本公開總體上涉及使用核酸治療人受試者中的聽力損失。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、感音神經(jīng)性聽力損失是由哺乳動物內(nèi)耳中的細(xì)胞(例如，毛細(xì)胞)功能失調(diào)引起的聽力損失。感音神經(jīng)性聽力損失的非限制性原因包括暴露于大的噪音、頭部創(chuàng)傷、病毒感染、自身免疫性內(nèi)耳疾病、遺傳性聽力損失、衰老、內(nèi)耳畸形、梅尼埃病、耳硬化癥和腫瘤。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及包括將治療有效量的任何腺相關(guān)病毒(aav)載體引入哺乳動物(例如，人)的內(nèi)耳中的方法，所述aav載體包括編碼以下多肽的核苷酸序列：(a)包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽；或(b)包括可操作地連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽。

2、本文提供了用于提高對其有需要的哺乳動物的內(nèi)耳中的抗體或抗原結(jié)合抗體片段的水平的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼以下多肽的核苷酸序列：(a)包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽；或(b)包括連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中抗體或抗原結(jié)合抗體片段的水平升高。

3、在一些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合抗體片段特異性結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子(vegf)。在一些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合抗體片段降低vegf活性。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼抗體或抗原結(jié)合抗體片段的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。

4、在一些實施方案中，aav載體包括選自由以下組成的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

5、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定為患有內(nèi)耳病癥。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被診斷為患有內(nèi)耳病癥。

6、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽。

7、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號的抗原結(jié)合抗體片段的多肽。

8、本文還提供了用于治療對其有需要的哺乳動物中的內(nèi)耳病癥的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼以下多肽的核苷酸序列：(a)包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽；或(b)包括連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽；其中引入使得哺乳動物中的內(nèi)耳病癥得到治療。

9、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼抗體或抗原結(jié)合抗體片段的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。

10、在一些實施方案中，aav載體包括選自由以下組成的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。

11、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

12、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定為患有內(nèi)耳病癥。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被診斷為患有內(nèi)耳病癥。

13、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽。

14、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號的抗原結(jié)合抗體片段的多肽。

15、本文還提供了降低對其有需要的哺乳動物的內(nèi)耳中vegf活性的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼以下多肽的核苷酸序列：(a)包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽；或(b)包括連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽；其中(a)的多肽編碼特異性結(jié)合到vegf并降低vegf活性的抗體，(b)的多肽編碼特異性結(jié)合到vegf并降低vegf活性的抗原結(jié)合抗體片段；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中vegf活性降低。

16、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼抗體或抗原結(jié)合抗體片段的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。

17、在一些實施方案中，aav載體包括選自由以下組成的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。

18、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。

19、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有聽神經(jīng)瘤。在一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有前庭神經(jīng)鞘瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有2型神經(jīng)纖維瘤病。

20、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽。

21、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽。

22、本文還提供了治療哺乳動物的內(nèi)耳中聽神經(jīng)瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤或2型神經(jīng)纖維瘤病的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼以下多肽的核苷酸序列：(a)包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽；或(b)包括連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽；其中(a)的多肽編碼特異性結(jié)合到vegf并降低vegf活性的抗體，(b)的多肽編碼特異性結(jié)合到vegf并降低vegf活性的抗原結(jié)合抗體片段；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中聽神經(jīng)瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤或ii型神經(jīng)纖維瘤病分別得到治療。

23、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼抗體或抗原結(jié)合抗體片段的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。

24、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括選自由以下組成的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。

25、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

26、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有聽神經(jīng)瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有前庭神經(jīng)鞘瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有2型神經(jīng)纖維瘤病。

27、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽以及包括可操作地連接到信號肽的抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽。

28、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括編碼以下多肽的核酸序列：包括可操作地連接到信號肽的抗原結(jié)合抗體片段的多肽。

29、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，抗體包括有包括一個或多個氨基酸置換的fc區(qū)，與對照抗體相比，所述氨基酸置換縮短了哺乳動物中抗體的半衰期；或

30、與對照抗原結(jié)合抗體片段相比，所述抗體的抗原結(jié)合抗體片段的體內(nèi)半衰期縮短。

31、本文還提供了包括將治療有效量的腺相關(guān)病毒(aav)載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中的方法，所述aav載體包括編碼可操作地連接到信號肽的可溶性血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體的核苷酸序列。

32、本文還提供了用于提高對其有需要的哺乳動物的內(nèi)耳中可溶性血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體水平的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼可操作地連接到信號肽的可溶性vegf受體的核苷酸序列；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中可溶性vegf受體水平升高。

33、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-1(vegfr-1)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。

34、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-2(vegfr-2)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。

35、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegfr-1的胞外區(qū)的一部分和vegfr-2的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域；并且vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體為阿柏西普(aflibercept)。

36、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-3(vegfr-3)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-3的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括fc結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，fc結(jié)構(gòu)域為igg1?fc結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，igg1?fc結(jié)構(gòu)域為人野生型igg1?fc結(jié)構(gòu)域。

37、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體降低了vegf結(jié)合到vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3中的一者或多者的能力。

38、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼可溶性vegf受體的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括選自以下的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

39、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定為患有內(nèi)耳病癥。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被診斷為患有內(nèi)耳病癥。

40、本文還提供了用于治療對其有需要的哺乳動物中的內(nèi)耳病癥的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼可操作地連接到信號肽的可溶性血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體的核苷酸序列；其中引入使得哺乳動物中的內(nèi)耳病癥得到治療。

41、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼可溶性vegf受體的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括選自以下的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

42、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定為患有內(nèi)耳病癥。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被診斷為患有內(nèi)耳病癥。

43、本文還提供了降低對其有需要的哺乳動物的內(nèi)耳中vegf活性的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼可操作地連接到信號肽的可溶性血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體的核苷酸序列；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中vegf活性降低。

44、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼可溶性vegf受體的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括選自以下的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

45、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有聽神經(jīng)瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有前庭神經(jīng)鞘瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有2型神經(jīng)纖維瘤病。

46、本文還提供了治療哺乳動物的內(nèi)耳中聽神經(jīng)瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤或2型神經(jīng)纖維瘤病的方法，所述方法包括：將治療有效量的aav載體引入哺乳動物的內(nèi)耳中，所述aav載體包括編碼可操作地連接到信號肽的可溶性血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體的核苷酸序列；其中引入使得哺乳動物的內(nèi)耳中聽神經(jīng)瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤或ii型神經(jīng)纖維瘤病分別得到治療。

47、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括可操作地連接到編碼可溶性vegf受體的序列的啟動子和kozak序列中的一者或兩者。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體包括選自以下的組的啟動子：誘導(dǎo)型啟動子、組成型啟動子和組織特異性啟動子。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括多聚腺苷酸化信號序列。

48、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物為人。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有聽神經(jīng)瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有前庭神經(jīng)鞘瘤。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，哺乳動物已被鑒定或診斷為患有2型神經(jīng)纖維瘤病。

49、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-1(vegfr-1)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。

50、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-2(vegfr-2)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。

51、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegfr-1的胞外區(qū)的一部分和vegfr-2的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-1的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域；并且vegfr-2的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體為阿柏西普。

52、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括vegf受體-3(vegfr-3)的胞外區(qū)的一部分。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括來自野生型人vegfr-3的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，vegfr-3的胞外區(qū)的一部分包括與來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列。

53、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體包括fc結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，fc結(jié)構(gòu)域為igg1?fc結(jié)構(gòu)域。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，igg1fc結(jié)構(gòu)域為人野生型igg1?fc結(jié)構(gòu)域。

54、在本文所述的任何方法的一些實施方案中，可溶性vegf受體降低了vegf結(jié)合到vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3中的一者或多者的能力。在本文所述的任何方法的一些實施方案中，aav載體還包括分泌序列。

55、除非另外規(guī)定，否則“編碼氨基酸序列的核苷酸序列”包括是彼此的簡并形式并因此編碼相同的氨基酸序列的所有核苷酸序列。

56、術(shù)語“分離的”意指從天然狀態(tài)改變或去除。例如，天然存在于活體動物中的核酸或肽不是“分離的”，但是相同的與其天然狀態(tài)的共存物質(zhì)部分或完全分離的核酸或肽是“分離的”。分離的核酸或蛋白質(zhì)可以基本上純化的形式存在，或可存在于非天然環(huán)境中，例如像，宿主細(xì)胞中。

57、術(shù)語“轉(zhuǎn)染的”、“轉(zhuǎn)化的”或“轉(zhuǎn)導(dǎo)的”是指將外源性核酸轉(zhuǎn)移或引入細(xì)胞的過程。“轉(zhuǎn)染的”、“轉(zhuǎn)化的”或“轉(zhuǎn)導(dǎo)的”哺乳動物細(xì)胞是已用外源性核酸轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞。

58、術(shù)語“表達(dá)”是指編碼蛋白質(zhì)的特定核苷酸序列的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。

59、術(shù)語“瞬時表達(dá)”是指短時間(例如，數(shù)小時或數(shù)天)內(nèi)非整合編碼序列的表達(dá)。在細(xì)胞(例如，哺乳動物細(xì)胞)中瞬時表達(dá)的編碼序列在多輪細(xì)胞分裂后丟失。

60、術(shù)語“受試者”旨在包括任何哺乳動物。在一些實施方案中，受試者為嚙齒動物(例如，大鼠或小鼠)、兔子、綿羊、山羊、豬、狗、貓、非人靈長類動物或人。在一些實施方案中，受試者患有非綜合征性耳聾或有發(fā)展為非綜合征性耳聾的風(fēng)險。在一些實施方案中，受試者先前已被鑒定為患有內(nèi)耳病癥。在一些實施方案中，受試者先前已被診斷為患有內(nèi)耳病癥。在一些實施方案中，受試者已被鑒定為患有藥物性聽力損失。在一些實施方案中，受試者為嬰兒(例如，人類嬰兒)。

61、當(dāng)治療使得受試者(例如，人)中疾病的一種或多種癥狀(例如，無癥狀感音神經(jīng)性聽力損失)的數(shù)量、嚴(yán)重程度和頻率中的一種或多種減少時，所述治療為“治療有效的”。

62、術(shù)語“核酸”或“多核苷酸”是指單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)或其組合。除非明確限制，否則術(shù)語包括含有天然核苷酸的已知類似物的核酸，所述類似物具有與參考核苷酸類似的結(jié)合特性。除非另外指出，否則特定的核酸序列還隱含地包括互補(bǔ)序列以及明確指出的序列。在本文所述的任何核酸的一些實施方案中，核酸為dna。在本文所述的任何核酸的一些實施方案中，核酸為rna。

63、術(shù)語“信號肽”是指存在于新生分泌蛋白的n端但不存在于天然存在的成熟蛋白中的序列。在信號肽被翻譯后，“信號肽”被蛋白酶(例如，信號肽酶)裂解。信號肽在本領(lǐng)域中是已知的。信號肽的非限制性實例包括：meffkktalaalvmgfsgaala(seq?id?no:9)和mkyllptaaagllllaaqpama(seq?id?no:10)。

64、術(shù)語“內(nèi)耳病癥”是指由哺乳動物的內(nèi)耳中或周圍的細(xì)胞(例如，毛細(xì)胞、支持細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元、巨噬細(xì)胞或雪旺式細(xì)胞)的功能障礙引起的病癥。內(nèi)耳病癥的非限制性實例包括，例如，感音神經(jīng)性聽力損失(snhl)、噪聲性聽力損失、藥物性聽力損失、年齡相關(guān)性聽力損失、聽神經(jīng)瘤、2型神經(jīng)纖維瘤病、聽覺神經(jīng)病、噪聲性耳蝸突觸病而無毛細(xì)胞缺失、年齡相關(guān)性耳蝸突觸病、獲得性感音神經(jīng)性聽力損失和前庭神經(jīng)鞘瘤。參見，例如，kujawa等人,hear?res330(0?0):191-199,2015；和suzuki等人,scientific?reports?6:24907。本文描述了內(nèi)耳病癥的非限制性實例，并且內(nèi)耳病癥的其他實例在本領(lǐng)域中是已知的。

65、術(shù)語“抗體”意指相互作用以形成至少一個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的兩個或更多個單多肽鏈的復(fù)合物。抗體的非限制性實例包括單克隆抗體(例如，全長或完整單克隆抗體)、多克隆抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性、三特異性等抗體，只要其表現(xiàn)出所需的生物學(xué)活性即可)?？贵w可以是人、人源化的和/或親和力成熟的。

66、術(shù)語“抗原結(jié)合抗體片段”是單一多肽，其包括構(gòu)成至少一個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，scfv)的所有氨基酸。

67、如本文所用，術(shù)語“單克隆抗體”是指從基本上同質(zhì)抗體的群體獲得的抗體，即，包含該群體的各個抗體是相同的，不同的是可以微量存在的可能的天然存在的突變。單克隆抗體具有高度特異性(針對單一抗原)。另外，與通常包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制品相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。

68、本文中的單克隆抗體具體包括“嵌合”抗體，以及此類抗體的片段，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類或亞類的抗體中的對應(yīng)序列相同或同源，而鏈的其余部分與源于其他物種或?qū)儆谄渌贵w類或亞類的抗體中的對應(yīng)序列相同或同源，只要其表現(xiàn)出所需的生物學(xué)活性即可(參見，例如，美國專利號4,816,567；和morrison等人,proc.natl.acad.sci.usa?81:6851-6855(1984))。

69、“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”是一個或多個能夠特異性結(jié)合到一種或多種不同抗原的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域(例如，由單一多肽的氨基酸形成或由兩個或更多個多肽(例如，相同或不同的多肽)的氨基酸形成。在一些實例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與天然存在的抗體類似的特異性和親和力結(jié)合到抗原或表位。在一些實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可包括替代支架。本文描述了抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的非限制性實例?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域的其他實例在本領(lǐng)域中是已知的。在一些實例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可結(jié)合到單一抗原。

70、“親和力”是指抗原結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合伴侶(例如，抗原或表位)之間的非共價相互作用的總和的強(qiáng)度。除非另外說明，否則如本文所用，“親和力”是指反映抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的成員與抗原或表位之間的1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子x對其伴侶y的親和力可用解離平衡常數(shù)(kd)來表示。親和力可通過本領(lǐng)域已知的常用方法(包括本文中描述的那些方法)進(jìn)行測量。親和力可例如使用表面等離子體共振(spr)技術(shù)(例如，)或生物層干涉法(例如，)來測定。用于測定抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與其對應(yīng)的抗原或表位之間的親和力的其他方法在本領(lǐng)域中是已知的。

71、短語“半衰期”是指在哺乳動物(例如，本文所述的任何哺乳動物)的循環(huán)(例如，血液)中的抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的半衰期，并且由從循環(huán)中清除50％的抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體所需的時間表示。在一些實施方案中，通過比較受試者中抗體、抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的半衰期與類似哺乳動物中對照抗體、對照抗原結(jié)合抗體片段或?qū)φ湛扇苄詖egf受體的半衰期來測定半衰期的改變(例如，抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的半衰期的減少)。

72、在一些實施方案中，通過在全身性施用(例如，靜脈內(nèi)施用)本文所述的任何aav載體后的不同時間點(diǎn)，測量從受試者獲得的樣品(例如，血液樣品)中抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的水平來測定哺乳動物中抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的半衰期。在一些實施方案中，使用酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)或本領(lǐng)域已知的另一種測定來測定從哺乳動物獲得的樣品中存在的抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的水平，并且使用軟件程序(例如，graphpad?prism)將樣品中存在的抗體、其抗原結(jié)合抗體片段或可溶性vegf受體的測定水平作為時間函數(shù)作圖。

73、術(shù)語“vegf活性”是指vegf蛋白的一種或多種已知活性。例如，vegf蛋白的一種活性是結(jié)合到一種或多種vegf受體的能力。在另一個實例中，vegf蛋白的一種活性是vegf在表達(dá)vegf受體的哺乳動物細(xì)胞中觸發(fā)下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的能力。用于檢測vegf的一種或多種活性的方法在本領(lǐng)域中是已知的。

74、術(shù)語“可溶性vegf受體”是指包括可操作地連接到信號肽的一種或多種哺乳動物vegf受體(例如，vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3)的胞外區(qū)的一部分的多肽，其中可溶性vegf受體能夠特異性結(jié)合到一種或多種哺乳動物vegf蛋白(例如，vegf-a、vegf-b、vegf-c和vegf-d中的一個或多個)。在一些實例中，可溶性vegf受體包括vegfr-1的胞外區(qū)的一部分(例如，來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列(例如，來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域)或與來自野生型人vegfr-1的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列)。在一些實例中，可溶性vegf受體包括vegfr-2的胞外區(qū)的一部分(例如，來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列(例如，來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域)或與來自野生型人vegfr-2的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列)。在一些實例中，可溶性vegf受體包括vegfr-1的胞外區(qū)的一部分和vegfr-2的胞外區(qū)的一部分(例如，來自野生型人vegfr-1的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域以及來自野生型人vegfr-2的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域)(例如，阿柏西普)。在一些實例中，可溶性vegf受體包括vegfr-3的胞外區(qū)的一部分(例如，來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列(例如，來自野生型人vegfr-3的胞外區(qū)中的一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域)或與來自野生型人vegfr-3的連續(xù)序列有至少90％同一性的序列)。

75、在一些實例中，可溶性vegf受體還可包括穩(wěn)定結(jié)構(gòu)域(例如，fc結(jié)構(gòu)域，諸如igg1fc結(jié)構(gòu)域(例如，人野生型igg1?fc結(jié)構(gòu)域)。在一些實例中，可溶性vegf受體降低vegf結(jié)合到vegfr-1、vegfr-2和vegfr-3中的一個或多個(例如，兩個或三個)的能力。除非另有限定，否則本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員對于該發(fā)明所屬的通常理解的意義相同的意義。本文描述了用于本發(fā)明的方法和材料；還可使用本領(lǐng)域已知的其他合適的方法和材料。材料、方法和實例僅是說明性的而不是旨在限制。本文提及的所有出版物、專利申請、專利、序列、數(shù)據(jù)庫條目和其他參考文獻(xiàn)以引用方式整體并入。在有沖突的情況下，將以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。