1.一種防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌液,其特征在于,所述復(fù)合益生菌液組份及重量份數(shù)配比為:丁酸梭菌種子液10-20份、脫脂大豆粉10-20份、布拉氏酵母菌種子液10-40份、植物乳桿菌種子液5-15份、木醋桿菌種子液5-10份、青春雙歧桿菌種子液10-20份、地衣芽孢桿菌種子液10-20份、紅糖30-60份、脫脂奶粉10-20份、蜂蜜10-20份、氯化鈉2-4份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份和純化水800份,其制備過(guò)程包括:(1).在1000L發(fā)酵罐A中加入紅糖30-60份、脫脂大豆粉10-20份、氯化鈉1-2份、純化水400份,混勻后再在115℃下保溫30分鐘,然后降溫至30℃;再向發(fā)酵罐A中加入布拉氏酵母菌種子液10-40份、植物乳桿菌種子液5-15份、木醋桿菌種子液5-10份,在30℃-35℃下培養(yǎng)72-120小時(shí),每24小時(shí)攪拌30分鐘;培養(yǎng)前期48小時(shí),通氣量為每分鐘的液氣比為1:0.8,通氣過(guò)程維持發(fā)酵液pH5.8-6.8,48小時(shí)后不再通氣,同時(shí)不再調(diào)pH,繼續(xù)靜置培養(yǎng),待PH降低至4.2,布拉氏酵母菌含量不低于1億CFU/ml,細(xì)菌纖維含量不低于1g/L,殘葡萄糖含量低于0.2 g/L,總菌含量不低于10億CFU/ml,即可停止A罐的第一階段發(fā)酵;
(2).在600L發(fā)酵罐B中加入蜂蜜10-20份、脫脂奶粉10-20份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份、氯化鈉1-2份、純化水400份,混勻后再在108℃下保溫30分鐘,然后降溫至37℃;向發(fā)酵罐B中加入丁酸梭菌種子液10-20份、青春雙歧桿菌種子液10-20份、地衣芽孢桿菌種子液10-20份,在35℃-37℃下靜止厭氧培養(yǎng)72-96小時(shí),檢測(cè)丁酸梭菌的芽孢含量不低于20億CFU/ml,總菌含量不低于30億CFU/ml,即可停止發(fā)酵;
當(dāng)兩個(gè)發(fā)酵罐達(dá)到指標(biāo)后,將發(fā)酵罐B中的菌液移至發(fā)酵罐A中,攪拌均勻,在30℃-33℃下靜止繼續(xù)厭氧培養(yǎng)24-48小時(shí),檢測(cè)其PH降至3.0-3.2,總活菌含量不低于30億CFU/ml,細(xì)菌纖維含量不低于0.5g/L,檢測(cè)丁酸梭菌的芽孢含量不低于15億CFU/ml,即可停止發(fā)酵,無(wú)菌灌裝,100 ml/瓶,包裝成品;
其中,布拉氏酵母菌種子液按以下方法制備:
取出菌種保藏管,用YPD固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種150毫升YPD培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)箱中30℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí),種子采用5%的接種量,接種至裝有2L酵母菌培養(yǎng)基的 5L大三角瓶中,30℃震蕩培養(yǎng)20-28小時(shí),檢測(cè)其菌液濃度,菌含量超過(guò)5億CFU/ml,即可作為布拉氏酵母菌種子液接種;其中,所述的YPD固體培養(yǎng)基:酵母膏10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,瓊脂20 g,水1000mL;其中,所述的酵母菌培養(yǎng)基:紅糖15 g/L,酵母膏3 g/L,蛋白胨5 g/L,硫酸銨3 g/L,硫酸鎂0.5 g/L;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
其中,植物乳桿菌種子液按以下方法制備:
取出菌種保藏管,用MRS固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種250毫升MRS培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)24小時(shí),種子采用5%的接種量,接種至裝有9L乳酸菌培養(yǎng)基的 10L大三角瓶中,37℃厭氧培養(yǎng)20-28小時(shí),檢測(cè)其菌液濃度,菌含量超過(guò)50億CFU/ml,即可作為植物乳桿菌種子液接種,其中,所述的MRS培養(yǎng)基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,醋酸鈉5 g/L,檸檬酸二銨2 g/L,吐溫-80 1 ml/L,硫酸鎂0.6 g/L,硫酸錳0.05 g/L,磷酸氫二鉀2 g/L,瓊脂20 g/L,碳酸鈣20 g/L;其中,所述的乳酸菌培養(yǎng)基:葡萄糖4%,蛋白胨1.2%,牛肉膏0.75%,氯化鈉0.1%,硫酸錳0.001%,硫酸鎂0.02%,醋酸鈉0.05%,碳酸鈣1%,pH6.0;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
其中,木醋桿菌種子液按以下方法制備:
取出菌種保藏管,用木醋桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種至50毫升木醋桿菌液體培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)箱中30℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí),種子采用5%的接種量,接種至裝有2L木醋桿菌液體培養(yǎng)基的 5L大三角瓶中,30℃,150r/min震蕩培養(yǎng)20-28小時(shí),檢測(cè)其菌液濃度,菌含量超過(guò)10億CFU/ml,即可作為木醋桿菌種子液接種,其中,所述木醋桿菌固體培養(yǎng)基:葡萄糖40.0,蛋白胨8,檸檬酸1.2,磷酸氫二鈉1.0,磷酸二氫鈉 2.0,硫酸鎂0.3,瓊脂18.0,去離子水1L,pH6.8,121℃滅菌20分鐘;其中,所述的木醋桿菌液體培養(yǎng)基:葡萄糖20.0,蛋白胨4.0,檸檬酸2.0,磷酸二氫鈉 2.7,硫酸鎂0.25,去離子水1L,pH6.8,12l℃滅菌20分鐘;
其中,地衣芽孢桿菌種子液按以下方法制備:
取出菌種保藏管,用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,37℃培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種50毫升LB培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)箱中37℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí),種子采用5%的接種量,接種至裝有2L 地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的5L大三角瓶中,37℃震蕩培養(yǎng)20-28小時(shí),檢測(cè)其菌液濃度,芽孢含量超過(guò)60億CFU/ml,即可作為地衣芽孢桿菌種子液接種;其中所述LB固體培養(yǎng)基:蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂20 g,水1000mL,pH7.2;其中所述地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基:葡萄糖10g/L,玉米淀粉10 g/L, 豆粕粉30 g/L,硫酸鎂0.5 g/L,硫酸錳0.5 g/L,磷酸二氫鈉0.5 g/L,氯化鈉2 g/L,pH7.2;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
其中,青春雙歧桿菌種子液按以下方法制備:
取出菌種保藏管,用雙歧桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,37℃厭氧培養(yǎng)72小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種50毫升雙歧桿菌培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí),種子采用5%的接種量,接種至裝有9.5L雙歧桿菌培養(yǎng)基的 10L大三角瓶中,37℃厭氧培養(yǎng)20-28小時(shí),檢測(cè)其菌液濃度,菌含量超過(guò)10億CFU/ml,即可作為青春雙歧桿菌種子液接種;其中,所述的雙歧桿菌培養(yǎng)基:蛋白胨5.0g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏5.0 g/L,胰蛋白胨10.0g/L,葡萄糖10.0 g/L,醋酸鈉5.0 g/L,檸檬酸二銨2.0 g/L,吐溫-80 1.0 ml/L,硫酸鎂0.1 g/L,硫酸鋅0.25 g/L,磷酸氫二鉀2 g/L,瓊脂20 g;培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
其中,丁酸梭菌種子液按以下方法制備:
取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有9mLRCM培養(yǎng)基的試管中,37℃條件下靜態(tài)厭氧活化48h,將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過(guò)菌的10L丁酸梭菌種子培養(yǎng)基中,37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)24h~36h,菌含量超過(guò)5億CFU/ml,即可作為丁酸梭菌種子液接種;
其中,所述的RCM培養(yǎng)基:胰蛋白陳10g/L,牛肉膏10g,酵母膏10g/L,葡萄糖5g/L,氯化鈉5g/L,可溶性淀粉1g/L,半胱氨酸鹽酸鹽0.5克/L,醋酸鈉3g/L,pH7.0,121℃滅菌20min;
其中,所述的丁酸梭菌種子培養(yǎng)基::酵母膏15g/L,牛肉膏5g/L,KH2PO4 2g/L硫酸鎂1g/L,半胱氨酸鹽酸鹽1g/L,NaHCO3 1g/L,CaCO3 1g/L,葡萄糖20g/L, PH7.0,121℃滅菌20min。