本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療骨質(zhì)疏松癥的骨靶向脂質(zhì)體及其制備方法。

背景技術(shù)：

脂質(zhì)體(liposomes)是一種類似于生物膜組織的雙分子層微小囊泡，可以作為一種定向藥物載體，屬于靶向給藥系統(tǒng)(targetingdrugdeliverysystem)的一種新技術(shù)。利用脂質(zhì)體作為藥物載體不僅可使藥物制劑具有高度的靶向性，而且可以增加藥物的溶解性，提高藥物的生物利用度，減少藥物的治療劑量。中藥脂質(zhì)體系指將中藥的有效成分包封于類脂質(zhì)雙分子層而制成的一種超微型球狀藥物載體制劑。作為中藥的一種新型劑型，它制備簡單，應(yīng)用方便，可多用途給藥。它作為藥物載體有其獨特的優(yōu)勢，包括可保護藥物免受降解、達到靶向部位和減少毒副作用。其作用原理是脂質(zhì)體和靶細胞之間可通過內(nèi)吞、融合、接觸釋放、吸附、脂質(zhì)交換等方式起作用而改變藥物在體內(nèi)的分布，達到靶向釋藥。并且脂質(zhì)體有包封脂溶性藥物或水溶性藥物的特性，脂溶性藥物被脂質(zhì)體包封后，在體內(nèi)呈現(xiàn)出與藥物本身不同的特點。當(dāng)藥物包封于脂質(zhì)體中由于脂質(zhì)體的包裹作用或磷脂與藥物之間的氫鍵等作用，使藥物緩慢釋放出來，從而延長了藥物的作用時間，表現(xiàn)出一定的緩釋性；因脂質(zhì)體是類似于生物膜結(jié)構(gòu)的囊泡，對正常細胞和組織無損害和抑制作用，可長時間吸附于靶細胞周圍，使藥物能充分向靶細胞靶組織滲透，表現(xiàn)出細胞親和性和組織相容性。

近年來，脂質(zhì)體作為藥物載體的研究已成為熱點之一。加之其適合體內(nèi)降解、無毒性和無免疫原性，特別是它作為藥物載體可提高藥物治療指數(shù)、降低藥物毒性和減少藥物毒副作用等優(yōu)點，使它作為藥物載體的研究愈來愈受到重視。如黃芩有效成分黃芩素是有效的抗菌、抗病毒藥物，但他們都易氧化，受熱不穩(wěn)定，且不溶于水，限制了他們在實際中的應(yīng)用，而脂質(zhì)體制劑正好改變了這種缺點，又有其獨特的優(yōu)勢。因此開發(fā)這類藥物不僅有重要的臨床意義，也具有廣闊的市場前景。但是目前治療骨質(zhì)疏松癥的脂質(zhì)體的物理化學(xué)性質(zhì)，如粒徑、包封率和載藥量等，并不是很理想，嚴重降低了脂質(zhì)體藥物的療效。對于該技術(shù)問題，尚缺乏有效的解決方案。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種用于治療骨質(zhì)疏松癥的脂質(zhì)體及其制備方法，制成一種含異補骨脂素的脂質(zhì)體骨靶向制劑，可以改善傳統(tǒng)中藥的治療效果，提高其有效成分的利用率和生物利用度，減少用藥量，節(jié)約有限的中藥資源。

為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的第一個目的是提供一種骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，是由以下重量份的原料制成的：

卵磷脂4～6份、膽固醇4～6份、異補骨脂素0.2～0.4份、維生素e0.4～0.6份、膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸4～6份、葡萄糖0.08～0.12份。

本發(fā)明中的骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，本發(fā)明從脂質(zhì)體的粒徑、包封率和載藥量等因素出發(fā)，經(jīng)過篩選優(yōu)化實驗得到了一組較佳的脂質(zhì)體配方，各原料組分是一個有機整體，缺一不可。發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)，改變上述配方中的配比量，則脂質(zhì)體的整體作用效果顯著降低。

最優(yōu)選的，從脂質(zhì)體的粒徑、包封率和載藥量來講，所述骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，是由以下質(zhì)量濃度原料制成的：

卵磷脂5mg·ml^-1、膽固醇5mg·ml^-1、異補骨脂素0.3mg·ml^-1、維生素e0.5mg·ml^-1、膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸5mg·ml^-1、葡萄糖0.1mg·ml^-1。

其中，卵磷脂5mg·ml^-1是指每毫升脂質(zhì)體混懸液中使用5mg卵磷脂，其他原料具有與此相同的含義。

本發(fā)明的第二個目的是提供所述骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：

(1)按照設(shè)定比例稱取卵磷脂、膽固醇、異補骨脂素和維生素e溶于氯仿溶液中，然后采用薄膜分散法得到均勻的薄膜；

(2)再向薄膜中加入pbs緩沖液和膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸，在20～30℃超聲混勻，過濾膜，即得到脂質(zhì)體混懸液，再加入葡萄糖調(diào)節(jié)所述脂質(zhì)體混懸液的滲透壓，得到骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體。

本發(fā)明嘗試了多種制備方法，如高壓均乳法、薄膜分散法和反相蒸發(fā)法，從得到的脂質(zhì)體的粒徑、包封率和載藥量考慮，本發(fā)明篩選優(yōu)化得到采用薄膜-超聲分散法，其制備骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的粒徑符合要求，包封率和載藥量均較高。

步驟(1)中，為使得卵磷脂、膽固醇、異補骨脂素和維生素e能夠良好溶解以便能夠更好地形成均勻的薄膜，經(jīng)過試驗驗證，本發(fā)明選擇氯仿溶液。

所述薄膜分散法的旋轉(zhuǎn)溫度為30～45℃，本發(fā)明考慮得到藥物的熱敏性和卵磷脂相轉(zhuǎn)變溫度，優(yōu)選溫度為30℃。低于30℃時，脂質(zhì)體包封的異補骨脂素容易泄露；高于30℃時，脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性不好，不容易形成球形的脂質(zhì)體。

步驟(2)中，從提高影響脂質(zhì)體的均一穩(wěn)定性的效果來講，經(jīng)過試驗驗證，本發(fā)明的超聲溫度選擇在20～30℃。

本發(fā)明的pbs緩沖液的用量與最終形成的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性有關(guān)，經(jīng)過試驗驗證，本發(fā)明選擇用量比例為pbs緩沖液與卵磷脂＝5ml：4～6mg，優(yōu)選的為1ml：1mg。

本發(fā)明的超聲功率和時間對形成的脂質(zhì)體的形態(tài)、粒徑和包封率均有重要的影響，經(jīng)過試驗驗證，本發(fā)明的超聲功率為100～200w(優(yōu)選150w)，超聲時間選擇在15-20min，以使得脂質(zhì)體的粒徑均勻，滿足粒徑大小為200～300nm，并且使其包封率較高。若是超聲功率過大，超聲時間過長，會引起脂質(zhì)體的氧化受損，包封的異補骨脂素滲漏。超聲功率小，超聲時間長，脂質(zhì)體的穩(wěn)定性欠佳，形成的脂質(zhì)體的粒徑不符合要求，粒徑較小，在體內(nèi)容易被淋巴系統(tǒng)清除掉，失去療效。

本發(fā)明中所述膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸(bp-peg-chol)為現(xiàn)有技術(shù)中可以常規(guī)制備得到的物質(zhì)，例如：首先合成中間體膽固醇甲基磺酸酯，合成中間體膽固醇-聚乙二醇(chol-peg)，合成聚乙二醇末端氨基化的衍生物(chol-peg-nh2)，最終合成膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸(chol-peg-bp)。具體的，本發(fā)明采用以下方法制備得到，膽固醇溶解在二氯甲烷中，加三乙胺做縛酸劑，冷卻到-10℃，緩慢滴加甲基磺酰氯攪拌反應(yīng)，反應(yīng)完畢后處理用水洗過濾得白色粉末狀固體。將peg2000充分干燥并抽真空之后，氬氣保護下，加入干燥的二甲基亞砜(dmso)和四氫呋喃(thf)，隨后迅速加入氫化鈉，室溫活化后，將溶解于thf的膽固醇甲基磺酸酯滴加入上述溶液中反應(yīng)，將反應(yīng)液傾人到冰水中，二氯甲烷提取，旋干，經(jīng)快速柱層析分離得chol-peg。將上述產(chǎn)物與甲基磺酰氯反應(yīng)制備甲基磺酸酯的中間體，溶于二甲基甲酰胺(dmf)中，加入的疊氮鈉于50-80℃反應(yīng)還原生成伯胺。將雙磷酸衍生物溶于無水thf中，攪拌下加入chol-peg-nh2，加入二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)，室溫反應(yīng)后過濾到thf混懸液中，過濾、洗滌、無水硫酸鈉干燥、濃縮物經(jīng)硅膠快速柱層析，以二氯甲烷/甲醇梯度洗脫得骨靶向接合物bp-peg-chol。

步驟(2)中，過濾膜的具體過程為：依次過0.8和0.45um的濾膜。

本發(fā)明的第三個目的是提供上述骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體在制備治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。

上述技術(shù)方案具有如下有益效果：

(1)本發(fā)明選用合適的原料制備成為骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，由于采用了合適的原料以及配制量和制備方法，制備得到的脂質(zhì)體多為類似球形的粒子，粒徑約為200～300nm，平均粒徑為224.3nm，該粒徑范圍在體內(nèi)的穩(wěn)定性較高；包封率和載藥量較高，體外釋放度比較穩(wěn)定。

(2)將異補骨脂素制備成為骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，對骨質(zhì)疏松癥具有顯著的治療效果，對老年性骨代謝疾病具有顯著的治療前景，為難治性骨代謝疾病患者帶來福音。

(3)本發(fā)明的脂質(zhì)體作為藥物載體，能夠有效保護異補骨脂素，提高異補骨脂素的生物利用度，使異補骨脂素具有靶向性，從而加強了骨質(zhì)疏松癥的治療效果。

附圖說明

圖1是骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2是骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體透射電鏡(x20000)。

圖3是骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體粒徑分布圖。

圖4是骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體包封率和載藥量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

圖5：骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體對去卵巢c57/bl6小鼠股骨下段runx2和ppar-γ表達影響。

圖6：骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體對去卵巢c57/bl6小鼠股骨下段骨量的影響。

具體實施方式

應(yīng)該指出，以下詳細說明都是示例性的，旨在對本發(fā)明提供進一步的說明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

需要注意的是，這里所使用的術(shù)語僅是為了描述具體實施方式，而非意圖限制根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說明書中使用術(shù)語“包含”和/或“包括”時，其指明存在特征、步驟、操作和/或它們的組合。

本發(fā)明中所用試劑和材料均是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)得到的。

為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實施例與對比例詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案。

實施例1

一種骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：

分別稱取卵磷脂、膽固醇、異補骨脂素、維生素e、氯仿溶液，過濾后備用。按實施例2中正交試驗表的安排，依次精密吸取上述濾液適量置于25ml的圓底燒瓶中，在適宜的溫度水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至瓶壁上形成均勻薄膜，繼續(xù)抽吸至氯仿充分揮發(fā)，再加入適量pbs緩沖液(是一種常規(guī)的磷酸緩沖鹽溶液)和膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸，在20-30℃水浴條件下超聲，形成近透明略顯乳光的脂質(zhì)體混懸液；依次過0.8和0.45um的濾膜，再加入葡萄糖調(diào)節(jié)所述脂質(zhì)體混懸液的滲透壓，得到骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體。

得到骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，是由以下重量份的各原料制成的：卵磷脂5mg·ml^-1、膽固醇5mg·ml^-1、異補骨脂素0.3mg·ml^-1、維生素e0.5mg·ml^-1、膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸5mg·ml^-1、葡萄糖0.1mg·ml^-1。

使得異補骨脂素脂質(zhì)體效果最優(yōu)的條件為：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30℃，緩沖液用量5ml，超聲功率150w及超聲時間15分鐘。

對比例1

骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體是由以下重量份的各原料制成的：卵磷脂10mg·ml^-1、膽固醇10mg·ml^-1、異補骨脂素0.3mg·ml^-1、維生素e0.8mg·ml^-1、膽固醇-聚乙二醇-雙膦酸5mg·ml^-1、葡萄糖0.1mg·ml^-1。實驗步驟與實施例1相同，條件為：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30℃，緩沖液用量5ml(pbs緩沖液與卵磷脂的添加比例為1ml：1mg)，超聲功率150w及超聲時間15分鐘，區(qū)別在于形成的脂質(zhì)體混懸液中，各原料的含量不同，脂質(zhì)體的整體作用效果顯著降低。

實施例2

一種骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的制備工藝的研究，包括以下步驟：

根據(jù)薄膜-超聲分散法的制備過程著重考察了旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度(a)、緩沖液的用量(b)、超聲功率(c)、超聲時間(d)四因素對脂質(zhì)體包封率的影響，擬訂了l9(3⁴)試驗因素水平表(見表1)。

表1制備工藝正交試驗表

結(jié)果顯示最佳制備條件為a1b3c2d3，即旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30℃，緩沖液用量5ml，超聲功率150w及超聲時間15分鐘。

實施例3

實施例1中效果最優(yōu)的骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的質(zhì)量考察，包括以下步驟：

脂質(zhì)體粒徑的大小直接影響其在體內(nèi)的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體在體內(nèi)時由于與高密度脂蛋白膽固醇(hdl)結(jié)合會導(dǎo)致粒徑的改變。粒徑大于300nm的脂質(zhì)體缺乏血管通透性，易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，難以離開循環(huán)系統(tǒng)，而小于等于l00nm的脂質(zhì)體易被淋巴系統(tǒng)清除掉。小單室脂質(zhì)體(20nm-50nm)增加了體內(nèi)靶部位的聚集和延長在血液中的半衰期，但多室的脂質(zhì)體藥物滲透困難。本實驗制備脂質(zhì)體的透射電鏡結(jié)果(見圖2、圖3)，本發(fā)明通過控制各原料的配比量，所制備的脂質(zhì)體多為類似球形的粒子，粒徑約為200～300nm，平均粒徑為224.3nm，該粒徑范圍的骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體在體內(nèi)的穩(wěn)定性較高。

經(jīng)過測定，對比例1脂質(zhì)體的粒徑范圍在300nm以上，這會影響脂質(zhì)體在體內(nèi)的穩(wěn)定性。這說明改變脂質(zhì)體各組分的用量對脂質(zhì)體的粒徑大小影響較大，不合適的配比關(guān)系的各原料得到的脂質(zhì)體形態(tài)不滿足要求。

實施例4實施例1中效果最優(yōu)的骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體的包封率和載藥量的測定，包括以下步驟：精密吸取上述所制得的脂質(zhì)體液1.0ml低溫超速離心(4℃、16000r.rain^-1)30min，取上清液用pbs稀釋至l0ml，用微孔濾膜過濾，取濾液10ul，進樣測定峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求出異補骨脂素生物濃度，從而求出脂質(zhì)體中游離異補骨脂素衍生物的含量，按下列公式計算包封率(entrapmentefficiency，ee)和載藥量(drugloading，dl)。計算公式：ee＝(w總-w游)/w總x100％，dl＝(w總-w游)/w類脂xl00％，其中w總為投藥量，w游為未包入脂質(zhì)體的游離的藥量，w類脂為處方中類脂總量(見圖4)。

經(jīng)過測定可得，實施例1中的脂質(zhì)體的包封率ee為91.2％，載藥量dl為38.3％。對比例1脂質(zhì)體的包封率ee為80.3％，載藥量dl為29.7％，與實施例1中的效果相比具有顯著的差別，這說明改變脂質(zhì)體各組分的用量對脂質(zhì)體的包封率和載藥量影響較大，不合適的配比關(guān)系的各原料得到的脂質(zhì)體的包封率和載藥量較低，兩者的效果具有顯著的差異。

實施例5實驗效果

1.1候選藥物

異補骨脂素(純度＞99％，分子量186.1635，sigma，usa)；

實施例1中效果最優(yōu)的骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體。

1.2動物分組與模型建立

24只c57/bl6雌鼠隨機平均分為假手術(shù)組(shame)、去卵巢組(ovx)和去卵巢加異補骨脂素組(ovx+iso1)、去卵巢加骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體.(ovx+iso2)，各組數(shù)量6只。ovx組、ovx+iso1和ovx+iso2組分離背部近髂脊處肌肉，取出雙側(cè)卵巢，結(jié)扎上部輸卵管，剪去雙側(cè)輸卵管。shame組相同入路后剪去包裹卵巢周圍的部分脂肪組織。ovx+iso1和ovx+iso2組在去卵巢前5天開始分別灌胃異補骨脂素和骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體，灌胃劑量為20mg/(kg·d)，灌胃持續(xù)時間2個月，shame組組以等劑量生理鹽水灌胃。

1.3觀察指標(biāo)及方法

1.3.1骨標(biāo)本收集：術(shù)后喂養(yǎng)3個月，斷頸處死小鼠，取兩側(cè)股骨、脛骨，仔細剔除周圍附著的肌肉等軟組織，同時將左側(cè)股骨放入含有0.1％疊氮鈉的生理鹽水中，備骨組織微結(jié)構(gòu)測定；右側(cè)股骨用于免疫組織化學(xué)、免疫熒光檢測runx2和過氧化物酶體增殖物激活受體γ(ppar-γ)蛋白表達以及組織形態(tài)學(xué)分析。

1.3.2股骨下段he染色及脂肪細胞定量分析：取實驗鼠股骨4％中性多聚甲醛常溫固定，漂洗后進行脫鈣，4℃脫鈣21天，每3天更換1次脫鈣液，每隔3天觀察脫鈣過程，股骨彎曲至90°認為脫鈣完全即可終止。將已經(jīng)完成脫鈣的標(biāo)本漂洗、組織脫水、石蠟包埋、切片、烤片，進行he染色。普通光學(xué)顯微鏡對股骨下段干骺端進行拍照，定量脂肪細胞，分析參數(shù)為:脂肪細胞數(shù)量(ad#，permm²)，總脂肪細胞面積占骨髓腔比例(av/tv)。所有切片均由3個不同人統(tǒng)一拍攝同一區(qū)域，拍攝順序由圖片左下角干骺端向右將圖片平均分割呈3個區(qū)域進行拍攝，然后從圖片左上角皮質(zhì)骨內(nèi)向右將圖片分割成3個區(qū)域進行拍攝，進行脂肪細胞計數(shù)時不包括已被破壞的脂肪細胞。分析時為避免對最終結(jié)果產(chǎn)生偏倚，所有圖均未知標(biāo)本的各自分組(sham，ovx、ovx+iso1組和ovx+iso2)。

1.3.3股骨下段micro-ct掃描：股骨遠端進行顯微ct(scancomedical，μct80)分析:小鼠co2麻醉，股骨下端骨小梁較為明顯和集中的區(qū)域通過顯微ct(μct)分析和三維重建，設(shè)置參數(shù)為掃描電壓70kv，功率30w，掃描電流429μa，每次掃描厚度5μm。分析數(shù)據(jù)包括:骨小梁厚度(tb.th)、骨小梁體積(tb.sp)、骨體積(bv)/總體積(tv)和骨小梁數(shù)量(tb.n)。

1.3.4股骨下段runx2、ppar-γ免疫熒光表達:取去卵巢并灌胃異補骨脂素c57/bl6小鼠股骨，保留膝關(guān)節(jié)和股骨中下段，4％中性多聚甲醛室溫固定，進行漂洗、脫鈣、再漂洗、組織脫水、石蠟包埋、切片烤片、烤蠟、脫蠟、抗原修復(fù)、孵育抗體等，后用含dipi封片劑封片，避光保存3分鐘后熒光共聚焦顯微鏡觀察拍照，從上下左右中5個方位隨機取5個非重疊視野，使用image-proplus(ipp)軟件計算平均光密度值。

1.4結(jié)果分析

1.4.1候選藥物對去卵巢c57/bl6小鼠股骨下段runx2和ppar-γ表達結(jié)果：

核心結(jié)合蛋白因子2(runx2)是成骨細胞分化的關(guān)鍵調(diào)控因子，用來衡量細胞成骨或成脂的能力。ppar-γ是脂肪細胞成熟過程中必需的細胞轉(zhuǎn)錄因子，它的表達強弱和活性高低會決定小鼠bmscs向成骨細胞或是脂肪細胞分化。

結(jié)果：對去卵巢c57/bl6小鼠股骨下段進行runx2和ppar-γ免疫熒光提示，骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體治療能增加股骨下段由于去卵巢引起的runx2表達降低，同時能抑制ppar-γ表達增加，即ovx+iso2組股骨下段runx2、ppar-γ免疫熒光表達強度高于ovx+iso1組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，見表2，圖5。

表2骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體對去卵巢c57/bl6小鼠股骨下段runx2和ppar-γ表達影響(均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝6)

*為ovx+iso2與ovx+iso1組相比較，p<0.05；+為sham組與ovx組相比較，p<0.05。

1.4.2候選藥物對骨質(zhì)疏松動物模型的試驗結(jié)果：

脂肪細胞對成骨細胞具有脂毒性，脂肪細胞成脂分化的狀態(tài)會影響成骨細胞的成骨能力和分化能力。

骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體能顯著抑制去卵巢小鼠骨髓腔中脂肪細胞的增加，即ovx+iso2組脂肪細胞數(shù)量低于ovx+iso1組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。(表3)

表3骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體對c57/bl6小鼠股骨下段脂肪細胞量的影響(均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝6)

*為ovx+iso與ovx組相比較，p<0.05；+為sham組與ovx組相比較，p<0.05。

通過對各組c57/bl6小鼠股骨下段的顯微ct(micro-ct)掃描提示，骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體治療能明顯改善由于去卵巢引起的股骨下段骨量丟失，即ovx+iso2組骨小梁厚度(tb.th)、骨體積/總體積(bv/tv)、骨小梁數(shù)量(tb.n)大于ovx+iso1組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；而ovx+iso2組骨小梁體積(tb.sp)小于ovx+iso1組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，見表3、4，圖6。

表4骨靶向修飾的異補骨脂素脂質(zhì)體對c57/bl6小鼠股骨下段骨量的影響(均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝6)

*為ovx+iso2與ovx+iso1組相比較，p<0.05；+為sham組與ovx組相比較，p<0.05。

綜上，本發(fā)明的脂質(zhì)體作為藥物載體，能夠有效保護異補骨脂素，提高異補骨脂素的生物利用度，相比于單純的異補骨脂素，對骨質(zhì)疏松癥具有更加優(yōu)異的治療效果。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。