)施例實(shí)施例1采用大豆油制備不含活性成分的納米乳處方質(zhì)量g大豆油20.0蛋黃卵磷脂7.2吐溫807.2氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.采用注射用水制備水相，攪拌并加熱至約60℃。2.水相經(jīng)0.22微米濾膜過濾，加入混合容器。3.此外，采用經(jīng)0.22微米濾膜過濾的大豆油、吐溫80和蛋黃卵磷脂制備油相，混合物在約60℃下攪拌至全部溶解。4.將油相加入水相。5.采用高剪切混合器(PolytronPT3100)、轉(zhuǎn)速10,000rpm混合5min得到大顆粒粗乳液，將其pH調(diào)至6-9。6.采用高壓均質(zhì)機(jī)(APV2000)在5,000-30,000psi高壓下對(duì)混合物進(jìn)行均質(zhì)，直至達(dá)到目標(biāo)顆粒粒徑。7.所得的水包油型納米乳冷卻，必要時(shí)調(diào)pH到6-9，轉(zhuǎn)移至灌裝容器。8.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例2采用大豆油制備含活性成分環(huán)孢霉素的納米乳在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.采用甘油和注射用水制備水相，攪拌并加熱至約60℃。2.水相經(jīng)0.22微米濾膜過濾，加入混合容器。3.此外，采用經(jīng)0.22微米濾膜過濾的大豆油、環(huán)孢霉素、吐溫80和蛋黃卵磷脂制備油相，混合物在約60℃下攪拌至全部溶解。4.將油相加入水相。5.采用高剪切混合器(PolytronPT3100)、轉(zhuǎn)速10,000rpm混合5min得到粗乳液，將其pH調(diào)至6-9。6.采用高壓均質(zhì)機(jī)(APV2000)在5,000-30,000psi高壓下對(duì)混合物進(jìn)行均質(zhì)，直至達(dá)到目標(biāo)顆粒粒徑。7.所得的水包油型納米乳冷卻，必要時(shí)調(diào)pH到6-9，轉(zhuǎn)移至灌裝容器。8.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。干眼癥(KCS)是由眼部干澀引發(fā)的疾病，可由淚液分泌減少或淚膜蒸發(fā)增加引起。常見于人和某些動(dòng)物。KCS是最常見的眼科疾病，發(fā)病率達(dá)5-6％，在絕期后婦女中高達(dá)6-9.8％，而在老年人群中達(dá)34％。淚膜高滲透性反饋所致炎癥可使用局部免疫抑制劑，如環(huán)孢霉素。因此，該實(shí)施例及以下實(shí)施例中所述的制劑，可用于增加KCS相關(guān)眼部炎癥患者淚液。實(shí)施例3采用大豆油/中鏈甘油三酯制備含活性成分環(huán)孢霉素的納米乳在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.采用甘油和注射用水制備水相，攪拌并加熱至約60℃。2.水相經(jīng)0.22微米濾膜過濾，加入混合容器。3.此外，采用經(jīng)0.22微米濾膜過濾的大豆油和中鏈甘油三酯(Migloyol812)、環(huán)孢霉素、吐溫80和蛋黃卵磷脂制備油相，混合物在約60℃下攪拌至全部溶解。4.將油相加入水相。5.采用高剪切混合器(PolytronPT3100)、轉(zhuǎn)速10,000rpm混合5min得到粗乳液，必要時(shí)將其pH調(diào)至6-9。6.采用高壓均質(zhì)機(jī)(APV2000)在5,000-30,000psi高壓下對(duì)混合物進(jìn)行均質(zhì)，直至達(dá)到目標(biāo)顆粒粒徑。7.所得的水包油型納米乳冷卻，必要時(shí)調(diào)pH到6-9，轉(zhuǎn)移至灌裝容器。8.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例4稀釋實(shí)施例1制備納米乳處方質(zhì)量g大豆油5.0蛋黃卵磷脂1.8吐溫801.8氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.獲取實(shí)施例1的納米乳樣品2.用純凈水稀釋納米乳(1:3v/v)，混勻3.必要時(shí)調(diào)pH至6-9，混勻4.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例5稀釋實(shí)施例2制備納米乳處方質(zhì)量g環(huán)孢霉素0.05大豆油5蛋黃卵磷脂1.8吐溫801.8甘油2.25氫氧化鈉q.s.topH6-9注射用水to100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.獲取實(shí)施例2的納米乳樣品2.用含2.25％甘油的純凈水稀釋納米乳(1:3v/v)，混勻3.必要時(shí)調(diào)pH至6-9，混勻4.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例6稀釋實(shí)施例3制備納米乳在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.獲取實(shí)施例2的納米乳樣品2.用含2.25％甘油的純凈水稀釋納米乳(1:3v/v)，混勻3.必要時(shí)調(diào)pH至6-9，混勻4.納米乳經(jīng)0.22微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例7采用大豆油和卵磷脂制備乳劑(對(duì)照組)處方質(zhì)量g大豆油20.0蛋黃卵磷脂12甘油2.25氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。水包油型水狀納米乳制備如下：1.采用甘油和注射用水制備水相，攪拌并加熱至約60℃。2.水相經(jīng)0.22微米濾膜過濾，加入混合容器。3.此外，采用經(jīng)0.22微米濾膜過濾的大豆油和蛋黃卵磷脂制備油相，混合物在約60℃下攪拌至全部溶解。4.將油相加入水相。5.采用高剪切混合器(PolytronPT3100)、轉(zhuǎn)速10,000rpm混合5min得到大顆粒乳狀液，將其pH調(diào)至6-9。6.采用高壓均質(zhì)機(jī)(APV2000)在5,000-30,000psi高壓下對(duì)混合物進(jìn)行均質(zhì)，直至達(dá)到顆粒粒徑不再下降。7.所得的水包油型納米乳冷卻，必要時(shí)調(diào)pH到6-9，轉(zhuǎn)移至灌裝容器。8.納米乳經(jīng)0.45微米濾膜過濾，在氮?dú)猸h(huán)境下轉(zhuǎn)移至容器中。實(shí)施例8采用大豆油、卵磷脂和吐溫80制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油20蛋黃卵磷脂12吐溫802.4氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。采用實(shí)施例1方法制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為68nm(D50)。實(shí)施例9采用大豆油、卵磷脂和吐溫80制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油35.0蛋黃卵磷脂2.52吐溫8012.6氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。采用實(shí)施例1方法制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為99nm(D50)。實(shí)施例10采用大豆油、卵磷脂和泊洛沙姆F68制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油13.3蛋黃卵磷脂4.8泊洛沙姆F684.8甘油6.7氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100gAllprocessingstagesarecarriedoutundernitrogen.采用實(shí)施例1方法制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為67nm(D50)。實(shí)施例11采用大豆油、卵磷脂和吐溫80制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油5.0蛋黃卵磷脂3.0吐溫800.6甘油2.25氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。用甘油溶液稀釋實(shí)施例8納米乳劑制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為67nm(D50)。實(shí)施例12采用大豆油、卵磷脂和泊洛沙姆F68制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油20.0蛋黃卵磷脂7.2泊洛沙姆F681.27甘油10氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。采用實(shí)施例1方法制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為89nm(D50)。實(shí)施例13采用大豆油、卵磷脂和泊洛沙姆F68制備乳劑處方質(zhì)量g大豆油20.0蛋黃卵磷脂7.2泊洛沙姆F684甘油10氫氧化鈉適量至pH6-9注射用水至100g在氮?dú)猸h(huán)境下完成所有制備流程。采用實(shí)施例1方法制備水包油型水狀乳劑，上述發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定為75nm(D50)。實(shí)施例14采用MalvernNanoZetaSizer表征納米乳的粒徑分布將采用單一表面活性劑蛋黃卵磷脂制備的乳劑(實(shí)施例7)與本發(fā)明中的乳劑(實(shí)施例1)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑為-47nm(D50)，光學(xué)清晰可見且呈透明狀(圖2)，而采用單一表面活性劑蛋黃卵磷脂制備的乳劑(實(shí)施例7)則呈乳狀且乳劑的強(qiáng)度均一平均粒徑為-177nm(D50)。實(shí)施例15采用LCT/蛋黃卵磷脂和吐溫80制備的納米乳的穩(wěn)定性將采用卵磷脂/吐溫80制備的乳劑(實(shí)施例1)貯藏在40℃/75％RH條件下5個(gè)月，考察其顆粒粒徑分布(圖3)，發(fā)現(xiàn)粒徑并無變化且保持光學(xué)透明。實(shí)施例16采用LCT/蛋黃卵磷脂和吐溫80與活性成分制備的納米乳的穩(wěn)定性將采用卵磷脂/吐溫80制備的環(huán)孢霉素乳劑(實(shí)施例2)貯藏在40℃/75％RH條件下5個(gè)月，考察其顆粒粒徑分布(圖4)，發(fā)現(xiàn)粒徑并無顯著變化。初始平均粒徑為38nm，40℃下放置5個(gè)月后為45nm。乳劑光學(xué)透明，環(huán)孢霉素的化學(xué)穩(wěn)定性無異。初始3個(gè)月5個(gè)月含量(mg/mL)1.71.71.8D50(nm)383745實(shí)施例17采用混合油、蛋黃卵磷脂和吐溫80與活性成分制備的納米乳的穩(wěn)定性將采用LCT/MCT/卵磷脂/吐溫80與活性成分制備的乳劑(實(shí)施例3)貯藏在40℃/75％RH、2-8℃條件下5個(gè)月，考察其顆粒粒徑分布(圖5)，發(fā)現(xiàn)粒徑并無變化，乳劑為光學(xué)透明的。實(shí)施例18采用混合油、蛋黃卵磷脂和吐溫80與活性成分制備的納米乳的穩(wěn)定性將采用LCT/MCT/卵磷脂/吐溫80與活性成分環(huán)孢霉素制備的乳劑(實(shí)施例5)貯藏在室溫(-25℃)及冷藏條件(-2-8℃)下14個(gè)月，考察其顆粒粒徑分布(圖6)，發(fā)現(xiàn)平均粒徑均低于50nm。乳劑光學(xué)透明，環(huán)孢霉素的化學(xué)穩(wěn)定性無異。初始14個(gè)月@5℃14個(gè)月@25℃含量(mg/mL)0.45--0.48D50(nm)383949當(dāng)前第1頁1 2 3