本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)、構(gòu)建方法及應用。

背景技術(shù)：

1、近年來，多項研究闡述了非病毒納米藥物載體在遞送核酸類藥物中的可行性與卓越的臨床療效。然而，盡管可以在體外高效包覆核酸類藥物，當前的非病毒納米藥物遞送技術(shù)對于器官的靶向性未知，無法在體內(nèi)有效地將核酸類藥物遞送到藥物作用位置。多項研究表明未修飾或未優(yōu)化的非病毒納米載體以及包覆的核酸類藥物在給藥后大部分會被體內(nèi)的單核吞噬細胞系統(tǒng)(mps)清除，導致藥物會在巨噬細胞豐富的肝臟與脾臟聚集，若重復給藥將會有相關(guān)器官損傷及副作用的風險。同時當靶點器官為大腦時，多數(shù)納米藥物遞送技術(shù)難以穿透血腦屏障將藥物有效地釋放至腦微環(huán)境。因此當前針對腦靶向治療中樞神經(jīng)疾病的核酸藥物遞送技術(shù)尚未被充分開發(fā)。

2、紫蘇醇(perillylalcohol,poh)是一種從紫蘇(perilla?frutescens)等植物中提取的天然單萜，研究表明紫蘇醇可以通過改變血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能，增加藥物通過血腦屏障的能力。同時紫蘇醇還可與納米載體系統(tǒng)結(jié)合使用，進一步提高藥物遞送效率。這種組合可以利用紫蘇醇的多重生物活性，增強藥物的腦部靶向遞送。盡管單一的紫蘇醇結(jié)構(gòu)無法成為有效的藥物載體與遞送系統(tǒng)，其疏水性質(zhì)提示紫蘇醇可與帶電脂質(zhì)或乳化劑組分結(jié)合制備出基于紫蘇醇的納米乳劑實現(xiàn)腦部藥物遞送。文獻提示干預環(huán)狀rna的表達(如上調(diào)circdym的表達)可顯著緩解小鼠抑郁樣行為，然而當前缺乏針對環(huán)狀rna的腦部遞送技術(shù)。因此，基于紫蘇醇的納米乳劑可實現(xiàn)環(huán)狀rna的腦部遞送，并可作為針對抑郁癥的精準治療手段。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提出一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)、構(gòu)建方法及應用。

2、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

3、一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)，所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)包括環(huán)狀rna、紫蘇醇類疏水分子和帶電脂質(zhì)；所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)中紫蘇醇類疏水分子質(zhì)量占比為0-60％；所述帶電脂質(zhì)的質(zhì)量占比為5-30％。

4、進一步地，所述帶電脂質(zhì)為dotap、sm-102、dspc、膽固醇以及peg脂質(zhì)中的兩種或兩種以上的組合。

5、進一步地，所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)中陽離子或可離子化組分與環(huán)狀rna的氮磷比為(3～10)：1。

6、進一步地，所述環(huán)狀rna的正義鏈序列為seq?id?no:1，所述環(huán)狀rna的反義鏈序列為seq?id?no:2。

7、一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，所述構(gòu)建方法包括如下步驟：

8、s1、將環(huán)狀rna用緩沖液配制成環(huán)狀rna緩沖液；

9、s2、將帶電脂質(zhì)用無水乙醇和紫蘇醇配制成納米乳劑混合液；

10、s3、將納米乳劑混合液與緩沖液混合制成空載納米乳劑；

11、s4、將空載納米乳劑和環(huán)狀rna緩沖液按陽離子或可離子化組分與環(huán)狀rna的氮磷比為(3～10):1混合，然后除去乙醇、稀釋并調(diào)節(jié)ph，得到基于紫蘇醇納米乳劑的環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)。

12、進一步地，步驟s1中的緩沖液為醋酸鈉緩沖液，所述醋酸鈉濃度為25mm，所述配置成的環(huán)狀rna緩沖液的ph＝5.0，環(huán)狀rna的濃度為0.2mg/ml。

13、進一步地，步驟s2中配置成的納米乳劑混合液中帶電脂質(zhì)總濃度為8-10mg/ml。

14、進一步地，步驟s3中緩沖液為醋酸鈉緩沖液，所述納米乳劑混合液與緩沖液的體積比為1:10。

15、進一步地，步驟s4中調(diào)節(jié)后的ph值為6.5～7.4。

16、一種用于上調(diào)環(huán)狀rna基因表達藥物組合物，所述藥物組合物包含所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)。

17、本發(fā)明的有益效果：

18、1、本發(fā)明將針對上調(diào)circdym靶基因表達的環(huán)狀rna(circdym)，通過經(jīng)鼻給藥對小鼠注射3次藥物，顯著上調(diào)小鼠大腦中circdym的基因表達。因此，本發(fā)明提供的用于遞送circdym的紫蘇醇納米乳劑遞送系統(tǒng)可作為環(huán)狀rna藥物的復雜制劑，與藥學上可接受的一種或多種輔料制成藥物，應用于治療心血管疾病與circdym基因表達相關(guān)的適應癥。

19、2、在一些實施方式中，可以通過經(jīng)鼻給藥途徑施用本發(fā)明的藥物組合物。

20、3、在一些實施方式中，在通過脂多糖(lps)對小鼠抑郁造模后，經(jīng)鼻給藥注射3次藥物，給藥結(jié)束一周內(nèi)，取出大腦、心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟進行rt-qpcr、流式分析與wb檢測。結(jié)果顯示本發(fā)明circdym藥物可顯著上調(diào)小鼠全身與腦部的circdym基因表達，緩解小鼠抑郁樣行為，并提高神經(jīng)可塑性，減少神經(jīng)炎癥反應，且具有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果表明，針對上調(diào)circdym靶基因表達的環(huán)狀rna藥物有望能為治療抑郁癥的藥物。

技術(shù)特征：

1.一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)包括環(huán)狀rna、紫蘇醇類疏水分子和帶電脂質(zhì)；所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)中紫蘇醇類疏水分子質(zhì)量占比為0-60％；所述帶電脂質(zhì)的質(zhì)量占比為5-30％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述帶電脂質(zhì)為dotap、sm-102、dspc、膽固醇以及peg脂質(zhì)中的兩種或兩種以上的組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)中陽離子或可離子化組分與環(huán)狀rna的氮磷比為(3～10)：1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)，其特征在于，所述環(huán)狀rna的正義鏈序列為seq?id?no:1，所述環(huán)狀rna的反義鏈序列為seq?id?no:2。

5.一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括如下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s1中的緩沖液為醋酸鈉緩沖液，所述醋酸鈉濃度為25mm，所述配置成的環(huán)狀rna緩沖液的ph＝5.0，環(huán)狀rna的濃度為0.2mg/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s2中配置成的納米乳劑混合液中帶電脂質(zhì)總濃度為8-10mg/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s3中緩沖液為醋酸鈉緩沖液，所述納米乳劑混合液與緩沖液的體積比為1:10。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟s4中調(diào)節(jié)后的ph值為6.5～7.4。

10.一種用于上調(diào)環(huán)狀rna基因表達藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1～4任一所述的一種基于紫蘇醇納米乳劑的環(huán)狀rna遞送系統(tǒng)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于紫蘇醇乳劑環(huán)狀RNA遞送系統(tǒng)、構(gòu)建方法及應用。所述環(huán)狀RNA遞送系統(tǒng)包括環(huán)狀RNA、紫蘇醇類疏水分子和帶電脂質(zhì)；所述環(huán)狀RNA遞送系統(tǒng)中紫蘇醇類疏水分子質(zhì)量占比為0?60％；所述帶電脂質(zhì)的質(zhì)量占比為5?30％。本發(fā)明提出具有帶電性質(zhì)的紫蘇醇納米乳劑可包覆遞送針對circDYM靶基因表達的環(huán)狀RNA藥物，通過經(jīng)鼻給藥對小鼠注射3次藥物，顯著提高小鼠腦部circDYM的基因表達，緩解小鼠抑郁樣行為。同時，本發(fā)明提供的用于緩解抑郁樣行為的circDYM藥物可與藥學上可接受的一種或多種輔料制成藥物，應用與治療心血管疾病、神經(jīng)退行疾病、癌癥、自身免疫性疾病等與circDYM基因表達相關(guān)的適應癥。

技術(shù)研發(fā)人員：姚紅紅,張仲琨,沈靈
受保護的技術(shù)使用者：東南大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/14