本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說是涉及銀葉巴豆根及其提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬鏈球菌病(Streptococcosis suis)是鏈球菌屬馬鏈球菌獸疫亞種、馬鏈球菌類馬亞種、Lancefield分群中D、E、L群鏈球菌以及豬鏈球菌引起豬的疫病的總稱。臨床上主要表現(xiàn)為淋巴膿腫、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎及敗血癥等癥狀。其中，豬鏈球菌是引起豬鏈球菌病最主要的病原，該菌可引起豬腦膜炎以及敗血癥等疫病，人通過特定的傳播途徑亦可感染該菌。1987年Kilpper-Balz和Schleifer J J建議將豬鏈球菌歸納為一個新種。我國自1958年首次報道該病以來，20世紀(jì)70年代發(fā)病增加，80年代后期發(fā)病更趨嚴(yán)重，在許多地方呈大群暴發(fā)，地方性流行，造成極大危害。1998年-1999年夏季在江蘇省部分地區(qū)，豬群大面積暴發(fā)流行2型豬鏈球菌病，豬群的發(fā)病率和死亡率均在50％左右，并導(dǎo)致相關(guān)從業(yè)人員嚴(yán)重感染。2005年6月～7月份發(fā)生在四川省資陽、內(nèi)江等地區(qū)的2型豬鏈球菌感染事件造成了一定的社會影響和極大的經(jīng)濟損失，引起廣泛關(guān)注。近年來，海南五指山部分豬場也有豬鏈球菌病與其他疾病的混合感染，造成一定的損失。雖然理論上有很多藥物能治療豬鏈球菌病，例如青霉素，但隨著抗菌藥物的廣泛使用以及臨床中不合理用藥，使得病原菌的耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。
中國專利CN105267916A公開了一種治療豬鏈球菌病的獸藥，其以黃芪50g、余甘子40g、佛手15g、牛蒡子10g、香櫞8g、沙棘7g、黑芝麻7g、肉豆蔻5g、魚腥草100g、干姜45g、枸杞子20g、蒲公英15g、車前草10g、葫蘆巴6g、紅景天5g、吳茱萸4g、芡實4g、花椒3g制成了一種純中藥的制劑，能夠有效地治療豬鏈球菌病，并可以避免當(dāng)下抗菌藥物的耐藥性問題。但是隨之而來的問題是現(xiàn)有的中藥產(chǎn)品所用中藥組分較多，如上述專利就使用了多達(dá)20種左右的中藥組分，無論從生產(chǎn)的簡易程度上還是成本上都是不利的，與此相似的專利的還有CN105267797A、CN105147972A。因此，需要提供一種簡易有效的藥物來防治豬鏈球菌病。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供銀葉巴豆根及其提取物的應(yīng)用，使其治療豬鏈球菌病療效顯著，對豬鏈球菌具備高敏感性，同時可用于相關(guān)藥物的制備中。
銀葉巴豆(Croton cascarilloides Raeusch)，大戟科(Euphorbiaceae)巴豆屬(Croton L.)植物，別名葉下白，為海南黎族常用草藥。生長于海拔500米以下河谷或海邊灌木叢中或疏林中。產(chǎn)于臺灣、福建、廣東、海南、廣西及云南等地。分布于日本琉球群島、菲律賓和東南亞各國。其枝葉可入藥，味澀，性涼，可用于清火解毒，殺蟲止癢，斂水止瀉。其根，可用于祛風(fēng)，壯筋骨。用于治療風(fēng)濕骨痛，凜癰，咽喉痛，婦女白帶多。但截至目前國內(nèi)外未見銀葉巴豆根用于治療豬鏈球菌病的報道。
本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，銀葉巴豆根及其提取物均可治療和/或預(yù)防豬鏈球菌病，故提出了銀葉巴豆根或其提取物在制備治療和/或預(yù)防豬鏈球菌病藥物中的應(yīng)用。
其中，作為優(yōu)選，所述提取物為銀葉巴豆根水提取物、有機溶劑提取物或兩者的混合，所述有機溶劑提取物更優(yōu)選為乙醇提取物。
作為優(yōu)選，所述藥物為注射劑、膠囊劑、片劑或粉針劑。
根據(jù)應(yīng)用，本發(fā)明提供了一種治療和/或預(yù)防豬鏈球菌病的藥物，包括銀葉巴豆根或銀葉巴豆根提取物。其中，所述銀葉巴豆根提取物優(yōu)選為銀葉巴豆根水提取物、有機溶劑提取物或兩者的混合，所述有機溶劑提取物更優(yōu)選為銀葉巴豆根乙醇提取物。所述藥物優(yōu)選為注射劑、膠囊劑、片劑或粉針劑。
此外，本發(fā)明還提供了一種銀葉巴豆根提取物，所述提取物為銀葉巴豆根水提取物、有機溶劑提取物或兩者的混合。作為優(yōu)選，所述有機溶劑提取物為乙醇提取物。
同時，本發(fā)明還提供了一種銀葉巴豆根提取物的提取方法，其特征在于，將銀葉巴豆根加水或有機溶劑提取，所獲的水提取物、有機溶劑提取物或兩者的組合即為銀葉巴豆根提取物。
進(jìn)一步的提取方案為，取銀葉巴豆根加入乙醇浸泡，然后加熱提取，重復(fù)提取兩次，合并每次過濾后的濾液，減壓濃縮回收乙醇溶液至流浸膏狀，獲得所述銀葉巴豆根提取物。
更優(yōu)選地的提取方案為，取銀葉巴豆根放入煎藥器具中，加入10倍重量的75％乙醇溶液，浸泡30分鐘，用300至350攝氏度的武火煮沸后改用150至170攝氏度的文火煮30分鐘，趁熱過濾藥液；藥渣中加入5倍量的75％乙醇溶液，用300至350攝氏度的武火煮沸后改用150至170攝氏度的文火煮30分鐘，趁熱過濾藥液，合并2次藥液，減壓濃縮回收乙醇溶液至流浸膏狀，獲得所述銀葉巴豆根提取物。
本發(fā)明以CN105267916A專利中的中藥制劑為對照，采用本發(fā)明提取的銀葉巴豆根乙醇提取物對患豬鏈球菌病的病豬進(jìn)行臨床觀察治療，結(jié)果顯示，本發(fā)明提供的銀葉巴豆根乙醇提取物的治療總有效率和對照均為100％，但從用藥數(shù)量上，本發(fā)明更加具有優(yōu)勢。同時，本發(fā)明還和青霉素G、復(fù)達(dá)欣、菌必治一同檢測對豬鏈球菌的藥敏性，結(jié)果顯示銀葉巴豆根乙醇提取物具有對豬鏈球菌的高敏感性，而青霉素G卻產(chǎn)生了耐藥性。
由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明提供了銀葉巴豆根及其提取物在制備治療和/或預(yù)防豬鏈球菌病藥物中的應(yīng)用，其以單一的中藥組分達(dá)到了顯著的治療效果，同時具備對豬鏈球菌較高的敏感性，為預(yù)防和治療豬鏈球菌病開拓了新途徑。
具體實施方式
本發(fā)明公開了銀葉巴豆根及其提取物的應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實施例1：制備銀葉巴豆根提取物
取50公斤的銀葉巴豆根放入煎藥器具中，加入10倍重量的75％乙醇溶液，浸泡30分鐘，使銀葉巴豆根被乙醇溶液浸透，用300至350攝氏度的武火煮沸后改用150至170攝氏度的文火煮30分鐘，趁熱過濾藥液；藥渣中加入5倍量的75％乙醇溶液，用300至350攝氏度的武火煮沸后改用150至170攝氏度的文火煮30分鐘，趁熱過濾藥液，合并2次藥液，減壓濃縮回收乙醇溶液至流浸膏狀(約3公斤)即得銀葉巴豆根提取物。
實施例2：動物試驗
對照組1：CN105267916A專利治療豬鏈球菌病的獸藥，黃芪50g、余甘子40g、佛手15g、牛蒡子10g、香櫞8g、沙棘7g、黑芝麻7g、肉豆蔻5g、魚腥草100g、干姜45g、枸杞子20g、蒲公英15g、車前草10g、葫蘆巴6g、紅景天5g、吳茱萸4g、芡實4g、花椒3g。
將上述重量的中藥材放入煎藥器具內(nèi)，加入純凈水5000毫升；浸泡30分鐘使中藥材充分濕潤，用武火煮沸后改用文火煎煮1小時，過濾除去藥渣后得到中藥液；將所述中藥液加熱濃縮至2000毫升既得所述治療豬鏈球菌病的獸藥。
對照組2：黃芪50g、余甘子40g、佛手15g、牛蒡子10g、香櫞8g、沙棘7g、黑芝麻7g、肉豆蔻5g。制備方法同對照組1。
試驗組：取實施例1制備方法所得的藥物10g，加無菌純水10ml，制得濃度約為1g/ml的藥物溶液。
臨床資料：對海南省五指山市62頭患豬鏈球菌病的病豬進(jìn)行臨床觀察治療，主要發(fā)病癥狀：發(fā)熱、食欲下降、跛行或不能站立、呼吸急促、流鼻涕、眼結(jié)膜潮紅等，排除豬傳染性萎縮性鼻炎、豬接觸傳染性胸膜肺炎和豬藍(lán)耳病，經(jīng)病源微生物檢測發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性鏈球菌即可確診。將上述確診為患豬鏈球菌病的病豬分為3個治療組，分別為第一組21頭、第二組21頭和第三組20頭。第一組采用試驗組的藥物治療；第二組采用對照組1的獸藥治療；第三組采用對照組2的獸藥治療。
(1)治療方法：
將試驗組的藥物直接給病豬食用，每日每千克體重1克，分3次服用，連續(xù)服用3天后觀察癥狀變化。
將對照組1和2的獸藥直接給病豬飲用，一日三次，每次100-200毫升，連續(xù)治療3天后觀察癥狀變化。
(2)療效評定標(biāo)準(zhǔn)：
治愈：發(fā)熱、食欲下降、跛行或不能站立、呼吸急促、流鼻涕、眼結(jié)膜潮紅等臨床癥狀體征完全消失，功能活動恢復(fù)正常。
有效：發(fā)熱、食欲下降、跛行或不能站立、呼吸急促、流鼻涕、眼結(jié)膜潮紅等臨床癥狀體征明顯好轉(zhuǎn)或改善。
無效：臨床癥狀體征無改善。
(3)治療效果：
第一組：治愈18頭，占85％；有效3頭，占15％；無效0頭；總有效率100％。
第二組：治愈19頭，占90％；有效2頭，占10％；無效0頭；總有效率100％。
第三組：治愈12頭，占60％；有效6頭，占30％；無效2頭；總有效率90％。
通過以上臨床試驗可知，銀葉巴豆根對豬鏈球菌病有明顯療效，治愈率高達(dá)85％，總有效率達(dá)100％，與第二組的效果相當(dāng)，但在中藥組分上卻遠(yuǎn)少于現(xiàn)有產(chǎn)品。
實施例3：體外藥敏試驗
1、藥物與菌株
1.1試驗藥物
青霉素G(Penicillin G)、復(fù)達(dá)欣(Fortum)、菌必治(Hartridge bacteria)無菌水溶液，濃度約為1mg/ml，備用；
本發(fā)明實施例2試驗組所得的藥物溶液；
1.2試驗菌株
分離自發(fā)病死豬的肝臟和脾臟，經(jīng)生理生化實驗、致病性試驗驗證，得到2株豬鏈球菌，編號為：zlqj1和zlqj2。
2、試驗方法
采用紙片擴散法。將保存的純化菌株分別在37攝氏度營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)18h～24h，用無菌生理鹽水將菌液稀釋至濃度約為2×106個/mL，均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板。每個平板貼4張藥敏紙片，兩紙片相距25mm，紙片與平板邊緣10mm～15mm，并輕按紙片中心，使其附著嚴(yán)密，37℃恒溫培養(yǎng)24h。測量抑菌圈直徑，判定豬鏈球菌對藥敏紙片的敏感性(判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1)。根據(jù)試驗結(jié)果比較高敏率和耐藥率。
表1藥敏試驗判斷標(biāo)準(zhǔn)
試驗結(jié)果見表2。
表2兩株豬鏈球菌的藥敏試驗結(jié)果
由表2所示數(shù)據(jù)可知，2株豬鏈球菌對頭復(fù)達(dá)欣、菌必治、銀葉巴豆高度敏感，而對青霉素有明顯耐藥性。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。