本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種抗衰老保健品槲皮素的新劑型，特別涉及一種復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品。

技術(shù)背景

槲皮素(Quercetin)，又名櫟精，槲皮黃素，溶于冰醋酸，堿性水溶液呈黃色，幾乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。

槲皮素能顯著抑制促癌劑的作用、抑制離體惡性細胞的生長、抑制艾氏腹水癌細胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成。

槲皮素有抑制血小板聚集和5-羥色胺(5-HT)的釋放作用。槲皮素對ADP、凝血酶和血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的血小板聚集均有明顯抑制作用，其中對PAF的抑制作用最強，槲皮素也能明顯抑制凝血酶誘導(dǎo)的兔血小板3H-5-HT釋放。

研究結(jié)果顯示，受照大鼠肝臟中過氧化物質(zhì)MDA含量顯著增加，科研人員認為其可能是自由基對膜脂質(zhì)的脂肪酸成分造成損傷而引起的。而攝入槲皮素可提高肝臟抗氧化物質(zhì)的含量和抗氧化酶類的活性，加速過氧化氫的分解，減輕炎性細胞的浸潤，有助于抗氧化和保護肝細胞。同時，槲皮素可顯著增強照射組大鼠淋巴細胞的增殖率，并顯著增加免疫輔助細胞、免疫殺傷細胞的百分率。這表明槲皮素確實對受照大鼠機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)有緩解作用。

槲皮素抗氧化、抗衰老效果好，但由于本身脂溶性的缺陷，致使槲皮素的作用無法充分被發(fā)揮利用，使得槲皮素?zé)o法得到充分利用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種分布均勻，穩(wěn)定性好，滲透性高、溶解度好、生物利用度高的復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品。

實現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案是：一種復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品，其特征在于該藥的粒徑介于67.1～92.4nm之間，平均粒徑為78.4nm，其原料及其質(zhì)量百分比為：

其余成分為蒸餾水，上述原料的質(zhì)量百分比之和為100％。

本發(fā)明所選的芹菜，屬傘形科植物。有水芹、旱芹兩種，功能相近，藥用以旱芹為佳。旱芹香氣較濃，又名“香芹″，亦稱″藥芹″。芹菜是高纖維食物，它經(jīng)腸內(nèi)消化作用產(chǎn)生一種木質(zhì)素或腸內(nèi)脂的物質(zhì)，這類物質(zhì)是一種抗氧化劑，對預(yù)防高血壓、動脈硬化等都十分有益，并有輔助治療作用。

性味歸經(jīng)：性涼，味甘辛，無毒；入肺、胃、肝經(jīng)。功效主治：清熱除煩，平肝，利水消腫，涼血止血。主治高血壓，頭痛，頭暈，暴熱煩渴，黃疸，水腫，小便熱澀不利，婦女月經(jīng)不調(diào)，赤白帶下.瘰疬.痄腮等病癥。

功效：1.平肝降壓：芹菜含酸性的降壓成分，對兔、犬靜脈注射有明顯降壓作用；血管灌流，可使血管擴張；用主動脈弓灌流法，它能對抗煙堿、山梗茶堿引起的升壓反應(yīng)，并可引起降壓。臨床對于原發(fā)性、妊娠性及更年期高血壓均有效。2.鎮(zhèn)靜安神：從芹菜子中分離出的一種堿性成分，對動物有鎮(zhèn)靜作用，對人體能起安定作用；芹菜甘或芹菜素口服能對抗可卡因引起的小鼠興奮，有利于安定情緒，消除煩躁。3.利尿消腫：芹菜含有利尿有效成分，消除體內(nèi)水鈉潴留，利尿消腫。臨床上以芹菜水煎有效率達85.7％，可治療乳糜尿。4.：防癌抗癌芹菜是高纖維食物，它經(jīng)腸內(nèi)消化作用產(chǎn)生一種木質(zhì)素或腸內(nèi)脂的物質(zhì)，這類物質(zhì)是一種抗氧化劑，高濃度時可抑制腸內(nèi)細菌產(chǎn)生的致癌物質(zhì)。它還可以加快糞便在腸內(nèi)的運轉(zhuǎn)時間，減少致癌物與結(jié)腸粘膜的接觸達到預(yù)防結(jié)腸癌的目的。5.養(yǎng)血補虛：芹菜含鐵量較高，能補充婦女經(jīng)血的損失，食之能避免皮膚蒼白、干燥、面色無華，而且可使目光有神，頭發(fā)黑亮。6.清熱解毒：秋季氣候干燥，人們往往感到口干舌燥氣喘心煩，身體不適，常吃些芹菜有助于清熱解毒，去病強身。肝火過旺，皮膚粗糙及經(jīng)常失眠、頭疼的人可適當多吃些。

本發(fā)明所選的蘑菇(mushrooms)，真菌門蘑菇科，蘑菇富含18種氨基酸、多種維生素和豐富的鈣、鐵等礦物質(zhì)，無機質(zhì)、維生素、蛋白質(zhì)、植物纖維素等豐富的營養(yǎng)成分，熱量低。

藥理：1.抗菌作用：蘑菇的培養(yǎng)液(28～30℃培養(yǎng)22天)能抑制金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌及大腸桿菌，此培養(yǎng)液對豚鼠無毒，人口服250毫升亦無副作用。同屬植物AgaricusnebularisBatsch.的壓榨汁尚能抑制分支桿菌及結(jié)核桿菌。2.提高機體免疫力：蘑菇的有效成分可增強T淋巴細胞功能，從而提高機體抵御各種疾病的免疫功能。3.鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜：巴西某研究所從蘑菇中提取到一種物質(zhì)Act-2，具鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜功效，其鎮(zhèn)痛效果可代替嗎啡。4.止咳化痰：蘑菇提取液用于動物實驗，發(fā)現(xiàn)其有明顯的鎮(zhèn)咳、稀化痰液的作用。5.抗癌：日本研究人員在蘑菇有效成分中分析出一種分子量為288的超強力抗癌物質(zhì)，能抑制癌細胞的生長，其作用比綠茶中的抗癌物質(zhì)強1000倍。蘑菇中還含有一種毒蛋白，能有效地阻止癌細胞的蛋白合成。6.通便排毒：蘑菇中所含的人體很難消化的粗纖維、半粗纖維和木質(zhì)素，可保持腸內(nèi)水分，并吸收余下的膽固醇、糖分，將其排出體外，對預(yù)防便秘、腸癌、動脈硬化。糖尿病等都十分有利。

本發(fā)明選用的表面活性劑為聚氧乙烯40氫化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐溫80或泊洛沙姆188中的任意一種或與span80的混合物，這些表面活性劑對人體低毒、安全、無刺激。

本發(fā)明選用的油是的油是大豆油、菜籽油、肉豆蔻酸異丙酯、乙酸乙酯、油酸乙酯或油酸中的任意一種或幾種的混合物，安全、無毒。

本發(fā)明選用的助表面活性劑為無水乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400或丙三醇中的任意一種或幾種的混合物。

本發(fā)明的復(fù)方槲皮素納米乳通過口服給藥，極大的提高了藥物的溶解度，減少藥物在體內(nèi)的首過效應(yīng)，促進藥物的胃腸道吸收。槲皮素在水中極難溶解，使藥物的轉(zhuǎn)運及吸收變得困難，納米乳基質(zhì)為槲皮素提供了良好的溶解環(huán)境，并且通過復(fù)方芹菜水提物及蘑菇水提物，使得本復(fù)方納米乳的抗氧化、抗衰老效果更佳顯著及持久?？诜r可經(jīng)淋巴吸收，克服首過效應(yīng)和分子通過胃腸道時的屏障。

本發(fā)明的復(fù)方槲皮素納米乳與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點：

1.本發(fā)明的槲皮素抗衰老納米乳的藥物粒徑在67.1～92.4nm之間，平均粒徑為78.4nm，是將槲皮素溶于油相中，加入表面活性劑和助表面活性劑)，用蒸餾水滴定到均勻、透明的納米乳體系。形成的復(fù)方槲皮素納米乳含槲皮素達5.8％以上。

2.本發(fā)明的槲皮素抗高血壓納米乳分布均勻，體系透明、穩(wěn)定性好，有較低的表面張力，油包水型納米乳具有良好的流動性。

3.本發(fā)明的槲皮素抗高血壓納米乳給藥后迅速被網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞吞噬，使藥物迅速起效，并維持恒定的血藥濃度及藥理效應(yīng)，提高藥物的生物利用度，減少藥物的用量和使用次數(shù)。

4.本復(fù)方納米乳通過加入芹菜水提物及蘑菇水提物，使得本復(fù)方納米乳的抗衰老效果更佳顯著及持久。

5.本發(fā)明的槲皮素抗高血壓納米乳制備方法簡單，藥效穩(wěn)定，生耗能低。

6.本發(fā)明制成納米后可制成口服液直接服用、也可經(jīng)膠囊包封或經(jīng)凍干粉技術(shù)等處理。

試驗例1本發(fā)明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品粒徑大小分析

具體實施方式

發(fā)明人給出具體制備方法實施例及使用藥效試驗來進一步說明本發(fā)明藥物的效果。

試驗例1本發(fā)明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品穩(wěn)定性分析

本發(fā)明經(jīng)透射電子顯微鏡檢測，液滴呈類球形，分散性好，無粘連。經(jīng)馬爾文粒度分析儀檢測其直徑分布在67.1～92.4nm之間，平均粒徑為78.4nm。

通過以下離心試驗、光穩(wěn)定性試驗、溫度穩(wěn)定性試驗等觀察本發(fā)明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品的穩(wěn)定性，觀察本發(fā)明是否有分層、渾濁或晶體析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象。

1.高速離心試驗

取適量制備好的本發(fā)明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品于離心管中，以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min，離心試驗后，本發(fā)明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品依然保持離心前的澄清透明，未見分層、渾濁或晶體析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象。

2.光穩(wěn)定性試驗

將適量制備好的復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品裝入透明好的無色、透明小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照條件下10d，分別于1d、2d、4d、6d、8d、10d取樣觀察。結(jié)果表明復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品每份樣品均保持澄清透明，未見分層、渾濁或晶體析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象。

3.溫度穩(wěn)定性試驗

將適量制備好的復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品裝入透明好的無色、透明玻璃瓶中，密封，放置于4℃、室溫(25℃)和40℃三中溫度條件下留樣考察各30d，每隔5d取樣觀察。結(jié)果表明，復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品在此三種溫度條件下均保持澄清透明，未見分層、渾濁或晶體析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象。

4.長期穩(wěn)定性試驗

將3批納米乳密封于棕色玻璃瓶內(nèi)，置于(25±2)℃、相對濕度(60±5)％條件下12個月，分別于0、3、6、9和12個月時取樣，考察納米乳的性狀及含量變化，并參考文獻統(tǒng)計分析方法，計算復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品的有效期。試驗結(jié)果表明在長期試驗條件下，復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品的外觀一直保持澄明、均一，未見分層、色變、絮凝和破乳等現(xiàn)象；體系中的槲皮素含量隨時間延長而逐漸降低，其含量-時間變化曲線提供的線性回歸方程，計算出復(fù)方槲皮素納米乳抗衰老保健品的有效期為31.22個月。

試驗例2毒性試驗及結(jié)論：

本發(fā)明產(chǎn)品嚴格按照按《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》進行了急性毒性試驗，遺傳毒性試驗，包括Ames試驗、小鼠骨髓微核試驗、小鼠精子畸形試驗、小鼠辜丸染色體畸變試驗以及小鼠30d喂養(yǎng)試驗，試驗結(jié)果如下。

本品對小鼠急性毒性實驗結(jié)論：給藥后連續(xù)觀察一周，60只小鼠無明顯不良反應(yīng)及死亡。本品對小鼠灌胃的耐受量為180g/kg，相當于臨床用量的1800倍。根據(jù)急性毒性分設(shè)標準，本品屬無毒物質(zhì)。

本發(fā)明產(chǎn)品的Ames試驗、小鼠精子畸形試驗和睪丸染色體畸變試驗等遺傳毒性試驗的結(jié)果均為陰性。

大鼠30d喂養(yǎng)本發(fā)明產(chǎn)品的結(jié)果表明：在試驗期內(nèi)各實驗組動物生長發(fā)育良好，體重、攝食量、血常規(guī)、血生化、臟器系數(shù)等指標均在正常范圍內(nèi)，病理組織學(xué)檢查亦未見異常，說明本品無毒性作用。

本品長期毒性實驗結(jié)論：不同劑量的本藥品在連續(xù)灌胃給藥三個月未見大鼠不良反應(yīng)，各項檢查指標均在正常范圍內(nèi)，病理檢查其主要臟器及靶器官均未見該藥引起的中毒性病理改變。

試驗例3藥效研究項目及結(jié)論：

1.雌性小鼠生殖器官試驗結(jié)果表明：①注射D-半乳糖的小鼠與正常組相比，其卵巢和子宮SOD、GSH-Px和總蛋白含量以及血清雌二醇含量顯著下降，MDA含量顯著升高(P＜0.01)。②服用本品后，小鼠卵巢和子宮SOD、GSH-Px和總蛋白含量分別升高(P＜0.01，P＜0.05)，MDA含量顯著下降(P＜0.01)。③服用本品后，小鼠血清雌二醇含量提升，分別為(6.68±0.66)和(6.66±0.56)，與衰老組相比有顯著性差異(P＜0.05)。

2.乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)試驗結(jié)果表明：①與正常組相比，本品能縮短乳腺上皮細胞群體倍增時間(P＜0.05)，提升細胞分裂指數(shù)(P＜0.05)，具有顯著性差異；②單純使用玉米幼芽提取物不能誘導(dǎo)乳腺上皮細胞合成酪蛋白；③血清饑餓培養(yǎng)能夠降低細胞增殖活性，20mg/L濃度和40mg/L濃度玉米幼芽提取物能夠有效延緩乳腺上皮細胞增殖活性的降低(P＜0.05)，具有顯著的保護效應(yīng)(P＜0.05)。④血清饑餓培養(yǎng)能夠誘導(dǎo)乳腺上皮細胞凋亡，凋亡的細胞表達bcl-2基因；本品能夠誘導(dǎo)細胞高表達bcl-2基因，經(jīng)分析，平均光密度分別為(0.3777±0.0111)和(0.4163±0.0134)，和饑餓組相比有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。⑤與饑餓組相比，本品能夠顯著提升乳腺上皮細胞總蛋白含量(P＜0.05)；10mg/L濃度與饑餓組相比，無顯著性差異。

3.氧化所導(dǎo)致的心肌缺血保護：

(1)Iso誘發(fā)的家兔心肌缺血損傷保護試驗：本品可減輕Iso誘發(fā)的家兔心肌缺血損傷。實驗結(jié)果顯示，本品可減輕Iso引起的家兔心率加快、J點升高程度，改善心肌組織損傷；顯著或極顯著降低血清中的AST、LDH、CK活性(P＜0.01或P＜0.05)；顯著或極顯著提高血清中NO含量(P＜0.01或P＜0.05)、心肌組織和血清中SOD和GSH-pX活性(P＜0.01或P＜0.05)，顯著或極顯著降低心肌組織和血清中MDA含量(P＜0.01或P＜0.05)。

(2)Pit誘發(fā)的家兔心肌缺血損傷保護試驗：預(yù)先給家兔灌胃本品作為保護，連續(xù)2周后，耳緣靜脈注射Pit(2.0U·kg^-1，用生理鹽水稀釋為3ml，20s勻速注射)，誘發(fā)家兔心肌缺血。結(jié)果顯示，本品可抑制Pit所致家兔心率減緩、S-T段抬高、T波高聳；顯著或極顯著降低血清中的AST、LDH、CK活性(P＜0.01或P＜0.05)；顯著或極顯著提高心肌組織中SOD和GSH-PX活性(P＜0.01或P＜0.05)，顯著或極顯著降低MDA含量(P＜0.01或P＜0.05)。

(3)本品可減輕Iso誘發(fā)的體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞缺血損傷

體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，加入Iso模擬心肌缺血狀態(tài)30min后，加入本品。結(jié)果顯示，本品可改善缺血狀態(tài)下的心肌細胞形態(tài)，提高細胞存活率和細胞密度；顯著或極顯著降低細胞培養(yǎng)液中AST、LDH、CK活性(P＜0.01或P＜0.05)；極顯著提高SOD和GSH-pX活性(P＜0.01)，顯著降低MDA含量(P＜0.05)；促進BCl-2表達，抑制NF-κB表達。

綜合上述實驗結(jié)果，本品對氧化所致的心肌缺血損傷有保護作用。

4.本品對衰老小鼠心肌自由基代謝和超微結(jié)構(gòu)的影響：以D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老模型，研究本品對衰老小鼠心肌抗氧化酶活性、自由基含量和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量的影響，并從形態(tài)學(xué)上對EMP的抗氧化損傷作用進行了考察。結(jié)果顯示：(1)本藥品保護組的各項指標與衰老模型組間均呈極顯著差異(SOD：87.241±3.849U/mg，+18.8％，P＜0.01；CAT：47.313±2.195U/mg，+36.4％，P＜0.01；GSH-Px：28.038±1.583U/mg，+37.6％，P＜0.01；MDA：11.300±1.529nmol/mg，-34.7％，P＜0.01；NO：6.438±0.637μmol/L，-47.1％，P＜0.01)；(2)HE染色觀察，模型組心肌纖維排列紊亂，扭曲斷裂增多，纖維間空隙增大；電鏡觀察，模型組心肌Z線變寬、模糊，肌原纖維斷裂、溶解、凝集，線粒體腫脹、空泡化、嵴消失；20mg/kgEMP保護組的以上病變得到了明顯的改善。以上結(jié)果說明，20mg/kgEMP具有增強衰老小鼠心肌抗氧化酶活性，改善心肌自由基代謝，保護心肌細胞超微結(jié)構(gòu)免受自由基氧化損傷的作用。

5.本品對果蠅的抗衰老作用：以果蠅為實驗對象研究EMP對其繁殖力、抗熱應(yīng)激能力、吃食量、水分含量和壽命的影響，并基于D-半乳糖誘導(dǎo)的果蠅衰老模型考察EMP對衰老果蠅體內(nèi)SOD活性和MDA含量的作用。結(jié)果表明：(1)與空白對照組比較，40mg/kg的藥物組能明顯提高果蠅繁殖力、抗熱應(yīng)激能力(雌蠅：75.250±4.031％，+33.78％，P＜0.01；雄蠅：63.750±3.500％，+19.72％，P＜0.01)、吃食量(雌蠅：0.043±0.003g，+22.86％，P＜0.05；雄蠅：0.048±0.002g，+23.08％，P＜0.05)、水分含量(雌蠅：0.065±0.004g，+14.04％，P＜0.05；雄蠅：0.059±0.002g，+20.41％，P＜0.01)、平均壽命(雌蠅：66.23±13.37d，+10.79％，P＜0.01；雄蠅：63.96±12.66d，+15.64％，P＜0.05)和最高壽命壽命(雌蠅：80.67±2.08d，+14.15％，P＜0.01；雄蠅：75.67±1.53d，+10.74％，P＜0.05)；(2)與模型組相比，藥物保護組的SOD活性顯著升高(雌蠅：40d，P＜0.01；雄蠅：30d、40d，P＜0.05)，MDA含量明顯下降(雌蠅：30d、40d，P＜0.01；雄蠅：30d、40d，P＜0.01)。以上結(jié)果顯示，本品能提高果蠅的繁殖力、抗熱應(yīng)激能力、吃食量、水分含量和壽命，升高衰老果蠅體內(nèi)的SOD活性，降低MDA含量，對抗D-半乳糖引起的氧化損傷。

6.本品能極顯著升高衰老小鼠睪丸組織SOD活性、GSH-PX活性及NO含量、血清T水平、附睪精子數(shù)和精子活率(P＜0.01)，極顯著降低MDA含量(P＜0.01)。藥物組小鼠睪丸生精細胞數(shù)目增多、排列有序，管腔內(nèi)精子數(shù)目增多。生精細胞細胞器數(shù)目增多，線粒體形態(tài)完整，細胞核清晰。Leydig細胞數(shù)目增多，細胞核清晰、顆粒狀分布。并可能極顯著提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸Leydig細胞睪酮合成和分泌的能力(P＜0.01)，保持細胞結(jié)構(gòu)完整性。

綜上所述，本發(fā)明制劑對于發(fā)揚人體活力延緩人體的各種生理功能衰退有顯著效果，無毒副作用，適于各年齡段、特別是中老年人服用。

實施例1

精確稱取EL40 28g，乙酸乙酯9g，槲皮素5.8g，PEG200 4g在室溫(25℃)條件下磁力攪拌器攪拌均勻，然后向其中緩慢滴入已溶解芹菜提取物及蘑菇提取物的蒸餾水。隨著蒸餾水量的增加，體系黏稠度增大，當蒸餾水量使得體系由油包水變?yōu)樗托图{米乳時，體系粘稠度從最粘稠的狀態(tài)變稀，此時產(chǎn)生的是無色透明的復(fù)方槲皮素納米乳，加入的芹菜水提物5.2g，蘑菇水提物4.7g，蒸餾水43.3g。此比例即為槲皮素抗高血壓納米乳的最優(yōu)配比。

以下實施例步驟同實施例1：

實施例2

槲皮素6g，吐溫80 24g，肉豆蔻酸異丙酯12g，乙醇12g，芹菜水提物4g，蘑菇水提物4g，蒸餾水46g。

實施例3

槲皮素4g，RH40 28g，油酸10g，PEG400 3g，芹菜水提物5g，蘑菇水提物7g，蒸餾水43g。

實施例4

槲皮素4.7g，EL40氫化蓖麻油21g，油酸乙酯7g，丙三醇3g，芹菜水提物3.5g，蘑菇水提物6.5g，蒸餾水54.3g。

實施例5

槲皮素8g，泊洛沙姆188 25g，肉豆蔻酸異丙酯10g，PEG200 12g，芹菜水提物6g，蘑菇水提物3g，蒸餾水36g。

實施例6

槲皮素7.1g，RH40 22g，大豆油10g，聚乙二醇600 17g，芹菜水提物2g，蘑菇水提物4g，蒸餾水37.9g。

實施例7

槲皮素1g，吐溫80 15g，肉豆蔻酸異丙酯5g，乙醇15g，芹菜水提物15g，蘑菇水提物15g，蒸餾水34g。

實施例8

槲皮素3g，RH40 15g，油酸8g，PEG400 12g，芹菜水提物12g，蘑菇水提物12g，蒸餾水38g。