本發(fā)明涉及中藥活性成分生產(chǎn)提取工藝,涉及鼠婦抗腫瘤有效部位提取的新思路新方法,具體涉及利用抗腫瘤追蹤的方式提取分離鼠婦有效成分。
背景技術:
隨著對中藥抗腫瘤作用的實驗和臨床研究的深入開展,中藥抗腫瘤作用日益被肯定,也越來越受到國際社會的承認,成為當今研究的熱點。
鼠婦俗稱潮濕蟲、地虱婆、潮蟲,分為平甲蟲科動物平甲蟲或潮蟲科動物鼠婦的干燥蟲體。
腫瘤細胞的代謝比正常細胞旺盛,腫瘤細胞是正常細胞在致瘤因素作用下,基因發(fā)生了改變,失去對其生長的正常調(diào)控,導致異常增生。
鼠婦具有破瘀利水、利咽止痛的功效,在扁平疣、口腔炎、鵝口瘡、牙痛、咽喉腫痛、術后疼痛、小便不利、閉經(jīng)等的臨床治療應用非常廣泛,其鎮(zhèn)痛、抗炎作用效果尤為顯著。
鼠婦的乙醇提取物具有體外抗人肝癌細胞株(Bel-7402)、肺癌(A549)以及乳腺癌(MCF-7)的作用。
技術實現(xiàn)要素:
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是明確了鼠婦提取物在體外對不同癌細胞的抑制效果。
本發(fā)明的優(yōu)點是確定鼠婦對常見腫瘤的體外抑制作用及有效部位。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)鼠婦乙醇提取物經(jīng)氯仿萃取濃縮后所得的物質(zhì)對Bel-7420、A549、MCF-7均有顯著抑制作用,具體如下步驟:
(1)取一定量的鼠婦藥材用10倍的95%的乙醇加熱回流提取2次,第一次2小時,第二次1.5小時;
(2)合并兩次的提取液減壓濃縮,濃縮成浸膏;
(3)將所得浸膏用一定量水溶解,加入等量的氯仿萃取兩次合并濾液為氯仿萃取物a,再加入正丁醇萃取兩次合并濾液為正丁醇萃取物b,剩余的液體為c;
(4)將a、b、c三種溶液減壓濃縮至有極少溶劑后,進行冷凍干燥,得A、B、C三種藥物粉末;
(5)用MTT法進行體外腫腫瘤實驗,把以上三種藥物配制成一系列濃度對腫瘤細胞進行試驗;
(6)所選用的癌細胞有Bel-7420、A549、MCF-7。
具體實施方式
實例1(1)稱取一定量鼠婦藥材用10倍的95%的乙醇加熱回流提取2次,第一次2小時,第二次1.5小時,合并兩次提取液,減壓濃縮至浸膏,加水溶解后所得浸膏用100ml水溶解,加入等量的氯仿萃取兩次合并濾液為氯仿萃取物a,再加入正丁醇萃取兩次合并濾液為正丁醇萃取物b,剩余的液體為c。
(2)將(1)得到的a、b、c減壓抽濾,濃縮到含有極少溶劑時冷凍干燥得粉末A、B、C。
(3)將(2)配成400μg/ml、300μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml系列濃度。
(4)將凍存的細胞復蘇,待細胞貼壁長滿后進行傳代培養(yǎng),將處于對數(shù)生長期的細胞進行實驗。
(5)細胞用胰酶消化后加入培養(yǎng)基104-105個/ml的細胞懸液,以每孔加于孔板中,細胞對照組孔再加入含小牛血清的培養(yǎng)液,陽性對照組加入100μg/ml的順鉑,實驗組孔加入(3)中不同濃度提取物的實驗用藥液。每組3個復孔。放入孵育箱中培養(yǎng)24h。用微量加樣器每孔加入20μlMTT培養(yǎng)4h,然后每孔加入100μlDMSO,震蕩6分鐘,使生成的甲囋顆粒完全溶解,在酶標儀上選擇波長540nm為測定值。
(6)將癌細胞Bel-7420、A549、MCF-7分別進行(4)、(5)操作得到A對這三種細胞均有抑制作用,且IC50分別為82μg/ml、145μg/ml、100μg/ml。