本發(fā)明涉及一種治療癌癥干細(xì)胞的組合物，其含有葡萄糖吸收抑制劑和鈣泵抑制劑。
背景技術(shù)：
：目前在積極開發(fā)并實際用于抗癌治療的抗癌藥物，主要是靶向快速增殖的癌細(xì)胞的藥物。在使用這些藥物作為抗癌療法的情況下，似乎癌細(xì)胞在初始階段被有效殺傷了，表明癌癥得到了治療。然而，保留在體內(nèi)的癌癥干細(xì)胞沒有被清除，因此容易出現(xiàn)癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。最終，常常出現(xiàn)對現(xiàn)有的抗癌療法產(chǎn)生抗性這樣的問題?；诖嗽?，癌癥干細(xì)胞成為最近研究的熱點。眾所周知，癌癥干細(xì)胞是一種具有無限自我更新能力的癌細(xì)胞，這一點與普通干細(xì)胞相同，與普通癌細(xì)胞不同的是其增殖緩慢，癌癥干細(xì)胞也具有自我更新或分化的能力，這是干細(xì)胞的特征。而且，已知這些癌癥干細(xì)胞具有與先前所知的癌細(xì)胞不同的機(jī)制。然而，對癌癥干細(xì)胞還沒有積極地進(jìn)行研究，尤其是對靶向癌癥干細(xì)胞用于治療癌癥干細(xì)胞的藥物的研究幾乎沒有或沒有(韓國專利申請?zhí)枺?0-2011-0066035)。因此，期望對能夠有效地針對癌癥干細(xì)胞的、用于治療癌癥干細(xì)胞的組合物的開發(fā)能夠提供一種有效的治療方法，所述治療方法能夠增加癌癥治療效果并且能夠抑制癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。技術(shù)問題本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中出現(xiàn)的上述問題，本發(fā)明的一個目的是提供一種治療癌癥干細(xì)胞的組合物，該組合物含有葡萄糖吸收抑制劑和鈣泵抑制劑。然而，此發(fā)明所達(dá)到的技術(shù)效果并不局限于上述技術(shù)效果，其他未被提及到的技術(shù)效果可以通過以下描述被該本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地了解。技術(shù)方案在下文中，描述的多種實施方式將參考附圖進(jìn)行描述。在接下來的說明書中，描述了很多具體細(xì)節(jié)，如具體結(jié)構(gòu)、組合物和工藝等，以提供對本發(fā)明的充分理解。然而，某些實施方式可能在沒有一個或多個這些特定細(xì)節(jié)的情況下實施，或者與其他已知的方法和結(jié)構(gòu)組合實施。在其他情況中，為了不要不必要地混淆本發(fā)明，已知的方法和制備技術(shù)沒有被特別詳細(xì)地描述。貫穿整個說明書中對“一個實施方式”和“實施方式”的提及意味著結(jié)合該實施方式描述的特定特征、結(jié)構(gòu)、組成、或特性包括在本發(fā)明的至少一個實施方式中。因此，在本說明書中的許多地方出現(xiàn)的詞組“一個實施方式中”或“一實施方式”不一定指的是本發(fā)明的同一實施方式。另外，特定的特征、結(jié)構(gòu)、組成或特性可以以任何適合的方式組合在一個或多個實施方式中。如下文所用，術(shù)語“癌癥干細(xì)胞”指的是具有自我更新或分化能力的癌細(xì)胞，這是干細(xì)胞的特征。與正常癌細(xì)胞不同，癌癥干細(xì)胞可在正常的腫瘤生長條件(指這樣的情況：細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)(葡萄糖)充足，且腫瘤微環(huán)境條件豐富從而沒有細(xì)胞應(yīng)激)下緩慢增殖，或者可以保持在休眠狀態(tài)，因此對抗癌藥物具有耐藥性。例如，與普通腫瘤細(xì)胞不同，癌癥干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子如pgc-1α的表達(dá)可以被調(diào)控，因此，癌癥干細(xì)胞的主要代謝調(diào)控因子的功能可以與普通癌細(xì)胞不同。通過這種不同的代謝調(diào)控能力和對與其機(jī)械連接的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的調(diào)控，癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏的條件下獲得對細(xì)胞凋亡的抗性，并能夠浸潤和/或轉(zhuǎn)移。然而，癌癥干細(xì)胞不局限于此，只要能夠分化成普通癌細(xì)胞即可。本發(fā)明提供一種用于抑制癌癥干細(xì)胞生長或治療癌癥干細(xì)胞的藥物組合物，其包含作為為活性成分的葡萄糖吸收抑制劑和鈣泵抑制劑。在本發(fā)明的一個實施方式中，葡萄糖吸收抑制劑優(yōu)選為葡萄糖衍生物，更優(yōu)選為2-脫氧葡萄糖(2dg)，但不限于此，只要是能抑制葡萄糖(其為細(xì)胞的能量來源)吸收的化合物即可，以在癌癥干細(xì)胞中誘導(dǎo)營養(yǎng)缺乏和/或代謝能量耗盡相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而抑制細(xì)胞生長并誘導(dǎo)質(zhì)膜ca2+atp酶(pmca)的表達(dá)。如本文所用，術(shù)語“葡萄糖衍生物”是指通過修飾葡萄糖的一部分得到的化合物，并且其與正常的葡萄糖發(fā)生競爭性作用，從而抑制葡萄糖攝的吸收。在本發(fā)明的另一個實施方式中，鈣泵抑制劑優(yōu)選為質(zhì)膜ca2+atp酶(pmca)的抑制劑，ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性激酶-2-α(camk-2α)的抑制劑，等等。更優(yōu)選地，鈣泵抑制劑可以是caloxin、硝苯地平、kn62(1-[n，o-雙(5-異喹啉磺酰基)-n-甲基-l-酪氨酰]-4-苯基哌嗪)、與camk-2α特異性結(jié)合的sirna，等等，但不限于此，只要是能夠抑制癌癥干細(xì)胞的能力以控制胞內(nèi)鈣濃度的物質(zhì)即可。如本文所述，術(shù)語“pmca抑制劑”是指能夠抑制pmca的活性以抑制鈣的細(xì)胞外釋放的物質(zhì)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，組合物還可進(jìn)一步包含雙胍類化合物。雙胍類化合物優(yōu)選為治療糖尿病的雙胍類藥物。更優(yōu)選地，雙胍類化合物可以是二甲雙胍，苯乙雙胍，丁基雙胍，等等，但不限于此，只要是干擾細(xì)胞內(nèi)能量生成以誘導(dǎo)營養(yǎng)缺乏樣狀態(tài)的雙胍類化合物即可。在本發(fā)明的另一個實施方式中，癌癥可以優(yōu)選為乳腺癌，子宮癌，胃癌，腦癌，直腸癌，結(jié)腸直腸癌，肺癌，皮膚癌，卵巢癌，腎癌，血癌，胰腺癌，前列腺癌，甲狀腺癌，肝癌，等等。更優(yōu)選地，癌癥可以是乳腺癌，但不限于此，只要其進(jìn)展(例如腫瘤分化和/或生長)依賴于本發(fā)明所述的癌癥干細(xì)胞即可。用于治療癌癥干細(xì)胞的藥物組合物也可以與其它抗癌藥物聯(lián)合給藥，從而不僅能夠有效治療癌癥干細(xì)胞，而且也能有效地治療普通癌細(xì)胞。此外，所述藥物組合物也可以用作抑制癌癥復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的藥物組合物。本發(fā)明中，藥物組合物可以是以膠囊，片劑，顆粒劑，注射液，軟膏，粉末或飲料的形式，并且可以用于人對象。為了使用，可以分別根據(jù)常規(guī)方法，將藥物組合物制備成口服制劑，包括粉末、顆粒、膠囊、片劑、水混懸液等等，外用栓劑，和無菌注射劑，但不限于此。本發(fā)明的藥物組合物可以含有藥學(xué)上可接受的載體。對于口服給藥，藥學(xué)上可接受的載體可包括以下中的一種或多種：粘合劑，潤滑劑，崩解劑，賦形劑，增溶劑，分散劑，穩(wěn)定劑，助懸劑，色素，芳香劑，等等。對于注射劑，藥學(xué)上可接受的載體可包括以下中的一種或多種：緩沖劑，防腐劑，止痛劑，增溶劑，等滲劑，穩(wěn)定劑，等等。對于局部給藥，藥學(xué)上可接受的載體可包括以下中的一種或多種：堿，賦形劑，潤滑劑，防腐劑，等等。根據(jù)本發(fā)明所述的藥物組合物可以和如上所述藥學(xué)上可接受的載體混合以提供各種制劑。例如，對于口服給藥，本發(fā)明的藥物組合物可以以片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸液、糖漿、薄片(wafer)、等等的形式制備，對于注射給藥，藥物組合物可以以單位劑量安瓿或多劑量容器的形式制備。此外，本發(fā)明的藥物組合物可以制備成溶液劑，混懸劑，片劑，膠囊，緩釋制劑，等等。同時，適用于制劑的載體、賦形劑和稀釋劑包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，木糖醇，赤蘚醇，麥芽糖醇，淀粉，阿拉伯膠，藻酸鹽，明膠，磷酸鈣，硅酸鈣，纖維素，甲基纖維素，微晶纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羥基苯甲酸甲酯，羥基苯甲酸丙酯，滑石粉，硬脂酸鎂，礦物油，等等。此外，本發(fā)明所述的藥物組合物還可進(jìn)一步包括填充劑、抗凝劑、潤滑劑、潤濕劑、芳香劑、乳化劑、防腐劑、等等中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明所述的藥物組合物的給藥途徑包括但不限于口服，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動脈內(nèi)，骨髓內(nèi)，鞘內(nèi)，心內(nèi)，經(jīng)皮，皮下，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，腸內(nèi)直腸內(nèi)，局部，舌下和直腸內(nèi)途徑。優(yōu)選口服或腸胃外給藥。本文所用的術(shù)語“腸胃外”指的是包括皮下，皮內(nèi)，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，囊內(nèi)，腸內(nèi)，鞘內(nèi)，腦內(nèi)和顱內(nèi)注射或灌注技術(shù)。本發(fā)明的藥物組合物也可以用于直腸給藥的栓劑的形式給藥。本發(fā)明的藥物組合物的給藥劑量可根據(jù)具體所用化合物的活性、患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄率、藥物組合、以及預(yù)防或治療的特定疾病的嚴(yán)重程度而變化。藥物組合物可以以0.0001-50mg/kg/天或0.001-50mg/kg/天的劑量給藥，這取決于患者的狀況，體重，疾病的嚴(yán)重程度，藥物的形式，給藥途徑、給藥周期。本發(fā)明的藥物組合物可以每天給藥一次或幾次。劑量不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的藥物組合物可以制備成丸劑，糖衣片，膠囊，溶液，凝膠，糖漿，藥漿、或混懸液。有益效果本發(fā)明所述用于治療癌癥干細(xì)胞的組合物包含葡萄糖吸收抑制劑和鈣泵抑制劑。本發(fā)明的組合物包含葡萄糖吸收抑制劑和雙胍類藥物，其誘導(dǎo)營養(yǎng)缺乏和代謝能量耗竭相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞中質(zhì)膜ca2+atp酶(pmca)的表達(dá)。此外，本發(fā)明的組合物還含有鈣泵抑制劑，其可以降低癌癥干細(xì)胞對ca2+相關(guān)凋亡的抗性，從而誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞死亡，表明該組合物可以用作治療癌癥干細(xì)胞的有效藥物。因此，預(yù)期本發(fā)明的組合物可以有效地治療各種癌癥干細(xì)胞，從而抑制癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。附圖描述圖1顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過結(jié)晶紫染色法測定葡萄糖缺乏情況下s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系活力的結(jié)果。圖2顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過mtt試驗測定葡萄糖缺乏情況下s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系的活力的結(jié)果。圖3顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的tunel測定的結(jié)果。圖4顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的免疫印跡分析的結(jié)果。圖5顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的細(xì)胞周期分析的結(jié)果。圖6顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例分析細(xì)胞內(nèi)ca2+水平的結(jié)果。圖7顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例分析camk-2α表達(dá)水平的結(jié)果。圖8顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，分析camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中細(xì)胞內(nèi)ca2+水平的結(jié)果。圖9顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中tunel測定的結(jié)果。圖10顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中免疫印跡分析的結(jié)果。圖11顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中細(xì)胞周期分析的結(jié)果。圖12顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例分析pgc-1α和camk-2α之間關(guān)系的結(jié)果。圖13顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，pgc-1α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中細(xì)胞內(nèi)ca2+水平測定的結(jié)果。圖14顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過emsa分析pgc-1α和pmca1之間結(jié)合關(guān)系的結(jié)果。圖15顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過emsa分析pgc-1α和pmca2之間的結(jié)合關(guān)系的結(jié)果。圖16顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，分析營養(yǎng)缺乏條件下pmca表達(dá)水平的結(jié)果。圖17顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，分析camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中pmca表達(dá)水平的結(jié)果。圖18顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例分析鈣泵抑制劑的作用的結(jié)果。圖19顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過免疫化學(xué)染色分析在乳腺癌動物模型中蛋白表達(dá)的結(jié)果。圖20顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過免疫化學(xué)染色分析在乳腺癌動物模型中共同給藥的作用的結(jié)果。圖21顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，分析癌細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞之間基因表達(dá)差異的結(jié)果。圖22顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，在癌細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞中進(jìn)行鈣調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達(dá)的免疫印跡分析結(jié)果。圖23是顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例癌癥干細(xì)胞中鈣離子調(diào)節(jié)機(jī)制的示意圖。圖24顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，測定的camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的時間依賴性變化。圖25顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例分析pnf-kb的作用的結(jié)果。圖26顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的tunel檢測的結(jié)果。圖27顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的免疫印跡分析的結(jié)果。圖28顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例進(jìn)行的細(xì)胞活力檢測結(jié)果。圖29顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，在基于癌癥干細(xì)胞的動物模型中檢測腫瘤生長的結(jié)果。圖30顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，在基于癌癥干細(xì)胞的動物模型中分析蛋白表達(dá)水平的結(jié)果。圖31顯示根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，在基于癌癥干細(xì)胞的動物模型中分析蛋白表達(dá)水平的結(jié)果。最佳實施方式以下對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，這些實施例僅用于說明的目的，并不意于限制本發(fā)明的范圍，實施例1：癌癥干細(xì)胞的產(chǎn)生為了產(chǎn)生癌癥干細(xì)胞，誘導(dǎo)p-mda-mb-231和p-mcf-7(分別是mda-mb-231和mcf-7細(xì)胞系(乳腺癌細(xì)胞系)的親本細(xì)胞)的長期營養(yǎng)缺乏，通過分析對一般癌癥干細(xì)胞特異性的生物特征，篩選和驗證在營養(yǎng)缺乏的環(huán)境下避免了細(xì)胞凋亡的存活細(xì)胞(s-mda-mb-231和s-mcf-7)，從而產(chǎn)生癌癥干細(xì)胞。為了鑒定癌癥干細(xì)胞的機(jī)制和開發(fā)出能夠抑制癌癥干細(xì)胞的治療劑，將shpgc-1αpgfp-v-rs載體(origene)分別轉(zhuǎn)染至s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系中，從而培養(yǎng)出穩(wěn)定表達(dá)shpgc-1α的sshpgc-1α-mda-mb-231和s-shpgc-1α-mcf-7干細(xì)胞。產(chǎn)生的細(xì)胞系用于實驗。將每個細(xì)胞系培養(yǎng)在含有10％胎牛血清(fbs)的rpmi-1640培養(yǎng)基中。實施例2：葡萄糖缺乏條件下癌癥干細(xì)胞活力的測定為了比較葡萄糖缺乏條件下癌細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞的活力，按照與實施例1相同的方法培養(yǎng)的p-mda-mb-231，p-mcf-7，s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系，分別加入到96孔板中，細(xì)胞濃度為5×103個細(xì)胞/100μl，并培養(yǎng)至約70％的融合，然后培養(yǎng)基更換成葡萄糖缺乏且含有10％fbs的rpmi-1640培養(yǎng)基，將細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)3天。分別在0、12、24、36、48、60和72小時，通過結(jié)晶紫染色和mtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)試驗測定每個細(xì)胞系的活力。結(jié)晶紫染色法的測定結(jié)果如圖1，mτt法測定的結(jié)果示如圖2。如圖1所示，通過結(jié)晶紫染色法對貼附在培養(yǎng)板表面的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，結(jié)果表明，與親代細(xì)胞系(p-mda-mb-231和p-mcf-7)相比，癌癥干細(xì)胞系(s-mda-mb-231和s-mcf-7)具有顯著的高活力。此外，如圖2所示，在培養(yǎng)的早期階段(培養(yǎng)12小時后)，癌癥干細(xì)胞與普通癌細(xì)胞的細(xì)胞活力無顯著性差異。然而，在培養(yǎng)的后期階段(培養(yǎng)48小時后)，癌癥干細(xì)胞與普通癌細(xì)胞之間的細(xì)胞活力存在顯著差異，尤其對s-mda-mb231細(xì)胞系，顯示癌細(xì)胞與癌癥干細(xì)胞之間的細(xì)胞活力差異為40％或更高。通過上述結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在葡萄糖缺乏(即營養(yǎng)缺乏)條件下，與普通癌細(xì)胞相比，癌癥干細(xì)胞具有高活力，表明癌癥干細(xì)胞對營養(yǎng)缺乏(即能量缺乏)具有高抗性。實施例3：癌癥干細(xì)胞凋亡抗性分析3.1：tunel測定為了檢測癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下的高活力是否是由于其對細(xì)胞凋亡具有抗性，p-mda-mb-231，p-mcf-7，s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞株各自按照與實施例2相同的方法在葡萄糖缺乏條件下培養(yǎng)40小時，收集并進(jìn)行tunel測定。在tunel測定中，將收集的細(xì)胞用4％多聚甲醛溶液固定48小時，然后根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dutp缺口末端標(biāo)記(dutpnickendlabeling,tunel)試劑盒進(jìn)行染色，使用熒光顯微鏡獲得細(xì)胞的熒光圖像，并使用zeisslsmimagebrowser軟件程序進(jìn)行分析。結(jié)果示于圖3。如圖3所示，在普通癌細(xì)胞系(p-mda-mb-231和p-mcf-7)中，大量細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的dna片段化，然而，在癌癥干細(xì)胞系(s-mda-mb-231和s-mcf-7)中，較少量細(xì)胞中出現(xiàn)dna片段化。這表明癌癥干細(xì)胞對營養(yǎng)缺乏誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有抗性，即使在營養(yǎng)缺乏的情況下也表現(xiàn)出較高活力。3.2：免疫印跡分析(western印跡)為了檢測凋亡相關(guān)蛋白是否參與了凋亡抗性(凋亡抗性是癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下顯示高活力的原因)，p-mda-mb-231，p-mcf-7，s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系按照與實施例2相同的方法在葡萄糖缺乏條件下培養(yǎng)40小時，收集并進(jìn)行免疫印跡分析。收集的細(xì)胞用冰冷的pbs(磷酸鹽緩沖鹽水)緩沖液清洗兩次，并用ripa緩沖液裂解細(xì)胞以分離蛋白。對于下一個實驗，通過bca法測定分離出的蛋白的量。從每個細(xì)胞系獲得的蛋白質(zhì)取20μg，在8-10％sds-聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳，通過電轉(zhuǎn)移到pvdf膜上。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的pvdp膜在室溫下用5％脫脂乳處理1小時，然后與分別針對半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-7、bcl-2和β-肌動蛋白(對照)的第一抗體4℃孵化16小時?？贵w孵育的pvdp膜用tbst緩沖液清洗三次以除去未結(jié)合的第一抗體，并在室溫下與hpr耦合的第二抗體進(jìn)一步孵育1小時。孵育結(jié)束后，用tbst緩沖液清洗膜以完全除去第二抗體，并用ecl緩沖液處理，孵育3分鐘后，暴露于柯達(dá)x-omatar膠片。結(jié)果如圖4.如圖4所示，在s-mda-mb231細(xì)胞系中，活化的半胱天冬酶(切割的形式)3和7的水平均降低，在s-mcf-7中，切割的半胱天冬酶7和9的水平均降低。這些結(jié)果表明，癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下，已知為凋亡標(biāo)記物的半胱天冬酶和自噬細(xì)胞死亡相關(guān)的物質(zhì)p62和lc3b的表達(dá)降低，但已知為抗凋亡標(biāo)記物的bcl-2的表達(dá)增加，因此，癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下的活力增加。3.3：細(xì)胞周期分析為了檢測營養(yǎng)缺乏的條件下是否誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞的凋亡，p-mda-mb-231、p-mcf-7、s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系分別按照與實施例2相同的方法在葡萄糖缺乏的條件下培養(yǎng)12小時(早期)和40小時(后期)，收集并進(jìn)行細(xì)胞周期分析。收集到的細(xì)胞用70％乙醇固定，然后在含有40μg/ml碘化丙啶(pi)和100μg/ml核糖核酸酶的pbs緩沖液中孵育30分鐘，以染色總dna。使用facscalibur流式細(xì)胞儀對染色的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期分析。使用facs和dna軟件程序(flowjo)測量g0/g1期、s期和g2/m期細(xì)胞的比例。結(jié)果如圖5。如圖5所示，在早期階段，普通干細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞無明顯的細(xì)胞周期依賴性變化；然而在后期階段，sub-g0/gl期癌癥干細(xì)胞數(shù)明顯減少。這些結(jié)果表明，在營養(yǎng)缺乏的條件下后期階段普通癌細(xì)胞的凋亡增加，而營養(yǎng)缺乏條件下癌癥干細(xì)胞的凋亡減少。從上述結(jié)果可以看出，與普通干細(xì)胞不同，癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下對細(xì)胞凋亡具有抗性(抗凋亡)，因此即使在營養(yǎng)缺乏條件下仍顯示高活力。實施例4：檢測癌癥干細(xì)胞凋亡抗性的原因4.1：細(xì)胞內(nèi)ca2+水平的測定在發(fā)生凋亡的很多細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度沒有被保持，因為發(fā)生了ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放到細(xì)胞質(zhì)或ca2+通過質(zhì)膜流入細(xì)胞的情況。因此，為了檢測ca2+遷移是否也發(fā)生在癌癥干細(xì)胞中，按照與實施例3相同的方法在營養(yǎng)缺乏的條件下培養(yǎng)細(xì)胞系，使用鈣離子指示劑fura-2-am檢測細(xì)胞內(nèi)ca2+水平。結(jié)果如圖6所示。如圖6所示，在早期階段，普通癌細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞之間ca2+水平無明顯的差異；然而，在后期階段，癌癥干細(xì)胞內(nèi)ca2+水平高于普通癌細(xì)胞。4.2:camk-2α(ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性激酶2α)表達(dá)水平分析為了研究癌癥干細(xì)胞內(nèi)ca2+水平高于普通癌細(xì)胞的原因，通過免疫印跡檢測camk-2α表達(dá)水平。免疫印跡按照與實施例3.2描述操作，結(jié)果如圖7所示。如圖7所示，在早期以及后期階段，camk-2α在癌癥干細(xì)胞中的表達(dá)水平增加。從這些結(jié)果可以看出，camk-2α在癌癥干細(xì)胞中的表達(dá)水平增加，因此，在營養(yǎng)缺乏和代謝能量應(yīng)激條件下，ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放到細(xì)胞的水平將被控制在一個控制水平，并因此癌癥干細(xì)胞對細(xì)胞凋亡具有抗性。4.3：camk-2α(ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性激酶2α)表達(dá)抑制效果的檢測為了檢測當(dāng)camk-2α在癌癥干細(xì)胞中表達(dá)時的效果，將從bioneer(韓國)購買的camk-2αsirna轉(zhuǎn)染到每個細(xì)胞系中，從而產(chǎn)生表達(dá)camk-2α的癌癥干細(xì)胞。此外，按照與實施例4.1和實施例4.2相同的方法檢測camk-2α表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)ca2+的水平，結(jié)果如圖8。如圖8所示，在camk-2α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中，ca2+的水平?jīng)]有減少。該結(jié)果表明癌癥干細(xì)胞中camk-2α的表達(dá)在維持細(xì)胞內(nèi)ca2+水平方面起重要作用。另外，按照與實施例3所述相同方法，對camk-2α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞進(jìn)行tunel測定、免疫印跡分析和細(xì)胞周期分析，分析結(jié)果分別如圖9-11所示。如圖9所示，營養(yǎng)缺乏下的癌癥干細(xì)胞通常表現(xiàn)出對細(xì)胞凋亡具有抗性；然而在使用sirna抑制camk-2α表達(dá)的癌癥干細(xì)胞中，與普通癌細(xì)胞一樣，細(xì)胞凋亡被誘導(dǎo)以引起dna片段化。如圖10所示，在camk-2α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中，與普通癌細(xì)胞一樣，在營養(yǎng)缺乏條件下，切割的半胱天冬酶水平再次增加，bcl-2的表達(dá)水平下降。另外，結(jié)果顯示磷酸化的αkτ(ραkτ)，磷酸化的ikb(pikb)和磷酸化的nf-kb(pnf-kb)的水平降低，ip3r(其為一種鈣離子釋放通道)增加。這些結(jié)果表明，當(dāng)癌癥干細(xì)胞中camk-2α的表達(dá)被抑制時，在營養(yǎng)缺乏條件下癌癥干細(xì)胞的凋亡抗性下降，癌癥干細(xì)胞與普通癌細(xì)胞顯示出相似的結(jié)果。如圖11所示，在camk-2α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中，與普通干細(xì)胞一樣，后期sub-g0/g1期的細(xì)胞比例增加，表明在營養(yǎng)缺乏條件下，癌癥干細(xì)胞凋亡增多。從上述結(jié)果可以看出，營養(yǎng)缺乏下，癌癥干細(xì)胞通過增加細(xì)胞中camk-2α的表達(dá)水平以將細(xì)胞內(nèi)ca2+水平調(diào)節(jié)到適當(dāng)?shù)乃綇亩鴮a2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡產(chǎn)生抗性，當(dāng)癌癥干細(xì)胞中的camk-2α表達(dá)被抑制時，癌癥干細(xì)胞喪失其對細(xì)胞凋亡的抗性。4.4：測定pgc-1α(過氧化物酶體增殖劑激活的受體γ)與camk-2α的關(guān)系為了研究pgc-1α(已知其表達(dá)在營養(yǎng)缺乏條件下被調(diào)節(jié))是否與對ca2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抗性有關(guān)，將sh-pgc-1α載體(origene)轉(zhuǎn)染到s-mda-mb-231細(xì)胞系中，從而制備pgc-1α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞系。按照與實施例3.2中所述相同的方法對癌癥干細(xì)胞系進(jìn)行免疫印跡分析。結(jié)果如圖12。如圖12所示，營養(yǎng)缺乏條件下，在pgc-1α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中，如普通癌細(xì)胞一樣，早期和后期階段camk-2α的表達(dá)也受到抑制，bcl-2、磷酸化akt和磷酸化nf-kb的表達(dá)水平減少。此外，結(jié)果顯示，已知參與ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放到細(xì)胞外的pmca(質(zhì)膜ca2+atp酶)蛋白的表達(dá)水平也降低。從上述結(jié)果可以看出，在pgc-1α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中，camk-2α和pmca的表達(dá)水平受到抑制。因此，為了檢查細(xì)胞內(nèi)ca2+的水平是否發(fā)生變化，按照與實施例4.1所述相同的方法測定ca2+的水平，結(jié)果如圖13。如圖13所示，在營養(yǎng)缺乏的早期階段無明顯差異；然而，在后期階段，在pgc-1α表達(dá)的癌癥干細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)ca2+水平升高，出現(xiàn)癌癥干細(xì)胞凋亡。上述結(jié)果表明，在營養(yǎng)缺乏條件下，癌癥干細(xì)胞中pgc-1α表達(dá)水平升高以誘導(dǎo)camk-2α的表達(dá)，因而使細(xì)胞內(nèi)ca2+水平保持在適當(dāng)?shù)乃?，從而對ca2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有抗性，并且在營養(yǎng)缺乏條件下，pgc-1α對提高癌癥干細(xì)胞的活力發(fā)揮重要作用。實施例5：檢測pgc-1α在癌癥干細(xì)胞中的作用5.1：檢測pgc-1α和pmca1之間的結(jié)合關(guān)系為了檢測pgc-1α和pmca1之間的結(jié)合關(guān)系，按照生產(chǎn)商的說明使用emsa試劑盒進(jìn)行emsa測定。作為結(jié)合序列(探針)，使用pmca1啟動子結(jié)合位點序列“ttgacctttggccca”。結(jié)果示于圖14。如圖14所示，癌癥干細(xì)胞在后期階段，hnf4α、pgc-1α和dna(探針)之間的結(jié)合增加，而在普通癌細(xì)胞或pgc-1α表達(dá)被抑制的癌癥干細(xì)胞中結(jié)合降低。這些結(jié)果表明，在營養(yǎng)缺乏條件下，pgc-1α與hnf4α結(jié)合并與pmca1的啟動子區(qū)結(jié)合，從而調(diào)節(jié)pmca1的表達(dá)。5.2：檢測pgc-1α和pmca2之間的結(jié)合關(guān)系為了檢查pgc-1α和pmca2之間的關(guān)系，按照生產(chǎn)商的說明使用emsa試劑盒進(jìn)行emsa測定。作為結(jié)合序列(探針)，使用pmca2啟動子的結(jié)合位點序列的“ctggaaatacccc”。結(jié)果示于圖15。如圖15所示，在營養(yǎng)缺乏條件下的癌癥干細(xì)胞中，nf-kb、pgc-1α和dna(探針)之間的結(jié)合增加，當(dāng)加入抗nf-kb的抗體anti-p65或anti-p50時，抗體進(jìn)一步結(jié)合導(dǎo)致超遷移。這些結(jié)果表明，在營養(yǎng)缺乏條件下，pgc-1α與nf-kb結(jié)合并與pmca2的啟動子區(qū)結(jié)合，從而調(diào)節(jié)pmca2的表達(dá)。5.3：測定pmca與營養(yǎng)缺乏的關(guān)系為了測定營養(yǎng)缺乏條件下pmca表達(dá)水平的變化，按照與實施例2所述相同的方法，在營養(yǎng)缺乏條件下培養(yǎng)每種細(xì)胞系，并且在不同培養(yǎng)時間點進(jìn)行qrt-pcr。每個時間點收集細(xì)胞，并按照生產(chǎn)商的說明使用rneasymini試劑盒提取rna。取1μg提取的rna，使用一步rt-pcr試劑盒進(jìn)行qrt-pcr。所用的引物序列如下表1所示。結(jié)果如圖16，此外，使用camk-2α的表達(dá)被抑制的細(xì)胞系進(jìn)行上述相同的實驗，結(jié)果示于圖17。表1基因產(chǎn)物正向引物反向引物pmca1tttccaaacactgcttctcttcggtccacagatgcattacgapmca2gttttaggcacttttgtggtctaattcctcctcaggtattpmca3aggcctggcagacaacaccatcccacaccagctgcaggaapmca4gagcttcctggataccgatgctagcttggccacactggapdhggtaaggtcggagtcaacgggaggtcaatgaaggggtcattg如圖16所示，在s-mda-mb-231細(xì)胞系中，隨著培養(yǎng)時間的延長，pmca1和pmca2的表達(dá)水平增加，而在s-mcf-7細(xì)胞系中，pmca1、pmca2和pmca4的表達(dá)水平升高。另外，如圖17所示，與癌癥干細(xì)胞不同，在camk-2α表達(dá)被抑制的細(xì)胞系中，營養(yǎng)缺乏下pmca的表達(dá)水平?jīng)]有增加。5.4：pmca抑制的效果的檢測為了研究在營養(yǎng)缺乏條件下pmca被抑制時，癌癥干細(xì)胞鈣濃度調(diào)節(jié)能力是否發(fā)生變化，通過使用caloxin(一種鈣泵抑制劑)作為pmca(充當(dāng)質(zhì)膜中的ca2+-atpase(鈣atp酶))的抑制劑和使用毒胡蘿卜素作為serca(sarco/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ca2+-atpase，充當(dāng)ca2+-atpase(鈣atp酶))的抑制劑，抑制pmca和serca的活性，然后測定癌癥干細(xì)胞的細(xì)胞外ca2+濃度的變化。結(jié)果如圖18。如圖18所示，與普通癌細(xì)胞相似，當(dāng)使用鈣泵抑制劑caloxin處理癌癥干細(xì)胞時，癌癥干細(xì)胞外的細(xì)胞外鈣濃度降低，細(xì)胞活力也下降。然而，結(jié)果顯示，當(dāng)用serca抑制劑毒胡蘿卜素處理癌癥干細(xì)胞時，癌癥干細(xì)胞的細(xì)胞外鈣濃度保持在高水平，并且細(xì)胞活力也高。這些結(jié)果表明，當(dāng)用鈣泵抑制劑抑制pmca的活性時，可降低癌癥干細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏條件下的活力。從上述結(jié)果可以看出，在營養(yǎng)缺乏和代謝能量耗竭相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的條件下，癌癥干細(xì)胞中pgc-1α的表達(dá)增加以促進(jìn)camk-2α的表達(dá)，癌癥干細(xì)胞顯示出對ca2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抗性，其中ca2+(作為pmca1和pmca2的共激活劑以提高pmca蛋白的表達(dá)，其在營養(yǎng)缺乏條件下從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放到細(xì)胞質(zhì)中)被釋放到細(xì)胞外，從而在線粒體中積累以因而誘導(dǎo)凋亡。此外，從上述結(jié)果可以預(yù)期，鈣泵抑制劑和通常用于抗癌治療的誘導(dǎo)營養(yǎng)缺乏的方法相組合可以用作治療癌癥干細(xì)胞的有效方法。實施例6：癌癥干細(xì)胞有效治療方法的鑒定6.1：動物模型的構(gòu)建為了鑒定針對癌癥干細(xì)胞的有效治療方法，構(gòu)建了乳腺癌動物模型。為了構(gòu)建乳腺癌動物模型，乳腺癌細(xì)胞(p-mda-mb-231和p-mcf-7)和乳腺癌干細(xì)胞系(s-mda-mb-231和s-mcf-7)分別在體外培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細(xì)胞注射到5-6周齡balb/c裸鼠的左上腹部，細(xì)胞密度為1.0×107個細(xì)胞/小鼠。然后，將小鼠放在22℃、12h光照和12h黑暗交替環(huán)境下飼養(yǎng)7天，期間飼喂并飲水，從而構(gòu)建乳腺癌動物模型。6.2：免疫組織化學(xué)為了檢測以實施例6.1所述相同方法構(gòu)建的乳腺癌動物模型中pmca1，pmca2，pgc-1α和camk-2α的表達(dá)是否增加，進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。具體來說，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)外科病理學(xué)操作程序，從每只小鼠中收集腫瘤組織，并用10％中性緩沖福爾馬林固定并包埋在石蠟中，然后，將組織切至5μm的厚度，除去石蠟。將切片組織置于檸檬酸鹽緩沖液(ph6)中進(jìn)行抗原恢復(fù)，并用3％過氧化氫處理5分鐘，然后組織用1:100倍稀釋的針對pmca1，pmca2，pgc-1α和camk-2α的單克隆抗體處理。然后，用蘇木精對組織反染色，干燥后觀察。使用metamorph4.6軟件對染色部分進(jìn)行定量。結(jié)果如圖19。如圖19所示，在癌癥干細(xì)胞注射的乳腺癌動物模型中，pmca1，pmca2，pgc-1α和camk-2α的表達(dá)均增加。6.3：治療癌癥干細(xì)胞的方法的鑒定按照以實施例6.1所述相同方法構(gòu)建的乳腺癌動物模型被分成幾組，每組由9只動物組成，每只動物腹膜內(nèi)注射500mg/kg葡萄糖吸收抑制劑2-脫氧葡萄糖(2dg)、250mg/kg雙胍類藥物二甲雙胍和200mg/kgcaloxin2al的組合，每天一次，連續(xù)給藥45天，每天使用卡尺測量腫瘤的水平直徑(a)和垂直直徑(b)，并根據(jù)以下公式計算腫瘤的體積：4/3xbx(acmxbcm)3x1/2。結(jié)果如表2和圖20。表2如上表2和圖20所示，對普通癌細(xì)胞和癌癥干細(xì)胞之間腫瘤體積進(jìn)行比較時，結(jié)果顯示癌癥干細(xì)胞組的腫瘤生長明顯地快。此外，與對照組相比，在2-脫氧葡萄糖單獨給藥治療癌癥干細(xì)胞的情況下，腫瘤體積略有下降。在2-脫氧葡萄糖和二甲雙胍聯(lián)合給藥治療癌癥干細(xì)胞的情況下，腫瘤體積略有下降，但在2-脫氧葡萄糖和caloxin聯(lián)合給藥治療癌癥干細(xì)胞的情況下，腫瘤體積減少5倍或更多。此外，在2-脫氧葡萄糖、caloxin和二甲雙胍聯(lián)合給藥治療癌癥干細(xì)胞的情況下，癌癥干細(xì)胞基本上不生長。上述結(jié)果說明，葡萄糖吸收抑制劑和雙胍類藥物誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞中的營養(yǎng)缺乏和代謝能量耗竭相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞中pmca的表達(dá)，結(jié)果還說明，鈣泵抑制劑聯(lián)合葡萄糖吸收抑制劑和雙胍類藥物給藥降低癌癥干細(xì)胞對ca2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抗性，從而誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞的凋亡，表明其可以提供一種特異性針對癌癥干細(xì)胞的有效治療方法。因此，可以發(fā)現(xiàn)葡萄糖吸收抑制劑和雙胍類藥物與鈣泵抑制劑聯(lián)合使用可以有效抑制癌癥干細(xì)胞介導(dǎo)的癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移(這是常規(guī)抗癌藥物的局限性)。實施例7：癌癥干細(xì)胞存活機(jī)制的檢測7.1：測定癌細(xì)胞與癌癥干細(xì)胞之間的基因表達(dá)差異為了檢測癌癥干細(xì)胞的存活機(jī)制，按照與實施例2所述相同的方法將p-mda-mb-231，p-mcf-7，s-mda-mb-231和s-mcf-7細(xì)胞系分別在葡萄糖缺乏的條件下培養(yǎng)40小時，收集細(xì)胞，并按照與實施例5.3所述相同的方法從收集的細(xì)胞中提取rna，并進(jìn)行微陣列分析，結(jié)果如圖21。如圖21所示，作為ca2+-atpase(鈣atp酶)的serca2基因在癌癥干細(xì)胞中顯著增加。此外，為了測定鈣調(diào)節(jié)基因的表達(dá)差異，按照與實施例3.2所述相同的方法進(jìn)行免疫印跡分析。結(jié)果如圖22顯示。如圖22所示，在癌癥干細(xì)胞中，serca2的表達(dá)增加，而ip3r的表達(dá)降低。通常所知，在葡萄糖缺乏條件下，細(xì)胞中的鈣離子通過ip3r通道釋放到細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)鈣的釋放迅速增加時，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且在誘導(dǎo)凋亡過程中，可能出現(xiàn)通過serca2重吸收鈣離子以抑制細(xì)胞凋亡。從上述結(jié)果可以看出，在癌癥干細(xì)胞中，serca2的表達(dá)增加以促進(jìn)鈣的再吸收，且ip3r的表達(dá)被抑制從而鈣離子釋放到細(xì)胞質(zhì)中也被抑制。如圖23可以看出，由于camk-2α的調(diào)節(jié)，癌癥干細(xì)胞中ip3r的表達(dá)首先被抑制，從而鈣離子的釋放將被抑制，然后發(fā)生通過serca的被釋放鈣離子的細(xì)胞內(nèi)吸收以抑制細(xì)胞凋亡，從而即使在營養(yǎng)耗竭的情況下，細(xì)胞的活力也會增加。7.2：測定camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的變化為了測定在營養(yǎng)缺乏條件下，camk-2α信號機(jī)制的時間依賴性變化，按照與實施例3.2所述相同的方法進(jìn)行免疫印跡，按照與實施例5.1所述的相同方法使用pnf-kb進(jìn)行emsa測定。結(jié)果示于圖24和圖25。如圖24所示，與普通干細(xì)胞不同，在癌癥干細(xì)胞中，隨著營養(yǎng)缺乏的進(jìn)展，camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的信號傳導(dǎo)物質(zhì)被激活。此外，如圖25所示，pnf-kb作為轉(zhuǎn)錄因子，提高ip3r抑制劑bcl-2和serca2的表達(dá)。這些結(jié)果表明，當(dāng)camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)被激活時，nf-kb被磷酸化和活化，并且由于活化的nf-kb，bcl-2和cerca2的表達(dá)增加，從而使得鈣離子的再吸收增加，并且ip3r的表達(dá)被抑制從而鈣離子的釋放被抑制。7.3測定camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制被抑制的影響為了測定當(dāng)camk-2α信號被抑制時發(fā)生的影響，用10μm公知為camk-2α抑制劑的kn62(1-[n，o-雙(5-異喹啉磺?；?n-甲基-l-酪氨酰基]-4-苯基哌嗪)處理癌癥干細(xì)胞，然后按照與實施例3.1所述相同的方式進(jìn)行tunel測定以檢測凋亡和dna片段化。此外，按照與實施例3.2中所述相同的免疫印跡法檢測基因的表達(dá)，并按照與實施例2所述相同的方法測量細(xì)胞的活力。結(jié)果如圖26-28。如圖26-28顯示，當(dāng)在營養(yǎng)缺乏條件下癌癥干細(xì)胞的camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)被抑制時，沒有發(fā)生nf-kb磷酸化，基于此原因，ip3r的表達(dá)被抑制，而serca2的表達(dá)提高，因此鈣離子的釋放將被增加，從而誘導(dǎo)凋亡。這些結(jié)果表明，camk-2α的抑制劑可以降低癌癥干細(xì)胞對ca2+介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抗性，從而誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞的凋亡，表明camk-2α抑制劑的使用能夠提供特異性針對癌癥干細(xì)胞的有效治療方法。實施例8：測定癌癥干細(xì)胞動物模型的特征為了測定按照實施例6所述相同的方法構(gòu)建的動物模型的特征，從動物模型中提取已產(chǎn)生的乳腺癌組織，并測量腫瘤體積。結(jié)果如圖29所示。此外，通過免疫印跡和免疫組織化學(xué)分析乳腺癌組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。按照與實施例3.2所述相同的方法進(jìn)行免疫印跡分析，按照與實施例6.2所述相同的方法進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，結(jié)果如圖30和圖31。如圖29所示，基于癌癥干細(xì)胞的動物模型中腫瘤的生長率高于基于普通癌細(xì)胞的動物模型。另外，如圖30和圖31所示，與基于普通癌細(xì)胞的動物模型相比，基于癌癥干細(xì)胞的動物模型中ip3r的表達(dá)降低，serca2的表達(dá)增加。這些結(jié)果與體外實驗結(jié)果一致。從這些結(jié)果可以看出，在癌癥干細(xì)胞中，camk-2α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制可以在體內(nèi)惡劣的環(huán)境中被激活，從而抑制ip3r的表達(dá)并增加serca2的表達(dá)，從而抑制鈣離子釋放誘導(dǎo)的凋亡，因而提高癌細(xì)胞在體內(nèi)的活力并促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。這表明，有效針對癌癥干細(xì)胞的用于治療癌癥干細(xì)胞的組合物可以用作有效的治療方法，其可以克服傳統(tǒng)抗癌療法的局限性，從而最大化對癌癥的治療效率并抑制癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。盡管參考具體特征詳細(xì)描述了本公開發(fā)明，但對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，該描述僅僅是其優(yōu)選實施方式，并不限制本發(fā)明的范圍。因此，本發(fā)明的實質(zhì)范圍將由所附權(quán)利要求及其等價形式來限定。工業(yè)適用性如上所述，本發(fā)明的組合物可以通過有效地誘導(dǎo)癌癥干細(xì)胞的凋亡從而用作治療癌癥干細(xì)胞的藥劑。因此，本發(fā)明的組合物可用作能夠有效治療各種癌癥干細(xì)胞以有效抑制癌癥復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移的藥物組合物。當(dāng)前第1頁12