本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及包含奧貝膽酸和二甲雙胍的復(fù)方組合物、制劑及制備方法和應(yīng)用等。

背景技術(shù)：

奧貝膽酸(obeticholicacid，簡稱oca，如結(jié)構(gòu)式i)，又名6-乙基鵝去氧膽酸(6-ecdca)，為法尼酯衍生物x受體(fxr)的天然配體，奧貝膽酸屬法尼醇x受體激動劑，通過活化法尼醇x受體，間接抑制細(xì)胞色素7a1(cyp7a1)的基因表達(dá)。奧貝膽酸由美國intercept制藥公司研發(fā)成功，是二十年來首個研發(fā)用于治療膽汁淤積性肝病的藥物。研究用于那些對舊標(biāo)準(zhǔn)治療藥物熊去氧膽酸沒有充分應(yīng)答或不能耐受的患者。安慰劑對照的三期臨床試驗中，奧貝膽酸(oca)提高了與肝移植風(fēng)險降低相關(guān)的兩個生物標(biāo)志物的水平。臨床研究的復(fù)合終點是堿性磷酸酶至少下降15％，血清堿性磷酸酶的活性低于正常上限的1.67倍，而膽紅素在正常范圍內(nèi)，堿性磷酸酶是用來表示肝臟疾病嚴(yán)重程度的一種生物標(biāo)記物。近日公開的文獻(xiàn)(lancet.2015mar14；385(9972):956-965)指出，在奧貝膽酸治療非酒精性脂肪肝的臨床研究中，觀察到了試驗樣本出現(xiàn)高低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)的副作用，這是奧貝膽酸作為潛在的非酒精性脂肪肝上市面臨的巨大挑戰(zhàn)。如何減少甚至消除奧貝膽酸升高ldl-c的副作用，成為奧貝膽酸進(jìn)一步開發(fā)，提高藥物安全性的重要思路。

二甲雙胍(metformin，如結(jié)構(gòu)式ii)，為雙胍類口服降血糖藥。具有多種作用機制，包括延緩葡萄糖由胃腸道的攝取，通過提高胰島素的敏感性而增加外周葡萄糖的利用，以及抑制肝、腎過度的糖原異生，不降低非糖尿病患者的血糖水平。二甲雙胍片首選用單純飲食控制及體育鍛煉治療無效的2型糖尿病，特別是肥胖的2型糖尿病。二甲雙胍與胰島素合用，可減少胰島素用量，防止低血糖發(fā)生?？膳c磺酰脲類降血糖藥合用，具協(xié)同作用。二甲雙胍能增加肌肉內(nèi)葡萄糖無氧代謝，減少葡萄糖對肌肉組織的能量供應(yīng)，很多2型糖尿病患者服藥后體重有所下降。

在現(xiàn)有技術(shù)沒有啟示奧貝膽酸和二甲雙胍的復(fù)方或聯(lián)合藥用的情況下，本發(fā)明人通過自身的研究，實踐，十分令人意外地獲得了一種奧貝膽酸和二甲雙胍的復(fù)方藥物，不但能夠增加(甚至協(xié)同增加)兩者降低甘油三酯、血糖和/或轉(zhuǎn)氨酶的功效，而且能降低奧貝膽酸在總膽固醇、ldl-c方面引起的副作用或不良反應(yīng)，整體上也能起到降低總膽固醇和/或低密度脂蛋白的效果，甚至能夠有效減少奧貝膽酸和/或鹽酸二甲雙胍的用藥量。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供新的藥物組合物，其可以用于降低血糖、血脂、低密度脂蛋白、轉(zhuǎn)氨酶和/或堿性磷酸酶水平，其可以用于治療肝硬化、脂肪肝、高血脂、高血糖、肥胖和/或肝纖維化。另外，本發(fā)明還提供了基于該藥物組合物的制劑、制備方法和應(yīng)用等。

具體而言，本發(fā)明公開了一種藥物組合物，其包括奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽。

上述所述的藥物組合物，其中，奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽是奧貝膽酸；和/或二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽是鹽酸二甲雙胍。

上述所述的藥物組合物，其中，以奧貝膽酸和鹽酸二甲雙胍計，奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽的重量比為3～100：10～3000，優(yōu)選為4～50：20～1000，更優(yōu)選為4～20：50～500。

本發(fā)明公開了一種藥物制劑，其包括上述所述的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔劑。

上述所述的藥物制劑，為口服制劑，選自片劑，膠囊，腸溶片，腸溶膠囊，軟膠囊，緩釋片，緩釋膠囊，控釋片，控釋膠囊，散劑口崩片或滴丸。

本發(fā)明公開了奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合在制備用于降低血糖、血脂(如，膽固醇和/或甘油三酯)，低密度脂蛋白，轉(zhuǎn)氨酶(如谷丙轉(zhuǎn)氨酶和/或谷草轉(zhuǎn)氨酶)和/或堿性磷酸酶水平的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明公開了奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合在制備用于預(yù)防和/或治療肝硬化，脂肪肝，高血脂，高血糖，肥胖和/或肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明公開了二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于降低奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的副作用或不良反應(yīng)的藥物中應(yīng)用。

上述所述的應(yīng)用，其中，副作用或不良反應(yīng)是提高膽固醇和/或低密度脂蛋白水平和/或降低高密度脂蛋白水平。

本發(fā)明提供了藥物組合物，其包括奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物可以不包括其他活性藥物化合物，即本發(fā)明的藥物組合物可以由奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽組成。在本文中，如沒有特別指出或矛盾之處，術(shù)語藥物組合物和復(fù)方組合物可以互換使用。

在本文中，藥學(xué)上可接受的鹽指適于與人或動物的組織接觸而且無過多的毒性、刺激或變態(tài)反應(yīng)等的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的。通常，二甲雙胍的藥學(xué)上可接受的鹽可以是酸加成鹽，而奧貝膽酸的藥學(xué)上可接受的鹽可以是堿加成鹽。代表性的酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、二己酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、3-苯基丙酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。能用于形成藥學(xué)上可接受鹽的優(yōu)選的酸是鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽中的陽離子包括但不限于堿金屬或堿土金屬離子如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁等，以及非毒性季銨陽離子如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、二乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。優(yōu)選的堿加成鹽包括鈉鹽和鉀鹽。優(yōu)選在本發(fā)明的藥物組合物中，奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽是奧貝膽酸，即不成鹽的形式。也優(yōu)選在本發(fā)明的藥物組合物中，二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽是鹽酸二甲雙胍，即黃連素。

優(yōu)選在本發(fā)明的藥物組合物中，以奧貝膽酸和鹽酸二甲雙胍計，奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽的重量比為3～100：30～3000，優(yōu)選為4～50：50～1000，更優(yōu)選為4～10：80～500。通過分子量的換算，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過上述奧貝膽酸和鹽酸二甲雙胍的重量比計算出其他奧貝膽酸的藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其其他藥學(xué)上可接受的鹽的重量比。

本發(fā)明提供了藥物制劑，其包括本發(fā)明第一方面的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔劑。在本文中，藥學(xué)上可接受的輔劑包括藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑等，它們與活性成分相容。運用藥學(xué)上可接受的輔劑制備藥物制劑對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是公知的。含活性成分的藥物組合物可以是適用于口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可參照本領(lǐng)域任何已知制備藥用組合物的方法制備口服組合物，此類組合物可含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用制劑。片劑含有活性成分和用于混合的適宜制備片劑的無毒的可藥用的賦形劑。這些賦形劑可以是惰性賦形劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑 可以不包衣或可通過掩蓋藥物的味道或在胃腸道中延遲崩解和吸收，因而在較長時間內(nèi)提供緩釋作用的已知技術(shù)將其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物質(zhì)，例如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延長時間物質(zhì)例如乙基纖維素、醋酸丁酸纖維素。

也可用其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊，或其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合軟明膠膠囊提供口服制劑。

水懸浮液含有活性物質(zhì)和用于混合的適宜制備水懸浮液的賦形劑。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可以是天然產(chǎn)生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷山梨醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷脫水山梨醇單油酸酯。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種嬌味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。

油混懸液可通過使活性成分懸浮于植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或礦物油例如液體石蠟中配制而成。油懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？杉尤肷鲜龅奶鹞秳┖蛬晌秳?，以提供可口的制劑?？赏ㄟ^加入抗氧化劑例如丁羥茴醚或α-生育酚保存這些組合物。

通過加入水可使適用于制備水混懸也的可分散粉末和顆粒提供活性成分和用于混合的分散劑或濕潤劑、懸浮劑或一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑可說明上述的例子。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、嬌味劑和著色劑。通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。

本發(fā)明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然產(chǎn)生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦單油酸酯，和所述偏酯和環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷山梨醇單油酸酯。乳劑也可以含有甜味劑、嬌味劑、防腐劑和抗氧劑。可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖漿和酏劑。此類制劑也可含有緩和劑、防腐劑、著色劑和抗氧劑。

藥物組合物可以是無菌注射水溶液形式?？稍谑褂玫目山邮艿娜苊胶腿軇┲杏兴?、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射制劑可以是其中活性成分溶于油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳?？赏ㄟ^局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本發(fā)明化合物恒定循環(huán)濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恒定濃度，可使用連續(xù)靜脈內(nèi)遞藥裝置。

藥物組合物可以是用于肌內(nèi)和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式?？砂匆阎夹g(shù)，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制該混懸液。無菌注射制劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中制備的無菌注射溶液或混懸液，例如1,3-丁二醇中制備的溶液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內(nèi)的任何調(diào)和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制備注射劑。

用于局部(包括經(jīng)頰和舌下)或透皮施用本發(fā)明的化合物的劑量形式包括粉末、噴霧、油膏、糊劑、乳膏、洗液、凝膠、溶液和貼片。活性組分可在無菌條件下與可藥用載體或賦形劑以及與可能需要的任何防腐劑或緩沖劑混合。粉末和噴霧可例如用賦形劑(例如糖、云母、硅酸、氫氧化鈉、硅酸鈣和聚胺粉末或這些物質(zhì)的混合物)來制備。油膏、糊劑、乳膏和凝膠還可含有下述賦形劑，例如，動物和植物脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、斑脫土、硅酸、云母和氧化鋅或其混合物。還可使用吸收增強劑，來增加本發(fā)明的化合物穿透皮膚的流動?？赏ㄟ^提供速率控制膜(例如作為透皮貼片的一部分)或?qū)⒒衔锓稚⒂诰酆衔锘|(zhì)或凝膠中來控制此類流動的速率。

可按用于直腸給藥的栓劑形式給予本發(fā)明化合物?？赏ㄟ^將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來制備這些藥物組合物。此類物質(zhì)包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

本發(fā)明的藥物制劑將活性成分(奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽)和藥學(xué)上可接受的輔劑組合在一起，配制成各種制劑，優(yōu)選為固體制劑和液體制劑。本發(fā)明的制劑可以為單 位劑量形式，如片劑、丸劑、膠囊(包括持續(xù)釋放或延遲釋釋放形式)、粉劑、混懸劑、顆粒劑、酊劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮液、針劑、等劑型以及各種緩釋劑型，從而適合各種給藥方式，例如口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、皮內(nèi)或經(jīng)過皮膚等的給藥形式。優(yōu)選本發(fā)明第三方面的藥物制劑是口服藥物制劑。

藥物制劑的用量，以其中的活性成分(如，奧貝膽酸和鹽酸二甲雙胍，尤其是奧貝膽酸)計，可以被降低，從而降低活性成分帶來的副作用或不良反應(yīng)。

本發(fā)明提供了奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合在制備用于降低血糖、血脂、低密度脂蛋白、轉(zhuǎn)氨酶和/或堿性磷酸酶水平的藥物中的應(yīng)用。其中，血脂水平是膽固醇和/或甘油三酯水平；也優(yōu)選轉(zhuǎn)氨酶水平是谷丙轉(zhuǎn)氨酶和/或谷草轉(zhuǎn)氨酶水平。在本發(fā)明的應(yīng)用中，藥物用于降低尚未達(dá)到疾病標(biāo)準(zhǔn)的血糖、血脂、低密度脂蛋白、轉(zhuǎn)氨酶和/或堿性磷酸酶水平，即本發(fā)明的應(yīng)用中的藥物可以被看作為是食品或保健品。

本發(fā)明提供了奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合在制備用于預(yù)防和/或治療肝硬化、脂肪肝、高血脂、高血糖、肥胖和/或肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明應(yīng)用中的藥物可以是用于治療這些疾病中的任何一個。這些疾病均超越了健康標(biāo)準(zhǔn)的范圍。本發(fā)明中，肝硬化可以是由膽總管輸導(dǎo)不暢引起的肝硬化。在本發(fā)明中，肝纖維化也可以是化學(xué)性肝纖維化，即由肝毒性物質(zhì)(例如，酒精和/或四氯化碳等，也可以是肝毒性藥物)攝入而引起的肝纖維化；也可以是非化學(xué)性肝纖維化。

本發(fā)明提供了二甲雙胍或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于降低奧貝膽酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的副作用或不良反應(yīng)的藥物中應(yīng)用。副作用或不良反應(yīng)是指提高膽固醇和/或低密度脂蛋白水平；其中，副作用或不良反應(yīng)是降低高密度脂蛋白水平。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，奧貝膽酸的給藥會提高膽固醇水平、提高低密度脂蛋白水平和/或降低高密度脂蛋白水平，這些對于健康都是不利的因素，而給藥二甲雙胍可以降低副作用或不良反應(yīng)。給藥二甲雙胍可以減少奧貝膽酸的用藥量，因此可以預(yù)計也能夠降低奧貝膽酸的其他副作用或不良反應(yīng)，如嚴(yán)重瘙癢癥狀等。

本發(fā)明取得的有益效果總結(jié)如下：

(1)、通過二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方組合，可以有效地消除奧貝膽酸帶來的升高ldl-c的副作用。奧貝膽酸臨床研究中顯著升高ldl-c的實驗事實，已經(jīng)得到了證實，通過與具有降脂活性的藥物進(jìn)行搭配，能夠緩解奧貝膽酸的升高ldl-c的副作用，以上的思路是專業(yè)人員通過簡單的邏輯推理能夠推導(dǎo)出來的，例如，在專利cn201510740833中，已經(jīng)報道了奧貝膽酸與具有降脂作用的小檗堿進(jìn)行復(fù)方搭配。但是，采用具有降糖作用機制的二甲雙胍與奧貝膽酸復(fù)方搭配，用于消除奧貝膽酸所引起的ldl-c升高現(xiàn)象，是專業(yè)人員通過簡單推理不能得出的結(jié)論。

(2)、二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方組合能夠顯著改善模型動物的血液生化指標(biāo)，使得已經(jīng)失常的血液生化指標(biāo)基本趨于正常水平。

(3)、二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方組合能夠顯著改善模型動物脂肪肝癥狀，能減少脂肪的聚集和脂肪細(xì)胞體積增大，肝臟脂肪程度減輕，脂肪細(xì)胞造成的肝臟損傷得到了一定修復(fù)，減小了空泡變性程度。脂肪肝的癥狀得到了顯著的緩解，恢復(fù)到了正常金黃地鼠水平

附圖說明

圖1顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)的測定結(jié)果比較。

圖2顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中總膽固醇(tc)的測定結(jié)果比較。

圖3顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中總甘油三酯(tg)的測定結(jié)果比較。

圖4顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中葡萄糖(glu)的測定結(jié)果比較。

圖5顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)的測定結(jié)果比較。

圖6顯示了高脂金黃地鼠，經(jīng)本發(fā)明部分化合物口服灌胃給藥四周后，血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)的測定結(jié)果比較。

具體實施方式

以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容。如未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段和市售的常用儀器，可參見的相關(guān)規(guī)定和指導(dǎo)原則等。

實施例1高脂飲食誘導(dǎo)造成金黃地鼠血液指標(biāo)異常的治療型研究實驗

模型建立：定制高脂飼料飼養(yǎng)金黃地鼠，正常組用普通大小鼠生長飼料飼養(yǎng)，4周后采集動物血清，檢測指標(biāo)變化。高脂飼料誘導(dǎo)的金黃地鼠和正常組金黃地鼠相比，血清中l(wèi)dl-c、tc等含量有明顯升高并具有統(tǒng)計學(xué)差異，證明高血脂模型建立成功。

試驗組別和劑量設(shè)計：正常對照組，高脂模型對照組，辛伐他汀組(8mg/kg)，二甲雙胍(met)組(100mg/kg)，奧貝膽酸(oca)組(10mg/kg)，二甲雙胍+奧貝膽酸(met+oca)低劑量組((50mg+5mg)/kg)，二甲雙胍+奧貝膽酸(met+oca)高劑量組((100mg+10mg)/kg)。動物數(shù)量：每組10只。給藥途徑：口服灌胃。給藥頻率：每天一次。給藥時間：4周。血清指標(biāo)測定：給藥4周后，采取動物血液，進(jìn)行測定。

測定結(jié)果歸納總結(jié)如圖1，如圖2，圖3，圖4，圖5，如圖6。

圖1，如圖2，圖3，圖4，圖5，如圖6的結(jié)果顯示：本發(fā)明公開的二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物，對高脂誘導(dǎo)的金黃地鼠的血液指標(biāo)異常具有顯著的治療作用，具體作用總結(jié)如下：

(1)、對低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的ldl-c顯著降低，四周后，其ldl-c水平降至接近正常金黃地鼠水平。另外，辛伐他汀組藥物治療后，金黃地鼠的血清ldl-c也有所降低，但是并沒有降至正常水平；單用二甲雙胍，其ldl-c也有降低，但是，降低水平遠(yuǎn)不及二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物的作用；另一方面，給藥奧貝膽酸四周后，其ldl-c沒有降低，反而升高。灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的ldl-c顯著降低，四周后，其ldl-c水平降至接近正常金黃地鼠水平。該實驗結(jié)果表明，通過將二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，可以顯著避免單用奧貝膽酸帶來的ldl-c升高的不良后果。以上的降低ldl-c的效果，不是簡單地將二甲雙胍和奧貝膽酸疊加效應(yīng)所帶來的效果，該組合物，所取得的降低ldl-c的效果，是本專利人員不能通過簡單推理得到的。

(2)、對總膽固醇(tc)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的tc顯著降低，四周后，其tc水平降至接近正常金黃地鼠水平。另外，分別灌胃辛伐他汀和二甲雙胍，金黃地鼠的總膽固醇水平均有降低，但是均沒有降低至正常水平，單獨灌胃奧貝膽酸，其總膽固醇不降反升，超過了高脂模型組動物水平。但是，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的tc顯著降低，四周后，其tc水平降至接近正常金黃地鼠水平。

(3)、對甘油三酯(tg)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的tg顯著降低，四周后，其tg水平降至接近正常金黃地鼠水平。單獨使用辛伐他汀，二甲雙胍，甘油三酯水平均有降低，但是降低幅度并沒有二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)合物的降低幅度顯著。

(4)、對葡萄糖(glu)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的glu顯著降低，四周后，其glu水平降至接近正常金黃地鼠水平。單獨使用二甲雙胍，其glu水平有降低，但是降低幅度并沒有二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)合物的降低幅度顯著。使用辛伐他汀和奧貝膽酸并沒有降低金黃地鼠的glu水平。灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的glu顯著降低，四周后，其glu水平降至接近正常金黃地鼠水平。

(5)、對谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的alt顯著降低，四周后，其alt水平降至接近正常金黃地鼠水平。但是，使用辛伐他汀四周后，金黃地鼠的alt水平顯著升高，說明，長時間使用他汀后，肝臟功能受到損傷。

(6)、對谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)作用：實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃 地鼠的ast顯著降低，四周后，其ast水平降至接近正常金黃地鼠水平。但是，使用辛伐他汀四周后，金黃地鼠的ast水平顯著升高，說明，長時間使用他汀后，肝臟功能受到損傷。

綜上所述，實驗數(shù)據(jù)表明，灌胃二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物后，高脂金黃地鼠的血清指標(biāo)僅有顯著改善，以上的治療效果并不能通過二甲雙胍和奧貝膽酸單一成本分的效果簡單的疊加產(chǎn)生的效果。特別是，二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物對ldl-c，tc和葡萄糖的降低效果顯著，是專業(yè)人員沒有辦法通過簡單的推測能夠想到的。另外，二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物對肝臟正常功能沒有影響，其中，alt和ast的水平降至正常金黃地鼠水平。以上數(shù)據(jù)說明，二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物可以開發(fā)為安全，有效的降脂和降糖的藥物，對現(xiàn)代社會日益威脅廣大人民的代謝疾病具有潛在的治療作用。

實施例2高脂飲食誘導(dǎo)造成金黃地鼠脂肪肝藥物療效研究

研究動物說明：本實驗采用的研究動物為上述“金黃地鼠模型體內(nèi)降脂實驗”使用動物，動物血清指標(biāo)研究完成后，將動物處死并解剖，取動物肝臟組織，部分福爾馬林固定，部分-80℃冷凍保存，固定超過48hr后進(jìn)行病理切片染色(h&e染色、油紅-o染色)檢查。重點關(guān)注肝臟結(jié)構(gòu)完整性、炎性細(xì)胞浸潤與脂肪肝嚴(yán)重程度，并進(jìn)行評分(評分標(biāo)準(zhǔn)：0級：正常；1級：<20％；2級：20-40％；3級：40-60％；4級：60-80％；5級：>80％)。結(jié)果見下表。

結(jié)果顯示，高脂模型組與正常組相比，肝臟中脂肪細(xì)胞的體積明顯增大，出現(xiàn)大泡性脂肪變性，脂肪的聚積嚴(yán)重破壞了肝臟的組織結(jié)構(gòu)，造成肝臟空泡變性，并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤，以上現(xiàn)象表明，非酒精性脂肪肝炎造模成功。

動物灌胃服用本發(fā)明部分化合物后，從空泡變性評分來看，二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方均對肝臟結(jié)構(gòu)有一定的保護(hù)作用，由于脂肪細(xì)胞造成的肝臟損傷得到了一定修復(fù)，減小了空泡變性程度；二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方還能顯著降低炎性細(xì)胞浸潤，減少肝臟炎癥程度，能減少脂肪的聚集和脂肪細(xì)胞體積增大，肝臟脂肪程度減輕。

但是，辛伐他汀組動物肝臟解剖，其肝臟結(jié)構(gòu)完整性、炎性細(xì)胞浸潤與脂肪肝嚴(yán)重程度與高脂模型組一致，脂肪肝癥狀并沒有緩解。單用二甲雙胍，脂肪肝的組織學(xué)特點有所緩解，但是效果不明顯；單用奧貝膽酸，脂肪肝的組織學(xué)特點有所緩解，但是，并沒有接近正常水平。采用二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物低劑量治療金黃地鼠的脂肪肝時，其脂肪肝的癥狀得到了顯著的緩解，采用二甲雙胍和奧貝膽酸的復(fù)合物高劑量治療金黃地鼠的脂肪肝時，其脂肪肝的癥狀得到了顯著的緩解，恢復(fù)到了正常金黃地鼠水平。

以上兩項實驗“高脂飲食誘導(dǎo)造成金黃地鼠血液指標(biāo)異常的治療型研究實驗”和“高脂飲食誘導(dǎo)造成金黃地鼠脂肪肝藥物療效研究”，揭示了本發(fā)明二甲雙胍和奧貝膽酸復(fù)方具有如下特點：

(1)、本發(fā)明化合物表現(xiàn)出降脂活性，不會影響肝臟正常功能。在安全劑量范圍內(nèi)，本發(fā)明化合物體現(xiàn)出體內(nèi)降脂的活性，并沒有引起金黃地鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的升高，提示并沒有對肝臟造成損傷。但是，辛伐他汀降脂藥物，表現(xiàn)出降脂活性的同時，進(jìn)一步使得動物轉(zhuǎn)氨酶水平的升高，說明正常的肝臟功能受到了損傷，表現(xiàn)出明顯的肝臟毒性。本發(fā)明化合物降脂但不影響肝臟功能的特點，在臨床應(yīng)用上，提示本發(fā)明化合物比他汀類藥物具有較為顯著的安全性優(yōu)勢。

(2)、本發(fā)明化合物表現(xiàn)出降糖活性，不會影響肝臟正常功能。在安全劑量范圍內(nèi)，本發(fā)明化合物體現(xiàn)出體內(nèi)降脂的活性，并沒有引起金黃地鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的升高，提示并沒有對肝臟造成損傷。

(3)、本發(fā)明化合物對高脂模型動物脂肪肝癥狀具有潛在的治療作用，而他汀類等降脂藥并沒有以上療效。從“高脂飲食誘導(dǎo)造成金黃地鼠脂肪肝藥物療效研究”中可以看出，本發(fā)明化合物減少肝臟炎癥程度，能減少脂肪的聚集和脂肪細(xì)胞體積增大，肝臟脂肪程度減輕，脂肪細(xì)胞造成的肝臟損傷得到了一定修復(fù)，減小了空泡變性程度。然而，辛伐他汀組動物肝臟解剖，其肝臟結(jié)構(gòu)完整性、炎性細(xì)胞浸潤與脂肪肝嚴(yán)重程度與高脂模型組一致，脂肪肝癥狀并沒有緩解。

綜合以上體內(nèi)和體外藥效學(xué)實驗，可以看出，本發(fā)明化合物降脂作用機制，不同于現(xiàn)有上市降脂藥物(例如：他汀類，貝特類等等)，其優(yōu)異降脂活性以及其良好的安全性特點，以及在脂肪肝治療中的潛在治療價值，有望成為廣大心血管疾病患者，以及代謝綜合征疾病獲得良好治療收益的新一代藥物。