本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，尤其涉及一種血栓水凝膠及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、黑色素瘤是由黑色素細(xì)胞發(fā)生惡變而引起的，是最具侵襲性的皮膚腫瘤。盡管黑色素瘤只占皮膚癌的5％-10％，但致死率很高。惡性黑色素瘤通常對(duì)放射治療不敏感，也缺乏高效的化療藥物。近年來，黑色素瘤領(lǐng)域發(fā)展迅速，新的治療手段層出不窮，但手術(shù)切除仍然是臨床上治療黑色素瘤的主要手段。手術(shù)治療在患者診療和預(yù)后存在諸多缺點(diǎn)，嚴(yán)重威脅患者的生活質(zhì)量。一方面，手術(shù)切除難以完全根除，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)仍然是威脅患者生存的主要難題。免疫療法通過增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能，幫助身體識(shí)別和攻擊癌細(xì)胞，在預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中已取得巨大成功。但不可否認(rèn)仍然存在一些患者可能對(duì)免疫治療不敏感或無法獲得足夠的效果。因此，免疫療法還需要進(jìn)一步開發(fā)。另一方面，腫瘤局部的慢性炎性微環(huán)境和手術(shù)切除腫瘤造成的大量組織缺損使健康組織難以再生，甚至容易因感染而發(fā)生繼發(fā)性損傷。臨床上，傳統(tǒng)術(shù)后創(chuàng)面管理方式主要通過抗生素預(yù)防感染，但抗生素的濫用可能會(huì)導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生，同時(shí)一些患者可能對(duì)某些抗生素過敏。如何在抑制腫瘤復(fù)發(fā)的同時(shí)重塑健康皮膚組織是黑色素瘤術(shù)后治療中的一大挑戰(zhàn)。因此，目前迫切需要一種既能有效清除殘留腫瘤細(xì)胞，又能在腫瘤切除部位創(chuàng)造最佳微環(huán)境以加速創(chuàng)面修復(fù)的術(shù)后輔助治療平臺(tái)。

2、因此，很有必要設(shè)計(jì)一種多功能水凝膠用于黑色素瘤的術(shù)后治療，以期實(shí)現(xiàn)預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)并加速術(shù)后創(chuàng)面愈合。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種血栓水凝膠及其制備方法與應(yīng)用。

2、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種血栓水凝膠，所述血栓水凝膠包括由醫(yī)用聚合物材料形成的凝膠，分散于所述凝膠中的腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡、小球藻提取物和血液。

3、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述醫(yī)用聚合物材料選自海藻酸鈉、羧甲基殼聚糖和羧甲基纖維素中的一種或多種。

4、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述腫瘤細(xì)胞選自皮膚黑色素瘤細(xì)胞。

5、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡含有來自其源細(xì)胞的蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等各種生物分子，并模擬源細(xì)胞的自然性質(zhì)。腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡富含腫瘤相關(guān)抗原和內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)，可刺激樹突狀細(xì)胞成熟并引發(fā)后續(xù)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡作為全抗原疫苗，通過激活免疫器官和免疫細(xì)胞，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)。不僅避免了復(fù)雜的腫瘤特異性抗原的篩選和純化過程，還可以針對(duì)不同的抗原決定簇觸發(fā)多種特異性免疫反應(yīng)，這類疫苗還可防止單一抗原突變?cè)斐擅庖咴缘膯适А?/p>

6、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述小球藻提取物是由聚乙二醇提取得到。

7、進(jìn)一步地，所述聚乙二醇為聚乙二醇200。

8、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種所述的血栓水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

9、s1、將醫(yī)用聚合物材料、聚乙二醇和鈣鹽溶于水中，反應(yīng)得到溶膠；

10、s2、向s1所述的溶膠中加入腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡溶液、小球藻提取物溶液和血液攪拌均勻，繼續(xù)加入有機(jī)酸進(jìn)行反應(yīng)，得到所述的血栓水凝膠。

11、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在s1中，鈣鹽選自磷酸鈣、碳酸鈣和草酸鈣中的一種或多種。

12、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在s1中，所述有機(jī)酸選自葡萄糖酸內(nèi)酯、水楊酸、檸檬酸和蘋果酸中的一種或多種。

13、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在s2中，所述溶膠、腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡溶液、小球藻提取物溶液和血液的體積比為4-5：1-2：2-3：1。

14、在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在s2中，所述腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡溶液的濃度為1mg/ml-1.5mg/ml；所述小球藻提取物溶液中蛋白的濃度為20mg/ml-25mg/ml。

15、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種所述的血栓水凝膠在制備預(yù)防黑色素瘤復(fù)發(fā)和促進(jìn)黑色素瘤術(shù)后傷口愈合藥物中的應(yīng)用。

16、本發(fā)明的技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：

17、(1)本發(fā)明所述的血栓水凝膠中的腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡富含腫瘤細(xì)胞的多種腫瘤相關(guān)抗原，并具有合適的尺寸以有利于細(xì)胞攝取。通過將腫瘤相關(guān)抗原傳遞給抗原提呈細(xì)胞繼而激活抗腫瘤免疫反應(yīng)。為進(jìn)一步提高腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡的療效，引入血栓成分實(shí)現(xiàn)了抗原提呈細(xì)胞的原位募集，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了抗腫瘤免疫反應(yīng)的持續(xù)激活，用于對(duì)抗黑色素瘤手術(shù)后預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

18、(2)本發(fā)明所述的血栓水凝膠中采用的小球藻提取物中的多糖成分可激活toll樣受體(一類參與非特異性免疫的蛋白分子)，是一種天然的免疫佐劑，可輔助激活樹突狀細(xì)胞，進(jìn)而進(jìn)一步提高抗原提呈能力，該結(jié)果有助于樹突狀細(xì)胞的激活和持續(xù)抗腫瘤免疫反應(yīng)的發(fā)生；另外小球藻提取物也具有優(yōu)異的抗菌活性，有助于參與術(shù)后創(chuàng)面面臨的細(xì)菌感染和創(chuàng)面愈合，并作為免疫佐劑輔助抗腫瘤免疫反應(yīng)。小球藻提取物可有效應(yīng)對(duì)多種細(xì)菌的感染而不產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性，這將有助于加速創(chuàng)面從炎癥期向增殖期過渡。將小球藻提取物加載到水凝膠中可實(shí)現(xiàn)緩慢釋放，并且高親水性的水凝膠還可為細(xì)胞的增殖和分化創(chuàng)造了理想的微環(huán)境，進(jìn)而聯(lián)合參與有效的組織修復(fù)和皮膚再生。由于其有效性、良好的生物相容性和可實(shí)現(xiàn)個(gè)體化給藥等特點(diǎn)，這種血栓水凝膠將很有應(yīng)用前景。

19、(3)本發(fā)明所述的血栓水凝膠中采用的血液從液體轉(zhuǎn)化為凝膠狀，纖維蛋白在凝血過程中產(chǎn)生并纏繞形成水合的纖維網(wǎng)絡(luò)，后者捕獲血細(xì)胞形成血栓。血栓聯(lián)合腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡可提高樹突狀細(xì)胞的原位募集，有助于提高樹突狀細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡攝取、加工和呈遞抗原信息，從而產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，有望成為預(yù)防腫瘤手術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的一種新治療模式。

20、(4)本發(fā)明所述的血栓水凝膠局部注射后，可通過原位募集樹突狀細(xì)胞的形式提高腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡和小球藻提取物的利用效率，在水凝膠緩慢降解過程中持續(xù)釋放抗原和佐劑以持續(xù)激活樹突狀細(xì)胞，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)持久的免疫激活，用于預(yù)防手術(shù)后黑色素瘤發(fā)復(fù)發(fā)。此外，該血栓水凝膠還具有良好的抗菌活性，可用于抑制術(shù)后感染創(chuàng)面的愈合。

技術(shù)特征：

1.一種血栓水凝膠，其特征在于，所述血栓水凝膠包括由醫(yī)用聚合物材料形成的凝膠，分散于所述凝膠中的腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡、小球藻提取物和血液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血栓水凝膠，其特征在于，所述醫(yī)用聚合物材料選自海藻酸鈉、羧甲基殼聚糖和羧甲基纖維素中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血栓水凝膠，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞選自皮膚黑色素瘤細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血栓水凝膠，其特征在于，所述小球藻提取物是由聚乙二醇提取得到。

5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的血栓水凝膠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血栓水凝膠的制備方法，其特征在于，在s1中，鈣鹽選自磷酸鈣、碳酸鈣和草酸鈣中的一種或多種。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血栓水凝膠的制備方法，其特征在于，在s1中，所述有機(jī)酸選自葡萄糖酸內(nèi)酯、水楊酸、檸檬酸和蘋果酸中的一種或多種。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血栓水凝膠的制備方法，其特征在于，在s2中，所述溶膠、腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡溶液、小球藻提取物溶液和血液的體積比為4-5：1-2：2-3：1。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血栓水凝膠的制備方法，其特征在于，在s2中，所述腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡溶液的濃度為1mg/ml-1.5mg/ml；所述小球藻提取物溶液中蛋白的濃度為20mg/ml-25mg/ml。

10.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的血栓水凝膠在制備預(yù)防黑色素瘤復(fù)發(fā)和促進(jìn)黑色素瘤術(shù)后傷口愈合藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種血栓水凝膠及其制備方法與應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的血栓水凝膠包括由醫(yī)用聚合物材料形成的凝膠，分散于所述凝膠中的腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡、小球藻提取物和血液。血栓水凝膠局部注射后，可通過原位募集樹突狀細(xì)胞的形式提高腫瘤細(xì)胞衍生的納米囊泡和小球藻提取物的利用效率，在水凝膠緩慢降解過程中持續(xù)釋放抗原和佐劑以持續(xù)激活樹突狀細(xì)胞，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)持久的免疫激活，用于預(yù)防手術(shù)后黑色素瘤發(fā)復(fù)發(fā)。此外，該血栓水凝膠還具有良好的抗菌活性，可用于抑制術(shù)后感染創(chuàng)面的愈合。

技術(shù)研發(fā)人員：李夢(mèng),高潔,劉文尚,張慧琪,盧正茂
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10