本發(fā)明涉及化合物Friedolanostanes的新用途，尤其涉及Friedolanostanes在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種革蘭氏陰性螺旋狀細菌。研究顯示，幽門螺桿菌是急、慢性胃炎以及胃、十二指腸潰瘍的主要致病原因,并可能與胃癌和胃粘膜相關(guān)性淋巴樣組織(MALT)惡性淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。最近，世界衛(wèi)生組織將Hp歸為I類致癌物，它在胃癌發(fā)展中起主導(dǎo)作用。目前流行的治療Hp感染的方案是同時服用質(zhì)子泵抑制劑(PPI)加兩種抗生素(克拉霉素，阿莫西林、四環(huán)素、甲硝唑等選二種)的三聯(lián)療法。影響三聯(lián)療法的最主要因素被認為是Hp對抗菌劑的耐藥性；另一嚴重問題是質(zhì)子泵抑制劑會誘發(fā)消化不良，大量抗菌劑則導(dǎo)致消化道內(nèi)菌群的嚴重毀滅。因此，尋找高效、安全的抗Hp活性一類新藥物成為一個重要和迫切的任務(wù)。
本發(fā)明涉及的化合物Friedolanostanes是一個2014年發(fā)表(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類型，目前的用途是保護新生大鼠的心肌細胞(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)，對于本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備抗幽門螺桿菌藥物中的用途屬于首次公開，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類型，而且其對于抗幽門螺桿菌的活性強得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于抗幽門螺桿菌顯然具有顯著的進步。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Friedolanostanes研究中未發(fā)現(xiàn)其具有抗幽門螺桿菌活性的報道的現(xiàn)狀，提供了Friedolanostanes在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
所述化合物Friedolanostanes,結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：
Friedolanostanes的體外實驗表明，F(xiàn)riedolanostanes具有很強的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為16mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個隨機的臨床菌株(Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和1個標準菌株(ATCC43504)的生長，最小抑菌濃度(MIC)均為0.34μg/ml。用氨芐西林作陽性對照，其對6株測試菌完全抑制的最小濃度(MIC)為4.1μg/ml。
本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)riedolanostanes的抑制幽門螺旋桿菌活性的能力比氨芐西林強，說明對于與幽門螺旋桿菌密切相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來講，F(xiàn)riedolanostanes是一個極具開發(fā)潛力的化合物。它可直接用于相應(yīng)疾病的治療以及相關(guān)藥物的制備。
本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備治療抗幽門螺桿菌藥物中的用途屬于首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于幽門螺桿菌抑制活性強得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于幽門螺桿菌感染的防治顯然具有顯著的進步。
具體實施方式
本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes的制備方法參見文獻(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
實施例1：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes片劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes,加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機制成1000片。
實施例2：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes膠囊劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
下面通過藥效學(xué)實驗來進一步說明其藥物活性。
Friedolanostanes的藥理實驗
1)供試菌株
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)標準菌株ATCC 43504購于美國菌種保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)。15株Hp臨床菌株采自江蘇省人民醫(yī)院消化科、江蘇省中醫(yī)院檢驗科和南京市兒童醫(yī)院胃鏡室接受胃鏡檢查的患者；在連續(xù)胃鏡檢查中對消化性潰瘍、十二指腸球炎或疣狀胃炎的患者，先經(jīng)快速尿素酶實驗確定為Hp陽性者，再取胃竇黏膜1-2塊，切碎后接種于含8％馬血清、三甲氧芐氨嘧啶(trimethropin,TMP)1.25g/L、多粘菌素(polymyxin)B2500U/L、萬古霉素(vancomycin)10mg/L的Columbia選擇性瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃在微氧環(huán)境下(5％O2,10％CO2和85％N2)培養(yǎng)72小時。收集細菌，經(jīng)涂片革蘭氏染色，氧化酶、觸酶和尿素酶鑒定為陽性后，傳代純培養(yǎng)，所得菌株作為實驗菌株。
2)菌株培養(yǎng)
我們采用微需氧袋(購自上海醫(yī)科大學(xué))進行HP的菌株培養(yǎng)，它可通過化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生Hp所需要的微需氧環(huán)境。
3)生物活性測定
采用紙片法(Microbiological paper method)測定化合物對幽門螺桿菌的抑制作用，用瓊脂稀釋法來測定供試樣品的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)。
I.紙片法實驗
(A)準備培養(yǎng)基將配制好的Columbia培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，冷卻至50-60℃，加8％馬血清或綿羊血，混勻傾注于已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿7-10ml，培養(yǎng)基厚度為1.5mm(無菌操作)。
(B)轉(zhuǎn)接實驗菌(涂菌)用微量取樣器取稀釋好的108CFU/ml(1OD660＝108CFU/ml)Hp的菌懸液0.1ml均勻地涂抹在適宜的培養(yǎng)皿表面。倒置于37℃烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。
(C)貼樣品紙片用微量取樣器取6μl待測樣品(質(zhì)量濃度2mg/ml)注入已經(jīng)滅菌的圓濾紙片上。用無菌鑷子鑷取含樣品的紙片和對照空白紙片，按無菌操作分別紙片緊貼于含菌瓊脂表面，每隔一定距離貼一張紙片。每種菌做3皿，所得結(jié)果求其平均值。
(D)培養(yǎng)將各平皿置于微需氧袋中，封口，打開氣體發(fā)生器，再置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。
(E)測抑菌圈直徑取出平板后，分別測量各紙片周圍抑菌圈直徑的大小。參照對照組的結(jié)果，可得出待測樣品敏感實驗的結(jié)果。重復(fù)三次。
II.瓊脂稀釋法測定MIC
(A)藥物平板的制備首先將測試的化合物用二甲基亞砜(DMSO)溶液配制成0.5mg/ml的母液，再用無菌水稀釋，最終配成10.0，8.0，6.0，4.5，4.0，3.5，3.0，2.5，2.0，1.5，1.0，0.5和0.25μg/ml的濃度系列，DMSO在介質(zhì)中的濃度小于1％。將1ml配制好的測試化合物溶液與保溫于50℃的9ml哥倫比亞培養(yǎng)基另加1ml保溫于50℃的馬血清充分混勻，澆制入培養(yǎng)皿中冷卻即成。
(B)轉(zhuǎn)接實驗菌(涂菌)用微量取樣器吸取稀釋好的1×108CFU/ml Hp的菌懸液0.1ml均勻地涂抹在培養(yǎng)皿表面，倒置于37℃烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。
(C)確定MIC將待測培養(yǎng)皿在微需氧袋(含：85％N2,10％CO2和5％O2)中，保溫37℃培養(yǎng)72小時，觀察Hp生長情況，與空白組相對照，以完全沒有菌生長的樣品最低濃度為最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)值。陽性對照為氨芐西林(Ampicillin)。
3、Friedolanostanes的藥理實驗結(jié)果
體外實驗表明，F(xiàn)riedolanostanes具有很強的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為16mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個隨機的臨床菌株(Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和1個標準菌株(ATCC43504)的生長，最小抑菌濃度(MIC)均為0.34μg/ml。用氨芐西林作陽性對照，其對6株測試菌完全抑制的最小濃度(MIC)為4.1μg/ml。
結(jié)論：Friedolanostanes抑制幽門螺旋桿菌活性的能力比氨芐西林強，說明對于與幽門螺旋桿菌密切相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來講，F(xiàn)riedolanostanes是一個極具開發(fā)潛力的化合物。它可直接用于相應(yīng)疾病的治療以及相關(guān)藥物的制備。