本發(fā)明涉及包含特定的免疫抑制成分而構(gòu)成的用于改善包含不孕和/或不育的妊娠狀態(tài)的藥劑及其使用。

背景技術(shù)：

希望孕育但未能正常的妊娠和分娩因而最后放棄了孕育的人有很多。如果將未能正常的妊娠和分娩的狀態(tài)按其階段分類，分為：未適當(dāng)?shù)剡M行受精卵向子宮內(nèi)膜的著床且妊娠不成功的狀態(tài)(廣義的不孕)；以及適當(dāng)?shù)剡M行了受精卵向子宮內(nèi)膜的著床但由于流產(chǎn)、死產(chǎn)等導(dǎo)致不能孕育的狀態(tài)(廣義的不育)。

不孕和不育在其狀態(tài)穩(wěn)定了的情況下，可作為所謂的不孕癥、不育癥而成為治療的對象。目前，對于不孕癥和不育癥的治療，根據(jù)其原因，選擇被認為最佳的治療方法。例如，在由于血液凝固異常引起的不孕癥和不育癥的情況下，存在診斷方法和治療的指標，治療方法基本上確立。然而，原因不能明確地確定的不孕癥和不育癥也以一定的比例存在也成為一個原因，導(dǎo)致為治療傷腦筋的情況也不少。例如，在重癥不孕癥中，存在有實施多次基于體外受精的治療但仍未能妊娠的著床障礙癥例，并且，在重癥不育癥中，存在有不少對目前進行的不育癥治療有抵抗性的癥例。對于原因不明的重癥不孕癥，沒有特別的治療方法，但是，對于重癥不育癥，例如，有時進行抗血小板療法(低劑量阿司匹林給藥)、抗凝療法(肝素給藥)、類固醇療法(psl；潑尼松龍)、大劑量丙種球蛋白療法(ivig)等。

現(xiàn)有技術(shù)文獻

非專利文獻

非專利文獻1:uemuray,suzukim,liuty,naritay,hiratas,ohyamah,ishiharao,matsushitas.intimmunol.2008；20:405-12.

非專利文獻2:saitos,nakashimaa,shimat,itom.amjreprodimmunol.2010；63:601-10.

非專利文獻3:kwak-kimjy,chung-banghs,ngsc,ntrivalasei,mangubatcp,beamankd,beerae,gilman-sachsa.humreprod.2003；18:767-73.

非專利文獻4:ngsc,gilman-sachsa,thakerp,beamankd,beerae,kwak-kimj.amjreprodimmunol.2002aug；48(2):77-86.

非專利文獻5:yamaguchik,hisanom,isojimas,iries,aratan,watanaben,kubot,katot,murashimaa.jmedvirol.2009；81:1923-8.

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)課題

受精卵或胎兒對于母體而言是異物(一種外來抗原)。因此，可認為，受精卵著床、妊娠維持至分娩為止的期間中，為了受精卵或胎兒不從母體中排除而被繼續(xù)接受，母體的免疫系統(tǒng)發(fā)生變化。例如，具有如下觀點：在子宮內(nèi)脫落膜中，為了使受精卵或胎兒不作為異物被排除而促進以細胞性免疫為中心的免疫系統(tǒng)的抑制是為了使妊娠繼續(xù)的重要的因素之一(非專利文獻1～5)。然而，免疫系統(tǒng)非常復(fù)雜，關(guān)于受精卵著床至分娩為止在母體中的免疫系統(tǒng)的變化的細節(jié)，仍有許多尚未查明的部分。

鑒于這樣的原因，作為已有的治療方法，不存在針對不孕癥治療的免疫抑制療法。

在不育癥治療中，上述的類固醇(psl)療法和大劑量丙種球蛋白療法(ivig)被認為可對免疫系統(tǒng)抑制性地發(fā)揮作用。但是，任一種治療方法都被報告出對母體和胎兒有各種非期望的影響。另外，在ivig療法中，還存在有由于使用血漿制劑(從1000人以上的庫血漿中精制)引起的未知的感染癥的危險性以及作用期間短等的問題。

但是，根據(jù)本發(fā)明人的預(yù)備研究，逐漸明確的是，在不孕癥的患者中，存在有被推斷為與妊娠前相比，其細胞性免疫亢進并在著床時發(fā)生對受精卵的排斥反應(yīng)的人，在不育癥的患者中，存在有被推斷為著床前的免疫狀態(tài)沒有異常，但著床后(妊娠成功后)細胞性免疫顯著亢進而導(dǎo)致發(fā)生對胎兒的排斥反應(yīng)的人?？梢哉J為，任一情況下，攻擊受精卵或胎兒的免疫的抑制機構(gòu)(免疫耐受)不夠充分是其主要原因。

基于這些認知，本申請的發(fā)明人推斷，具有同種抗原的受精卵和胚胎于子宮內(nèi)膜上的接受是與器官移植非常類似的免疫反應(yīng)，從各種角度檢驗的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了展現(xiàn)充分地改善不孕和不育的狀態(tài)的效果并且對母體和胎兒的非期望的影響得到抑制的藥劑，由此想到本發(fā)明。而且，發(fā)現(xiàn)該藥劑還可以有助于改善不孕和不育以外的妊娠狀態(tài)，由此想到本發(fā)明。

用于解決課題的手段

為了解決上述課題，本發(fā)明包含以下的方式。

【化1】

一種用于改善妊娠狀態(tài)的藥劑，其包含上述通式(i)表示的化合物或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分(式中，r¹和r²、r³和r⁴、r⁵和r⁶相鄰的各對分別獨立地(a)表示兩個相鄰的氫原子或者r²是烷基，或者(b)在鍵合有所述對的成員的碳原子彼此之間形成另一個鍵；r⁷表示氫原子、羥基、受保護的羥基、或者與烷基鍵合并一起表示氧代基；r⁸和r⁹分別獨立地表示氫原子或羥基；r¹⁰表示氫原子、烷基、被一個以上的羥基取代的烷基、烯基、被一個以上的羥基取代的烯基、或者被氧代基取代的烷基；x表示氧代基、(氫原子、羥基)、(氫原子、氫原子)、或由式-ch2o-表示的基團；y表示氧代基、(氫原子、羥基)、(氫原子、氫原子)、或由式n-nr¹¹r¹²或n-or¹³表示的基團；r¹¹和r¹²分別獨立地表示氫原子、烷基、芳基或甲苯磺酰基；r¹³、r¹⁴、r¹⁵、r¹⁶、r¹⁷、r¹⁸、r¹⁹、r²²和r²³分別獨立地表示氫原子或烷基；r²⁴表示可根據(jù)期望被取代的、包含一個以上的雜原子的環(huán)；n表示1或2，除上述的含義以外，進一步，y、r¹⁰及r²³可以通過與之結(jié)合的碳原子鍵合在一起，并表示由飽和或不飽和的5元環(huán)或6元環(huán)組成的、含有氮原子、硫原子和/或氧原子的雜環(huán)基，該雜環(huán)基由選自烷基、羥基、烷氧基、苯甲基、由式-ch2se(c6h5)表示的基團、以及被一個以上的羥基取代的烷基中的一個以上的基團取代)。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，能夠改善包含不孕和/或不育的妊娠狀態(tài)。

具體實施方式

以下，對本發(fā)明進行詳細說明。

[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]

(有效成分)

根據(jù)本發(fā)明的藥劑的有效成分，包含由下述通式(i)表示的化合物(以下，有時也將它們統(tǒng)稱為化合物(i))或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分。

此外，化合物(i)是大環(huán)內(nèi)酯類化合物。大環(huán)內(nèi)酯類化合物是指為大環(huán)狀內(nèi)酯類且是具有12或以上的環(huán)成員原子的化合物的統(tǒng)稱。

【化2】

(式中，r¹和r²、r³和r⁴、r⁵和r⁶相鄰的各對分別獨立地

(a)表示兩個相鄰的氫原子或者r²是烷基，或者

(b)在鍵合有所述對的成員的碳原子彼此之間形成另一個鍵；

r⁷表示氫原子、羥基、受保護的羥基、或者與烷基鍵合并一起表示氧代基；

r⁸和r⁹分別獨立地表示氫原子、羥基；

r¹⁰表示氫原子、烷基、被一個以上的羥基取代的烷基、烯基、被一個以上的羥基取代的烯基、或者被氧代基取代的烷基；

x表示氧代基、(氫原子、羥基)、(氫原子、氫原子)、或由式-ch2o-表示的基團；

y表示氧代基、(氫原子、羥基)、(氫原子、氫原子)、或由式n-nr¹¹r¹²或n-or¹³表示的基團；

r¹¹和r¹²分別獨立地表示氫原子、烷基、芳基或甲苯磺?；?；

r¹³、r¹⁴、r¹⁵、r¹⁶、r¹⁷、r¹⁸、r¹⁹、r²²和r²³分別獨立地表示氫原子或烷基；

r²⁴表示根據(jù)期望也可以被取代的、可包含一個以上的雜原子的環(huán)；

n表示1或2。

除上述的含義以外，進一步，y、r¹⁰及r²³可以通過與之結(jié)合的碳原子鍵合在一起，并表示由飽和或不飽和的5元環(huán)或6元環(huán)組成的、含有氮原子、硫原子和/或氧原子的雜環(huán)基，但是該雜環(huán)基也可以被選自烷基、羥基、烷氧基、苯甲基、由式-ch2se(c6h5)表示的基團、以及被一個以上的羥基取代的烷基中的一個以上的基團取代。

優(yōu)選的r²⁴可可以是可含有適當(dāng)?shù)娜〈沫h(huán)(c5-7)烷基，并且其示例包括例如，如下的基團。

(a)3，4-二氧代-環(huán)己基；

(b)3-r²⁰-4-r²¹-環(huán)己基、

其中，r²⁰是羥基、烷氧基、氧代、或och2och2ch2och3，r²¹是羥基、-ocn、烷氧基、可具有適當(dāng)?shù)娜〈碾s芳基氧基、-och2och2ch2och3、受保護的羥基、氯代、溴代、碘代、氨基乙二酰氧基(aminooxalyloxy)、疊氮基、p-甲苯氧基硫代羰基氧基(p-tolyloxythiocarbonyloxy)、或r²⁵r²⁶chcoo-(式中,r²⁵是根據(jù)期望可受保護的羥基、或者受保護的氨基，r²⁶是氫原子或甲基，或者r²⁰和r²¹結(jié)合在一起，形成環(huán)氧化物環(huán)的氧原子)；或者

(c)環(huán)戊基，該環(huán)戊基被甲氧甲基(methoxymethyl)、根據(jù)期望受保護的羥甲基、酰氧甲基(其中，酰基部分是根據(jù)期望可季銨化的二甲基氨基或可以酯化的羧基)、一個或一個以上的可受保護的氨基和/或羥基、或者氨基乙二酰氧甲基取代。優(yōu)選的例子是2-甲酰-環(huán)戊基。

對通式(i)中使用的各定義及其具體例、以及其優(yōu)選的實施方式在下面進行詳細說明。

“低級”是指如果沒有特別指示，則表示具有1～6個碳原子的基團。

作為“烷基”和“烷氧基”的烷基部分的優(yōu)選的例子，可列舉出直鏈或支鏈脂肪族烴殘基，例如，可列舉出甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、新戊基、己基等低級烷基。

作為“烯基”的優(yōu)選的例子，可列舉出含有一個雙鍵的直鏈或支鏈脂肪族烴殘基，例如，可列舉出乙烯基、丙烯基(烯丙基等)、丁烯基、異丁烯基、戊烯基、己烯基等低級烯基。

作為“芳基”的優(yōu)選的例子，可列舉出苯基、甲苯基、二甲苯基、異丙苯基、三甲基苯基(mesityl)、萘基等。

作為“受保護的羥基”和“受保護的氨基”中的優(yōu)選的保護基，例如，可列舉出甲硫基甲基、乙硫基甲基、丙硫基甲基、異丙基硫甲基、丁硫基甲基、異丁硫基甲基、己硫基甲基等低級烷硫基甲基這樣的1-(低級烷硫基)(低級)烷基、作為更優(yōu)選的成分，可列舉出c1～c4烷硫基甲基、作為最優(yōu)選的成分，可列舉出甲硫基甲基；

例如，可列舉出三甲硅烷基、三乙硅烷基、三丁硅烷基、叔丁基-二甲基硅烷基、三-叔丁基硅烷基等三(低級)烷硅烷基，例如，可列舉出甲基-二苯基硅烷基、乙基-二苯基硅烷基、丙基-二苯基硅烷基、叔丁基-二苯基硅烷基等低級烷基-二芳基硅烷基等這樣的三取代硅烷基，作為更優(yōu)選的，可列舉出三(c1～c4)烷基硅烷基及c1～c4烷基二苯基硅烷基，作為最優(yōu)選的，可列舉出叔丁基-二甲基硅烷基和叔丁基-二苯基硅烷基；

可列舉出從羧酸、磺酸和氨基甲酸衍生的脂肪族?；⒎甲艴；捅环蓟〈闹咀艴；菢拥孽；?；等。

作為脂肪族?；?，可列舉出甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁酰基、異丁酰基、戊?；愇祯；?、特戊?；?、己?；?、羧基乙?；?、羧基丙?；Ⅳ然□；?、羧基己?；?、具有一個以上如羧基那樣的適當(dāng)?shù)娜〈牡图壨轷；?/p>

例如，可列舉出環(huán)丙氧基乙?；?、環(huán)丁氧基丙?；h(huán)庚氧基丁?；?、薄荷氧基乙?；?、薄荷氧基丙酰基、薄荷氧基丁酰基、薄荷氧基戊?；⒈『裳趸乎；取⒕哂幸粋€以上如低級烷基那樣的適當(dāng)?shù)娜〈沫h(huán)(低級)烷氧基(低級)烷?；?alkanoylgroup)；

可列舉出樟腦磺?；?camphorsulfonylgroup)；

例如，可列舉出羧甲基氨基甲?；Ⅳ纫一被柞；Ⅳ缺被柞；Ⅳ榷』被柞；Ⅳ任旎被柞；?、羧己基氨基甲酰基等羧基(低級)烷基氨基甲?；蛘?，例如，可列舉出三甲硅烷基甲氧基羰基乙基氨基甲酰基、三甲硅烷基乙氧基羰基丙基氨基甲?；⑷夜柰榛已趸驶被柞；?、叔丁基二甲硅烷基乙氧基羰基丙基氨基甲酰基、三甲硅烷基丙氧基羰基丁基氨基甲?；热?低級)烷基硅烷基(低級)烷氧基羰基(低級)烷基氨基甲酰基等、具有一個以上的羧基或受保護的羧基那樣的適當(dāng)?shù)娜〈牡图壨榛被柞；取?/p>

作為芳族?；?，例如，可列舉出苯甲?；?、甲苯?；⒍妆锦；⑤刘；?、硝基苯甲?；?、二硝基苯甲?；?、硝基萘酰基等、具有一個以上硝基那樣的適當(dāng)?shù)娜〈姆减；?/p>

例如，可列舉出苯磺?；?、甲苯磺?；⒍妆交酋；?、萘磺?；?、氟苯磺?；?、氯苯磺?；?，溴苯磺酰基、碘苯磺?；?、具有一個以上的鹵素那樣的適當(dāng)?shù)娜〈姆蓟酋；?arenesulfonyl)等。

作為被芳基取代的脂肪族酰基，例如，可列舉出苯乙?；?、苯丙?；?、苯丁酰基、2-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯乙酰基、2-乙基-2-三氟甲基-2-苯乙酰基、2-三氟甲基-2-丙氧基-2-苯乙?；?、具有一個以上的低級烷氧基或三鹵(低級)烷基那樣的適當(dāng)?shù)娜〈姆蓟?低級)烷?；?。

在上述酰基中，作為更優(yōu)選的酰基，可列舉出也可具有羧基的c1～c4烷?；?alkanoyl)、在環(huán)烷基部分中具有2個(c1～c4)烷基的環(huán)(c5～c6)烷氧基(c1～c4)烷?；⒄聊X磺?；?、羧基-(c1～c4)烷基氨基甲?；?、三-(c1～c4)烷基甲硅烷基-(c1～c4)烷氧基羰基-(c1～c4)烷基氨基甲?；?、具有1個或2個硝基的苯甲?；?、具有鹵素的苯磺?；⒕哂衏1～c4烷氧基和三鹵-(c1～c4)烷基的苯基-(c1～c4)烷?；?。其中，作為最優(yōu)選的成分，可列舉出乙?；Ⅳ然；?、薄荷氧基乙酰基(menthyloxyacetyl)、樟腦磺?；?、苯甲?；?、硝基苯酰基、二硝基苯?；?、碘苯磺?；?-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯乙酰基。

作為“由飽和或不飽和的5元環(huán)或6元環(huán)組成的、含有氮原子、硫原子和/或氧原子的雜環(huán)基”的優(yōu)選的例子，可列舉出吡咯基、四氫呋喃基等。

“可具有適當(dāng)?shù)娜〈碾s芳基氧基”中的“可具有適當(dāng)?shù)娜〈碾s芳基部分”是指，可列舉出作為由ep-a-532，088中的式表示的化合物的r1基團的例示的部分，但是，例如，優(yōu)選1-羥基乙基吲哚-5-基。該公開被援引而成為說明書記載的一部分。

本發(fā)明中使用的化合物(i)及其藥學(xué)上允許的鹽具有優(yōu)異的免疫抑制作用、抗菌活性、及其他的藥理活性，因此，對于對器官或組織的移植的排斥反應(yīng)、移植物抗宿主反應(yīng)、自身免疫疾患、及感染癥等的治療及預(yù)防有用，這一點記載在例如ep-a-184162、ep-a-323042、ep-a-423714、ep-a-427680、ep-a-465426、ep-a-480623、ep-a-532088、ep-a-532089、ep-a-569337、ep-a-626385、wo89/05303、wo93/05058、wo96/31514、wo91/13889、wo91/19495、wo93/5059等，并且，這些化合物的制造方法也被公開。這些公開被援引而成為說明書記載的一部分。

具體地，稱作fr900506(＝fk506、他克莫司)、fr900520(子囊霉素)、fr900523及fr900525的化合物是由鏈霉菌(streptomyces)屬，例如鏈霉菌屬/筑波(streptomycestsukubaensis)no.9993(保藏機構(gòu)：日本茨城縣筑波市東1丁目1-3、對外經(jīng)濟貿(mào)易部工業(yè)技術(shù)院生命科學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所(舊稱：對外經(jīng)濟貿(mào)易部工業(yè)技術(shù)院微生物工業(yè)技術(shù)研究所)、保藏日：1984年10月5日、受理號：微工研條寄第927號)或者吸水鏈霉菌屬yakushimaensis亞種(streptomyceshygroscopicussubsp.yyakushimaensis)no.7238(保藏機構(gòu)：日本茨城縣筑波市鎮(zhèn)東1丁目1-3、對外經(jīng)濟貿(mào)易部工業(yè)技術(shù)院生命科學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所、保藏日：1985年1月12日、受理號：微工研條寄第928號)(ep-a-0184162)生產(chǎn)的物質(zhì)，具體地，由下列結(jié)構(gòu)式表示的fk506(通用名：他克莫司)是代表性的化合物。

【化學(xué)式3】

化學(xué)名：17-烯丙基-1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23,25-二甲氧基-13,19,21,27-四甲基-11,28-二噁烷-4-氮雜三環(huán)[22.3.1.04,9]二十八烷-18-烯-2,3,10,16-四酮。

化合物(i)中，更優(yōu)選的是如下的化合物：r³和r⁴、r⁵和r⁶的相鄰的各對在鍵合有所述對的成員的碳原子彼此之間形成另一個鍵，

r⁸和r²³獨立地表示氫原子，

r⁹表示羥基，r¹⁰是甲基、乙基、丙基或烯丙基，

x表示(氫原子、氫原子)或氧基，

y表示氧代基，

r¹⁴、r¹⁵、r¹⁶、r¹⁷、r¹⁸、r¹⁹和r²²分別表示甲基，

r²⁴表示3-r²⁰-4-r²¹-環(huán)己基、

其中，r²⁰是羥基、烷氧基、氧代或

-och2och2ch2och3基團，以及

r²¹是羥基、-ocn、烷氧基、可具有適當(dāng)?shù)娜〈碾s芳基氧基、1-四唑或2-四唑、-och2och2ch2och3基團、受保護的羥基、氯代、溴代、碘代、氨基乙二酰氧基(aminooxalyloxy)、疊氮基、p-甲苯氧基硫代羰基氧基(p-tolyloxythiocarbonyloxy)、

或者r²⁵r²⁶chcoo-基團(式中，r²⁵是根據(jù)期望可受保護的羥基、或者受保護的氨基，r²⁶是氫原子或甲基)，或者

r²⁰和r²¹結(jié)合在一起，形成環(huán)氧化物環(huán)的氧原子，并且，n由1或2表示。

作為優(yōu)選的化合物(i)，可列舉出他克莫司、子囊霉素或其衍生物，例如，ep427，680的實施例66a中記載的33-表氯-33-脫氧子囊霉素(33-epichloro-33-desoxyascomyin)。作為其他的優(yōu)選的化合物(i)，例如，可列舉出ep569337的實施例6d中記載的化合物及ep626385的實施例8中記載的化合物。

ep-0184162、ep323042、ep424714、ep427680、ep465426、ep474126、ep480623、ep484936、ep532088、ep532089、ep569337、ep626385、wo89/05303、wo93/05058、wo96/31514、wo91/13889、wo91/19495、wo93/5059、wo96/31514等中記載的化合物也被列舉作為大環(huán)內(nèi)酯類化合物(i)的優(yōu)選的例子，該公開被援引而成為說明書記載的一部分。

作為本發(fā)明的另一方式，根據(jù)本發(fā)明的藥劑包含如下所示的化合物或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分。

在本發(fā)明的藥劑中，作為以有效成分發(fā)揮作用的化合物，可列舉出代替上述化合物(i)及其鹽使用或者與上述化合物(i)及其鹽組合使用的環(huán)孢菌素、例如環(huán)孢菌素a、b、d等，這些成分被記載在默克索引merckindex(12版)no.2821，該公開被援引而成為說明書記載的一部分。

在本發(fā)明的藥劑中，作為代替上述化合物(i)及其鹽用作有效成分或者與上述化合物(i)及其鹽組合用作有效成分的優(yōu)選的大環(huán)內(nèi)酯類化合物，可列舉出默克索引(merckindex)(12版)no.8288中記載的雷帕霉素及其衍生物。作為優(yōu)選的例子，可列舉出：wo95/16691的1頁的式a的40位的羥基被-or¹(在此，r¹是羥基烷基、氫烷氧基烷基(hydroalkyloxyalkyl)、酰氨基烷基及氨基烷基)取代的o-取代衍生物、例如、40-o-(2-羥基)乙基-雷帕霉素、40-o-(3-羥基)丙基-雷帕霉素、40-o-[2-(2-羥基)乙氧基]乙基-雷帕霉素及40-o-(2-醋酰氨基乙基)-雷帕霉素。

這些o-取代衍生物可通過最佳的反應(yīng)條件下雷帕霉素(或者二氫或脫氧雷帕霉素)和鍵合在離去基團(例如，rx(在此，r是烷基、烯丙基或苯甲基部分那樣的優(yōu)選作為o-取代基的有機自由基及x是cc13c(nh)o或cf3so3那樣的離去基團))的有機基團之間的反應(yīng)來制造。

在x為cc13c(nh)o的情況下，條件是酸性或中性條件，例如，在三氟甲磺酸、樟腦磺酸、p-甲苯磺酸或它們的對應(yīng)的吡啶鹽或取代的吡啶鹽的存在下，或者在x為cf3so3的情況下，條件為在吡啶、取代的吡啶、二異丙基乙胺或五甲基哌啶那樣的堿的存在下。最優(yōu)選的雷帕霉素衍生物是如wo94/09010中記載的40-o-(2-羥基)乙基-雷帕霉素，所述文獻的公開被援引而成為說明書記載的一部分。

化合物(i)以及雷帕霉素及其衍生物具有類似的基本構(gòu)架、即三環(huán)大環(huán)內(nèi)酯構(gòu)架和至少一個類似的生物學(xué)特性(例如，免疫抑制作用)。

作為化合物(i)以及允許作為環(huán)孢菌素、雷帕霉素及其衍生物的醫(yī)藥的鹽，是無毒的允許作為醫(yī)藥的慣用的鹽，可列舉出例如鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽、例如鈣鹽、鎂鹽等堿土金屬鹽、銨鹽、例如三乙胺鹽、n-苯-n-甲胺鹽等胺鹽那樣的無機或有機堿基這樣的鹽。

在本發(fā)明的化合物(i)中，可能存在構(gòu)象異構(gòu)體或者由不對稱碳原子及雙鍵引起的光學(xué)異構(gòu)體及幾何異構(gòu)體那樣的一對以上的立體異構(gòu)體，這樣的構(gòu)象異構(gòu)體或者異構(gòu)體也被包含在本明的化合物的范圍內(nèi)。

另外，化合物(i)還能夠形成溶劑化物，但該情況也被包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。作為優(yōu)選的溶劑化物，可列舉出水和物以及乙醇。

(其他的任意的成分)

根據(jù)本發(fā)明的藥劑除上述的有效成分以外，只要不存在阻礙有效成分的活性的危險并且對于給藥對象(以下，也稱作患者))而言不是有害的物質(zhì)，也可以包含一種以上的對于其他的疾病、疾患及狀態(tài)具有治療作用的治療活性物質(zhì)。

另外，也可以包含對于給藥對象無害的在藥學(xué)上可接受的載體?？墒褂玫妮d體可以是固體、半固體、或液體型的任一者，例如，可列舉出選自水、電解液、及糖溶液等中的任一者，但不限于此。另外，治療藥也可以包含助劑。作為助劑，可列舉出潤滑劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、乳化劑、增稠劑(粘稠劑)、著色劑、香料(增香劑)、賦形劑、防腐劑、緩沖劑、調(diào)味劑、懸浮劑、乳化劑、溶解助劑及滑潤劑等。

(劑型)

作為劑型，可列舉出片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、散劑、糖漿劑、栓劑、錠劑、微丸劑、乳劑、懸浮劑及公知的其他的方式。其中，例如，作為經(jīng)口給藥制劑，優(yōu)選片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、散劑、液劑、糖漿劑及凝膠劑中的任一者，更優(yōu)選片劑、膠囊劑及顆粒劑中的任一者，進一步優(yōu)選片劑。此外，如下所述，例如，也可以被制劑作為注射劑、栓劑及經(jīng)皮吸收型制劑那樣的非經(jīng)口給藥制劑。

(藥劑的制造方法)

根據(jù)本發(fā)明的藥劑可利用公知的制造方法制造。作為一例，將有效成分和任意的其他的成分按照每種成分單獨制造之后，將各成分以達到期望的含量的方式混合來制造。

(藥劑的給藥對象)

＝對象生物種類＝

作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象，可列舉出哺乳動物、鳥類、爬蟲類、兩棲類等，其中優(yōu)選哺乳動物。在哺乳類中，作為人體以及人體以外的動物，可列舉出牛、馬、豬及羊等那樣的家畜、以及狗、貓、大鼠及兔子等那樣的寵物動物，優(yōu)選地，可例舉出人體。另外，作為鳥類，可列舉出雞、家鴨、鴨等那樣的家禽類。

＝妊娠狀態(tài)不良＝

本發(fā)明的藥劑的給藥對象是伴隨有妊娠狀態(tài)不良的上述對象。在此，妊娠狀態(tài)不良是指，除被分類為疾患或疾病的情況以外，還包含與正常的妊娠狀態(tài)相比處于不良狀態(tài)的情況的概念。即，妊娠狀態(tài)不良不僅是母體中的受孕及胎兒的狀態(tài)不良，還包含妊娠中母體自身的健康狀態(tài)的不良等。妊娠中是指妊娠確立(與妊娠成功同義)至分娩為止的期間中的任意的期間，包含妊娠初期、妊娠中期及妊娠后期的整個期間。在此，妊娠初期是指妊娠成功至第13周，妊娠中期是指妊娠第14周至第27周，妊娠后期是指第28周至分娩日。另外，妊娠狀態(tài)不良還包含分娩后母體的健康狀態(tài)不良以及分娩后作為障礙由新生兒表現(xiàn)的妊娠中及產(chǎn)后的母體的健康狀態(tài)。

妊娠狀態(tài)不良的種類不特別限定，具體地，例如，可列舉出選自1)不孕、2)不育、及3)不孕和不育以外的妊娠狀態(tài)不良(例如，妊娠并發(fā)癥等)中的至少一種，其中，如下所述，更優(yōu)選的是，由于給藥對象的免疫異常引起的妊娠狀態(tài)不良作為通過本發(fā)明的藥劑的給藥應(yīng)該改善的對象的不良。

＝不孕、不育＝

本說明書中的“不孕”以廣義的含義使用，是指與正常的狀態(tài)相比母體處于妊娠困難的狀態(tài)，是包含不孕癥的概念。在此，不孕癥是指希望孕育后未采取避孕在1年以內(nèi)妊娠不成功的情況。

在一個實施方式中，成為本發(fā)明的藥劑的給藥對象的、伴隨有不孕的對象也可以接受現(xiàn)有的不孕癥的治療。作為這種不孕癥的治療方法，可列舉出人工受精、體外受精及排卵誘導(dǎo)劑的給藥等。

其中，作為體外受精的具體的方法，可列舉出使收集的卵子和精子在培養(yǎng)皿內(nèi)受精并使受精卵返回子宮的胚胎移植(體外受精胚胎移植:ivf-et)、以及通過在顯微鏡下將精子直接注入卵子而進行受精的顯微受精(胞質(zhì)內(nèi)精子注射:icsi)等方法。作為ivf-et，還可列舉出對將新鮮的胚胎用于移植的新鮮胚胎移植(新鮮et)及收集后冷凍保存后的胚胎進行解凍而用于移植的解凍胚胎移植(fet)。對象也可以是進行了數(shù)次胚移植或顯微受精等妊娠仍不成功(未見到hcg(絨毛膜促性腺激素)的明顯上升)者，對于進行了3次以上、4次以上、或5次以上的治療妊娠仍不成功的者也可適當(dāng)?shù)貞?yīng)用。

作為包含不孕癥的不孕的原因，具有卵子因素、輸卵管因素、子宮因素、宮頸因素及免疫因素等。作為卵子因素的具體例，具有由抗高泌乳素血癥、多囊卵巢綜合癥、各種壓力、減肥及卵巢早衰疾病等產(chǎn)生的排卵障礙。另外，作為輸卵管因素的具體例，具有由衣原體輸卵管炎及輸卵管周圍炎癥等產(chǎn)生的、輸卵管的堵塞、狹窄或粘連等，作為子宮因素的具體例，具有子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、子宮的先天性畸形、子宮內(nèi)腔粘連癥(阿謝曼綜合癥)等。作為宮頸因素的具體例，具有子宮宮頸炎、來自子宮宮頸的粘液分泌異?；蛘骋悍置诓蛔愕?。作為免疫因子的具體例，具有抗精子抗體的產(chǎn)生等。在此，原因不明的不孕是指不屬于上述因素的任一者并且原因不確定的情況。原因不明的不孕中，可認為包含由于免疫異常(還包含免疫細胞的異常、抗磷脂抗體綜合癥等自身免疫疾患)引起的不孕，伴隨有這種原因不明的不孕的對象也適合作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象(也參照實施例)。具體地，在伴隨有自身免疫疾患的情況或者不伴隨有自身免疫疾患的情況下，伴隨有由于免疫異常導(dǎo)致受精卵或胚胎向子宮內(nèi)膜的著床受阻被認為是主要原因的不孕的對象，適合作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象。

本說明書中“不育”是指妊娠后在母體的子宮內(nèi)發(fā)現(xiàn)胎兒不能發(fā)育的狀態(tài)或胎兒的發(fā)育遲緩或者發(fā)育不良的狀態(tài)，是包含不育癥的概念。在此，不育癥是指妊娠(除自然妊娠以外，還包含人工受精和體外受精的情況)成功但是流產(chǎn)或死產(chǎn)重復(fù)2次以上未能孕育的情況。此外，流產(chǎn)、早產(chǎn)或死產(chǎn)經(jīng)歷一次或重復(fù)兩次的情況也被包含在本說明書的“不育”的概念中。

作為包含不育癥的不育的原因，具有遺傳因素、解剖因素、內(nèi)分泌因素、凝血因素及自身免疫因素等。作為遺傳因素的具體例，具有夫婦染色體異常及胎兒染色體異常等。作為解剖因素的具體例，具有肌瘤及子宮形體異常等。作為分泌因素的具體例，具有黃體功能不全、高泌乳素血癥、甲狀腺功能異常及血糖異常等。作為凝血因素的具體例，具有血液凝固異常。作為自身免疫因素的具體例，具有抗磷脂抗體的產(chǎn)生(抗磷脂抗體綜合癥)。在此，原因不明的不育是指不屬于上述的因素的任一者，原因不確定的情況。原因不明的不育中，可認為包含由于免疫異常(還包含免疫細胞的異常、抗磷脂抗體綜合癥以外的自身免疫疾患)引起的不育，伴隨有這種原因不明的不育的對象、伴隨有由于自身免疫因素(抗磷脂抗體綜合癥)引起的不育的對象也適合作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象(也參照實施例)。具體地，1)伴隨有由于免疫異常導(dǎo)致受精卵或胚胎從母體作為異物被排除的免疫系統(tǒng)亢進被認為是主要原因的不育的對象、和/或2)伴隨有由于免疫異常導(dǎo)致胎盤構(gòu)筑不良被認為是主要原因的不育的對象適合作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象。

此外，如上所述，伴隨有抗磷脂抗體綜合癥以外的自身免疫疾患的不孕及不育也是本發(fā)明的藥劑的給藥對象。作為這種自身免疫疾患，例如，可列舉出系統(tǒng)性紅斑狼瘡、anca相關(guān)血管炎(低血球性血管炎(cryoglobulinemicvasculitis)、iga血管炎、低補體血癥蕁麻疹血管炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎、川崎病、抗gbm病、多發(fā)性大動脈炎(takayasu'sarteritis)、巨細胞動脈炎、顯微鏡下多發(fā)血管炎、多發(fā)血管炎肉芽腫癥、嗜酸性多發(fā)血管炎肉芽腫癥)、以及惡性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。包含抗磷脂抗體綜合癥的自身免疫疾患有可能通過血栓的形成等引起胎盤的構(gòu)筑不良。胎盤的構(gòu)筑不良除血栓的形成以外，可能還伴隨有胎盤的血管炎以及胎盤的炎癥等。通過本發(fā)明的藥劑的給藥，可期待抑制自身抗體的非期望的活動、改善胎盤構(gòu)筑的不良。

＝不孕和不育以外的妊娠狀態(tài)不良＝

本說明書中“不孕和不育以外的妊娠狀態(tài)不良”，例如，還包含妊娠高血壓綜合癥、血栓癥、梗塞、心力衰竭(圍產(chǎn)期心肌病等)、以及肺水腫等伴隨妊娠產(chǎn)生的疾患或疾病(妊娠并發(fā)癥等)，是除被分類為疾患或疾病的情況以外，還包含與正常的妊娠狀態(tài)相比處于不良狀態(tài)的情況的概念。其中，妊娠高血壓綜合癥發(fā)病的可能性高(例如，具有妊娠高血壓綜合癥的發(fā)病史)的對象更適合作為本發(fā)明的藥劑的給藥對象。機理不一定必然確定，但是通過這種治療母子之間的免疫學(xué)的關(guān)系變得良好，因此胎盤構(gòu)筑變得順暢，母體的壓力也被減輕，因此可期待避免妊娠并發(fā)癥的可能性。

妊娠高血壓綜合癥是指妊娠中主要是妊娠后期及產(chǎn)后12周為止的期間中發(fā)現(xiàn)的高血壓、或產(chǎn)生高血壓和伴隨著高血壓產(chǎn)生的浮腫及蛋白尿等癥狀的綜合癥。妊娠高血壓綜合癥詳細而言，病型進一步分類為妊娠高血壓、高血壓腎病、加重型高血壓腎病及子癇。妊娠高血壓綜合癥具有反復(fù)性，以前妊娠時具有妊娠高血壓綜合癥的既往史的情況下，在下一次妊娠時妊娠高血壓綜合癥發(fā)病的風(fēng)險非常高。

作為妊娠高血壓綜合癥的原因，具有胎盤的缺血及基于缺氧狀態(tài)的血管內(nèi)皮障礙等。因此，在具有妊娠高血壓綜合癥的情況下，可能發(fā)生胎盤構(gòu)筑不良。其進一步的結(jié)果是，有可能發(fā)生胎兒發(fā)育不良、胎盤早期剝離、胎兒功能障礙及胎兒死亡。

在妊娠高血壓綜合癥的患者的情況下，可期待通過本發(fā)明的藥劑的給藥抑制對作為胎兒成分的滋養(yǎng)層的抗拒(一種免疫異常的抑制)、促進子宮內(nèi)膜螺旋動脈向更粗的螺旋動脈的再構(gòu)筑。因此，能夠促進良好的胎盤的構(gòu)筑。

＝藥劑的給藥對象的年齡＝

給藥對象的年齡是能夠妊娠的年齡即可。在給藥對象是人體的情況下，例如，優(yōu)選16歲～50歲，更優(yōu)選16歲～45歲，進一步優(yōu)選16歲～40歲。如果是16歲以上，則將獲得本人的同意。另外，患者是不孕的患者的情況下，如果是40歲以下，則妊娠確立的可能性較高，因此能夠更高效地獲得根據(jù)本發(fā)明的藥劑的效果。給藥對象的年齡不限于此，在一例中，是30歲～45歲，33歲～43歲，33歲～41歲，33歲～39歲。

＝藥劑的給藥對象的更優(yōu)選的一例＝

優(yōu)選地，上述的藥劑的給藥對象不具有上述的妊娠狀態(tài)不良以外的疾病、疾患或狀態(tài)，更優(yōu)選地，具體地，不具有粘膜下肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、子宮腔粘連、子宮中的先天性異常及輸卵管積水等與子宮有關(guān)的疾病、疾患或異常。另外，優(yōu)選地，不具有因為本發(fā)明的藥劑受到嚴重的影響的風(fēng)險很高的疾病、疾患或狀態(tài)。作為這種疾患等，例如，可列舉出慢性感染癥等。

＝藥劑的給藥對象和th1/th2細胞比率＝

另外，在一個實施方式中，也可以確定上述的藥劑的給藥對象的th1/th2細胞比率，用于向該對象的藥劑的給藥的要否、藥劑的給藥量的確定(該過程的細節(jié)也參照實施例)。例如，藥劑的給藥對象的th1/th2細胞比率與健康者相比升高。在更具體的一例中，th1/th2細胞比率與健康者相比升高10％～800％的對象可以是本發(fā)明的藥劑給藥的優(yōu)選的對象，升高10％～400％的對象可以是本發(fā)明的藥劑給藥的更優(yōu)選的對象，升高10％～200％的對象可以是本發(fā)明的藥劑給藥的進一步優(yōu)選的對象。作為具體的th1/th2細胞比率的數(shù)值，th1/th2細胞比率為10～50的對象可以是本發(fā)明的藥劑給藥的優(yōu)選的對象，th1/th2細胞比率為10～40的對象可以是本發(fā)明的藥劑給藥的更優(yōu)選的對象，th1/th2細胞比率為10～30的對象可以是進一步優(yōu)選的本發(fā)明的藥劑給藥的對象。此外，關(guān)于下述的實施例，健康者的th1/th2細胞比率的平均值為7～8左右，接受了治療的組體的th1/th2細胞比率的最高值為30～40左右。

在此，健康者是指不伴隨有以改善為目的的妊娠狀態(tài)不良的個體，例如，以改善不孕為目的的情況時，是指至少不伴隨有不孕的個體，以改善不育為目的的情況時，是指至少不伴隨有不育的個體。優(yōu)選地，健康者是指不伴隨有以改善為目的的妊娠狀態(tài)不良且已知的其他的疾患、疾病未發(fā)病的個體(也可以是伴隨著改善目的外的妊娠狀態(tài)不良的情況)。更優(yōu)選地，健康者是指不伴隨有上述的所有的妊娠狀態(tài)不良的個體，進一步優(yōu)選地，是指不伴隨有上述的所有的妊娠狀態(tài)不良且已知的其他疾患、疾病未發(fā)病的個體。

th1/th2細胞比率的確定不特別限定，優(yōu)選在緊接進行藥劑給藥的預(yù)定日前(當(dāng)天、前天或2天前)～6個月的期間進行th1/th2細胞比率的確定，更優(yōu)選在緊接進行藥劑給藥的預(yù)定日前～3個月的期間進行th1/th2細胞比率的確定，進一步優(yōu)選在緊接進行藥劑給藥的預(yù)定日前～2個月的期間進行th1/th2細胞比率的確定，特別優(yōu)選在緊接進行藥劑給藥的預(yù)定日前～1個月的期間進行th1/th2細胞比率的確定。在更具體的一例中，在藥劑的給藥對象是接受ivf-et、icsi等治療的情況下，優(yōu)選在緊接接受治療前、接受治療兩次以前、接受治療三次以前、接受治療四次以前、接受治療五次以前或者接受治療六次以前的生理周期中，進行th1/th2細胞比率的確定，更優(yōu)選在緊接接受治療前或接受治療兩次前的生理周期中進行th1/th2細胞比率的確定，進一步優(yōu)選在緊接接受治療前的生理周期中進行th1/th2細胞比率的確定。此外，考慮到生理周期對免疫狀態(tài)產(chǎn)生的影響，優(yōu)選對健康者和藥劑給藥的對象在生理周期上的相同的時刻進行th1/th2細胞比率的確定。另外，優(yōu)選在生理周期上的低體溫期(月經(jīng)～排卵)進行th1/th2細胞比率的確定。

未特別限定，但更具體地，例如，對于伴隨有不孕的對象的th1/th2細胞比率的確定，可在至少受精卵或移植胚胎將要著床的優(yōu)選1或2日前～180日前的期間、更優(yōu)選1或2日前～60日前的期間、進一步優(yōu)選2日前～30日前的期間且進行藥劑給藥的預(yù)定日前進行。不特別限定，但是更具體地，例如，對于可能伴隨有不孕以外的妊娠狀態(tài)不良(不育等)的對象的th1/th2細胞比率的確定，可在妊娠確認后的優(yōu)選0日～60日的期間、更優(yōu)選0日～30日的期間、進一步優(yōu)選0日～20日或0日～15日的期間、特別優(yōu)選0日～10日的期間且進行藥劑給藥的預(yù)定日前進行。

th1/th2細胞比率也可以是藥劑的給藥對象的體內(nèi)的任一組織中的值，但優(yōu)選是末梢血中的值。

＝藥劑的給藥對象的特別具體的一例＝

＜不孕癥＞

特別優(yōu)選的患者的一例是與下述1)～2)相符的患者，更優(yōu)選地，與3)也相符，進一步優(yōu)選地，與4)～6)也相符。

1)未確認明顯的原因的重癥不孕癥例中，進行了四次以上可確認形態(tài)良好的受精卵(可以是新鮮胚胎、冷凍胚胎、早期胚胎、囊胚)的胚胎移植仍未能實現(xiàn)科學(xué)的妊娠(hcg的升高)的著床障礙的患者。

2)未滿40歲的患者。

3)對于對象者在妊娠前的身體狀況良好的低體溫期(月經(jīng)～排卵)進行免疫學(xué)檢查(篩查)并且th1/th2細胞比率為高值的患者。

4)沒有具有活動性的感染癥的患者。

5)沒有hbv、hcv、hiv的持續(xù)感染癥的患者。

6)對他克莫司的成分沒有過敏癥的既往史的患者。

＜不育癥＞

特別優(yōu)選的患者的一例是與下述1)或2)相符的患者(其中包含原因不明的不育癥的患者)，更優(yōu)選地，與3)～5)也相符。

1)在血清學(xué)檢查中未確認與不育有關(guān)的明顯的異常所見的重癥不育癥患者。

2)對治療有抗性的習(xí)慣性流產(chǎn)(包含抗磷脂抗體綜合癥)的患者。

3)沒有具有活動性的感染癥的患者。

4)沒有hbv、hcv、hiv的持續(xù)感染癥的患者。

5)對他克莫司的成分沒有過敏癥的既往史的患者。

＜全體＞

不特別地限定，但是也可以從本發(fā)明的藥劑的給藥對象中排除在妊娠狀態(tài)的改善以外的醫(yī)療上的目的中持續(xù)地接受他克莫司或其衍生物的給藥的患者(例如，接受器官移植，他克莫司被持續(xù)給藥的患者等)。

(給藥路徑/給藥方法)

本發(fā)明的藥劑的給藥方法(給藥路徑)可根據(jù)給藥對象的年齡、狀態(tài)、及治療期間等適當(dāng)確定。具體而言，可以是經(jīng)口給藥和非經(jīng)口給藥的任一者，但優(yōu)選經(jīng)口給藥(實施例中，是經(jīng)口給藥)。作為非經(jīng)口給藥，可列舉出注射給藥、作為栓劑的給藥、作為經(jīng)皮吸收型制劑的給藥等方法。作為注射給藥的種類，例如，可列舉出肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、及局部注射。另外，本發(fā)明的藥劑可經(jīng)皮、經(jīng)鼻、經(jīng)陰道及經(jīng)由直腸等各種路徑給藥。

(給藥量)

藥劑的給藥量根據(jù)接受藥劑給藥的患者的疾病、疾患或狀態(tài)的種類、嚴重度、各種檢查結(jié)果及藥劑的有效成分的種類等不同。另外，藥劑的給藥量依據(jù)將被處置的患者的年齡、基于本發(fā)明的治療方法的治療的實施次數(shù)、以及各種檢查結(jié)果等也不同。作為一例，本發(fā)明的藥劑從藥劑中含有的有效成分的含量的觀點出發(fā)，以與活體移植及免疫系疾患等治療中用作免疫抑制劑的情況下的給藥量相比低劑量的劑量被給藥。例如，在藥劑的給藥對象是人體的情況下，不特別限定，但是，每日，作為有效成分的量，優(yōu)選地，給藥0.5～5mg或1～5mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地，給藥0.5～4.5mg或1～4.5mg的范圍內(nèi)的量，進一步優(yōu)選地，給藥0.5～4mg或1～4mg的范圍內(nèi)的量，更進一步優(yōu)選地，給藥0.5～3.5mg或1～3.5mg的范圍內(nèi)的量，更進一步優(yōu)選地，給藥0.5～3mg或1～3mg的范圍內(nèi)的量，最優(yōu)選地，給藥1～2mg的范圍內(nèi)的量。此外，以下，只要沒有特別說明，與藥劑的給藥量有關(guān)的記載適應(yīng)于人體是對象的情況，給藥量被表示為有效成分的量。

另外，不特別限定，但是，在經(jīng)口進行給藥的情況下，每日的給藥次數(shù)優(yōu)選為1～4次，更優(yōu)選為1～3次，進一步優(yōu)選為1～2次。

另外，根據(jù)需要，也可以預(yù)先確定上述的th1/th2細胞比率(也參照實施例)，并基于該比率的數(shù)值確定給藥量。另外，在包含不育治療的妊娠中和分娩后某一期間以上的持續(xù)給藥中，也可以在治療期間中以一定的間隔測量th1/th2細胞比率，針對每次重新測量，基于測量結(jié)果，確定給藥量。

作為基于th1/th2細胞比率的數(shù)值確定給藥量的一例，在th1/th2細胞比率為10以上的情況下，每日，作為有效成分的量，優(yōu)選地，給藥0.5～5mg或1～5mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地，給藥0.5～4.5mg或1～4.5mg的范圍內(nèi)的量，進一步優(yōu)選地給藥0.5～4mg或1～4mg的范圍內(nèi)的量，進一步更優(yōu)選地給藥0.5～3.5mg或1～3.5mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地給藥0.5～3mg或1～3mg的范圍內(nèi)的量，最優(yōu)選地給藥1～2mg的范圍內(nèi)的量。作為其他的例子，在th1/th2細胞比率在10以上13以下的范圍內(nèi)的情況下，每日，作為有效成分的量，優(yōu)選地，給藥0.5～3mg或1～3mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地，給藥0.5～2mg或1～2mg的范圍內(nèi)的量，進一步優(yōu)選地，給藥0.5～1mg的范圍內(nèi)的量。作為其他的例子，在th1/th2細胞比率在超過13小于等于16(例如，小于等于15.8)的范圍內(nèi)的情況下，每日，作為有效成分的量，優(yōu)選地，給藥0.5～4mg或1～4mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地，給藥0.5～3.5mg或1～3.5mg的范圍內(nèi)的量，進一步優(yōu)選地，給藥1～3mg或1.5～2.5mg的范圍內(nèi)的量。作為其他的例子，在th1/th2細胞比率為15以上的情況下(例如，超過15.8的情況下)，每日，作為有效成分的量，優(yōu)選地，給藥0.5～5mg或1～5mg的范圍內(nèi)的量，更優(yōu)選地，給藥0.5～3.5mg或1～3.5mg的范圍內(nèi)的量，進一步優(yōu)選地，給藥2～3.5mg或2.5～3.5mg的范圍內(nèi)的量。

另外，根據(jù)進行了本發(fā)明的改善方法的次數(shù)(妊娠的次數(shù))，也可增加藥劑的給藥量。例如，在不孕的治療(改善的一種方式)中，每次追蹤治療次數(shù)，使每日的給藥量比上次治療時的給藥量優(yōu)選地遞增0.5～3mg(有效成分的量。以下相同)，更優(yōu)選地遞增0.5～2mg，進一步優(yōu)選地遞增0.5～1mg。即，針對最初的治療期間的開始至結(jié)束為止給藥的藥劑的每日的給藥量，使最初的治療期間之后進行的第二次治療期間中的每日的給藥量增加0.5～3mg，在直至妊娠成功為止的每單一的治療期間中每次重復(fù)上述操作。

不孕的治療(改善的一種方式)中治療次數(shù)優(yōu)選地允許2次～5次的重復(fù)，更優(yōu)選地允許2次～4次的重復(fù)。此外，在治療的重復(fù)中，優(yōu)選地，最終的治療期間結(jié)束時每日的給藥量不超過本發(fā)明的治療方法中優(yōu)選的給藥量(一日，有效成分量5mg為止)。

另外，在不育的治療(改善的一種方式)中，也可以在妊娠期間中，每隔一定期間測量th1/th2細胞比率，每當(dāng)th1/th2細胞比率升高時，使每次每日的給藥量優(yōu)選地遞增0.5～3mg(有效成分的量。以下相同)，更優(yōu)選地遞增0.5～2mg，進一步優(yōu)選地遞增0.5～1mg。

此外，上述的給藥量是可適用于女性全體的數(shù)值，但是，在極端偏離標準體重的女性(例如，體重未滿45kg的女性或超過75kg的女性)作為對象的情況下，也可以將上述給藥量除以60(kg)求出每kg體重的給藥量，根據(jù)對象的實際體重調(diào)整實際的給藥量。

另外，在使用包含雷帕霉素或其衍生物作為有效成分的藥劑的情況下，可設(shè)定與該有效成分的種類相對應(yīng)的適當(dāng)?shù)慕o藥量，但是，作為一例，除應(yīng)用上述的給藥量以外，也可以采用應(yīng)用上述的給藥量乘以2/3得到的給藥量的方式。在使用包含環(huán)孢菌素或其衍生物作為有效成分的藥劑的情況下，可設(shè)定與該有效成分的種類相對應(yīng)的適當(dāng)?shù)慕o藥量，但是，作為一例，也可以采用應(yīng)用作為有效成分的量每日1000mg以下的給藥量、優(yōu)選地60mg以下的給藥量的方式。

(藥劑的給藥的時期及期間)

本發(fā)明的藥劑的給藥的時期及期間根據(jù)成為改善的對象的疾病、疾患或狀態(tài)不同。在人體對象伴隨有不孕的情況下，優(yōu)選地，在至少受精卵或移植胚胎向子宮內(nèi)膜的著床的優(yōu)選1或2日前～60日前、更優(yōu)選2～30日前、進一步優(yōu)選2～15日前至著床的優(yōu)選0～100日后、更優(yōu)選0～15日后(0～1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15日后)為止的期間中被給藥。在對象是接受了人工受精或體外受精的治療的患者的情況下，在精子注入或胚胎移植的優(yōu)選1或2日前～60日前、更優(yōu)選2～30日前、進一步優(yōu)選2～15日前至精子注入或胚胎移植的優(yōu)選0～100日后、更優(yōu)選0～15日后(0～1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15日后)為止的期間中進行。

另外，在人體對象伴隨有不育的情況下，優(yōu)選地，優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至200日后為止，更優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至300日后為止，進一步優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩為止，被連續(xù)地給藥。

另外，在人體對象具有伴隨著妊娠并發(fā)癥(妊娠高血壓綜合癥等)的危險性的情況下，優(yōu)選地，優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至200日后為止，更優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至300日后為止，進一步優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩為止，最優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩后60日為止，被連續(xù)地給藥。

另外，也可以在妊娠初期、中期及后期的各時期適當(dāng)變更給藥量。例如，也可以在妊娠初期、中期及后期、以及隨著經(jīng)過下述妊娠期間逐漸地使每日的藥劑的給藥量遞減0.5～1mg?；蛘?，也可以是藥劑僅在妊娠初期給藥并在中期以后中止給藥的方式，也可以是直至妊娠中期為止持續(xù)給藥但后期以后中止給藥的方式，也可以是藥劑僅在妊娠初期及后期給藥并在中期停止給藥的方式。

另外，也可以根據(jù)妊娠中的各期間的妊娠狀態(tài)的檢查結(jié)果是否良好，調(diào)節(jié)連續(xù)的給藥期間。如果是妊娠確立100日后以后，則母體進入妊娠穩(wěn)定期。因此，對于藥劑給藥量，只要可獲得充分的治療效果，則盡可能減少給藥量，由此能夠?qū)⑺巹δ阁w及胎兒的副作用的影響抑制到最低限，能夠?qū)o藥對象的身體上的負擔(dān)保持在最小。

[2.改善妊娠狀態(tài)的方法]

使用根據(jù)本發(fā)明的藥劑的改善妊娠狀態(tài)的方法(其一種方式是治療妊娠狀態(tài)不良的方法)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。以下，對改善本發(fā)明的妊娠狀態(tài)的方法進行詳細說明。

一個實施方式中用于改善本發(fā)明的妊娠狀態(tài)的方法包含將根據(jù)本發(fā)明的藥劑向?qū)ο蠼o藥的工序(給藥工序)。妊娠狀態(tài)的改善是指將不良的妊娠狀態(tài)向良好的狀態(tài)或正常的狀態(tài)改善的含義，是還包含防止成為不良的妊娠狀態(tài)的概念。作為不良的妊娠狀態(tài)的具體例，可列舉出不孕、不育及妊娠高血壓綜合癥等妊娠并發(fā)癥等。妊娠狀態(tài)不良的概念中包含的疾病、疾患及狀態(tài)如在上述的[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]的(藥劑的給藥對象)的項目中所說明的。另外，被給藥的藥劑的有效成分包含由上述通式(i)表示的化合物或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分，或者包含環(huán)孢菌素、雷帕霉素或它們的衍生物(還包含其藥學(xué)上允許的鹽等)作為有效成分。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的藥劑，也包含上述的[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]的項目中所說明的成分。另外，應(yīng)用本發(fā)明的治療方法的對象如上述的[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]的(藥劑的給藥對象)的項目中所說明的。

另外，在進一步的實施方式中，本發(fā)明的治療方法除給藥工序以外，也可以還包含1)測量th1/th2細胞比率的工序、和/或2)進行人工受精(精子向子宮的注入)、或者將在體外受精中得到的受精卵或胚胎向子宮內(nèi)膜移植的工序。以下，對各工序進行更詳細的說明。

(給藥工序)

給藥工序是將本發(fā)明所涉及的藥劑向給藥對象施藥的工序。

本發(fā)明的方法是用于改善人體對象中的不孕的方法(包含治療方法)時，優(yōu)選地，給藥工序中的藥劑給藥期間在至少受精卵或移植胚胎向子宮內(nèi)膜著床的優(yōu)選1或2日前～60日前、更優(yōu)選2～30日前、進一步優(yōu)選2～15日前至著床的優(yōu)選0～100日后、更優(yōu)選0～15日后為止的期間中被給藥。在人體對象是接受了人工受精或體外受精的治療的患者的情況下，在精子注入或胚胎移植的優(yōu)選1或2日前～60日前、更優(yōu)選2～30日前、進一步優(yōu)選2～15日前至精子注入或胚胎移植的優(yōu)選0～100日后、更優(yōu)選0～15日后為止的期間中進行。

在本發(fā)明的方法是用于改善人體對象中的不育的方法(包含治療方法)時，給藥工序中的藥劑給藥期間優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至200日后為止，更優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至300日后為止，進一步優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩為止。

在本發(fā)明的方法是用于改善人體對象中的妊娠高血壓綜合癥等妊娠并發(fā)癥(還包含預(yù)防)的方法時，給藥工序中的藥劑給藥期間優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至200日后為止，更優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至300日后為止，進一步優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩為止，最優(yōu)選妊娠確立的確認當(dāng)日至分娩后60日為止。

上述期間中的給藥可以是連續(xù)的(即，在期間中每日給藥)，也可以是間斷的(即，期間中也可以包含不給藥日)，具體而言，應(yīng)用[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]的(藥劑的給藥的時期及期間)的記載。此外，作為間斷的給藥的具體的一例，可列舉出具有每隔規(guī)定的天數(shù)(1日、2日、3日)的規(guī)律性進行給藥的方式、設(shè)置一次或多次包含多日的規(guī)定的中止期間進行給藥的方式等。

給藥量如[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]的(給藥量)的項目中所記載的。

(測量th1/th2細胞比率的工序)

另外，在進一步的實施方式中，本發(fā)明的方法也可以還包含測量th1/th2細胞比率的工序。所確定的th1/th2細胞比率如[1.藥劑(醫(yī)藥組合物)]欄中記載的，也可以用于向該對象的藥劑的給藥的要否、藥劑的給藥量的確定。測量th1/th2細胞比率的工序在給藥工序前進行。在此，給藥工序前也指一個給藥期間中的給藥與給藥之間，但也指一個給藥期間(治療期間)中的最初的給藥之前。

在本發(fā)明的方法是用于改善不孕的方法時，測量th1/th2細胞比率的工序例如可在受精卵或移植胚胎著床的優(yōu)選1或2日前～180日前為止的期間、更優(yōu)選1或2日前～60日前為止的期間、進一步優(yōu)選2日前～30日前為止的期間、且進行藥劑的給藥的預(yù)定日前進行。

在本發(fā)明的治療方法是用于改善不育、包含妊娠高血壓綜合癥等妊娠并發(fā)癥的不孕以外的妊娠狀態(tài)不良的治療方法時，測量th1/th2細胞比率的工序可在妊娠確認后的優(yōu)選0日～60日的期間、更優(yōu)選0日～30日的期間、進一步優(yōu)選0日～20日或0日～15日的期間、特別優(yōu)選0日～10日的期間、且進行藥劑的給藥的預(yù)定日前進行。

(進行人工受精或者將在體外受精中得到的受精卵或胚胎向子宮內(nèi)膜移植的工序)

當(dāng)應(yīng)用使用根據(jù)本發(fā)明的藥劑的改善妊娠狀態(tài)的方法時，對象(包含人體對象)也可以接受人工受精(精子向子宮的注入)的治療或者接受將在體外受精中得到的受精卵或胚胎向子宮內(nèi)膜移植的治療。與接受這種治療進行著床的受精卵或移植胚有關(guān)的對妊娠狀態(tài)的改善是本發(fā)明的特別優(yōu)選的一個方式。作為體外受精的具體的方法，可列舉出ivf-et、icsi等方法。作為ivf-et，還可列舉出對將新鮮的胚胎用于移植的新鮮胚胎移植(新鮮et)及收集后冷凍保存后的胚胎進行解凍而用于移植的解凍胚胎移植(fet)，其中也優(yōu)選接受fet。通過本發(fā)明的藥劑的給藥，能夠提高接受這些治療的對象的妊娠成功及分娩的效率，還能夠抑制妊娠并發(fā)癥的發(fā)病等。

但是，具有不孕或不育的對象中的妊娠的成功也可以是基于自然妊娠的妊娠的成功，改善自然妊娠中的妊娠狀態(tài)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

[4.其他的方式]

另外，本發(fā)明中，用于改善妊娠狀態(tài)的藥劑的制造中的、選自上述的化合物(i)、雷帕霉素或其衍生物、環(huán)孢菌素或其衍生物、及其藥學(xué)上允許的鹽的至少一種化合物的使用也被包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

[5.總結(jié)]

即，本發(fā)明的范圍中包含以下的實施例。

1)包含由上述通式(i)表示的化合物(化合物(i))或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分的用于改善妊娠狀態(tài)的藥劑。

2)如1)所述的藥劑，其中，上述化合物是他克莫司或其藥學(xué)上允許的鹽。

3)如1)或2)所述的藥劑，其中，改善由于免疫異常引起的妊娠狀態(tài)不良。

4)如1)～3)中任一項所述的藥劑，其中，改善選自由不孕、不育、及妊娠高血壓綜合癥組成的組中的至少一種妊娠狀態(tài)的不良。

5)如4)所述的藥劑，其中，上述不孕和不育是伴隨有自身免疫疾患的不孕和不育。

6)如5)所述的藥劑，其中，上述自身免疫疾患是抗磷脂抗體綜合癥。

7)如1)～6)中任一項所述的藥劑，其中，作為上述有效成分的量，每日對治療的對象給藥5mg以下。

8)如7)所述的藥劑，其中，上述有效成分的量在每日1mg以上3mg以下的范圍內(nèi)。

9)如1)～8)中任一項所述的藥劑，其中，對與健康者相比th1/th2細胞比率升高的對象給藥。

10)如1)～9)中任一項所述的藥劑，其中，對接受通過體外受精得到的胚胎的移植的對象給藥。

11)如1)～9)中任一項所述的藥劑，其中，在以作為妊娠狀態(tài)的不良的不孕為對象的情況下，在至少受精卵或移植胚胎向子宮內(nèi)膜著床的1日前或2日前至著床后0日的期間中給藥，在以不孕以外的妊娠狀態(tài)的不良為對象的情況下，在至少妊娠確立至第200日為止的期間中給藥。

12)一種改善妊娠狀態(tài)的方法，包含藥劑的給藥的工序，上述藥劑是包含上述化合物(i)或其藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分的用于改善妊娠狀態(tài)的藥劑。

13)如12)所述的方法，上述藥劑通過上述2)～11)中記載的任一方式或形式給藥。

實施例

[實施例1]

＜本實施例的課題＞

發(fā)明人對于針對t輔助(th)1/th2細胞因子產(chǎn)生細胞的比率(以下，也稱作“th1/th2細胞比率”)高的、反復(fù)著床失敗(rif)的患者的使用了他克莫司的免疫抑制治療的效果進行了評價。

＜在本實施例中使用的研究的方法＞

該研究是在杉山診所在2011年11月至2013年10月的期間針對末梢血中的th1(cd4+/ifn-γ+)/th2(cd4+/il-4+)細胞比率高的rif患者(n＝42)進行的與治療有關(guān)的預(yù)見性的隊列研究。對25個患者使用他克莫司進行治療(治療組)，對17個患者不進行治療(對照組)。

對治療組，在胚胎移植(et)的2日前至妊娠測試日為止，共計16日的期間，持續(xù)進行他克莫司的給藥。他克莫司的一日給藥量(1～3mg)基于th1/th2細胞比率確定。

＜結(jié)果＞

治療組的醫(yī)學(xué)上的妊娠率為64.0％，是與對照組的結(jié)果(0％)相比顯著高的結(jié)果(p＜0.0001)。在治療組中，流產(chǎn)率為6.3％，生存出生率為60.0％(p＜0.0001)。在治療組中，未觀察到基于他克莫司的嚴重的副作用。任一患者在妊娠期間中均未發(fā)生分娩上的并發(fā)癥。

＜結(jié)論＞

通過使用了他克莫司的免疫抑制治療，改善了反復(fù)著床失敗且末梢血中的th1/th2細胞比率高的女性的分娩成果。

(介紹)

近年來，在全世界體外受精(ivf)和胚移植(et)的發(fā)生率提高。伴隨于此，包含反復(fù)著床失敗的經(jīng)歷多次ivf的失敗的女性的數(shù)量增加。進行ivf/et時，在受精后2～5日的期間，將胚胎向子宮腔移植。作為所謂的半異體移植片(semi-allograft)的胚胎伴隨著母體側(cè)的免疫耐受的確立，成功地著床于母體的脫落膜，由此妊娠確立(文獻2)。著床時適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)的確立是成功著床的關(guān)鍵。因此，可認為免疫上的病因?qū)W在ivf/et后的rif中發(fā)揮重要的作用。

t輔助(th)1/th2細胞例如在免疫排斥、免疫耐受等免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用(文獻3)。妊娠與th2優(yōu)勢相關(guān)聯(lián)，th1免疫反應(yīng)與胚胎的排斥相關(guān)聯(lián)通常一致(文獻4、5)?？烧J為胚胎的排斥的根源上的機制與同種移植中的排斥反應(yīng)類似(文獻6)。ivf/et的期間中被移植的胚胎根據(jù)與同種移植的排斥反應(yīng)以及同樣的免疫反應(yīng)，可能著床失敗。

在過去幾十年中，移植片的存活率被顯著改善(文獻7)。這種成功大部分歸因于新型的免疫抑制劑的開發(fā)。他克莫司(普樂可復(fù)、安斯泰來制藥(東京))是在同種異體的器官移植后使用的主要的免疫抑制劑之一，用于減小接受移植的患者的免疫系統(tǒng)的對同種的響應(yīng)性，減小所移植的器官被排斥的風(fēng)險(文獻8)。他克莫司被報告出，通過抑制由同種抗原引起的淋巴細胞的增殖，細胞毒性t細胞的生成、il-2受體的表達及il-2及ifn-γ等來自t細胞的可溶性介質(zhì)的產(chǎn)生，抑制對同種移植片的免疫排斥，促進其生長(文獻9)。他克莫司被報告出，雖然是與不同的t淋巴細胞亞組有關(guān)的癥狀，但有效地控制移植片抗宿主之間的疾患、或者風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎那樣的其他的免疫上的不良情況(文獻10、11)。伴隨有rif的女性具有伴隨有末梢血中的升高的th1/th2細胞比率的增強的th1免疫反應(yīng)(文獻4)。因此，他克莫司那樣的免疫抑制劑具有改善具有art(生殖輔助醫(yī)療)周期后的rif的病例的女性、特別是展示增強的th1免疫響應(yīng)的女性的著床率及妊娠結(jié)果的可能性。在該研究中，本發(fā)明人對他克莫司對伴隨有rif且伴隨有末梢血中的升高的th1/th2細胞比率的女性的治療效果進行了研究。

＜材料及方法＞

(研究的對象組)

將杉山診所(東京、日本)的生殖醫(yī)療科中具有ivf/et周期后5次以上的rif的病例的全部81個患者在2011年11月～2014年2月期間持續(xù)地登記到本研究中。本研究被杉山診所的院內(nèi)審查會認可。從所有的患者中取得了在參加本研究之前簽名的知情同意書。

對于成為對象的患者，以能夠進行ivf/et以及具有將形態(tài)學(xué)上且發(fā)育學(xué)上達到良好品質(zhì)的胚胎向適當(dāng)準備的子宮內(nèi)膜(子宮內(nèi)膜的厚度為8mm以上)移植的ivf/et周期失敗5次以上的經(jīng)歷為條件進行選擇?；颊咴谥笖?shù)art周期(indexartcycle)前，通過經(jīng)陰道超聲波檢查、輸卵管疏通性檢查以及子宮鏡檢查進行了評價。參加者中，沒有具有粘膜下肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、子宮腔粘連、子宮中的先天性異?；蜉斅压芊e水的患者。另外，這些參加者中，沒有具有自身免疫疾患的病例。另外，已妊娠的女性或者呈現(xiàn)慢性的醫(yī)學(xué)癥狀或炎癥性癥狀的女性從對象中排除。在3個月以內(nèi)在上次的ivf周期中發(fā)生了流產(chǎn)或者接受了ivf周期或者接受了疫苗接種的女性從對象中排除。伴隨有后天性或先天性血栓形成傾向的女性從對象中排除。

出于評價th1/th2細胞比率的基準值的目的，在進入指數(shù)art周期前的、生理第5日(周期日：cd)～第10日的期間采血。42個患者具有升高的th1/th2細胞比率(10.3以上)，39個患者具有正常的th1/th2細胞比率(小于10.3)。利用具有通過自然妊娠或使用了丈夫的精子的人工受精正常地分娩的經(jīng)歷的28名女性，確立了正常的th1/th2細胞比率的范圍。在生理周期的cd5(生理第5日)～cd10的期間采血。通過平均值+1標準偏差法(meanplusonestandarddeviation)確定th1/th2細胞比率的級別，將等于10.3或超過10.3的th1/th2細胞比率分類為升高的th1/th2細胞比率。

(th1細胞及th2細胞的分析)

出于評價th1/th2細胞比率的基準值的目的，采共計10ml的靜脈血。通過檢測細胞內(nèi)γ干擾素(ifn)-γ及il-4的產(chǎn)生，確定th1細胞及th2細胞。

淋巴細胞的特異的染色通過將全血以與抗-cd4-pc5或抗-cd8-pc5-綴合的單克隆抗體(mabs)(beckmancoulter,fullerton,ca,usa)培養(yǎng)來進行。通過溶血去除紅血球(rbcs)(使用facs裂解液；bectondickinson,bd134生物科學(xué),franklinlake.nj,usa)，使用流式細胞儀(facscalibur；bectondickson)分析淋巴細胞。將活化的全血樣本使用抗-cd4-pc5-綴合的mabs進行表面染色之后，按照制造者的使用說明書，依次進行rbc的溶血、以及使用了fastimmune(商標)ifn‐γ‐fitc/il‐4‐pe(bectondickinson)的特異的細胞內(nèi)染色。th1細胞被規(guī)定為伴隨著細胞內(nèi)ifn-γ，但是不伴隨有細胞內(nèi)il-4的cd4⁺淋巴細胞。th2被檢測為伴隨有細胞內(nèi)il-4，但是不伴隨有細胞內(nèi)ifn-γ的cd4⁺淋巴細胞。將細胞內(nèi)ifn-γ陽性的th細胞相對于細胞內(nèi)il-4陽性的th細胞的比例表示為th1/th2細胞比率。

(基于他克莫司(普樂(注冊商標))的治療)

索引ivf/et周期的期間，具有升高的th1/th2細胞因子比率(10.3以上)的42個患者中，對25人用他克莫司(普樂(注冊商標)、安斯泰來制藥、東京)進行治療(治療組)，剩余的患者(n＝17)不進行治療(對照組)。治療組的患者從et的2日前開始他克莫司的給藥直至妊娠測試為止，總計16日期間，持續(xù)給藥。他克莫司的每日的給藥量根據(jù)th1/th2細胞比率的升高的程度，設(shè)為1～3mg/日。即，th1/th2細胞比率略微升高(10.3以上且小于13.0)的患者(n＝12)每日用1mg的他克莫司進行了治療。th1/th2細胞比率平穩(wěn)升高(超過13.0小于15.8)的患者(n＝8)每日用2mg的他克莫司進行了治療。th1/th2細胞比率大幅升高(超過15.8)的患者(n＝5)每日用3mg的他克莫司進行了治療。

(ivf-et治療)

卵巣的刺激和取卵(opu)按照發(fā)明人的先前報道(文獻12)如通常那樣進行。本發(fā)明人的緩和的刺激方案如下所述：針對患者，每日將50mg的克羅米芬酸鹽(serophen(注冊商標)、merckserono,tokyo)在生理周期的第3日～第7日的期間的5天內(nèi)進行給藥。針對該患者，進一步，將225國際單位(iu)的rec-fsh(gonal‐f(注冊商標),merkserono,tokyo，)在生理周期的第4日、第6日及第8日進行給藥。在生理周期的第10日優(yōu)勢卵泡(dominantfollicles)達到直徑17mm以上的階段，注射10,000iu的人體絨毛膜促性腺激素(hcg；gonadotropin,mochida,tokyo)或者經(jīng)鼻給藥300μg的布舍瑞林醋酸鹽(buserecur,fujipharma,tokyo)，在35小時后進行opu。基于卵胞的成長，根據(jù)需要，給藥追加的rec-fsh(每日150iu)。根據(jù)精液的參數(shù)，使用細胞質(zhì)間精子注入(icsi)或慣例的共培養(yǎng)法。使用柔軟的導(dǎo)管(kitazatoetcatheter,kitazatosupply,shizuoka,japan)經(jīng)由子宮頸將胚胎配置于患者的子宮內(nèi)。在所有的患者中，移植一個或兩個胚胎。在第3日實施新鮮et。剩余的胚胎通過玻璃化進行冷凍保存(文獻13)。在et當(dāng)日和et后第5日，出于黃體支持的目的注射125mg的羥基孕酮己酸酯或鹽(progestonedepot‐s,fujipharma,tokyo)。在et后14日后，經(jīng)口給藥醋酸氯地孕酮(lutoral(注冊商標),shionogi,osaka)。由于解凍et(fet)周期，為了子宮內(nèi)膜的調(diào)整使用自然排卵周期和激素補充周期的任一者。在使用自然排卵周期的情況下，進行et的日期為排卵后第3日。進行與新鮮et周期的情況相同的黃體激素的補充給藥。在使用激素補充周期(hrc)的情況下，用于et的子宮內(nèi)膜的調(diào)整使用綴合的雌激素(premarin0.625mg,wyeth,tokyo,japan)及經(jīng)皮雌二醇(estranatape0.72mg,hisamitsupharmaceutical,tokyo,japan)進行。這些處置在不伴隨有出血的月經(jīng)周期的第3日或第1日至尿妊娠反應(yīng)測試日為止進行。黃體激素(100mg/油中；progestonedepot‐s,fujipharmaceutical,tokyo,japan)的給藥從月經(jīng)周期的第12日開始。從開始黃體激素的處置后第3日后，將胚胎融解，并移植生存的胚胎(文獻14)。

所有的患者在卵母細胞回收后3日后，接受了一個或兩個形態(tài)上良好品質(zhì)的胚胎(mges)的移植。由于冷凍胚胎周期，將日數(shù)3日的解凍胚胎在自然排卵周期中的排卵后3日后或hrc中的黃體酮的給藥后3日后移植。mges被定義為在卵母細胞回收后3日后的時間點具有7以上的卵裂球且斷裂的發(fā)生未滿10％(文獻13)。妊娠測試在et后14日后實施。臨床的妊娠被判定為et后21日后通過經(jīng)陰道的超音波檢查確認了胚囊的發(fā)育的情況。在妊娠的第12周，通過經(jīng)陰道的超聲波檢查觀察到正常的胎兒時，判定為妊娠的繼續(xù)。本研究的第一個成果和第二個成果分別是臨床上的妊娠和新生兒的分娩。

(統(tǒng)計學(xué)上的分析)

統(tǒng)計學(xué)上的分析使用statview,版本5(sasinstituteinc.,cary,nc)進行。連續(xù)變量通過魏氏的符號秩檢驗分析(wilcoxonsignedranktest)。分類變量通過χ2分析或費舍爾的準確概率檢驗所暗示的方法分析。在概率小于0.05的情況下，被認為是統(tǒng)計上存在差異。

＜結(jié)果＞

(研究組)

年齡、分娩及不孕的經(jīng)歷在治療組和對照組之間沒有差異(表1)。治療組的平均年齡是36.2±2.5(平均值±sd)，與對照組(36.1±4.1)相同。兩個組中的art治療的指標相同。治療組中的大約1/4的患者具有妊娠測試為陽性但未進行新生兒分娩這樣的經(jīng)歷。對照組也觀察到相同的傾向。治療組中的直至目前為止的et的嘗試次數(shù)、所移植的胚胎的數(shù)量及所移植的mges的數(shù)量由平均值和標準差(sd)表示，分別是5.8±2.9、8.6±5.8及5.0±2.1，這些數(shù)值與對照組(分別是5.9±2.7、7.4±3.4及4.9±2.0)相比不具有重要的差異。

(th1/th2細胞比率)

th1細胞及th2細胞的分析的結(jié)果示于表1。產(chǎn)生ifn-γ的cd4+t淋巴細胞(th1)的百分比在治療組和對照組中分別為27.7±9.4及26.7±7.3(平均值±sd)，沒有重要的差異。產(chǎn)生il-4的cd4+t淋巴細胞(th2)的百分比在治療組和對照組中分別為1.8±0.6及1.7±0.6(平均值±sd)，沒有重要的差異。th1/th2細胞比率在治療組中為16.1±7.0，與對照組的th1/th2細胞比率(16.7±5.2)類似。

(治療結(jié)果)

基于兩個組的art的治療結(jié)果總結(jié)于表2。每一周期的所移植的胚胎的數(shù)量在治療組中為1.4±0.5，在對照組中為1.4±0.5(p＝ns)。mges的百分比在治療組中為68.9％，與對照組的數(shù)值(70.8％)相匹敵。在對照組中沒有人實現(xiàn)妊娠，在治療組中25個患者中的16個患者(64％)的妊娠測試為陽性，并向伴隨有他克莫司處置的臨床上的妊娠進展。沒有生化上的損失，著床率為45.7％(16/35)。每日他克莫司處置的量為1mg、2mg或3mg的患者分別為12人、8人、5人(參照表3)。每日他克莫司處置的量為1mg的患者的、臨床上的妊娠率和出生率分別為83.3％和83.3％。每日他克莫司處置的量為2mg或3mg的患者的、臨床上的妊娠率和出生率分別為50.0％和37.5％、40.0％和40.0％(表3)。

治療組中的已妊娠的患者中，僅一人(6.3％)在妊娠10周流產(chǎn)。通過他克莫司的處置，共計誕生15名健康的嬰兒，治療組中的出生率為60.0％。新生兒出生時的信息如下。出生時的體重為(平均值±sd)2995±400g、直至分娩為止的平均在胎天數(shù)為279.5±10.6日，出生后1分鐘和5分鐘的apgar評分分別為8.3±0.5及9.2±0.5，6個嬰兒通過剖腹產(chǎn)出生，9個嬰兒通過經(jīng)產(chǎn)道分娩出生(表4)。

在他克莫司的處置中，接受解凍et的16個女性中的12人(75％)妊娠，接受新鮮et的9個女性中的4人(44.4％)妊娠。解凍et周期與新鮮ivf-et周期相比，成功概率高，但未達到示出統(tǒng)計學(xué)上的重要性。接受fet的16個女性中的12人(75％)和接受新鮮et的9個女性中的3人(33.3％)分娩出存活的新生兒。在接受他克莫司的處置的rif的患者中，與新鮮et周期相比，fet周期具有成功率增大的傾向(p＜0.1)。

＜討論＞

反復(fù)著床失敗(rif)經(jīng)常定義為，通過在每次移植1～2個高品質(zhì)的胚胎的至少3次的連續(xù)的ivf的嘗試中，良好品質(zhì)的胚胎著床失敗(文獻15)。然而，關(guān)于定義，尚未有普遍的共識。著床與母體側(cè)的免疫響應(yīng)和源于胚胎及子宮內(nèi)膜的細胞因子、趨化因子以及各種生長因子等大量介質(zhì)有關(guān)。因此，僅僅基于例如rif那樣的不孕的經(jīng)歷將患者分類可能對于進一步的評價和處置是不適當(dāng)?shù)?。與子宮內(nèi)膜受容度有關(guān)的最近的評論被報告為，子宮內(nèi)膜受容度沒有特異的單一的生物標志物(文獻16)。本發(fā)明人在本研究中測量了子宮內(nèi)膜的厚度作為標準的不孕的檢查項目，但是對于子宮內(nèi)膜受容度的客觀的診斷表面上存在有差距。本研究中僅著眼于th1/th2細胞比率的免疫學(xué)上的主要原因也適用同樣的理由。

關(guān)于用于具有升高的th1/th2比率的rif患者的處置方式，已有若干的報告。大量免疫球蛋白g靜脈注射療法(ivig)被報告為對反復(fù)ivf及著床失敗的女性有效(文獻17～19)。ivig使末梢血中的th1/th2淋巴細胞比率降低，這一點證實了著床及妊娠的繼續(xù)中th1/th2免疫控制的重要性(文獻17)。etanercept(enbrel(注冊商標))、重組人體tnf受體【p75】:fc融合蛋白質(zhì)被報告為在具有末梢血中的升高的th1/th2比率的rif患者中有效(文獻20)。在關(guān)于ivig及阿達木單抗(humira(商標))的使用詳述的最近的論文中，在伴隨有升高的th1/th2比率的rif患者中，示出了帶來了改善的妊娠率(文獻21)。阿達木單抗是對于tnf特異的重組人體igg1單克隆抗體。然而，對于不孕的女性、妊娠中的女性，依那西普或阿達木單抗那樣的抗tnf藥的安全性未被確立(文獻22)。關(guān)于他克莫司，由于從接受了移植的對象組中積累了與妊娠安全性有關(guān)的數(shù)據(jù)，因此在本研究中發(fā)明人對于在ivf周期后經(jīng)歷了相當(dāng)數(shù)量(5次或5次以上)的rif的女性中他克莫司是否適于控制免疫反應(yīng)且改善分娩結(jié)果進行了研究。

根據(jù)直至目前為止的報告，被報告出，rif患者的相當(dāng)大的比例發(fā)生了細胞性免疫效應(yīng)機制的控制異常(文獻4、23)，在伴隨有rif的女性中，在失敗的art周期之間，發(fā)現(xiàn)了th1細胞因子響應(yīng)的增強(文獻24)。在本研究中，對產(chǎn)生il-4及ifn-γ的t細胞進行調(diào)查時，伴隨有rif(超過5次)的女性的51.9％特別地示出了th1/th2比率的升高。這一點與過去的研究一致(文獻4、23)。針對半異體的胚胎的th1免疫性的存在反映了組織移植中的移植片排斥的過程。他克莫司那樣的免疫抑制劑由于減小組織排斥的風(fēng)險，因此對于接受同種的組織移植的接受者他克莫司經(jīng)常被開處方。

他克莫司阻礙t淋巴細胞信號傳遞和il-2信號傳遞雙方(文獻20)。在該研究中，通過測量cd4+/ifn-γ陽性細胞的比率及cd4+/il-4陽性細胞的比率，檢測到th1的轉(zhuǎn)移。超生理學(xué)的劑量的ifn-γ被報告出，在動物模型中，treg細胞及th17細胞在著床部位中局部減少，由此引起著床前后的失敗(文獻25)。另外，胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白質(zhì)7(igfbp7)引導(dǎo)伴隨有il-4及il-10的下方控制的ifn-γ的上方控制，其結(jié)果是，導(dǎo)致在小鼠模型中著床的失敗(文獻26)。與其相反，ifn-γ引起著床部位中的適當(dāng)?shù)膭用}修飾(文獻27)。因此，ifn-γ的適當(dāng)?shù)谋磉_和控制對著床及妊娠的成功起著重要的作用。考慮到ifn-γ所具有的依賴于劑量的相反的生物學(xué)效應(yīng)，在本研究中，基于伴隨有rif的女性中的th1/th2細胞比率，確定他克莫司的劑量。進一步而言，針對研究對象組的他克莫司的劑量為預(yù)防的腎移植的時間表中的劑量(0.1mg/kg/日)的20～60％。所有的患者在經(jīng)受他克莫司處置并進行他克莫司處置的期間中沒有副作用的報告。但是，由于研究的規(guī)模是小規(guī)模，因此該觀察結(jié)果需要慎重地解釋。

他克莫司針對接受同種組織移植的女性在整個妊娠期間中被進行使用，作為移植的接受者的許多的女性攝取他克莫司的同時進行分娩(文獻28)。他克莫司通過與免疫因子fkbp12(fk506結(jié)合蛋白質(zhì))結(jié)合形成新的復(fù)合體，由此降低肽脯氨酰異構(gòu)酶的活性。該fkbp12-fk506復(fù)合體與鈣調(diào)磷酸酶相互作用并對之發(fā)生阻礙，其結(jié)果是，阻礙t淋巴細胞信號傳遞和il-2信號傳遞雙方(文獻29)。該活性與環(huán)孢菌素類似，但是對于急性的排斥反應(yīng)的情況，通過研究示出了，大多數(shù)情況下，與環(huán)孢菌素相比，他克莫司的使用減小了排斥反應(yīng)(文獻30)。關(guān)于對患者中的短期的免疫抑制及移植片的存活的效果，這兩種藥劑好像類似，但是他克莫司帶來更良好的血脂譜，這一點在考慮到與排斥反應(yīng)有關(guān)的預(yù)后的影響的情況下，關(guān)于移植片的存活，可能具有重要且長期的意義(文獻31)。他克莫司根據(jù)fda妊娠分類，被分類為級別c的藥劑?？紤]到rif不是危及生命的疾患，對于進行了ivf周期的女性進行級別c的藥劑的給藥應(yīng)該在進行了慎重的利益-風(fēng)險調(diào)查的基礎(chǔ)上決定。在移植后妊娠的、與女性的移植接受者有關(guān)的報告中，他克莫司對母體及胎兒/嬰兒的安全性已被確立(文獻8、32)。從妊娠期間中接受了他克莫司的腎臟移植的接受者中出生的236個嬰兒中，死產(chǎn)率為2％，新生兒死亡率為2％(文獻33)。作為有其他報告的分娩上的并發(fā)癥，32％為高血壓腎病，妊娠中的糖尿病為8％，高血壓為56％，感染癥為22％，自然流產(chǎn)為26％(文獻33)。在本研究中，伴隨有升高的th1/th2比率的rif患者的60％(n＝15)妊娠，并分娩出活著的新生兒。沒有人具有分娩上的并發(fā)癥，僅發(fā)現(xiàn)一個嬰兒有新生兒短暫呼吸急促。本研究與對接受了腎移植的組的研究之間，分娩結(jié)果產(chǎn)生差異的理由可能是由于各個研究組的原來的健康狀態(tài)的差異、他克莫司的劑量的差異、以及接受藥劑的期間的差異。這些患者在接受基于5以上的mges的et以后，甚至還不能妊娠。

他克莫司的處置在伴隨有升高的th1/th2比率的rif的女性中顯著提高了著床率、醫(yī)學(xué)上的妊娠率及生存出生率。根據(jù)我們的數(shù)據(jù)，著床期間中由他克莫司的處置得到的利益超過影響胎兒的發(fā)育的風(fēng)險。th1/th2細胞比率的評價可用作響應(yīng)使用了他克莫司的免疫抑制處置、可獲得良好的分娩結(jié)果的、用于選擇伴隨有rif的女性的生物標志物。在本研究中，關(guān)于他克莫司處置，應(yīng)用fet的患者(成功率75％)比應(yīng)用新鮮et的患者(成功率33.3％)，示出了更高的成功率。由于在fet周期中期待受容性更好的子宮內(nèi)膜，與從新鮮et周期誕生的孩子相比從解凍胚胎中誕生的孩子更健康、以及fet的成功率升高并且現(xiàn)在為與新鮮et大致相同的成功率，因此，近年來，在ivf的據(jù)點中，凍結(jié)所有(freeze‐all)戰(zhàn)略被迅速地采用(文獻27)。根據(jù)2011年的cdc報告，35歲以下的女性中的新鮮et周期的生存出生率為40％，fet周期的生存出生率為39％(文獻33)。本研究中，雖然研究組的年齡較高(平均年齡36歲)，但fet周期的成功率為75％，是關(guān)于35歲以下的女性所報告的成功率(39％)的1.9倍高(文獻27)。因此，伴隨有他克莫司的處置的fet周期也可應(yīng)用于伴隨有rif的年齡更高的患者組(超過35歲)。fet周期中的較高的醫(yī)學(xué)上的妊娠率有可能通過基于他克莫司的th1免疫的控制的效果與基于fet周期的受容性更好的子宮內(nèi)膜的組合實現(xiàn)。然而，本研究在不是隨機化比較試驗、以及樣本尺寸小的方面上存在限制。另外，未對他克莫司的處置后的、子宮內(nèi)膜的變化和末梢的免疫反應(yīng)的變化進行評價。關(guān)于他克莫司對系統(tǒng)性的免疫反應(yīng)和子宮內(nèi)膜的受容性的效果，需要進一步的研究。結(jié)論是，通過使用了他克莫司的免疫抑制處置，在伴隨有升高的th1/th2比率的rif患者中妊娠結(jié)果得到改善。將th17和t控制性細胞、以及子宮內(nèi)膜受容度考慮在內(nèi)的進一步的研究被要求相應(yīng)的細節(jié)。結(jié)論是，本研究示出了，通過他克莫司的處置，在th1免疫響應(yīng)已轉(zhuǎn)移的rif患者中，在不增大對母體的嚴重的并發(fā)癥的情況下，醫(yī)學(xué)上的妊娠率及生存出生率顯著提高。

【表1】

表1.伴隨有反復(fù)著床失敗(5次以上)且升高的th1/th2細胞比率的用他克莫司處置后的女性組(treatmentgroup：治療組)與未用他克莫司處置的女性組(controlgroup：對照組)之間的年齡、分娩經(jīng)歷、不孕經(jīng)歷及臨床上的特征

在3個月內(nèi)在上次的ivf周期中發(fā)生了流產(chǎn)或者接受了ivf周期或者接受了疫苗接種的女性從該研究中排除。

除非另外指定，否則值是平均值+1標準差。

^aart；輔助生殖技術(shù)

^bsab；自然流產(chǎn)。自上次ivf周期在3個月內(nèi)發(fā)生了流產(chǎn)的女性從該研究中排除。

^cmges；形態(tài)上良好品質(zhì)的胚胎

^dth1細胞；產(chǎn)生干擾素γ的t輔助細胞(cd3⁺/4⁺/ifn-γ⁺)

^dth2細胞；產(chǎn)生il-4t的輔助細胞(cd3⁺/4⁺/il-4⁺)

表1示出了，伴隨有反復(fù)著床失敗(5次以上)且升高的th1/th2細胞比率的用他克莫司處置后的女性組(treatmentgroup：治療組)與未用他克莫司處置的女性組(controlgroup：對照組)之間的年齡(age)、分娩經(jīng)歷、不孕經(jīng)歷及臨床上的特征。表中，“身體質(zhì)量指數(shù)(bodymassindex)”指bmi，“unexplainedinfertility”指原因不明的不孕，“maleinfertility”指男性不孕，“tubalinfertility”指輸卵管性不孕。“previouspregnancyhistory”指過去的妊娠經(jīng)歷的有(yes)/無(no)，“婚育史(obstetricalhistory)”指分娩經(jīng)歷(gravidity＝妊娠史、parity＝分娩史、sab＝自然流產(chǎn))，“previousembryotransferhistory”指過去的胚胎移植史，“numberoffailedembryotransfercycle(n)”指失敗的胚胎移植周期數(shù)，“totalnumberoftransferredembryos(n)”指移植的胚胎的總數(shù)，“totalnumberoftransferredmges(n)”指移植的mges的總數(shù)。th1/th2ratio指th1/th2細胞比率。

【表2】

表2.用他克莫司處置后的組(treatmentgroup：治療組)和未用他克莫司處置的組(controlgroup：對照組)的女性的分娩結(jié)果

rif；反復(fù)著床失敗，

^amges；形態(tài)上良好品質(zhì)的胚胎

除非另外指定，否則值是平均值+1標準差。

表2表示關(guān)于伴隨有反復(fù)著床失敗(rif)的女性，用他克莫司處置后的組(treatmentgroup：治療組)和未用他克莫司處置的組(controlgroup：對照組)的分娩結(jié)果。表中“numberoftransferredcycles”指移植周期數(shù)，“numberoftransferredembryospercycle”指每1周期所移植的胚胎數(shù)，“frozen‐thawedembryotransfer,n”指解凍胚胎移植數(shù)，“freshembryotransfer,n”指新鮮胚移植數(shù)，“percentageofmges”指mges的百分比(％)，“endometriallining”指子宮內(nèi)膜的厚度，“positivehcg(％)”指hcg陽性的百分比(％)，“implantationrate(％)”指著床率(％)，“biochemicalpregnancyrate(％)”指生化上的妊娠率(％)，“clinicalpregnancy(n)”指達到臨床上的妊娠的個體數(shù)，“clinicalpregnancyoffreshet(％)”指新鮮et的臨床上的妊娠率(％)，“clinicalpregnancyrateperet(％)”指每次et的臨床上的妊娠率(％)，“spontaneousabortionrate”指自然流產(chǎn)率(％)，“l(fā)ivebirth(n)”指生存出生數(shù)，“l(fā)ivebirthrateoffreshet(％)”指新鮮et的生存出生率(％)，“l(fā)ivebirthrateofthawedet(％)”指解凍et的生存出生率(％)，“l(fā)ivebirthrate(％)”指生存出生率(％)。

【表3】

表3.用他克莫司的各種劑量處置后的伴隨有反復(fù)著床失敗的女性(treatmentgroup：治療組)的分娩結(jié)果

表3表示用他克莫司的各種劑量(treatmentdosage：治療劑量)處置后的伴隨有反復(fù)著床失敗(rif)的女性(treatmentgroup：治療組)的分娩結(jié)果。表中，“numberofpatientstreatedwith”指用規(guī)定的劑量處置后的患者的數(shù)量，“clinicalpregnancy(n)”指達到臨床上的妊娠的個體數(shù)，“l(fā)ivebirth(n)”指生存出生數(shù)。他克莫司的劑量為1mg、2mg或3mg。

【表4】

表4.用他克莫司處置后的伴隨有多次著床失敗(5次以上)的女性的分娩及新生兒誕生的結(jié)果

除非另外指定，否則值是平均值+1標準差。

^attn；新生兒短暫性呼吸急促。

表4表示用他克莫司處置后的伴隨有多次著床失敗(5次以上)的女性的分娩及新生兒誕生的結(jié)果。表中，“numberofnewborns(n)”指出生的新生兒數(shù)，“modeofdelivery”指分娩方式為經(jīng)陰道分娩(vaginaldelivery)或剖腹產(chǎn)(cesareansection)，“gestationaldaystodelivery(days)”指妊娠日數(shù)，“birthweight”指出生體重，“height”指出生身高，“sexofnewborn”指新生兒的性別是男(boy)或女(girl)，“apgarscoreat1(or5)minutesafterbirth”指出生1分鐘(5分鐘)后的apgar評分，“umbilicalcordgasanalysis(ph)”指臍帶氣分析(ph)，“umbilicalcordlength”指臍帶長度，“obstetricalcomplications(n)”指妊娠并發(fā)癥發(fā)病的個體數(shù)，“neonatalcomplications(n)”指新生兒短暫呼吸急促(tnn)的發(fā)病有一例。

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文獻16：garrido‐gomezt,ruiz‐alonsom,blesad,diaz‐gimenop,vilellaf,simonc:fertilsteril2013；99:1078‐85.

文獻17：clarkda,coulamcb,strikerrb:jassistreprodgenet2006；23:1-13.

文獻18：virromr,wingeree,reedjl:amjreprodimmunol2012；68:218-225.

文獻19：graphouo,chiotia,pantazia,tsukourac,kontopoulouv,guorqiadoue,balafoutasc,koussoulakoss,margaritislh,varla‐leftheriotim:amjreprodimmunol2003；49:21‐29.

文獻20：mangubatcp,thakerpp,cavalcantem,kwak-kimjyh,beerae:amjreprodimmunol2001:45:24.

文獻21：wingeree,reedjl,ashoushs,el‐toukhyt,ahujas,taranissim:amjreproimmunol2011；65:610‐618.

文獻22：carterjd,ladhania,riccalr,valerianoj,vaseyfb:jrheumatol2009；36:635‐641.

文獻23：tanbk,vandekerckhovep,kennedyr,keaysd:bjog2005；112:460773‐780.

文獻24：kalue,bhaskarans,thummy,ishwanathar,croucherc,sherriffe,fordb,bansalas:amjreprodimmunol2008；59:206‐211.

文獻25：liuhy,liuzk,chaoh,liz,songz,yangy,pengjp:jinterferoncytokineres2014；34:394‐403.

文獻26：liuzk,wangrc,hanbc,yangy,pengjp:plosone2012；7:e45224.

文獻27：ashkaraa,disantojp,croyba.jexpmed2000；192:259‐270.

文獻28：ostensenm,forgerf:curropinpharmacol2013；13:470‐475.

文獻29：liuj,farmerjdjr,lanews,friedmanj,weissmani,schreibersl:cell1991；66:807‐815.

文獻30：ratht:expertopinpharmacother2013；14:115‐122.

文獻31：abou‐jaoudemm,najmr,shaheenj,nawfaln,abbouds,alhabashm,darwishm,mulhema,ojjeha,almawiwy:transplantationproceedings2005；37:4843025‐3028.

文獻32：ogiwarad:transplantationnow2004；17:451‐455.

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文獻34：wongkm,mastenbroeks,reppings:fertilsteril2014；102:49319‐26.。

[實施例2]

＜材料及方法＞

(研究的對象組)

將能夠ivf/et且具有連續(xù)3次以上的流產(chǎn)、死產(chǎn)或子宮內(nèi)胎兒發(fā)育遲緩的經(jīng)歷的女性中的、即使進行1次以上已有的治療仍未孕育的11名不育癥患者作為對象。這些患者是在事先進行的血清學(xué)的檢查中未發(fā)現(xiàn)與不育相關(guān)的明顯的異常所見的患者組。

患者在指數(shù)art周期前通過經(jīng)陰道的超聲波檢查、輸卵管疏通性檢查及子宮鏡檢查進行了評價。參加者中，沒有人具有粘膜下肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、子宮腔粘連、子宮中的先天性異常、或卵管留水。另外，妊娠的女性或呈慢性的醫(yī)學(xué)癥狀或炎癥性癥狀的女性從對象中排除。在3個月內(nèi)在上次的ivf周期中發(fā)生了流產(chǎn)或者接受了ivf周期或者接受了疫苗接種的女性從對象中排除。伴隨有后天性或先天性栓病的女性從對象中排除。

(th1細胞及th2細胞的分析)

按照實施例1中記載的方法進行。但是，患者中的th1/th2細胞比率的確定在緊接妊娠成功后(確認了妊娠成功的日期)進行。th1/th2細胞比率的級別與實施例1相同，通過平均值+1標準差法確定，將等于10.3或超過10.3的th1/th2細胞比率分類為升高的th1/th2細胞比率。

(基于他克莫司的治療)

除給藥的期間以外，與實施例1同樣地，對11名患者全體進行了基于他克莫司的治療。他克莫司的給藥量即，在th1/th2細胞比率為10.3以上且小于13.0的患者(4人)中每日為1mg，在th1/th2細胞比率超過13.0且小于15.8的患者(3人)中每日為2mg，在th1/th2細胞比率為15.8以上的患者(4人)中每日為3mg。他克莫司的給藥的期間對任一患者都是緊接通過妊娠測試確認了妊娠成功并確認了th1/th2細胞比率后至分娩為止。

(ivf-et治療)

與實施例1同樣地進行。

(統(tǒng)計學(xué)上的分析)

與實施例1同樣地進行。

＜結(jié)果＞

接受了治療的患者的特征總結(jié)示于表5。

治療結(jié)果總結(jié)示于表6。接受治療的患者11人中有8人通過足月產(chǎn)得到了健康兒。在此所示的早產(chǎn)癥例1例是在背景中記載的對現(xiàn)在正在進行的所有的治療方法有抗性的具有10次以上的流產(chǎn)經(jīng)歷的癥例。不并用其他的治療方法，通過他克莫司單獨治療實現(xiàn)了孕育。

【表5】

【表6】

[實施例3]

＜材料及方法＞

(研究的對象組)

將能夠ivf/et且上次妊娠時具有成為妊娠高血壓綜合癥的經(jīng)歷或者伴隨有妊娠高血壓綜合癥容易發(fā)病的臨床上的所見的女性作為對象。妊娠高血壓綜合癥一度發(fā)病時，在下次以后的妊娠中還反復(fù)發(fā)病的可能性非常高。

患者在指數(shù)art周期前，通過經(jīng)陰道的超聲波檢查、輸卵管疏通性檢查以及子宮鏡檢查進行了評價。另外，已妊娠的女性或者呈現(xiàn)慢性的醫(yī)學(xué)癥狀或炎癥性癥狀的女性從對象中排除。在3個月以內(nèi)在上次的ivf周期中發(fā)生了流產(chǎn)或者接受了ivf周期或者接受了疫苗接種的女性從對象中排除。伴隨有后天性或先天性患有血栓傾向的女性從對象中排除。

(基于他克莫司的治療)

與實施例2同樣地，對患者全體進行基于他克莫司的治療。他克莫司的給藥量每日為1mg～3mg。他克莫司的給藥的期間對任一患者都是緊接通過妊娠測試確認了妊娠成功后至分娩為止。此外，在以下所示的癥例1及癥例3中，在確認了妊娠成功后至妊娠中期為止，每日給藥每日3mg的他克莫司，在妊娠后期后至分娩為止，每日給藥每日2mg的他克莫司。在以下所示的癥例2中，在確認了妊娠成功后至分娩為止，每日給藥每次2mg的他克莫司。

(ivf-et治療)

與實施例2同樣地進行。

(統(tǒng)計學(xué)上的分析)

與實施例2同樣地進行。

＜結(jié)果的確認＞

在妊娠的中期～后期的期間的規(guī)定的時刻，通過是否良好地維持妊娠狀態(tài)而妊娠高血壓綜合癥不發(fā)病，評價他克莫司的給藥的效果。對大概的評價結(jié)束的情況進行介紹，如下所述。

在上次妊娠中由于妊娠高血壓綜合癥在妊娠38周發(fā)生子宮內(nèi)胎兒死亡的癥例(癥例1)通過他克莫司的給藥，血壓未升高，并在39周分娩出健康兒。另外，妊娠高血壓綜合癥發(fā)病的可能性高的不育癥且抗磷脂抗體陽性的雙胎妊娠的癥例(癥例2)也通過他克莫司的給藥，血壓未升高，并在35周分娩出健康兒(由咳嗽引起的早期破水、雙胞胎早產(chǎn))。另外，在上次妊娠時在25周出現(xiàn)浮腫在28周血壓升高而被診斷為妊娠高血壓綜合癥并在32周發(fā)生子宮內(nèi)胎兒死亡的癥例(癥例3)通過他克莫司的給藥，現(xiàn)在是34周，但完全沒有浮腫和血壓升高傾向，經(jīng)過順利。

在妊娠過程中胎兒的成長良好且母子均未發(fā)現(xiàn)異常。

本發(fā)明不限于上述的各實施方式及各實施例，而能夠在權(quán)利要求所示的范圍內(nèi)進行各種變更，對于將不同的實施方式以及不同的實施例中分別公開的技術(shù)手段適當(dāng)組合得到的實施方式，也包含在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。進一步，通過將各實施方式及各實施例中分別公開的技術(shù)手段組合，能夠形成新的技術(shù)特征。