專利名稱：含有枯草芽胞桿菌的活菌制劑及其在燒傷治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株新的枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)和含有該菌株活菌的微生態(tài)制劑，以及該菌株及其微生態(tài)制劑在燒傷治療中的應(yīng)用。
近年來，隨著微生態(tài)學(xué)的發(fā)展，微生物菌體制劑的開發(fā)和其在臨床醫(yī)學(xué)中的利用出現(xiàn)一個新的飛跌。已報導(dǎo)的微生態(tài)制劑，包括利用乳酸桿菌、雙歧桿菌等用于防治腸道致病菌群過渡繁殖引起疾病的制劑，已在臨床應(yīng)用中顯示出良好效果(康白正常菌群在防治腸道傳染病中的意義，中國微生態(tài)學(xué)雜法1989年專利康白論文集，PP28-30，1989)。
創(chuàng)傷和燒傷感染是造成創(chuàng)面不能愈合或修復(fù)，甚至導(dǎo)致膿毒敗血癥的主要原因，因此對創(chuàng)面的處理在臨床治療中具有重要作用。治療創(chuàng)面感染的措施很多，例如全身和/或局部使用抗生素、激素、免疫排斥作用的抑制劑等。這些藥物在其有限范圍內(nèi)發(fā)揮治療作用的同時，也往往會導(dǎo)致局部正常微生物群與其寄生的生態(tài)平衡失調(diào)，進而出現(xiàn)新的耐藥菌株，使藥物治療，特別是抗生素治療難以得到預(yù)期的效果。另外，研究表明，正常菌群不僅在其內(nèi)部各成員間具有共生和拮抗等方面作用，而且對外來細(xì)菌(致病菌)的對宿主的入侵具有強烈的拮抗作用。
我們由此得到啟發(fā)，產(chǎn)生了尋找一種非致病性微生物，用以預(yù)防和控制創(chuàng)傷或燒傷創(chuàng)面感染的設(shè)想，并期望以此來克服和避免因產(chǎn)生耐藥菌株而給臨床治療帶來的困難。最初，我們成功從健康人的皮膚上分離到一株枯草芽胞桿菌BS224菌株，經(jīng)過多年大量實驗室研究，結(jié)果令人驚廳地發(fā)現(xiàn)，將由該菌株可培養(yǎng)液制成懸浮組合物噴灑于創(chuàng)傷或燒傷表面上后，可在短時間內(nèi)明顯防治包括綠膿桿菌在內(nèi)的其他致病菌的感染，并有利創(chuàng)面結(jié)痂的形成及愈合，而未見任何明顯的毒付作用。(參見齊涵等，“抑菌生的研究總結(jié)報告”，中國微生態(tài)學(xué)雜志，第3卷第4期，1-11頁，1991)。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人進一步分離并篩選了另一株新的枯草芽胞桿菌，該菌株與BS224相比，具有更好繁殖和抑制致病菌生長的特性，并具有使之更易于被鑒定的特殊的遺傳學(xué)標(biāo)記。動物實驗和臨床試用結(jié)果表明，該菌株具有更加突出的臨床使用效果和價值。
本發(fā)明的一個目的是提供一株新的枯草芽胞桿菌菌株，其特征在于該菌株為不溶血的腺嘌呤缺陷型菌株，并帶有多粘菌素B抗性標(biāo)記。
根據(jù)本發(fā)明的菌株，其被命名為枯草芽胞桿菌菌株BS874。
根據(jù)本發(fā)明的菌株，其中所說的腺嘌呤缺陷為該菌株固存的腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型遺傳標(biāo)記。
根據(jù)本發(fā)明的菌株，其中所說多粘菌素B抗性標(biāo)記是利用化學(xué)誘變劑)進行人工誘變獲得的，賦予對高濃度多粘菌素B的抗性的新的遣傳標(biāo)記。
本發(fā)明的另一個目的是提供含有非致病性芽胞桿菌屬細(xì)胞的活菌制劑，所說的非致病性枯草芽胞桿菌不溶血，對人和動物沒有任何毒付作用，且所說的細(xì)菌選自枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)、地衣芽胞桿菌(B Licheniforinis)、短小芽胞桿菌(B Pumilis)、軟化芽胞桿菌(B macerans)、多粘芽胞桿菌(B.Polymyxa)和環(huán)形芽胞桿菌(B.Cirulans)。
根據(jù)本發(fā)明的活菌制劑，其中所說的非致病性芽胞桿菌屬細(xì)菌較好是枯草芽胞桿菌，且最好是枯草芽胞桿菌菌株BS874。
根據(jù)本發(fā)明的活菌制劑，該制劑可以是噴霧劑、乳劑、凍干制品、懸浮劑、軟膏和薄膜貼敷劑。
本發(fā)明的再一個目的是提供一種利用非致病性芽胞桿菌屬細(xì)菌，制成不同劑型的微生物制劑，用于抑制創(chuàng)傷和燒傷表面致病病感染的方法，該方法包括將培養(yǎng)所說的非致病性芽胞桿菌屬細(xì)菌所得到的活菌液與適當(dāng)?shù)妮d體和/或賦形劑混合，制成不同的外用活菌制劑，并將所說的制劑施用于創(chuàng)傷或燒傷表面上。
根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所說的非致病性芽胞桿菌屬細(xì)菌選自枯草芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)、短小芽胞桿菌(B.puinilis)、多粘芽胞桿菌(B.pohymyxa)和環(huán)狀芽胞桿菌(B.circulans)。
根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所說的非致病性芽胞桿菌是枯草芽胞桿菌。
根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所說的非致病性芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌菌株BS874。
根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所說的活菌制劑的劑型選自噴霧劑、乳劑、凍干劑、懸浮劑、軟膏和薄膜貼敷劑。
根據(jù)本發(fā)明的其中所說的創(chuàng)傷是包括切割傷、機械創(chuàng)傷和槍彈傷。
燒傷創(chuàng)面感染是燒傷后全身感染的主要原因。燒傷感染的主要致病菌是綠膿桿菌和耐藥性金黃色葡萄菌。由于抗生素的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致抗藥菌株的出現(xiàn)，給燒傷創(chuàng)面感染的臨床治療帶來困難。臨床上，雖然不斷有新的抗生素如磺胺咪隆和磺胺嘧啶銀等出現(xiàn)和應(yīng)用，但從外傷，特別是燒傷治療學(xué)發(fā)展的角度看，仍存在潛在不利影響。隨著微生態(tài)學(xué)基礎(chǔ)和應(yīng)用研究的進展，人們逐步認(rèn)識到，人和高等哺乳動物體內(nèi)存在的正常菌群，不僅其中各成員間具有共生和拮抗作用，而且對外來的其他菌種，特別是對入侵肌體的非正常菌群具有強烈營養(yǎng)斗爭和生態(tài)拮抗作用。作用有理由推測，如果使從自然界正常菌群中，找到一種適合在皮膚表面生長、生命能力強、營養(yǎng)條件要求不高的非致病菌種，施用于人或動物的開放出創(chuàng)傷和燒傷表面，即有可能借助該菌種生長速度、生命力頑強的特征，利用菌種間的生態(tài)拮抗作用，抑制已將要侵入創(chuàng)傷和燒傷表面的致病性微生物的生長，從而達到預(yù)防和治療創(chuàng)面感染的目的。
為此目的，我們選擇了屬于芽孢桿菌屬的非致病性微生物，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多種芽孢桿菌對某些致病菌或條件致病菌具有生態(tài)環(huán)境和營養(yǎng)條件兩方面的競爭性抑制與拮抗作用。這些芽孢桿菌屬的細(xì)菌包括但不只僅于枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)、地衣形芽孢桿菌(B.lichcmiformis)、短芽孢桿菌(B.brenis)和軟化芽孢桿菌(B.macerans)。雖然上述細(xì)菌均可使用，但其中最好枯草芽孢桿菌。為此，我們首先從健康人皮膚上分離了一株不含溶血毒素的枯草芽孢桿菌，即BS224菌株。經(jīng)過大量的動物試驗和臨床試用，結(jié)果表明將含有該菌株發(fā)孝液噴灑于燒傷或開放性創(chuàng)傷傷口上，基于該菌株的生物學(xué)特性，可立即在傷面表面形成一層保護膜，在創(chuàng)面上迅速繁殖，不僅對創(chuàng)面構(gòu)成一個強大的生物屏障，而且可強有力地抑制包括先侵入或繼后侵入的致病菌，如金黃色葡萄菌、綠膿桿菌及大腸桿菌等的生長，達到預(yù)防和控制感雜、清潔創(chuàng)面，并促進早期愈合的目的。
本發(fā)明人在上述發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，進一步使人體皮膚分離到一株新的枯草芽孢桿菌菌株。該菌株除具有不含溶血素這一細(xì)菌學(xué)性質(zhì)外，還具以下三個重要的遺傳特征(1)具有腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型遺標(biāo)記；(2)具有人工誘變的多粘菌素抗性遺傳標(biāo)記；該菌株被定名為枯草芽孢桿菌BS874菌株，并于1995年6月13日保藏在中國專利局指定的微生物保藏機構(gòu)，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏登記號為CGMCC，NO.022F?，F(xiàn)將該菌株的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)特性詳細(xì)描述如下。
一、形態(tài)學(xué)及染色特征1.形態(tài)學(xué)為竹節(jié)桿菌，大小為0.7-0.8×2.0-3.0μm。芽胞位于菌體中央，成橢圓形。無莢膜，有動力。菌體單個游離或成短鏈狀排列。
2.染色革蘭氏染色陽性。
二、培養(yǎng)特性需氧。在普通瓊脂培養(yǎng)基上易于生長。在7％Nacl和PH5.7培養(yǎng)基中生長良好。在血液瓊脂平板上生長24小時后未見，溶血環(huán)。
菌落扁平，粗糙、呈灰白色，不透明，無光澤、邊緣不整齊。
三、生物化學(xué)反應(yīng)<
>按照伯杰氏細(xì)菌學(xué)鑒定手冊(1984年第八片第132-735頁)，并以標(biāo)準(zhǔn)枯草芽胞桿菌P.C.I.209.6633為標(biāo)準(zhǔn)菌株，確定本發(fā)明的菌株為枯草芽胞桿菌(Bacillus，subtilis)。
四、遺傳學(xué)特性1.腺嘌呤黃養(yǎng)缺陷型標(biāo)記本發(fā)明的枯草芽胞桿菌BS874菌株在每升含有10g旦白胨、5g素母粉、10gNacl，PH7.2的LB培養(yǎng)基中生長良好，但在每升含有14gD2HO4、6gKH2PO4、0.2g MgSo4·7H2O、2g(NH4)2SO4、1g檸檬酸鈉、PH7.0的基本培養(yǎng)基中不能生長。從而確定該菌株為腺嘌呤缺陷型菌株。試驗中使用的對照菌株為色氨酸缺陷型枯草芽胞桿BS168(trp-)菌株；在平行的試驗中，該對照菌株只有在補充了色氨酸的基本培養(yǎng)基中才得以生長。
2.抗多粘菌素B抗藥遺傳標(biāo)記及其產(chǎn)生為了增加本發(fā)明枯草芽胞桿菌的遺傳學(xué)標(biāo)記，并使本發(fā)明的BS874菌株的存活性不致因治療中同時使用多粘菌素B而受到影響，我們使用化學(xué)誘變劑硫酸二乙脂(DES)處于對數(shù)生長期活菌株60分鐘，使菌株逐步適應(yīng)度能耐受高濃度多粘菌素(300μg/ml)，并在繼續(xù)傳代中仍較穩(wěn)定地保留這一人工誘變獲得的抗藥性遺傳性狀。但這里應(yīng)順便指出的是這一獲得性遺傳標(biāo)記對于該菌株的臨床就用來說，并不是必要的。
基于上述結(jié)果，目前可以證明本發(fā)明的菌株是一株新的不同于天然任何已知菌株的新菌株。為了證明該菌株的懸浮培養(yǎng)液用作燒傷和創(chuàng)傷表面感染預(yù)防和治療劑的可行性，我們已進行體外生物拮抗試驗、皮膚過敏試驗、安全性試驗、動物燙傷創(chuàng)面致病菌感染的治療試驗等一系列試驗。結(jié)果表明，本發(fā)明的菌株對活體動物無任何毒付作用，安全性可靠，局部應(yīng)用和腹腔注入均不會對動物造成致病性感染。特別是該菌侏用于創(chuàng)傷和燒(燙)傷局部，可強有力地抑制或阻止其他致病性細(xì)菌的侵入與生長，使之適于用作創(chuàng)傷和燒傷感染的預(yù)防與治療劑(詳見實施例部分)。
為臨床應(yīng)用目的，可將本發(fā)明的活菌制劑制成凍干制品和乳劑制品。
為制備凍干制劑，將本發(fā)明的枯草桿菌BS874菌株高密度接種于每升含有28g營養(yǎng)肉湯、5.5瓊脂并加無菌蒸餾水到1升的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，35-37℃培養(yǎng)24-48小時后，用生理鹽水將瓊脂培養(yǎng)基表面上生長的菌苔洗下。離心沉淀(3000rpm，30分鐘)后，棄去上清后，將沉淀物與適量的2％蔗糖(W/V)混合均勻，用Mcfarland法測標(biāo)準(zhǔn)管比濁(JF.Mcfarland，醫(yī)學(xué)細(xì)菌生化試驗鑒定手冊，P173，人民衛(wèi)生出版社，1985年版)，并用常規(guī)滴注培養(yǎng)法進行活菌計數(shù)。將菌液濃度釋至10’5活菌/ml后，加入等量3％低分右旋糖并混勻，按每支1ml體積分裝到小安瓶中，真空下冷凍干燥，即得到凍干制品。
為了制備本發(fā)明枯草桿菌BS874株活菌的乳劑制品，首先取硬脂酸140g、單硬脂酸甘油酯50g、加熱混溶后冷卻至70℃。同時取氫氧化鉀5g、甘油180g溶解后混勻。在70℃水溶中，在持續(xù)攪拌下將如此得到的水相緩慢加入上述油相中，直至凝固。然后加入按前述方法培養(yǎng)增殖得到的BS874活菌體沉淀物，充分混勻成乳劑，并將活菌濃度適當(dāng)調(diào)整到每克乳劑約含5×108個活菌。將所得乳劑置4℃下保存。
本發(fā)明枯草桿菌制劑可以在由種子培養(yǎng)增殖后，直接制成每毫升約含5×108個活細(xì)菌的噴霧劑，亦可將按前述方法制得的凍干制品進行復(fù)蘇后，加適當(dāng)無菌鹽水制成菌濃度為每毫升約含5×108個活細(xì)菌的噴霧劑。
根據(jù)創(chuàng)面的特點和病情需要，亦可按常規(guī)方法將本發(fā)明的枯草桿菌制劑制成懸浮液劑，軟膏或薄膜貼敷劑，制備這些不同劑型制劑所使用的載體、賦形劑或添加劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的，制備方法亦可從許多藥劑學(xué)教科書和其他專業(yè)文獻中查找到。
雖然本發(fā)明的枯草桿菌制劑可制成多種劑型，但從方便臨床應(yīng)用的角度考慮，最好是使用噴霧劑。
使用本發(fā)明的枯草桿菌噴霧制劑預(yù)防或治療創(chuàng)傷、燒傷或燙傷時，一般是首先常規(guī)清除創(chuàng)面的污染物、滲出物和分泌物，必要時作簡單地創(chuàng)面消毒處理，然后將該噴霧劑均勻地噴灑在創(chuàng)面上，由于制劑中基質(zhì)中含有適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)瓊脂(約0.5％)，故噴灑后很容易在創(chuàng)面表面形成一層薄膜。噴灑量一般為每平方厘米約0.1ml。治療早期每天噴灑2-3次。待結(jié)痂形成后每天噴灑一次。噴灑時，霧液噴口離創(chuàng)面的距離應(yīng)不超過5厘米。噴灑后無須包扎或用敷料附蓋創(chuàng)面。
在特殊病例的治療中，可根據(jù)具體情況，將本發(fā)明的枯草桿菌制劑與適當(dāng)?shù)目股鼗旌鲜褂?，以進一步提高治療效果。
本發(fā)明的枯草桿菌活菌制劑，通過噴灑或涂敷植入創(chuàng)面后，活菌體作為優(yōu)勢菌在創(chuàng)面上迅速生長，形成菌膜構(gòu)成創(chuàng)面上的有力生物屏障，進而通過營養(yǎng)和生存競爭抑制致病菌的侵入和/或生長，并借助其復(fù)雜的代謝產(chǎn)物保護創(chuàng)面和促進創(chuàng)面早期愈合。
以下結(jié)合實施例，進一步說明本發(fā)明枯草桿菌制劑的臨床適用性、使用效果及優(yōu)點。
實施例7本實施例旨在證明本發(fā)明的枯草芽胞桿菌SB874菌株微生態(tài)制劑對三種常見致病菌的體外拮抗作用。
使用金黃色葡萄球菌ATCC25923、綠膿桿菌ATCC27853和大腸桿菌ATCC25922三種燒傷臨床中常見的致病菌作為體外生物拮抗試驗的靶細(xì)菌。
首先將各靶細(xì)菌分別接種于5ml肉腸培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12小時，并計數(shù)每種細(xì)菌的數(shù)目。然后在各靶細(xì)菌的12小時肉湯培養(yǎng)基中接入細(xì)菌總數(shù)不超過靶細(xì)菌數(shù)的枯草芽胞桿菌并置過28℃(大致相當(dāng)于人體表感染創(chuàng)面的溫度)培養(yǎng)。以不加BS874菌液的單一靶細(xì)菌培養(yǎng)物作為對照。
在培養(yǎng)開始后12、18、24和48小時分別取樣(對照生長期菌液0.2ml)經(jīng)用生理鹽水(1.8ml)稀釋后接種于瓊脂平板上37℃培養(yǎng)，并分別計數(shù)菌落形成單位。結(jié)果如1所示。
表1 BS874菌株對三種致病靶細(xì)菌的拮抗效應(yīng)
*活菌數(shù)/ml＝4滴菌液的總細(xì)菌數(shù)÷4×50(0.2ml/滴)×稀釋倍數(shù)**欄內(nèi)所有數(shù)據(jù)均為菌落形成單位(CFU)數(shù)logn/ml。
上述實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的BS874菌株在體外對燒傷和創(chuàng)傷表面的三種常見致病菌有明顯的拮抗作用。該拮抗作用從按一同體溫后18小時出現(xiàn)，24小時后達到高峰。作用機理可能是多方面的，其中包括BS874菌株高快速生長對致病菌的營養(yǎng)和競爭，以及BS874菌株產(chǎn)生的多種酶類對致病菌及其生態(tài)環(huán)境的破壞作用等。
實施例2本實施例的目的在于實驗證明本發(fā)明枯草芽胞桿菌活菌制劑的使用安全性。
1.局部過敏試驗選取體重為2.5-3.0kg的新西蘭純系雄性兔10只，分別皮下注射SB874菌株的細(xì)菌培養(yǎng)液4ml(5×108活細(xì)菌/ml)，正常飼養(yǎng)條件下觀察10天，結(jié)果所有被試動物健康狀態(tài)良好，注射局部未見任何異常。
2.全身性過敏試驗取體重18-20g的昆明純系健康小鼠，每天經(jīng)腹腔注射上述SB874菌液0.5ml(5×108活細(xì)菌/ml)，連續(xù)注射7天，未見任何全身或局部不良反應(yīng)，平均體重約增5％。第8天處死動物，分離心臟、肺、肝、腎、腦等主要器官，進行病理學(xué)檢查，結(jié)果這些臟器均未見明顯的組織學(xué)病理改變。
3.體外溶血試驗將BS874活菌制劑用生理鹽水作5、15、20和25倍稀釋。各取2ml稀釋液，分別與2％免經(jīng)細(xì)胞懸液2ml混合，并于37℃保溫24小時。結(jié)果顯微鏡下檢查未見溶血現(xiàn)象。
實施例3本實施例的目的旨在在基礎(chǔ)試驗的基礎(chǔ)上，將本BS874菌株的活菌制劑植入被金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌感染的大鼠燙傷動物模型的創(chuàng)面上，分別觀察其在活體動物的創(chuàng)面上抑制這些致病菌感染的效果。
健康大鼠(Wistar品系)90只(體重200-250g)，分成9組。分設(shè)三個實驗組，即金黃色葡萄球菌感染組、綠膿桿菌感染組、大腸桿菌感染組。與三個實驗組對應(yīng)的三個對照組；以及三個相應(yīng)的磺胺密啶銀霜(Ag-SD)治療組。
大鼠背部經(jīng)用硫化鈉脫毛及乙醚吸入麻醉后，將動物背部浸入99℃沸水中12秒鐘，造成局部燙傷。10分鐘后各實驗組及相應(yīng)對照組和Ag-SD組動物分別在燙傷部位接種金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌懸液1ml，造成感染動物模型。
感染4小時后，給實驗組動物創(chuàng)面噴灑本發(fā)明的BS874活菌噴霧劑各1ml；給對照組動物噴灑不含活菌的本發(fā)明噴霧劑的基質(zhì)材料各1ml；給Ag-SD霜劑，厚度2mm，每日涂2次。
全部動物分籠飼養(yǎng)1-4天，每天分別用75％酒精消毒創(chuàng)面后，于無菌條件下劃區(qū)切取痂下組織，按常規(guī)滴注培養(yǎng)法進行細(xì)菌定量檢查。結(jié)果如下列表2所示。
表2被感染動物經(jīng)處理后結(jié)痂下組織致病菌定量分析結(jié)果<
>*統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明，各對照組和Ag-SD組的檢測數(shù)據(jù)P值均＜0.01。
從上表可以看出，本發(fā)明的枯草桿菌BS874菌株活菌制劑，在活體動物燙(燒)傷模型中，可有效地抑制三種常見致病菌的生長和繁殖。而且，使用本發(fā)明的活菌制劑抑制燙(燒)傷局部致病菌感染，其效果明顯優(yōu)于目前常用的抗菌抑菌藥劑磺胺嘧啶銀(Ag-SD)。
實施例4本實施例旨在舉例說明本發(fā)明的枯草芽胞桿菌BS874菌株活菌制劑(噴霧劑)，在治療人體II°燒傷中的試用效果及優(yōu)點。
權(quán)利要求
1.新的枯草芽胞桿菌菌株，特征在于該菌株為不溶血的腺嘌呤缺陷型菌株，并帶有多粘菌素B遺傳標(biāo)記。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的菌株，特征在于該菌株的起始野生菌是從健康人的皮膚上分離并純化的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的菌株，其為保藏登記號為C2MCC N0.0227的枯草芽孢桿菌BS874菌株。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的菌株，其中所說的腺嘌呤缺陷為該菌株固有的腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型遺傳標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的菌株，其中所說的多粘菌素B抗性標(biāo)記是經(jīng)用化學(xué)誘變劑進行人工誘變獲得的，賦予對高濃度多粘菌素B的抗性的新的遺傳標(biāo)記。
6.一種含有非致病性的芽胞桿菌屬細(xì)菌的活菌制劑，所說的非致病性芽胞桿菌屬細(xì)菌選自枯草芽胞桿菌、地衣形芽胞桿菌、短小芽胞桿菌、軟化芽胞桿菌、多粘芽胞桿菌和環(huán)化芽胞桿菌，特征在于將所說的芽胞桿菌屬細(xì)胞的活菌液與適當(dāng)?shù)妮d體和/或賦形劑混合，制成不同劑型的外用活菌制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的活菌制劑，其中所說的非致病性芽胞桿菌是不溶血的非致病性枯草芽胞桿菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的活菌制劑，其中所說的非致病性枯草芽胞桿菌是保藏號為CGMCC N2.0227的枯草芽胞桿菌BS874菌株。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的活菌制劑，特征在于該制劑選自噴霧劑、凍干劑、懸浮劑、軟膏和薄膜貼敷劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項的活菌制劑在預(yù)防和治療開放性創(chuàng)傷感染中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項的活菌制劑在預(yù)防和治療燒傷或燙傷感染中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一新的枯草芽胞桿菌菌株BS874，該菌株不產(chǎn)生溶血毒素，具有腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型和多粘菌素B抗性遺傳標(biāo)記，其保藏登記號為CGMCC No.0227。本發(fā)明還提供了含有枯草芽胞桿菌菌株BS874的活菌制劑及其在預(yù)防和治療創(chuàng)傷和燒傷創(chuàng)面感染中的應(yīng)用。
文檔編號A61K35/66GK1120585SQ9510679
公開日1996年4月17日 申請日期1995年6月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月30日
發(fā)明者齊涵, 王淑芬 申請人:齊涵