本發(fā)明涉及一種二苯并呋喃化合物的用途。

背景技術(shù)：

長松蘿usnealongissimaach.是真菌界地衣門茶漬目松蘿科usneaceae松蘿屬地衣。松蘿酸(usnicacid)是從長松蘿中提取的一種具有藥物活性的成分，文獻(xiàn)報(bào)道其具有抗腫瘤、抑菌、消炎、止痛等活性。有報(bào)道表明，松蘿酸具有抗lewis肺癌細(xì)胞的活性；松蘿酸具有抗乳腺癌細(xì)胞株、肺癌細(xì)胞株等多種腫瘤細(xì)胞株的活性；松蘿酸能夠通過抑制vegfr-2介導(dǎo)的akt/p70s6k和erk1/2信號(hào)通路抑制乳腺癌腫瘤生長和血管新生；能夠通過誘導(dǎo)g0/g1期細(xì)胞周期阻滯抑制細(xì)胞生長；還能夠通過誘導(dǎo)線粒體膜去極化和凋亡促進(jìn)人肺癌細(xì)胞死亡。

化合物usenaminea是松蘿酸的衍生物，有報(bào)道將其用于創(chuàng)傷治療，從未有人嘗試將其用作抗腫瘤藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本申請(qǐng)的發(fā)明人通過對(duì)松蘿酸的多種衍生物進(jìn)行研究，意外地發(fā) 現(xiàn)usenaminea具有顯著的抗腫瘤作用，從而完成了本發(fā)明。

本發(fā)明的目的在于提供二苯并呋喃化合物usenaminea用于制備抗腫瘤藥物的用途，usenaminea抗腫瘤效果顯著。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了二苯并呋喃化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途，所述二苯并呋喃化合物的結(jié)構(gòu)式如下：

根據(jù)本發(fā)明的用途，優(yōu)選地，所述抗腫瘤藥物通過抑制akt/mtor信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用。

根據(jù)本發(fā)明的用途，優(yōu)選地，所述抗腫瘤藥物通過活化mapk信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用。

根據(jù)本發(fā)明的用途，優(yōu)選地，所述腫瘤選自肺癌、肝癌、前列腺癌中的任一種。

根據(jù)本發(fā)明的用途，優(yōu)選地，所述二苯并呋喃化合物用于小鼠的有效用量范圍是10mg/kg～40mg/kg。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的二苯并呋喃化合物具有顯著的抗腫瘤作用，特別是能夠通過抑制akt/mtor信號(hào)通路和/或通過活化mapk信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用，效果明顯優(yōu)于松蘿酸。

附圖說明

圖1為實(shí)施例4中transwell試驗(yàn)采用濃度為0～8μm的usenaminea分別作用于人肺腺癌細(xì)胞系a54936h、人肝癌細(xì)胞系skhep-112h、人肝癌細(xì)胞系hepg236h、人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì) 胞36h之后染色的照片。

圖2為實(shí)施例5中采用濃度為0～7.5μm的usenaminea預(yù)處理人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞huvec細(xì)胞24小時(shí)后的微管形成照片。

圖3a為實(shí)施例6中采用濃度為0～8μm的usenaminea作用于人肝癌細(xì)胞系hepg2、人肝癌細(xì)胞系skhep-1后的westernblotting結(jié)果圖。

圖3b為實(shí)施例6中采用濃度為0～8μm的usenaminea作用于人肝癌細(xì)胞系hepg2、人肝癌細(xì)胞系skhep-1和人肺腺癌細(xì)胞系a549后的westernblotting結(jié)果圖。

圖4a為裸鼠腹腔注射不同劑量的化合物usenaminea后，腫瘤大小隨時(shí)間的變化圖。

圖4b為裸鼠腹腔注射不同劑量的化合物usenaminea后，裸鼠體重隨時(shí)間的變化圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。

pi3k-akt-mtor信號(hào)通路能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、血管形成、侵襲遷移、細(xì)胞分化、能量代謝、自噬、蛋白翻譯等細(xì)胞生物學(xué)過程。akt-mtor信號(hào)通路異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中非常常見。akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，位于pi3k的下游，介導(dǎo)了其對(duì)mtor(哺乳動(dòng)物類雷帕霉素靶蛋白，一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶)活性的調(diào)節(jié)，并起到了重要作用。pi3k被激活后可磷酸化pip3，pip3能夠促進(jìn)akt被磷酸化而被激活。mtor能被雷帕霉素特異性抑制。針對(duì)腫瘤信號(hào)通路的抗癌藥物具有選擇性高，副作用低的特點(diǎn)，目前尋找pi3k-akt-mtor信號(hào)通路過度活化所致腫瘤的治療藥物正是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。mapk信號(hào)通路在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面發(fā)揮了重要作 用，其被激活在一定程度上可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。

本發(fā)明提供了二苯并呋喃化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途，所述二苯并呋喃化合物被命名為usenaminea，化學(xué)式為(r,e)-6-乙?；?2-(1-氨基亞乙基)-7,9-二羥基-8,9b-二甲基二苯并[b,d]呋喃-1,3(2h,9bh)-二酮，結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的抗腫瘤藥物usenaminea能夠通過抑制akt/mtor信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用。另一方面，本發(fā)明的抗腫瘤藥物usenaminea能夠通過活化mapk信號(hào)通路而發(fā)揮抗腫瘤作用。根據(jù)本發(fā)明的用途，所述的腫瘤可以是能夠通過抑制akt/mtor信號(hào)通路和/或活化mapk信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用的任何腫瘤類型。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，所述腫瘤選自肺腺癌、肝癌、前列腺癌中的任一種。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗腫瘤藥物usenaminea的有效用量范圍是小鼠10mg/kg～40mg/kg，更優(yōu)選為15mg/kg～30mg/kg。作用于人體的有效劑量可根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)方法換算。

以下實(shí)施例中，采用如下試驗(yàn)材料：

dmem基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素鏈霉素混合液(100×)、0.25％胰蛋白酶-edta、二甲基亞砜均為常規(guī)市售產(chǎn)品。

(+)松蘿酸為阿拉丁試劑(上海)公司生產(chǎn)。

cck-8細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)試劑盒(cellcountingkit-8)，為日本同仁化學(xué)研究所(dojindo)產(chǎn)品。

流式凋亡檢測(cè)試劑盒為美國bd公司產(chǎn)品，β-actin為美國百奇生 物(abgent)公司產(chǎn)品。

akt、p-akt、ps6、s6、p-p38、p38、p-erk、erk，均為美國cst公司(cellsignalingtechnology,inc)產(chǎn)品。

hrp-標(biāo)記的羊抗鼠/兔，為美國圣克魯茲(santacruz)生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

人肺腺癌細(xì)胞系a549細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec均來自美國atcc生物標(biāo)準(zhǔn)品資源中心；其中，人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec細(xì)胞用dmem完全培養(yǎng)基(含有10％的fbs、100u/ml青霉素、100g/ml鏈霉素)培養(yǎng)；人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì)胞用f12k完全培養(yǎng)基(含有10％的fbs、100u/ml青霉素、100g/ml鏈霉素)培養(yǎng)；細(xì)胞培養(yǎng)條件為37℃，5％co2，飽和濕度培養(yǎng)。

裸鼠，balb/c種系，18-22g，4-5周齡，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，在spf級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng)。

制備例

化合物usenaminea合成方法如下：

將(+)松蘿酸溶于無水乙醇，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，加入濃氫氧化銨溶液。80℃攪拌2小時(shí)，冷卻，濃縮。用1n鹽酸酸化并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的萃取物用水和鹽水洗滌后，用無水硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)。殘余物用氯仿結(jié)晶，經(jīng)鑒定為化合物usenaminea(產(chǎn)率77％)。將化合物usenaminea溶于dmso，得到20mm、40mm的母液，后稀釋到工作液濃度用于后續(xù)研究。

實(shí)施例1

cck-8細(xì)胞增殖試驗(yàn)

采用cck-8試劑(細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒，cellcountingkit-8)，測(cè)定不同濃度下的usenaminea對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3的增殖活性的影響。分別取對(duì)數(shù)期的人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3，制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為3.5×10⁴/ml～4.0×10⁴/ml，加入96孔板，每孔100μl。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)使其完全貼壁，將化合物usenaminea母液用完全培養(yǎng)基稀釋成2μm-10μm的工作液，每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。于加藥48h后，每孔加入10μlcck-8試劑，使其在37℃作用2小時(shí)。酶標(biāo)儀測(cè)定測(cè)量波長450nm，參比波長630nm下各孔的od值，并以公式計(jì)算各組的抑制率。結(jié)果如表1所示。

表1usenaminea抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用

由表1可看出，化合物usenaminea對(duì)所述腫瘤細(xì)胞均有十分明顯的增殖抑制作用，且隨著化合物usenaminea濃度的增加，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率逐漸增大。

另外，發(fā)明人還采用相同檢測(cè)方法檢測(cè)了松蘿酸對(duì)人肝癌細(xì)胞系hepg2增殖活性的影響，結(jié)果顯示，松蘿酸的濃度與對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率同樣呈正相關(guān)，但松蘿酸對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率遠(yuǎn)低于 usenaminea。例如，松蘿酸濃度增大至20μm，其對(duì)人肝癌細(xì)胞系hepg2的增殖抑制率也僅為15.8±0.5，效果明顯遜于usenaminea。

實(shí)施例2

流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡試驗(yàn)

分別取人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3，制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10⁵/ml，接種在6孔板中，過夜貼壁后，分別加入濃度為0、4、6、8μm的usenaminea，培養(yǎng)48h，按annexinv-fitc/pi檢測(cè)試劑盒方法方法操作。簡言之，以0.25％胰蛋白酶(不含edta)消化成單細(xì)胞懸液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使得收集的細(xì)胞總數(shù)約為1×10⁶。用pbs洗細(xì)胞2次，1000rpm離心5min，收集細(xì)胞。加入500μl的annexinvbindingbuffer懸浮細(xì)胞，加入5μlannexinv–fitc和5μlpropidiμmiodide混勻，避光，室溫反應(yīng)15min，流式細(xì)胞儀分析，得到細(xì)胞凋亡率，結(jié)果如表2所示。

表2usenaminea促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡作用

由表2可見，化合物usenaminea能夠促進(jìn)所述腫瘤細(xì)胞凋亡，且細(xì)胞凋亡率與劑量成正相關(guān)，即隨著給藥濃度的上升，所述腫瘤細(xì)胞凋亡率逐漸升高。

實(shí)施例3

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)被用來評(píng)價(jià)細(xì)胞體外的遷移能力。觀察不同濃度的化合物usenaminea對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì)胞體外遷移能力的影響。所選擇的給藥濃度均在低細(xì)胞毒的范圍內(nèi)，進(jìn)一步排除因細(xì)胞毒作用而致使細(xì)胞的遷移能力受到抑制的可能。每種腫瘤細(xì)胞根據(jù)其自身遷移能力的強(qiáng)弱調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)而開展試驗(yàn)。

分別將人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3接種在12孔板中，待細(xì)胞處于亞融合狀態(tài)時(shí)，換用無血清的dmem高糖培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)12h。用10μl的白色槍頭垂直輕柔劃痕，均勻用力。1×pbs清洗因劃痕而飄起的細(xì)胞碎片，至少3次。拍照，作為加藥前的空白對(duì)照。分別用不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基將化合物usenaminea母液稀釋成工作液，工作液的usenaminea濃度分別為0(表示不含usenaminea)、2、4、6μm的工作液，分別加藥刺激細(xì)胞，劃痕后24h于相差顯微鏡下觀察拍照，評(píng)價(jià)細(xì)胞遷移能力的大小。結(jié)果如表3所示。

表3usenaminea抑制腫瘤細(xì)胞的遷移能力的作用

由表3可見，隨著化合物usenaminea濃度的升高，劃痕愈合能 力減弱。因此，usenaminea可以在細(xì)胞毒較低的濃度范圍內(nèi)較好地抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。

實(shí)施例4

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

采用transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)化合物usenaminea對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外侵襲能力。所選擇的給藥濃度同樣均在低細(xì)胞毒的范圍內(nèi)，每種腫瘤細(xì)胞根據(jù)其自身侵襲能力的強(qiáng)弱調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)而開展試驗(yàn)。

取對(duì)數(shù)生長期的人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系skhep-1、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì)胞，更換培養(yǎng)液為無血清的培養(yǎng)液饑餓培養(yǎng)12h，以減少血清的干擾。將transwell小室置于24孔板中，將matrigel膠與細(xì)胞培養(yǎng)基按1:2比例混勻。取60μl均勻鋪到transwell小室的上室中，操作宜輕柔，避免氣泡產(chǎn)生。將鋪好matrigel膠的小室放在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，時(shí)間控制在半小時(shí)到四小時(shí)之間，使膠凝固。將細(xì)胞消化后離心，用無血清培養(yǎng)基懸浮，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5×10⁵/ml，下室加入750μl含10％fbs的完全培養(yǎng)基，上室加入200μl含不同濃度usenaminea的無血清培養(yǎng)基細(xì)胞懸液。將人肺腺癌細(xì)胞系a549、人肝癌細(xì)胞系hepg2、人前列腺癌細(xì)胞系pc3細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)分別培養(yǎng)36h后，人肝癌細(xì)胞系skhep-1置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12h后，用棉簽擦掉上室細(xì)胞，多聚甲醛通透4min，甲醇固定15min，結(jié)晶紫染色10min后用pbs沖洗小室，將染料去除，顯微鏡下取樣，拍照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

由圖1可見，化合物usenaminea對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力具有較好的抑制作用；與對(duì)照組相比，隨著化合物usenaminea給藥濃度的升高，穿越小室的細(xì)胞數(shù)目均逐漸下降。

實(shí)施例5

化合物usenaminea抗血管形成活性

血管生成是一個(gè)涉及多步驟的復(fù)雜的過程，在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)的過程中扮演重要角色。將不同濃度的化合物usenaminea(0、4.5、6，7.5、10μm)作用于人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞huvec，48h后cck-8法檢測(cè)，結(jié)果如表4所示。

表4usenaminea抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用

由表4可見，隨著化合物usenaminea給藥濃度的逐漸上升，huvec的增殖抑制率逐漸增加。

另外，內(nèi)皮細(xì)胞可以在matrigel膠上融和成微管，發(fā)明人利用內(nèi)皮細(xì)胞的這種成管特性，來研究藥物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞成管的作用。usenaminea(0、2.5、5、7.5μm)預(yù)處理huvec細(xì)胞24h后，觀察其成管能力。具體操作方法為：

取對(duì)數(shù)生長期的huvec細(xì)胞，以1×10⁵/ml的細(xì)胞密度接種在6孔板中，過夜貼壁后，分別加入終濃度為0、2.5、5、7.5μm的化合物usenaminea，培養(yǎng)24h。將4℃過夜化凍的matrigel人工基質(zhì)膠平鋪于96孔板的孔底，每孔70μl，放于5％co2、37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)30min使膠固化，處理過的各組huvec細(xì)胞用dmem完全培養(yǎng)基稀釋為密度為1×10⁵/ml的細(xì)胞懸液，接種于上述鋪好膠的96孔板，每孔200μl，常規(guī)培養(yǎng)10h，每隔2小時(shí)觀察微管樣結(jié)構(gòu)形成情況，倒置顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野拍照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

微管照片如圖2所示，在低濃度2.5μm時(shí)微管的形成受影響較小，在5、7.5μm的藥物作用下，微管形成的阻斷效果則十分明顯，僅在局部形成一些細(xì)、短、小的管，或者小環(huán)。

實(shí)施例6

usenaminea抑制akt/mtor信號(hào)通路、上調(diào)mapk信號(hào)通路試驗(yàn)

akt在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞轉(zhuǎn)移和血管生成等生物學(xué)功能中發(fā)揮重要作用。mtor是akt信號(hào)的下游分子。腫瘤細(xì)胞中經(jīng)常存在著akt/mtor信號(hào)通路的持續(xù)激活。為了研究usenaminea對(duì)akt/mtor信號(hào)通路的影響，發(fā)明人采用westernblotting試驗(yàn)檢測(cè)了相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果如圖3a所示，隨著給藥濃度的上升，在hepg2和skhep-1細(xì)胞中usenaminea可明顯降低p-akt，p-s6(p-s6是mtor活性的標(biāo)志物)的蛋白水平，提示usenaminea能夠抑制akt/mtor信號(hào)通路。

已知mapk信號(hào)通路主要包括jnk，p38和erk，該通路被激活在一定程度上可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。發(fā)明人采用westernblotting試驗(yàn)對(duì)mapk信號(hào)通路中的幾個(gè)關(guān)鍵蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果如圖3b所示，在hepg2、skhep-1、a549細(xì)胞中erk和p38的磷酸化水平隨著usenaminea給藥濃度的上升而增加，所以化合物usenaminea能夠激活mapk信號(hào)通路。

westernblotting試驗(yàn)方法如下：

細(xì)胞用預(yù)冷的1×pbs洗兩遍，然后加入適量裂解液，用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞和裂解液刮入1.5mlep管中，98℃煮沸10分鐘，然后離心。取15孔8％～15％sds-page蛋白膠，蛋白樣品加樣量為15μl/ 孔，電泳，轉(zhuǎn)膜，5％脫脂奶粉(tbst稀釋)室溫輕搖封閉1小時(shí)，用抗體稀釋劑將相應(yīng)的一抗稀釋到濃度為1:1000，4℃過夜孵育，1×tbst漂洗3次，每次10min，hrp標(biāo)記二抗用抗體稀釋劑稀釋，終濃度為1:5000或1:10000，室溫?fù)u床輕搖4h，顯影。

實(shí)施例7

裸鼠移植瘤模型給藥實(shí)驗(yàn)：

采用雄性balb/c裸鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。將人前列腺癌細(xì)胞pc3培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，用不含edta的0.25％胰酶消化，pbs洗滌細(xì)胞兩次，1000rpm離心5min，pbs調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至7.5×10⁶/ml，每只裸鼠項(xiàng)肩部皮下注射0.2ml。待腫瘤體積達(dá)到100～200mm³時(shí)將裸鼠隨機(jī)平均分為三組，每組8只，分別設(shè)為usenaminea低劑量治療組、usenaminea高劑量治療組和空白溶劑組。其中，低劑量治療組用usenaminea腹腔注射15mg/kg，高劑量治療組用usenaminea腹腔注射30mg/kg，對(duì)照組腹腔注射同體積的空白溶劑，每日一次。每日觀察精神、飲食、活動(dòng)、大小便等一般情況，每隔兩天稱量裸鼠體重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體最大長度(a)、寬度(b)，根據(jù)公式v＝ab²/2計(jì)算腫瘤體積，并畫出腫瘤體積時(shí)間生長曲線。

結(jié)果顯示，usenaminea能夠抑制人前列腺癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力(見圖4a)，體重變化曲線顯示usenaminea沒有明顯改變裸鼠的體重(見圖4b)。

本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式，在不背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以想到的任何變形、改進(jìn)、替換均落入本發(fā)明的范圍。