本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸制品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，還涉及透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：口腔膜劑為藥物與適宜的成膜材料經(jīng)加工制成的膜狀制劑，供口服或粘膜使用。通常由水溶性成膜材料、增塑劑、崩解劑、填充劑、矯味劑、藥物等組成。成膜材料是速溶膜處方中占比重最大的輔料，可以占到膜劑干重的45％以上，其中羥丙甲纖維素，支鏈淀粉和明膠是最常用的成膜材料。其它常用的成膜材料還有聚卡波非，纖維素衍生物，普魯蘭多糖，黃原膠，海藻酸鈉，殼聚糖，聚環(huán)氧乙烯，聚乙烯醇等。不同的成膜材料會(huì)顯著影響膜劑的力學(xué)性質(zhì)和使用感受。透明質(zhì)酸是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞間質(zhì)的主要成分之一，是人體的天然成分，具有卓越的保濕性、潤(rùn)滑性、黏彈性，并具有多種生物活性，已廣泛應(yīng)用于化妝品、保健品及醫(yī)藥領(lǐng)域。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究表明透明質(zhì)酸在口腔中是構(gòu)成牙周組織細(xì)胞外基質(zhì)的重要成分，人的唾液中也含有透明質(zhì)酸，能夠提高唾液的潤(rùn)滑性能及口腔疾病治愈性能，并協(xié)助保護(hù)口腔粘膜。Pirnazar等人的研究表明透明質(zhì)酸對(duì)口腔內(nèi)的伴放線放線桿菌(被公認(rèn)為與牙周炎密切相關(guān)，是牙周炎細(xì)菌病因?qū)W中研究最多的細(xì)菌之一)、口普氏菌、金黃色葡萄球菌等均有抑制作用，且不同分子量透明質(zhì)酸的抑菌效果不同。因此，唾液中透明質(zhì)酸含量的變異與口腔內(nèi)細(xì)菌數(shù)量以及是否有牙齦病或牙周病有關(guān)。透明質(zhì)酸的口腔護(hù)理作用表現(xiàn)為，拔牙及種植手術(shù)后創(chuàng)面的抗炎、抗感染、抗水腫、抑制細(xì)菌生長(zhǎng)作用；促進(jìn)牙周組織創(chuàng)傷愈合、修復(fù)的作用；加快口腔粘膜疾病的治愈過(guò)程，緩解疼痛；解決由于口干癥及粘膜灼熱帶來(lái)的不適等。此外，透明質(zhì)酸還廣泛用于牙膏產(chǎn)品中。鋅離子具有明顯的消炎和抗菌作用，同時(shí)能加速上皮再生速度，降低炎性反應(yīng)。透明質(zhì)酸鋅由透明質(zhì)酸鈉通過(guò)鋅離子置換反應(yīng)得到。透明質(zhì)酸鋅在生物活性方面，除了具有透明質(zhì)酸鈉的作用外，還具有鋅離子的作用，因此具有更強(qiáng)的抑菌和消炎效果，可用于輔助治療細(xì)菌和真菌感染。涉及透明質(zhì)酸的口腔護(hù)理產(chǎn)品，主要為液體劑型。CN103405470A公開(kāi)了一種溶液劑型的透明質(zhì)酸組合物，用于治療和緩解口腔干燥。CN105056219A公開(kāi)一種含有0.5mg/ml透明質(zhì)酸的人工唾液。CN103462847A公開(kāi)了一種口腔護(hù)理用漱口液。專(zhuān)利CN103211801A公開(kāi)了一種口腔中快速溶解的膜劑，由水溶性成膜材料30％-90％，增塑劑2％-20％，崩解劑0％-5％，及藥物活性成分0.1％-70％組成。所用成膜材料為羥丙甲基纖維素和透明質(zhì)酸的混合物，重量配比為20～80:1，透明質(zhì)酸用量極低，不足5％。但上述現(xiàn)有技術(shù)中記載的透明質(zhì)酸類(lèi)產(chǎn)品使用的均為普通的透明質(zhì)酸鈉，而且添加量比較低，需要加入其他活性成分才具有抑菌、保健等功效，對(duì)口腔細(xì)胞損傷修復(fù)，也需要額外添加細(xì)胞修復(fù)劑，限制其推廣使用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)中透明質(zhì)酸類(lèi)產(chǎn)品在口腔保健中存在的功能單一、不利于推廣的問(wèn)題，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N具有抑菌、修復(fù)細(xì)胞損傷等功效的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜。該膜的特點(diǎn)是以透明質(zhì)酸及其衍生物為全部成膜材料，同時(shí)也是主要的活性成分，發(fā)揮口腔抑菌、抗炎、修復(fù)、保濕等作用，賦予薄膜口腔和咽喉部日常保健、治療預(yù)防疾病的功效。根據(jù)需要，還含有潤(rùn)濕劑、其它活性成分。根據(jù)使用方法和用途分為口腔或牙齒貼膜及口腔溶膜。本發(fā)明還提供了所述透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜的制備方法。本發(fā)明是通過(guò)以下步驟得到的：一種透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明質(zhì)酸鈉10％-50％，透明質(zhì)酸鋅10％-40％，水解透明質(zhì)酸鈉10％-40％。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明質(zhì)酸鈉10％-30％，透明質(zhì)酸鋅10％-20％，水解透明質(zhì)酸鈉20％-30％。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明質(zhì)酸鈉10％-20％或20％-30％，透明質(zhì)酸鋅10％-15％或15％-20％，水解透明質(zhì)酸鈉20％-25％或25％-30％。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，還含有潤(rùn)濕劑：1％-30％，除透明質(zhì)酸外的其他活性成分：0-20％。本發(fā)明中的水解透明質(zhì)酸或其鹽，為華熙福瑞達(dá)生物醫(yī)藥公司自主研發(fā)并生產(chǎn)的產(chǎn)品，以芽孢桿菌A50CGMCCNO.5744發(fā)酵培養(yǎng)得到的芽孢桿菌透明質(zhì)酸酶對(duì)透明質(zhì)酸或其鹽進(jìn)行降解得到的酶切寡聚透明質(zhì)酸或其鹽。降解條件溫和、操作簡(jiǎn)單、無(wú)環(huán)境污染，并且得到的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)完整，生物活性更高，分子量為2～20kDa，優(yōu)選8kDa。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，透明質(zhì)酸鈉和透明質(zhì)酸鋅的分子量為100～2000kDa，優(yōu)選800kDa。該口腔護(hù)理膜可根據(jù)需要加入不同的口腔護(hù)理活性組分，以賦予薄膜不同的口腔護(hù)理功效，活性組分包括口氣清新劑、抗牙斑劑、抗菌劑、牙周活性劑、脫敏劑、止痛劑、唾液刺激劑、牙齒增白劑、防齲劑、牙結(jié)石控制劑、營(yíng)養(yǎng)劑等，及其組合。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，活性成分為葡萄籽提取物、茶多酚、維生素B2、檸檬酸、檸檬酸鈉、木糖醇和薄荷醇中的一種以上。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜，所述潤(rùn)濕劑為甘油、丙二醇、丁二醇中的一種以上。所述的透明質(zhì)酸口腔護(hù)理膜的制備方法，將透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鋅及水解透明質(zhì)酸鈉加入水中，攪拌條件下加熱至60～65℃，繼續(xù)攪拌使其充分溶解，然后，加入其余成分，攪拌溶解混勻后，涂布于不銹鋼板上，厚度0.01-2mm，于45～50℃低溫干燥成膜，控制干膜中殘留水分為5％-15％。本發(fā)明口腔薄膜的用途為口腔日常保健、口腔疾病預(yù)防及治療，包括口氣清新、口臭預(yù)防或減輕、口干預(yù)防或減輕、口腔粘膜損傷愈合、牙斑預(yù)防或減輕、牙周炎及牙齦炎預(yù)防或減輕、牙齒增白、牙石控制、牙齒過(guò)敏預(yù)防或減輕等。此外還有咽喉部護(hù)理，如咽炎等。根據(jù)使用方法和用途分為口腔或牙齒貼膜及口腔溶膜。透明質(zhì)酸或鹽具有抑制口腔細(xì)菌、抗炎、粘膜損傷修復(fù)、保濕等作用。具體表現(xiàn)為，拔牙及種植手術(shù)后創(chuàng)面的抗炎、抗感染、抗水腫、抑制細(xì)菌生長(zhǎng)作用；促進(jìn)牙周組織創(chuàng)傷愈合、修復(fù)的作用；加快口腔粘膜疾病的治愈過(guò)程，緩解疼痛；解決由于口干癥及粘膜灼熱帶來(lái)的不適等。在緩解口腔干燥癥方面，透明質(zhì)酸作為一種重要的保濕劑，已被認(rèn)為是代替口腔干燥患者唾液的候選物質(zhì)。分子量為2～50kDa的水解小分子透明質(zhì)酸或其鹽具有更顯著的修復(fù)、抗炎、清除自由基等生物活性。本發(fā)明的有益效果：(1)以透明質(zhì)酸及其衍生物為口腔薄膜的成膜材料，顯著改善膜的機(jī)械性能，增強(qiáng)柔韌性，不易破碎；(2)以透明質(zhì)酸及其衍生物為口腔薄膜的主要成分，具有多種生物活性，且透明質(zhì)酸對(duì)于加入的其它活性成分具有緩釋、促進(jìn)吸收、協(xié)同增效的作用；(3)透明質(zhì)酸的鋅鹽除具有透明質(zhì)酸鈉鹽的生理生物活性外，具有更強(qiáng)的抑菌和消炎作用，更有助于口腔粘膜疾病、牙齦炎、牙菌斑、牙齒過(guò)敏等癥狀的減輕；(4)透明質(zhì)酸也是一種重要的保健品原料(為CFDA批準(zhǔn)的新食品原料)，具有補(bǔ)充皮膚水分、抗氧化等美容保健功效，顯著改善皮膚干燥，使皮膚光滑潤(rùn)澤；還具有關(guān)節(jié)保健作用，改善關(guān)節(jié)功能，減輕關(guān)節(jié)炎癥，提高關(guān)節(jié)潤(rùn)滑能力，減輕關(guān)節(jié)疼痛。本發(fā)明產(chǎn)品除發(fā)揮口腔護(hù)理保健作用外，經(jīng)口吸收后還可發(fā)揮全身保健作用；(5)相比纖維素類(lèi)、聚乙二醇或聚環(huán)氧乙烷、淀粉等成膜材料，透明質(zhì)酸是人體內(nèi)的天然生物分子，也存在于唾液和牙周組織細(xì)胞外基質(zhì)中，安全性更高；(6)溶液、噴霧、凝膠等劑型的口腔護(hù)理產(chǎn)品，在貯存過(guò)程中需要加入防腐劑以防止微生物污染。而口腔膜劑由于水分含量極低，無(wú)需防腐劑，提高了使用安全性；(7)本發(fā)明產(chǎn)品輕盈、體積小，攜帶及運(yùn)輸方便。附圖說(shuō)明圖1各實(shí)施例護(hù)理膜對(duì)損傷細(xì)胞的修復(fù)作用圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明：1.實(shí)施例配方組成注：表中數(shù)值為各組分在干膜中所占的重量百分比。2.實(shí)施例的制備工藝：各實(shí)施例分別配制100g溶液。先將透明質(zhì)酸鈉和(或)透明質(zhì)酸鋅，及水解透明質(zhì)酸鈉加入相應(yīng)量的水中，攪拌條件下加熱至60～65℃，繼續(xù)攪拌使其充分溶解。然后，加入其余成分，攪拌溶解混勻后，涂布于不銹鋼板上，厚度0.3mm，于45～50℃低溫干燥成膜(控制干膜中殘留水分均為9％)。3.膜的機(jī)械性能測(cè)試方法：采用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)，對(duì)各實(shí)施例樣品進(jìn)行拉伸測(cè)試，膜寬度裁剪至2.0cm，夾具間距為3.0cm，拉伸速度5mm/min，對(duì)膜材料進(jìn)行縱向拉伸，直至膜斷裂，從儀器上讀取膜的拉伸強(qiáng)度，并計(jì)算延長(zhǎng)百分比。耐折度測(cè)試，由同一測(cè)試人員，將各樣品膜片反復(fù)對(duì)折，直至膜表面出現(xiàn)裂縫，該對(duì)折次數(shù)即為其耐折度。結(jié)果：測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。測(cè)試結(jié)果表明，實(shí)施例9的各項(xiàng)參數(shù)均顯著優(yōu)于其他各組，拉伸強(qiáng)度表現(xiàn)最明顯，表明透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鋅和水解透明質(zhì)酸鈉三者復(fù)合時(shí)膜的機(jī)械性能最佳。表1膜的機(jī)械性能測(cè)試結(jié)果拉伸強(qiáng)度(MPa)延長(zhǎng)百分比(％)耐折度(次)實(shí)施例163.153.921實(shí)施例279.774.331實(shí)施例386.434.736實(shí)施例483.154.532實(shí)施例587.484.732實(shí)施例677.654.330實(shí)施例780.824.432實(shí)施例882.114.431實(shí)施例991.265.639實(shí)施例1086.714.738實(shí)施例1189.354.944實(shí)施例1290.635.142實(shí)施例1374.234.221實(shí)施例1466.164.020實(shí)施例1545.63.0244.膜的抑菌活性菌株：牙齦卟啉單胞菌(ATCC33277)、伴放線放線桿菌(ATCC29523)、中間普雷沃菌(ATCC25611)。抑菌片制備：取3cm×3cm同樣大小的各實(shí)施例口腔薄膜溶于10mL無(wú)菌蒸餾水中。取無(wú)菌并干燥的5mm直徑濾紙片，每片滴加膜溶液20μL，干燥后備用。試驗(yàn)菌接種、培養(yǎng)：采用常規(guī)方法接種，菌密度為1×106cfu/mL。將抑菌片貼放到染菌平板，培養(yǎng)48h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈大小。結(jié)果：抑菌活性結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，實(shí)施例8、9、10、11、12的抑菌效果較強(qiáng)，其次是實(shí)施例2、3、4、6、7。表2膜的抑菌活性測(cè)試結(jié)果(抑菌圈直徑，mm)牙齦卟啉單胞菌伴放線放線桿菌中間普雷沃菌實(shí)施例1555實(shí)施例2777實(shí)施例3877實(shí)施例4766實(shí)施例5544實(shí)施例6888實(shí)施例7999實(shí)施例811109實(shí)施例9121111實(shí)施例10121212實(shí)施例11111111實(shí)施例12111010實(shí)施例13222實(shí)施例14544實(shí)施例153335.膜的細(xì)胞損傷修復(fù)活性1)測(cè)試樣品制備：將各實(shí)施例樣品裁剪成3cm×3cm尺寸，分別用10mL的磷酸緩沖液(pH7.2)溶解，過(guò)濾除菌，即為測(cè)試樣品。2)鋪板：取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的牙齦成纖維細(xì)胞(HGF-1細(xì)胞)，按照5×105/mL的細(xì)胞密度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μL細(xì)胞懸液，置二氧化碳培養(yǎng)箱37℃、5％CO2常規(guī)培養(yǎng)過(guò)夜。3)造模：采用7.2J/cm2UVA加126mJ/cm2UVB照射成纖維細(xì)胞細(xì)胞，設(shè)照射實(shí)驗(yàn)組(照射后加入實(shí)施例樣品溶液)，照射對(duì)照組和正常對(duì)照組(無(wú)照射)。照射實(shí)驗(yàn)組照射后，棄去培養(yǎng)液，加入100μL不同的實(shí)施例樣品溶液，照射對(duì)照組和正常對(duì)照組加入等量的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加入10μLMTT，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4h。棄去培養(yǎng)液，每孔加入100μLDMSO，避光震蕩10min，于490nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)定光吸收值。4)計(jì)算細(xì)胞增殖率(RGR)：RGR(%)=AcAc,0×100%]]>式中，Ac為樣品吸光度，Ac，0為正常對(duì)照組吸光度。結(jié)果：實(shí)施例9、10、11、12組的細(xì)胞增殖率最高，表明對(duì)損傷細(xì)胞的修復(fù)作用最強(qiáng)；其次是實(shí)施例2、3、4組和實(shí)施例6、7、8組。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受實(shí)施例的限制，其它任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡(jiǎn)化均應(yīng)為等效替換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3