專利名稱：新的三烯類視黃酸化合物及方法
發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及具有視黃酸受體和類視黃酸X受體活性的化合物，以及這些化合物的治療應(yīng)用方法。
發(fā)明的背景很早就已認(rèn)識(shí)到維生素A代謝產(chǎn)物視黃酸可誘導(dǎo)廣譜的生物學(xué)效應(yīng)。此外，已合成了各種視黃酸的結(jié)構(gòu)類似物，并已發(fā)現(xiàn)這些類似物也是有生物活性的。已發(fā)現(xiàn)例如Retin-A和Accutane等類似物可作為治療多種病理學(xué)狀態(tài)的治療劑。再者，還發(fā)現(xiàn)合成的類視黃酸(retinoid)可模擬視黃酸的許多藥理學(xué)作用。
醫(yī)學(xué)專業(yè)人員已逐漸對(duì)類視黃酸的治療應(yīng)用產(chǎn)生了濃厚興趣。在它們的應(yīng)用中，由FDA批準(zhǔn)的是治療重型痤瘡和牛皮癬。也有大量證據(jù)表明這些化合物可用于阻止并在一定程度上逆轉(zhuǎn)因長期暴露于陽光而引起的皮膚損害。其他證據(jù)則表明這些化合物可用于治療和預(yù)防各種癌的或癌變前的病變，例如黑素瘤、子宮頸癌、某些類型的白血病、口腔粘膜白斑病，以及基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌。也已顯示類視黃酸可有效地治療和預(yù)防眼、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、皮膚、呼吸道及消化道的疾病，并且可作為有利于傷口愈合和調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡的藥劑。
對(duì)視黃酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之分子機(jī)理的主要認(rèn)識(shí)是1988年獲得的，當(dāng)時(shí)證明類固醇/甲狀腺激素細(xì)胞內(nèi)受體超族(superfamily)的一個(gè)成員可轉(zhuǎn)導(dǎo)視黃酸信號(hào)(Evans,Science,240:889-95(1988)；Giguere et al.,Nature,330:624-29(1987)；Petkovich et al.,Nature,330:444-50(1987))?，F(xiàn)已知道類視黃酸可調(diào)節(jié)兩個(gè)不同的細(xì)胞內(nèi)受體亞族，即視黃酸受體(RAR)和類視黃酸X受體(RXR)以及它們的異型(isoforms)即RARα、β、γ及RXRo、β、γ的活性。就這個(gè)方面來說，一種調(diào)節(jié)RAR的轉(zhuǎn)錄活性的內(nèi)源性低分子量配體是全反式視黃酸(ATRA)，而RXR的一種內(nèi)源性配體是9-順式視黃酸(9-cis)[Heyman et al.,Cell,68:397-406(1992)和Levin et al.,Nature,355:359-61(1992)]。
雖然RAR和RXR在體內(nèi)對(duì)ATRA均有反應(yīng)，但由于有些ATRA在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成9-cis，所以這些受體在幾個(gè)重要的方面有所差異。首先，RAR和RXR在一級(jí)結(jié)構(gòu)上顯著不同(例如RARα和RXRα的配體結(jié)合區(qū)域只有27％的氨基酸相同)。這些結(jié)構(gòu)差異反映在RAR和RXR對(duì)各種維生素A代謝物及合成的類視黃酸有不同的相對(duì)反應(yīng)程度。此外，可看到RAR和RXR有不同的組織分布圖。例如，與在內(nèi)臟組織中表達(dá)水平并不高的RAR相反，已顯示RXRα mRNA在肝、腎、肺、肌肉和腸中極為豐富。最后，RAR和RXR具有不同的靶基因特異性。例如，最近已在Ⅱ型細(xì)胞視黃醛結(jié)合蛋白質(zhì)(CRBPⅡ)和載脂蛋白AI基因中鑒定了賦予針對(duì)RXR而不是RAR的反應(yīng)性的反應(yīng)元件。再者，最近也已顯示RAR可通過CRBPⅡ RXR反應(yīng)元件抑制RXR介導(dǎo)的激活作用(Manglesdorf et al.,Cell,66:555-61(1991))。這些資料表明兩種視黃酸反應(yīng)途徑不單純是繁復(fù)的，而且表現(xiàn)出一種復(fù)雜的相互作用。
鑒于這些受體的性質(zhì)相關(guān)但又明顯的不同，對(duì)RAR亞族或RXR亞族更具選擇性的類視黃酸對(duì)于選擇性地控制由一種或多種RAR或RXR異型介導(dǎo)的過程應(yīng)有很大價(jià)值，并將提供獨(dú)立控制由RAR或RXR介導(dǎo)的生理過程的能力。此外，激活RAR和RXR的一種或多種異型(isoforms)的全激動(dòng)劑(Pan-agonist)類視黃酸對(duì)于控制由類視黃酸受體的這些亞族介導(dǎo)的過程也應(yīng)是很有價(jià)值的。再者，當(dāng)用于治療應(yīng)用時(shí)，優(yōu)選影響一種或多種但不是所有受體異型的類視黃酸也有可能增加治療效果和降低副作用。
已公開了各種可用于治療炎癥、牛皮癬、變態(tài)反應(yīng)，以及用于化妝品防曬制劑的多烯化合物(例如參見美國專利NO.4,534,979和5,320,833)。另外，已證明己二烯酸的三烯二醇酯可用于合成視黃酸和去甲視黃酸(nor-retinoic acid)(參見M.J.Aurell,et al.,49 Tetrahedron,6089(1993))。然而，尚沒有這些化合物的類視黃酸活性的報(bào)道。
發(fā)明的概要本發(fā)明提供對(duì)RAR和RXR具有選擇活性，或?qū)σ环N或多種RAR和RXR異型有全激動(dòng)劑活性的新的三烯化合物。本發(fā)明還提供標(biāo)記的類視黃酸化合物，摻入這些新的三烯化合物的藥物組合物，以及這些化合物和藥物用于治療的方法。
本文后附的權(quán)利要求中特別指出了表征本發(fā)明的這些和其他多方面的優(yōu)點(diǎn)及新穎性特征，其構(gòu)成本發(fā)明的一部分。但為了更好地理解本發(fā)明、其優(yōu)點(diǎn)及其應(yīng)用方面所達(dá)到的目的，尚須參閱給出的詳細(xì)描述材料，其中舉例說明并描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案。定義除另有陳述外，依據(jù)本發(fā)明并如本文中使用的下列術(shù)語均由以下意義來定義。
術(shù)語烷基是指可選擇性的為飽和或未飽和(從而生成鏈烯基和炔基結(jié)構(gòu))的直鏈、支鏈或環(huán)結(jié)構(gòu)，及其組合。
術(shù)語芳基是指選擇性取代的六元芳環(huán)。
術(shù)語雜芳基是指選擇性取代的、含有一個(gè)或多個(gè)選自由氧、氮和硫組成的元素組的雜原子的五元或六元雜環(huán)。
術(shù)語類視黃酸是指結(jié)合和/或激活一種或多種類視黃酸受體，從而影響其結(jié)合了被活化受體和化合物復(fù)合物的靶基因之轉(zhuǎn)錄活性的化合物。
術(shù)語全激動(dòng)劑是指激活RAR亞族(即RARα、RARβ、或RXRγ)和RXR亞族(即RXRα、RXRβ、或RXRγ)中的至少一個(gè)成員的類視黃酸。這樣的全激動(dòng)劑類視黃酸較好能激活類視黃酸受體之RAR和RXR亞族的所有成員。
本文中所說的同位素標(biāo)記或放射性標(biāo)記是指用氘、氚、碳13和/或碳14標(biāo)記的取代基，其中包括但不只限于14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和13CD3。本發(fā)明實(shí)施方案的詳細(xì)描述根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，我們開發(fā)了具有下列結(jié)構(gòu)式的新的三烯化合物
或
或
或
或
其中R1、R2和R4各自分別是氫、芳基、雜芳基、CF3或可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3選擇性取代的C2-C6烷基、氟烷基或全氟烷基；R3和R5各自分別是氫、CF3、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或全氟烷基、或OR6，其中R6是氫、CF3、C1-C2烷基或C1-C2氟烷基或全氟烷基，但條件是當(dāng)R3是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基時(shí)，R1和R5不能是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基；R7是可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3選擇性取代的C1-C4烷基或者是CH2OR8，其中R8代表氫、C1-C6烷基、可被C1-C4烷基、F、Cl、Br、I、OH、CF3、OR6、NR6選擇性取代的C3-C7飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中R6具有上文給出的定義；R9是C1-C4烷基；R10至R15各自分別是氫、C1-C6烷基或CF3；X是COOR16、CONR17或CONHR17R18，其中R16代表氫或C1-C6烷基，且其中R17和R18各自分別代表C1-C6烷基、或可被OH、F、Br、Cl或I選擇性取代的芳基或雜芳基，但條件是R17和R18不能都是芳基或雜芳基；Y是C、O、S或N，條件是當(dāng)Y是O時(shí)，則R14和R15不存在，當(dāng)Y是N時(shí)，則R14和R15不能是CF3，另外當(dāng)Y是S時(shí)，則R14和R15可獨(dú)自或一起代表O，或者可能都不存在；W是N或CR16，這里R16具有如上文給出的同樣定義；R19是可被選自由氫、F、Cl、Br、I或C1-C6烷基組成的基團(tuán)組的一個(gè)或多個(gè)取代基選擇性取代的芳基或雜芳基，其中X具有上文給出的同樣定義；n是0、1或2；虛線表示選擇性的雙鍵；波狀線表示呈順式或反式構(gòu)型的碳-碳鍵，但條件是當(dāng)R1、R2、R4和R5都是氫時(shí)，R3不能是芳基。
R1、R2和R4較好各自代表C3-C6支鏈烷基、氟烷基或全氟烷基，其中R2和R4更佳地是各自代表C3-C6支鏈烷基、氟烷基或全氟烷基，而R1、R3和R5都是氫，且R2和R4最好選自由異丙基、叔丁基和CF3組成的基團(tuán)組，同時(shí)R1、R3和R5都是氫。
本發(fā)明的化合物還包括所有醫(yī)藥上可接受的鹽、以及酯、酰胺和前體藥物。這些鹽、酯和酰胺較好是在R16、R17和/或R18位置上形成的。本公開中使用的醫(yī)藥上可接受的鹽包括但不只限于與吡啶、銨、哌嗪、二乙胺、煙酰胺、甲酸、脲、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋰、肉桂酸、甲氨基、甲磺酸、苦味酸、酒石酸、三乙氨基、二甲氨基及三(羥甲基)氨基甲烷形成的鹽。其他一些醫(yī)藥上可接受的鹽都是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
本發(fā)明的化合物顯示出類視黃酸活性，并特別適用于治療與皮膚相關(guān)的疾病，其中包括但不只限于光化角化病、砷角化病、炎癥和非炎癥性座瘡、牛皮癬、魚鱗癬及皮膚的其他角質(zhì)化和高增殖性疾病、濕疹、特應(yīng)性皮炎、毛囊角化病、扁平苔癬、預(yù)防和逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素?fù)p傷(類固醇萎縮)、用作局部抗微生物劑、皮膚色素沉著劑以及治療和逆轉(zhuǎn)年齡和光對(duì)皮膚的損傷。這些化合物也可用于預(yù)防和治療癌和癌前期病變，包括惡性前和惡性過度增殖疾病，例如乳腺、皮膚、前列腺、子宮頸、子宮、結(jié)腸、膀胱、食管、胃、肺、喉、口腔、血液和淋巴系統(tǒng)的癌、組織變形、發(fā)育異常、瘤形成、粘膜的粘膜白斑病和乳頭狀瘤，以及治療卡波濟(jì)氏(Kaposis)肉瘤。此外，本發(fā)明的化合物可用于治療眼睛的疾病，其中包括但不限于增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)、視網(wǎng)膜脫離、干眼病和其他角膜病變，以及治療和預(yù)防各種心血管病，其中包括但不只限于與脂質(zhì)代謝有關(guān)的疾病如脂血異常，還可用于預(yù)防(心瓣膜口)再狹窄，以及用作增加循環(huán)組織纖維蛋白溶酶原激活劑(TPA)水平的藥劑。本發(fā)明化合物的其他應(yīng)用包括預(yù)防和治療與人乳頭狀瘤病毒(HPV)相關(guān)的病癥，包括疣、生殖器疣、各種炎性疾病如肺纖維化、回腸炎、結(jié)腸炎和Krohn氏病、神經(jīng)變性疾病如Alzheimer病、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、腦垂體功能異常、包括生長激素產(chǎn)生不足、調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡(apoptosis)、包括誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡和抑制T細(xì)胞激活的編程性細(xì)胞死亡、恢復(fù)毛發(fā)生長，包括用本發(fā)明的化合物和其他治療劑如Minoxidil聯(lián)合治療與免疫系統(tǒng)相關(guān)的疾病，包括使用本發(fā)明化合物作為免疫抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)器官移植物排斥和促進(jìn)傷口愈合，包括調(diào)節(jié)瘢痕形成。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可理解到，本發(fā)明的類視黃酸化合物將適用于任何可使用包括RAR選擇性類視黃酸、RXR選擇性類視黃酸及全激動(dòng)劑類視黃酸在內(nèi)的各種類視黃酸的療法中。
此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解到，本發(fā)明的化合物包括含有這些化合物的藥物組合物及配方，可用于各種聯(lián)合療法中以治療上述的那些疾病和病變。因此，本發(fā)明的化合物可與其他療法，其中包括但不只限于與化學(xué)治療劑如細(xì)胞生長繁殖抑制劑和細(xì)胞毒性劑、免疫修飾劑如干擾素、白細(xì)胞間素、生長激素及其他細(xì)胞活素，激素療法、外科和放射療法聯(lián)合使用。
本發(fā)明的有代表性的化合物包括但不只限于(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基〕-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-環(huán)己基-7-(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸、及(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可用常規(guī)的化學(xué)合成方法，例如通過已公開化合物的改性或全合成法等，來制得本發(fā)明的化合物。這方面，按照已有的如M.I.Dawson及W.H.Okanmara[“合成類視黃酸的化學(xué)和生物學(xué)”3,8,14和16章，CRC Press,Inc.,Florida(1990)]、M.H.Dawson及P.D.Hobbs[“類視黃酸的合成化學(xué)”第2章“類視黃酸，生物學(xué)，化學(xué)和醫(yī)學(xué)”M.B.Spornet al.,Eds.(2nd ed.),Raven Press,New York,New York,PP.5-178(1994)]和R.S.H.Liu及A.E.Asorto[“維生素A立體異構(gòu)體的光化學(xué)和合成”40Tetrahedron,1931(1984)](其公開內(nèi)容列入本文作為參考)所述的合成類視黃酸的路線和技術(shù)可很好地合成本發(fā)明的化合物。合成本發(fā)明化合物的一般方法的各系列步驟如下文所示。此外，本發(fā)明特定化合物的更詳細(xì)的描述舉例說明性合成路線將在本文的實(shí)施例中給出。通用方法1
在通用方法1中，為制備本發(fā)明的化合物，可以用例如氰甲基膦酸二乙基酯等膦酸酯處理芳基酮A以得到腈B，然后在如氫化二異丁基鋁(Dibal)等還原劑存在下還原B(虛線表示可選擇性地為單或雙鍵)，以提供醛C?？稍诖穗A段通過薄層色譜(TLC)或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他方法分離醛C的順式或反式異構(gòu)體。然后用如三乙基-3-烷基-4-膦?；∠┧狨サ褥⑺狨ヌ幚磉@些分離的醛C，得到三烯酸酯D，后者則可于堿性條件下經(jīng)皂化而得到羧酸E。
或者，亦可利用如下所示的通用方法2，從炔F制備醛C的順式異構(gòu)體。具體地說，于如二異丙基氨基化理(LDA)等強(qiáng)堿存在下，用如CIPO(EtO)2等磷?；瘎┨幚矸蓟阴１揭灾苽浞蓟睩。然后用合適的如PhOCN等腈源化合物，于如正丁基鋰(nBuLi)等堿存在下處理芳基炔F，以得到腈G，后者再經(jīng)還原性甲基化處理即無例外地得到腈B的順式異構(gòu)體。然后將腈B還原成相應(yīng)的醛B，并按前述通用方法1中的同樣方法得到化合物D和E。通用方法2
可通過通用方法3制備本發(fā)明的化合物的其他類似物。首先還原腈B的雙鍵(其中虛線表示選擇性單或雙鍵)，得到腈I。然后于Dibal存在下還原腈I得到醛J，后者經(jīng)用如三乙基-3-烷基-4-膦?；∠┧狨サ褥⑺狨ヌ幚砗蟮玫蕉┧狨。通過如KOH/MeOH等堿皂化二烯酸酯K，得到二烯酸L。通用方法3
可按下述通用方法4制備本發(fā)明化合物的放射性標(biāo)記的同系物。具體他說，將化合物A氧化成甲基酯B，然后用如LiAl3H4等氚氫化物來源，將其還原成醇C。氧化氚化的醇C得到醛D，然后與三乙基膦酰基丁烯酸酯的內(nèi)鎓鹽縮合得到氚化的酯E。將酯E皂化后以高產(chǎn)率得到有高比活性(＞20Ci/毫摩爾)的最后氚標(biāo)記的酸F。Boehm等人在“高比活性[3H]-9-順式-視黃酸的合成及其應(yīng)用于鑒別類視黃酸異常結(jié)合性質(zhì)”，37 J.Med.Chem.,408-414(1994)(其中公開的內(nèi)容列入本文作為參考)中詳細(xì)描述了這一方法。通用方法4放射性標(biāo)記同系物的制備
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解到，對(duì)上述方法的某些改動(dòng)仍包括于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，也可以以相應(yīng)的酰胺或酯的形式制備本發(fā)明的化合物，可用適當(dāng)?shù)恼⑷〈⑺狨ィ⑶铱梢栽谏鲜龊铣芍欣贸齃iAl3H4以外的還原劑。另外，應(yīng)理解到可以利用包括13CH3、13CD3等在內(nèi)的其他同位素標(biāo)記?？梢岳眠m當(dāng)標(biāo)記的MeLi(如13CH3Li)如方法1中所示引入這些標(biāo)記。而合成的其余步驟同方法1中所示。
另一方面，本發(fā)明的類視黃酸化合物、其醫(yī)藥上可接受的鹽或可水解的酯可與醫(yī)藥上可接受的載體混合形成混合物，以提供可用于治療哺乳動(dòng)物，更好是病人體內(nèi)如上文提到的生物學(xué)狀態(tài)或疾病的藥物組合物。在這些藥物組合物中使用的特定載體可依據(jù)所需的給藥型式的不同(例如靜脈內(nèi)注射、口服、局部用藥，栓劑或胃腸道外給藥〕而采取多種不同的形式。
在制備口服液體劑型(如懸浮液、酏劑和溶液劑)的組合物時(shí)，可使用例如水、乙二醇、油、醇、香味劑、防腐劑、著色劑等典型的藥物介質(zhì)。同樣，當(dāng)制備口服固體劑型(如粉末、片劑和膠囊劑)時(shí)，可以使用如淀粉、糖等載體、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、粘結(jié)劑、崩解劑等。由于片劑和膠囊劑用藥方便，所以它們代表了本發(fā)明藥物組合物的最為有利的口服劑型。
為了胃腸道外給藥，典型的載體將包括無菌水，但也可以使用有助于溶解度或作為防腐劑的其他成分。此外，也可以制備可注射的懸浮液，其中可利用適當(dāng)?shù)囊后w載體及懸浮劑等。
為了局部給藥，可以使用無刺激性的潤濕基質(zhì)如軟膏或乳膏配制本發(fā)明的化合物。適用的軟膏基質(zhì)包括凡士林、凡士林加揮發(fā)性硅氧烷、羊毛脂和油包水乳劑例如EucerinTM(Beiersdorf)。適用的乳膏基質(zhì)包括NiveaTMCream(Beiersdorf)、冷霜(USP)、Purpose CreamTM(Johnson & Johnson)、親水軟膏(USP)、和LubridermTM(Waner-Lambert)。
本發(fā)明的藥物組合物和化合物一般以大約每公斤體重大約1μg至500毫克，較好大約10μg至250毫克，最好大約20μg至100毫克的劑量單位形式給藥。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解到的，用于病人的本發(fā)明藥物組合物的特定給藥量將取決于多種因素，其中包括但不只限于預(yù)期的生物學(xué)活性、病人的狀況，以及對(duì)藥物的耐受性。
當(dāng)進(jìn)行標(biāo)記并用于檢測是否存在RAR和RXR的檢測法中時(shí)，也可體現(xiàn)本發(fā)明的化合物所具有的實(shí)用性。由于它們能夠與RAR和RXR亞族的成員特異性地結(jié)合，并因而可于其他類視黃酸受體或相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)受體存在下用于確定RAR和RXR異型的存在，所以是特別有用的。
因此，本發(fā)明還提供同位素標(biāo)記的和放射性標(biāo)記的化合物，包括氘、氚、碳13和碳14標(biāo)記的類似物，以及它們的合成方法。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明的標(biāo)記的化合物表現(xiàn)有至少15Ci/毫摩爾，較好至少25Ci/毫摩爾，且最好至少40Ci/毫摩爾的比活性。這些標(biāo)記的化合物也將證明可在動(dòng)物代謝研究中用于鑒定化合物代謝產(chǎn)物。
由于本發(fā)明化合物對(duì)類視黃酸受體的選擇性異性，所以這些化合物也可用于體外純化RAR和RXR的樣品?？蓪⒑蓄愐朁S酸受體的樣品與一種或多種本發(fā)明的化合物混合，以使化合物(配體)結(jié)合到受體上。然后再用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的分離技術(shù)分離出已結(jié)合的配體/受體結(jié)合物，以完成這一純化目的。所說的分離技術(shù)包括柱分離、過濾、離心、標(biāo)記和物理分離，以及抗體復(fù)合等。
本發(fā)明的化合物還包括外消旋物，單獨(dú)的立體異構(gòu)體及其混合物。然而用標(biāo)準(zhǔn)的拆分技術(shù)例如分步結(jié)晶和手征性柱色譜技術(shù)分離這些異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物和藥物組合物可有利地用于治療本文所述的疾病和病理狀態(tài)。就這方面來說，這些化合物和組合物特別適用于治療皮膚相關(guān)疾病和病變，例如痤瘡、牛皮癬和光損傷、癌的和癌前期的病變、眼科疾病、心血管病、炎癥和神經(jīng)退化性疾病、與人乳頭狀瘤病毒相關(guān)的疾病、異常腦垂體功能以及調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡、治療免疫系統(tǒng)疾病、促進(jìn)傷口愈合及恢復(fù)頭發(fā)生長。
此外，本發(fā)明的化合物和藥物組合物具有許多超越已鑒定之類視黃酸化合物的優(yōu)點(diǎn)。例如，如在下文中描述的共轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中所證明的，這些化合物是RAR和RXR的極好激活劑，在一般小于100nM、較好小于50nM、更好小于20nM，且最好小于10nM的濃度下，可對(duì)一種或多種類視黃酸受體表現(xiàn)有50％最大激活作用(即EC50)。另外，本發(fā)明的RAR和RXR選擇性化合物能夠以比激活其他類視黃酸受體亞族至少大2倍，較好至少大5倍，更好至少大10倍，最好至少大100倍的效力水平優(yōu)先激活一個(gè)類視黃酸受體亞族。再者，本發(fā)明的化合物也易于合成，具有更大的穩(wěn)定性和生物可利用性，而且與已知的RAR和RXR活性化合物即全反式視黃酸和9-順式視黃酸相比，致畸形作用也較少。
以下參照非限制性實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明。
實(shí)施例1-2按照下文圖解顯示和詳細(xì)描述的合成路線1制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(9)和(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)。合成路線1
3,5-二叔丁基乙酰苯(2)于-78℃向溶于100毫升無水THF的20克(85.5毫摩爾)3,5-二叔丁基苯甲酸1溶液內(nèi)，加入94.0毫升(188.0毫摩爾)2N MeLi的乙醚溶液。將反應(yīng)混合物慢慢加溫至室溫，并再繼續(xù)攪拌30分鐘，然后倒入飽和的NH4Cl水溶液(200毫升)中。用己烷(2×100毫升)萃取有機(jī)產(chǎn)物，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，并用色譜法(SiO2,2EtOAc-己烷)純化后，得到15克(64.7毫摩爾)酮2(75.7％產(chǎn)率)TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.39(s,18H,6(CH3)),2.61(s,3H,CH3),7.64(t,J=1Hz,1H,Ar-H),7.80(d,J=1Hz,2H,Ar-H)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯腈(3)(反式)和(4)(順式)向溶于10毫升無水THF的2.43克(13.7毫摩爾)的氰甲基膦酸二乙酯溶液加入440毫克(10.96毫摩爾)NaH(溶于礦物油中的60％溶液)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后加入溶于5毫升無水THF中的1.59克(6.85毫摩爾)酮2的溶液。攪拌12小時(shí)后，用飽和的NH4Cl水溶液(50毫升)使混合物驟冷，并用乙醚(2×50毫升)萃取產(chǎn)物。洗滌乙醚萃取物(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并用制備性TLC法(SiO2,2.5％EtOAc-己烷)純化后得到1.1g(4.4毫摩爾)反式異構(gòu)體和104毫克(0.4毫摩爾)順式異構(gòu)體4(合并產(chǎn)率70％)。反式異構(gòu)體3:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.9,1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,18H,6(CH3)),2.49(s,3H,CH3),5.59(s,1H,=CH),7.25(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.50(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。順式異構(gòu)體4:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.42(s,18H,6(CH3)),2.31(s,3H,CH3),5.34(s,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.49(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯醛(5)(反式異構(gòu)體)在78℃下向溶于5毫升CH2Cl2的736毫克(2.89毫摩爾)化合物3中，加入2.31毫升(3.47毫摩爾)溶于甲苯的1.5MDIBAL溶液。于-78℃下攪拌15分鐘后，加10毫升Rochelle鹽的飽和水溶液使反應(yīng)混合物驟冷。用乙醚(2×20毫升)萃取產(chǎn)物，洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并用色譜法(SiO2,3％ETOAc-己烷)純化，得到462.3毫克(1.80毫摩爾)化合物5(產(chǎn)率62％):TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.5,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),2.59(s,3H,CH3),6.50(d,J=8.0Hz,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.51(d,J=1Hz,1H,Ar-H),10.18(d,J=8.0 Hz,1H,CHO)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯醛(6)(順式異構(gòu)體)使用制備化合物5的同樣方法從相應(yīng)的順式異構(gòu)體4制備順式異構(gòu)體6:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.55,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,1 8H,6(CH3)),2.34(s,3H,CH3),6.12(d,J=8.0Hz,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.46(t,J=1Hz,1H,Ar-H),9.45(d,J=8.0Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(7)于-78℃下向溶于8毫升無水THF的790毫克(3.0毫摩爾)三乙基-3-甲基-4-膦?；∠┧狨ト芤褐?，加入l.2毫升溶于己烷的2.5MnBuLi溶液。攪拌15分鐘后，于-78℃將此含有三乙基膦?；∠┧狨サ膬?nèi)鎓鹽的溶液加到溶于8毫升無水THF的258毫克(1.0毫摩爾)的反式異構(gòu)體5中。將反應(yīng)混合物加溫至室溫，用NH4Cl飽和水溶液(20毫升)使之驟冷，并用乙醚(2×50毫升)萃取產(chǎn)物。洗滌(先用水，再用鹽水)乙醚萃取物、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并用柱色譜法(SiO2,5％EtOAc-己烷)純化后，得到294毫克(0.8毫摩爾)E,E,E異構(gòu)體7(產(chǎn)率49％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.78,1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7.7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.28(s,3H,CH3),2.39(s,3H,cH3),4.17(m,2H,CH2CH3),5.82(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.54(d,J=15Hz,1H,=CH),7.04(m,1H,=CH),7.21(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.39(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(8)按照制備2E,4E,6E-異構(gòu)體7的同樣方法制備2E,4E,6Z異構(gòu)體8，但其中用6替代5:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.82,1H-NMR(CDCl3)δ1.27(t,J=7.7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.17(s,3H,CH3),2.22(s,3H,CH3),4.15(m,2H,CH2CH3),5.74(s,1H,=CH),6.26(dd,J=8Hz,2H,=CH),6.80(m,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.37(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(9)向溶于5毫升MeOH的180毫克(0.49毫摩爾)2E,4E,6E-乙酯7溶液中加入1毫升5N NaOH水溶液。將混合物加回流10分鐘，冷卻至室溫，用20％HCl水溶液酸化，并用乙醚(2×10毫升)萃取有機(jī)物。洗滌(先用水，再用鹽水)乙醚層、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。經(jīng)柱色譜法(SiO2,20％EtOAc-己烷)純化后，得到157毫克(0.46毫摩爾)2E,4E,6E-異構(gòu)體9(產(chǎn)率93％)TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.6，熔點(diǎn)196-198℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s,18H,6(CH3)),2.29(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.54(d,J=15Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.32(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.39(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)按照制備9的同樣方法制備2E,4E,6Z-異構(gòu)體10，但其用8代替7:TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.57,熔點(diǎn)221-222℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),2.18(s,3H,CH3),2.23(s,3H,CH3),5.77(s,1H,=CH),6.27(m,2H,=CH),6.84(m,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H Ar-H),7.37(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
實(shí)施例3按照下文圖解顯示并詳述的合成路線2制備(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸(14)。合成路線2
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁烷腈(11)向溶于5毫升EtOAc的300毫克(1.18毫摩爾)3-(3,5-二叔丁基苯基)-丁-2-烯腈3溶液中加入20毫克(催化量)10％Pd/C。將混合物在真空下放置0.5分鐘，然后通入氫氣。于氫氣氛下攪拌2小時(shí)后，通過硅藻土過濾溶液，用EtOAc(3×5毫升)洗硅藻土，并濃縮溶液后，得到300毫克(1.17毫摩爾)還原的產(chǎn)物11(產(chǎn)率99％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),1.50(d,3H,CH3),2.60(m,2H,CH2),3.15(m,1H,CH),7.05(d,J=1Hz,2H,=Ar-H),7.33(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁醛(12)于-78℃下向溶于5毫升CH2Cl2的300毫克(1.17毫摩爾)腈11中，加入0.93毫升(1.4毫摩爾)溶于甲苯的1.5MDIBAL溶液。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，用NH4Cl(10毫升)飽和水溶液使之驟冷，用乙醚(2×20毫升)萃取、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮并用色譜法(SiO2,5％EtOAc-己烷)純化后，得到188毫克(0.72毫摩爾)所需的醛12(產(chǎn)率62％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),1.35(d,3H,CH3),2.70(m,2H,CH2),3.36(m,1H,CH),7.06(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.28(t,J=1Hz,1H,Ar-H),9.70(t,1H,CHO)。
(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯(13)按照制備化合物7的相似方法從化合物12制備化合物13:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.88,1H-NMR(CDCl3)δ1.30(m,6H,CH2CH3+CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.20(s,3H,CH3),2.40(m,2H,CH2),2.85(m,1H,CH),4.14(m,2H,CH2CH3),5.62(s,1H,=CH),6.03(m,2H,=CH),7.00(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.24(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸(14)按照制備化合物9的相似方法從13制備化合物14:TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.5，熔點(diǎn)127-128℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.28(d,J=8Hz,3H,CH3),1.32(s,1 8H,6(CH3)),2.23(s,3H,CH3),2.46(m,2H,CH2),2.86(m,1H,CH),5.69(s,1H,=CH),6.10(m,2H,=CH),7.01(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.26(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
實(shí)施例4按照如下圖示和描述的合成路線3再制備(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)。合成路線3
1,3-二叔丁基-5-乙炔基苯(15)在-78℃下向溶于THF的9.86毫升(24.7毫摩爾)2.5N LDA溶液內(nèi)，加入溶于3毫升無水THF的4.75克(20.47毫摩爾)酮2(得自實(shí)施例1-2)。攪拌30分鐘后，加入2.96毫升(20.47毫摩爾)二乙基膦酰基氯，并將反應(yīng)混合物加溫至室溫保持1小時(shí)。再次將反應(yīng)混合物冷卻到-78℃，然后加入溶于THF的19.7毫升(49.2毫摩爾)2.5NLDA溶液并加溫至室溫。加入水(50毫升)，并用己烷(2×40毫升)萃取混合物。洗滌(先用水，再用鹽水)合并的有機(jī)萃取物、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并經(jīng)柱色譜法(SiO2,2％EtOAc-己烷)純化后，得到3.02克(14.1毫摩爾)化合物15(產(chǎn)率69％):TLC(己烷)Rf0.9,1H-NMR(CDCl3)δ1.31(s 18H,6(CH3)),3.02(s,1H,C≡CH),7.35(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.42(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丙炔腈(16)于-78℃下向溶于25毫升無水THF中的1.68克(7.8毫摩爾)丙炔15內(nèi)，加入3.75毫升(9.38毫摩爾)nBuLi(2.5M，溶于己烷)。攪拌15分鐘后，加入1.12克(9.41毫摩爾)PhOCN，并將反應(yīng)混合物加溫至室溫。加入25毫升6N NaOH水溶液使混合物驟冷、萃取(EtOAc,2×25毫升)、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并經(jīng)柱色譜法(SiO2,5％EtOAc-己烷)純化后，得到1.71克(7.16毫摩爾)白色固體化合物16(產(chǎn)率92％):TLC(己烷)Rf0.4,1H-NMR(CDCl3)δ1.32(,s 18H,6(CH3)),7.45(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.58(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁-2-烯腈(4)(順式異構(gòu)體)在250毫升火焰干燥的園底燒瓶內(nèi)裝入3.27g(17.17毫摩爾)無水碘化銅和25毫升無水THF。將混合物冷卻至0℃，然后緩慢加入24.5毫升(34.3毫摩爾)MeLi(1.4M乙醚溶液)。在溶液逐漸澄清并變得無色后，將其冷卻至-78℃，并滴加溶于10毫升無水THF的1.71g(7.16毫摩爾)化合物16的溶液。將混合物于-78℃下攪拌45分鐘，用40毫升MeOH與NH4Cl飽和水溶液的1∶1混合物使之驟冷。用EtOAc(2×40毫升)萃取產(chǎn)物、洗滌(先用2％NaOH，然后用飽和NH4Cl，再用水，最后用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并通過短硅膠墊純化得到1.64g(6.80毫摩爾)順式異構(gòu)體4(產(chǎn)率95％):TLC(5％EtOAC-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.42(s,18H,6(CH3)),2.31(s,3H,CH3),5.34(s,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.49(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
按照實(shí)施例1-2中所述方法繼續(xù)合成化合物6、8及終產(chǎn)物10。
實(shí)施例5-6按照如下圖示并描述的合成路線4制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(27)和(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(28)。合成路線4
3.5-二叔丁基芐基醇(17)0℃下向溶于20毫升無水THF的10.0g(42.7毫摩爾)酸1中，加入42.7毫升(42.7毫摩爾)LAH(1.0M，溶于THF)。將反應(yīng)混合物升溫至50℃，并攪拌15分鐘。冷卻至室溫后，加入20％HCl水溶液直到溶液轉(zhuǎn)為澄清。用EtOAc(2×50毫升)萃取溶液，并洗滌(先用水，再用鹽水)合并的EtOAc提取物、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮后，得到8.8克(40.0毫摩爾)化合物17(產(chǎn)率94％)。將產(chǎn)物直接用于下步驟。TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.4,1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,18H,6(CH3)),4.68(s,2H,CH2),7.22(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.38(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3,5-二叔丁基苯甲醛(18)向溶于20毫升CH2Cl2的8.8g(40.0毫摩爾)醇17中，加入50.0克(575毫摩爾)MnO2。將反應(yīng)混合物強(qiáng)烈攪拌8小時(shí)，通過由頂層硅藻土和底層氧化硅組成的過濾墊進(jìn)行過濾。用50毫升等分的CH2Cl2反復(fù)洗濾墊直到不再有產(chǎn)物洗脫為止。經(jīng)1HNMR檢測其為純產(chǎn)物并直接用于下一個(gè)合成步驟(產(chǎn)率95％):TLC(20％EtOAC-80％己烷)Rf0.6,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),7.72(m,3H,Ar-H),10.01(s,’1H,CHO)。
1-(3,5-二叔丁基苯基)丁-1-醇(19):0℃下向溶于10毫升無水乙醚的2.0克(9.17毫摩爾)醛18溶液內(nèi)，加入5.5毫升(11.0毫摩爾)氯化丙基鎂(2.0M，溶于乙醚中)。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，并用水(50毫升)使之驟冷、用乙醚(2×50毫升)萃取、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、并濃縮后，得到2.37g(9.05毫摩爾)可直接用于下一個(gè)步驟的醇19(經(jīng)1H-NMR檢測為純樣)(產(chǎn)率98％):TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.96(t,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.66(m,2H,CH2),1.84(m,1H,CH),4.66(m,1H,CHOH),7.18(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.34(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
1-(3,5-二叔基基苯基)丁-1-酮(20)向溶于18毫升CH2Cl2的2.37g(9.05毫摩爾)醇19內(nèi)，加入7.86g(90.45毫摩爾)MnO2。將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后過濾(通過硅膠上有硅藻土的墊層)，并用20毫升等分的CH2Cl2反復(fù)洗濾墊。濃縮后，經(jīng)色譜法(SiO2,3％EtAOc-己烷)純化酮20，得到941毫克(3.62毫摩爾)的產(chǎn)物20(產(chǎn)率40％):TLC(10％EtAOc-90％己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ1.01(t,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.78(m,2H,CH2CH3),2.96(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),7.63(t,J=1Hz,1H,Ar-H),7.83(d,J=1Hz,2H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯腈(21)(反式)和(22)(順式)向溶于5毫升無水THF的661毫克(3.73毫摩爾)二乙基氰甲基膦酸酯內(nèi)，加入127毫克(3.17毫摩爾)氫化鈉(60％分散在礦物油中)。將混合物攪拌5分鐘，然后加入484毫克(1.87毫摩爾)溶于2毫升無水THF的酮20。將反應(yīng)混合物加熱回流30分鐘，冷卻至室溫、用NH4Cl(15毫升)飽和水溶液使之驟冷、用乙醚(2×15毫升)萃取、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。用色譜法(制備性TLC,SiO2,10％EtAOc-己烷)純化后，得到329毫克(1.16毫摩爾)反式異構(gòu)體21和70.5毫克(0.25毫摩爾)順式異構(gòu)體22(合并的產(chǎn)率為75％)。反式異構(gòu)體21:TLC(10％EtAOc-90％己烷)Rf0.8；1H-NMR(CDCl3)δ0.97(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,18H,6(CH3)),1.54(m,2H,CH2CH2CH3),2.88(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.50(s,1H,=CH),7.23(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.50(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。順式異構(gòu)體22:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.9；1H-NMR(CDCl3)δ,0.93(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.48(m,2H,CH2CH2CH3),2.57(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.32(s,1H,=CH),7.28(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.45(t,J=2Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯醛(23)(反式)于-78℃向溶于4毫升CH2Cl2的166毫克(0.59毫摩爾)腈21中，加入0.59毫升(0.88毫摩爾)DIBAL(1.5M，溶于甲苯)。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，并用10毫升Rochelle鹽的飽和水溶液使之驟冷。用乙醚(2×20毫升)萃取產(chǎn)物、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并用色譜法(制備性TLC,SiO2,3％EtOAc-己烷)純化后，得到141毫克(0.49毫摩爾)油狀化合物23(產(chǎn)率83％):TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ0.97(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.57(m,2H,CH2CH2CH3),3.03(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),6.32(d,J=8Hz,1H,=CH),7.33(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.48(t,J=1Hz,1H,Ar-H),10.15(d,J=8Hz,1H,CHO)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯醛(24)(順式)按照制備化合物23的同樣方法，但以順式異構(gòu)體22代替21制備化合物24:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.8；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,9H,CH3),1.35(s,9H,CH3),1.51(m,2H,CH2CH2CH3),2.58(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),6.10(d,J=8Hz,1H,=CH),7.04(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.43(t,J=2Hz,1H,Ar-H),9.42(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯(25)于-78℃向溶于5毫升無水THF的391毫克(1.48毫摩爾)三乙基-3-甲基-4-膦酰基丁烯酸酯內(nèi)，加入0.59毫升(1.48毫摩爾)溶于己烷的2.5MnBuLi溶液和2.5毫升DMPU。攪拌15分鐘后，于-78℃將含有三乙基膦?；∠┧狨サ膬?nèi)鎓鹽的溶液加到溶于5毫升無水THF的141毫克(0.49毫摩爾)化合物23中。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，用飽和的NH4Cl水溶液(20毫升)使之驟冷，并用乙醚(2×25毫升)萃取產(chǎn)物，洗滌乙醚萃取物(先用水，再用鹽水)，過濾，濃縮并用柱色譜法(SiO2,5％EtOAc-己烷)純化，得到171毫克(0.43毫摩爾)全反式異構(gòu)體25(產(chǎn)率88％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.29(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.52(m,2H,CH2CH2CH3),2.39(s,3H,CH3),2.70(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),4.18(m,2H,CH2CH3),5.80(s,1H,=CH),6.42(d,J=15Hz,2H,=CH),6.47(d,J=15Hz,1H,=CH),7.03(m,1H,=CH),7.27(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.36(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯(26)按照制備化合物25的同樣方法，用順式異構(gòu)體24代替23制備化合物26TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.29(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,1 8H6(CH3)),1.44(m,2H,CH2CH2CH3),2.15(s,3H,CH3),2.48(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),4.16(m,2H,-COCH2CH3),5.73(s,1H,=CH),6.22(d,J=11Hz,1H,=CH),6.26(d,J=11Hz,1H,=CH),6.74(dd,J=11Hz,1H,=CH),7.26(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.34(t,J=2Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(27)向溶于5毫升MeOH的171毫克(0.44毫摩爾)化合物25的溶液內(nèi)，加入1毫升5NNaOH水溶液。將混合物加熱回流10分鐘，冷卻至室溫，用20％HCl水溶液酸化，并用乙醚(2×10毫升)萃取有機(jī)物。先用水再用鹽水洗滌乙醚層、干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。用色譜法(制備性TLC,SiO2,20％EtOAc-己烷)純化后，得到28毫克(0.08毫摩爾)全反式異構(gòu)體27(產(chǎn)率80％):TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.8；熔點(diǎn)143-144℃；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.52(m,2H,CH2CH2CH3),2.40(s,3H,CH3),2.71(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(t,J=15Hz,1H,=CH),6.47(d,J=15Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.26(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.37(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(28)按照制備化合物27的同樣方法，以順式異構(gòu)體26代替25制備化合物28TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.8；熔點(diǎn)166-169℃；1H-NMR(CDCl3)δ0.89(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.31(s,9H,CH3),1.32(s,9H,CH3)1.42(m,2H,CH2CH2CH3),2.15(s,3H,CH3),2.49(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.76(s,1H,=CH),6.23(t,J=11Hz,1H,=CH),6.28(d,J=1 5Hz,1H,=CH),6.78(dd,J=15Hz,1H,=CH),7.04(s,2H,Ar-H),7.35(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例7-8按照下文圖示和描述的合成路線5制備(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,,4,6-三烯酸(29)和(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(40)。合成路線5
3,5-二叔丁基-2-羥基乙酰苯(30)向溶于60毫升二氯乙烷的10g(48.5毫摩爾)2,5-二叔丁基苯酚29和4.56g(58.16毫摩爾)乙酰氯中，加入11.9毫升(97.0毫摩爾)BF3·OEt2，并將反應(yīng)混合物加熱回流10分鐘。冷卻反應(yīng)混合物，并倒入1∶1冰-20％HCl水溶液內(nèi)，攪拌并萃取(2×100毫升，EtOAc)之。洗滌(先用水，再用鹽水)有機(jī)萃取物、干燥(MgSO4)、濃縮并純化(SiO2色譜法，5％EtOAc-己烷)，得到7.0g(28.22毫摩爾)油狀化合物30(58％產(chǎn)率):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.1；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,CH3),1.42(s,9H3(CH3)),2.68(s,3H,CH3),7.55(m,2H,AR-H)。
6,8-二叔丁基-2-羥基苯并二氫吡喃-4-酮(31)在火焰干燥的500毫升園底燒瓶內(nèi)，向其中的1.8g(78.26毫摩爾)鈉金屬中逐滴加入溶于120毫升甲酸乙酯的7.5克(30.24毫摩爾)苯酚30。加完之后將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后冷卻至室溫，并倒入1NHCl水溶液中。當(dāng)混合物的變得透明時(shí)，萃取有機(jī)物(2×150毫升EtOAc)、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)并濃縮，得到7.4g(26.81毫摩爾)油狀化合物31(產(chǎn)率89％)。該產(chǎn)物直接用于下一個(gè)步驟TLC(20％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3(CH3)),1.42(s,9H,3CH3),2.87(dd,J=16.0,5.5Hz,1H,CH2),3.01(dd,J=16.0,3.1Hz,1H,CH2),5.87(dd,J=5.5,3.3Hz,1H,CHOH),7.58(d,J=2.5Hz,1H,Ar-H),7.79(d,J=2.5Hz,1H,Ar-H)。
4H-6，8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮(未示出)向溶于20毫升MeOH的7.4g(26.81毫摩爾)化合物30中，加入8毫升20％HCl水溶液，并將混合物加熱回流20分鐘。冷卻至室溫后加入水(30毫升)，并萃取(2×30毫升EtOAc)產(chǎn)物、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)并濃縮，得到大約6.0g(25.00毫摩爾)4H-6,8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮油狀物，然后將其放置幾小時(shí)，固化(產(chǎn)率約93％)。該產(chǎn)物被直接用于步驟TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s,9H,3CH3),1.49(s,9H,3CH3),6.35(d,J=5.6Hz,1H,CH=CH),7.70(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.91(d,J=5.6 Hz,1H,CH=CH),8.10(d,J=2.4Hz,1H,AR-H)。
6,8-二叔丁基-苯并二氫吡喃-4-酮(32)向溶于8毫升EtOAc的1.0g(3.87毫摩爾)4H-6,8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮內(nèi)，加入200毫克10％Pd/C。使混合物脫氣，然后通入氫氣并于氫氣氛中室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾(硅藻土)后，濃縮并純化(SiO2色譜法，5％EtOAc-己烷)產(chǎn)物，得到857毫克(3.29毫摩爾)白色固體化合物32(產(chǎn)物85％):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,CH3),1.42(s,9H,CH3),2.78(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.52(t,J=6.0Hz,2H,CH2),7.53(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.81(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)。
(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)乙腈(33)(反式)和(34)(順式)向溶于6毫升無水THF的891毫克(5.03毫摩爾)氰甲基膦酸酯中，加入188毫克(4.69毫摩爾)NaH(60％，在油中)，并將混合物攪拌20分鐘。向此溶液內(nèi)加入溶于2毫升無水THF的436毫克(1.80毫摩爾)化合物32，并將反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)。冷卻至室溫后，用飽和NH4Cl溶液(10毫升)使反應(yīng)驟冷，萃取(2×10毫升EtAOc)、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、濃縮并純化(SiO2色譜法，5％EtOAc-己烷)，得到358毫克(1.32毫摩爾)反式異構(gòu)體33和95毫克(0.35毫摩爾)順式異構(gòu)體34(合并產(chǎn)率93％)。反式異構(gòu)體33:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3CH3),1.36(s,9H,3CH3),3.00(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.27(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.73(s,1H,=CH-CN),7.35(d,J=2.4 Hz,1H,Ar-H),7.41(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)；順式異構(gòu)體34:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,9H,3CH3),1.39(s,9H,3CH3),2.76(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.29(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.11(s,1H,=CH-CN),7.42(d,J=2Hz,1H,Ar-H),8.28(d,J=2Hz,1H,AR-H)。
(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)乙醛(35)(反式)于-78℃下，向溶于5毫升己烷的100毫克(0.36毫摩爾)腈33溶液內(nèi)，加入0.35毫升(0.53毫摩爾)溶于甲苯的1.5M DIBAL溶液。將混合物攪拌5分鐘，然后加入10毫升Rochelle鹽飽和水溶液，并使之升溫至室溫。萃取(2×10毫升EtOAc)該溶液，洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮，得到86毫克(0.30毫摩爾)相對(duì)純的醛35(產(chǎn)率83％):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,3CH3),1.41(s,9H,3CH3),3.27(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.30(t,J=6.0Hz,2H,CH2),6.57(d,J=8Hz,1H,=CH-CHO),7.41(d,J=2.4 Hz,1H,Ar-H),7.51(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),10.14(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)乙醛(36)(順式)按照制備化合物35的同樣方法，但用順式異構(gòu)體34代替33制備化合物36:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.80(t,J=6.5 Hz,2H,CH2),4.42(t,J=6.5Hz,2H,CH2),5.95(d,J=8Hz,1H,=CH),7.12(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.44(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),10.00(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯(37)于-78℃下，向溶于3毫升無水THF的238毫克(0.902毫摩爾)三乙基-3-甲基-4-膦?；∠┧狨ブ?，加入0.36毫升溶于己烷的2.5MnBuLi溶液，及3毫升DMPU。攪拌15分鐘后，在-78℃下將此含有三乙基膦酰基丁烯酸酯內(nèi)鎓鹽的溶液移入溶于4毫升1∶1 THF-DMPU的86毫克(0.30毫摩爾)化合物35中。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，用飽和NH4Cl水溶液(20毫升)使反應(yīng)驟冷，并用EtOAc(2×20毫升)萃取產(chǎn)物。洗滌(先用水，再用鹽水)萃取物、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，并經(jīng)柱色譜法(SiO2,5％EtOAc-己烷)純化，得到85.3毫克(0.22毫摩爾)2E,4E,6E-異構(gòu)體37(產(chǎn)率73％)和5.6毫克(0.014毫摩爾)2Z,4E,6E異構(gòu)體(產(chǎn)率5％)?；衔?7:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,9H,3CH3),1.37(s,9H,3CH3),2.37(s,3H,CH3),2.88(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.17(q,2H,CH2),4.23(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.81(s,1H=CH),6.43(d,J=15 Hz,1H,=CH),6.73(d,J=15Hz,1H,=CH),6.96(m,1H,=CH),7.25(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.50(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯(38)按照制備化合物37的同樣方法，但以順式異構(gòu)體36代替化合物35制備化合物38，化合物36:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.30(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.32(s,3H,CH3),2.66(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.16(m,2H,CH2),4.35(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.80(s,1H=CH),6.08(d,J=11Hz,1H,=CH),6.36(d,J=15Hz,1H=CH),7.27(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.29(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.28(dd,J=15,11Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(39)向溶于6毫升1∶1THF-MeOH的85.3毫克(0.22毫摩爾)酯37中，加入3毫升5NNaOH水溶液。將所得溶液加熱回流10分鐘，冷卻室溫，酸化(20％HCl水溶液)，并萃取(2×6毫升EtOAc)。合并萃取物、洗滌(先用水，再用鹽水)、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。以制備性TLC法(5％MeOH-CHCl3)，然后結(jié)晶(EtOAc-己烷，1∶4)純化，得到74.5毫克(0.20毫摩爾)酸39的淡黃色固體物(產(chǎn)率94％):TLC(5％EtAOc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)237-239℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.37(s,3H,CH3),2.89(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.23(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.86(s,1H,=CH),6.43(d,J=15Hz,1H,=CH),6.74(d,J=11Hz,1H,=CH),6.97(dd,11,15Hz,1H,=CH),7.25(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H),7.50(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(40)按照制備化合物39的同樣方法，但以順式異構(gòu)體37代替化合物36制備化合物40，化合物37:TLC(5％EtAOc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)233-235℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,3CH3),1.37(s,9H,3CH3),2.33(s,3H,CH3),2.68(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.35(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.83(s,1H,=CH),6.10(d,J=11Hz,1H,=CH),6.39(d,J=15Hz,1H,=CH),7.26(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.30(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.35(dd,J=11,15Hz,1H,=CH)。
實(shí)施例9按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(41)按照制備化合物9的方法，但使用3,5-二-三氟甲基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯合成該化合物TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)225-227℃；1H-NMR(CDCl3)δ2.30(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),5.90(s,1H,=CH),6.52(d,J=15Hz,1H,=CH),6.66(d,J=12Hz,1H,=CH),7.03(m,1H,=CH),7.78(s,1H,Ar-H),7.87(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例10按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(42)
按制備化合物9的類似方法合成該化合物，但其中使用3,5-二異丙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)157-160℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.28(d,J=8Hz,12H,CH3),2.27(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),2.90(p,J=8Hz,2H,CH),5.83(s,1H,=CH),6.42(d,J=15Hz,1H,=CH),6.60(d,J=15Hz,1H,=CH),7.02(s,1H,Ar-H),7.08(m,1H,=CH),7.45(s,2H,Ar-H)。
實(shí)施例11按照合成路線1制備(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(43)按照合成化合物10的相似方法合成該化合物，但在第一個(gè)步驟中使用3,5-二異丙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)177-179℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.25(d,J=7Hz,12H,CH3),2.18(s,3H,CH3),2.21(s,3H,CH3),2.90(p,J=7Hz,2H,CH),5.77(s,1H,=CH),6.25(d,J=11Hz,1H,=CH),6.27(d,J=15Hz,1H,=CH),6.85(dd,J=11,15Hz,1H,Ar-H),6.94(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.02(bs,H,Ar-H)。
實(shí)施例12按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(44)以合成化合物9的相似方法合成該化合物，但其中使用4-叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯。TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)198-200℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,9H,3CH3),2.26(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.60(d,J=12Hz,1H,=CH),7.07(m,1H,=CH),7.38(s,1H,Ar-H),7.43(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例13按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(45)以合成化合物9的相似方法合成該化合物，但其中使用3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基-乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)244-246℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(,s,9H,3CH3),1.42(s,9H,3CH3),2.27(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),3.67(s,3H,OCH3),5.83(s,1H,=CH),6.34(d,J=15Hz,1H,=CH),6.35(d,J=15Hz,1H,=CH),7.00(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.06(m,1H,=CH),7.27(d,J=2Hz,1H,Ar-H)。
實(shí)施例14按照合成路線1制備(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(46)按合成化合物10的類似方法合成該化合物，但其中使用3,5-二-三氟甲基-乙酰苯代替3,5-二叔丁基-乙酰苯。TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)225-227℃；1H-NMR(CDCl3)δ2.15(s,3H,CH3),2.24(s,3H,CH3),5.82(s,1H,CH=,6.36(d,J=15Hz,1H,CH=),6.39(d,J=9.7Hz,1H,CH=),6.53(dd,J=15Hz,9.7Hz,1H,CH=),7.70(s,2H,Ar-CH),7.83(s,1H,Ar-CH)。
實(shí)施例15按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(47)以合成化合物9的類似方法合成該化合物，但其中用3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)213-216℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s,18H,6(CH3)),2.25(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.70(s,3H,OCH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.52(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)。
實(shí)施例16按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(48)按照合成化合物9的類似方法合成該化合物，但其中使用3,4-二乙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.3；熔點(diǎn)153-155℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(dd,J=14.1Hz,7.5Hz 6H,2CH3),2.25(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),2.66(m,4H,2CH2),5.83(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.59(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.07(m,1H,=CH),7.14(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.27(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.28(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例17按照合成路線1制備(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(49)以制備化合物10的同樣方法制備化合物49，但其中以3,4-二乙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.32；1H-NMR(CDCl3)δ1.23(dd,J=14.1Hz,7.5Hz,6H,2CH3),2.18(s,6H,2CH3),2.67(m,4H,2CH2),5.76(s,1H,=CH),6.23(d,J=11.8Hz,1H,=CH),6.28(d,J=15Hz,1H,=CH),6.83(m,1H,=CH),7.04(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.06(s,1H,Ar-CH),7.17(d,J=7.8Hz,1H,Ar-CH)。
實(shí)施例18按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(50)以合成化合物9的相似方法合成該化合物，但其中使用3,5-二叔丁基-4-乙氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)236-239℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.41(t,J=7.0Hz,3H,CH3),1.44(s,18H,6(CH3)),2.66(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.77(q,J=7Hz,2H,OCH2CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.51(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)。
實(shí)施例19按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(51)以合成化合物9的類似方法合成該化合物，但其中用3,4-二叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％ EtOAc-80％己烷)Rf0.3；熔點(diǎn)195-199℃；1H-NMR(CDCl3)d 1.56(s,9H,3CH3),1.58(s,9H,3CH3),2.26(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.59(d,J=11Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.23(dd,J=8.5,2.3Hz,1H,Ar-H),7.57(d,J=8.5Hz,1H,Ar-H),7.72(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H)。
實(shí)施例20按照合成路線4制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-環(huán)己基-7-(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸(52)以制備化合物27的類似方法合成該化合物，但其中以3,4-二叔丁基苯基環(huán)己基酮代替3,5-二叔丁基丁-1-酮TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf 0.3；1H-NMR(CDCl3)1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s,9H),1.9-1.1(m,m,8H),2.40(s,3H),2.85(m,1H),5.81(s,1H),6.08(d,1H,J=11.3Hz),6.30(d,1H,J=15.8Hz),7.02(s,2H,Ar-H),7.14(dd,1H,J=15.2,15.2Hz),7.33(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例21按照合成路線1制備(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸(53)
以合成化合物9的類似方法合成該化合物，不同的是以3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔點(diǎn)213-216℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s,18H,6(CH3)),2.25(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.70(s,3H,OCH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.52(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)實(shí)施例22按照合成路線1制備(2E,4E,6z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸(54)以制備化合物10的類似方法合成該化合物，所不同的是用3,4-二乙基-6-甲基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.3；1H-NMR(CDCl3)δ1.22(t,J=7.5Hz,3H,CH3),1.24(t,J=7.5Hz,3H,CH3),2.08(s,3H,CH3),2.09(s,3H,CH3),2.17(s,3H,CH3),2.60(m,4H,2(CH2),5.73(s,1H,=CH),6.25(m,3H,3(=CH)),6.81(s,1H,Ar-H),7.01(s,1H,Ar-H)。
實(shí)施例23按照如下圖示和描述的合成路線6，制備(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(69)合成路線6
5-叔丁基-1,3-苯二甲醇(56)于0C下冷卻溶于THF(200毫升)的20.0g(89.9毫摩爾)5-叔丁基-1,3-苯二甲酸(15)的溶液，并于強(qiáng)烈攪拌下通過加液漏斗經(jīng)20分鐘緩慢加入溶于THF(190毫升)的甲硼烷-THF復(fù)合物的溶液。使混合物升溫至室溫，并繼續(xù)攪拌90分鐘。緩慢加入水-THF(1∶1,200毫升)的混合物，然后再加入200毫升水。用乙酸乙酯萃取混合物。用EtOAc(2×100毫升)萃取水層，并用水(2×100毫升)、鹽水(2×100毫升)洗滌合并的有機(jī)層，并在毫克SO4上干燥之。蒸發(fā)除去溶劑得到純的二醇(產(chǎn)率98％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,2H),7.19(s,1H)；4.69(s,4H)；1.75(br.s；2H)；1.33(s,9H)。
5-叔丁基-1,3-對(duì)苯二醛將5-叔丁基-1,3-苯二甲醇(56)(20.0g；103毫摩爾)加到強(qiáng)烈攪拌的氯鉻酸吡啶鎓(66.0g；306毫摩爾)和硅藻土(130g)在二氯甲烷(DCM)(500毫摩爾)中制成的混合物內(nèi)。室溫下將混合物攪拌3小時(shí)直到反應(yīng)完成(TLC)。通過硅膠的短濾墊(2″× 4″)過濾反應(yīng)混合物，并用DCM(1L)洗脫。蒸發(fā)除去溶劑得到18.7g所需的二醛(產(chǎn)率94％)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):10.11(s,2H)；8.18(s,3H)；1.41(s,9H)。
(R,S)-5-叔丁基-1,3-苯-[2,2’-二乙醇](57)將5-叔丁基-1,3-對(duì)苯二醛(18.7g,96.4毫摩爾)在THF(400毫升)中的溶液冷卻到-78℃，緩慢加入溴化甲基鎂(80.0毫升3M溶液)溶液，并使反應(yīng)混合物升溫至室溫。攪拌60分鐘后，用飽和NH4Cl溶液(100毫升)使所得溶液驟泠，再加入HCl(1N,50毫升)，并用EtOAc萃取。用水(2×100毫升)、鹽水(2×100毫升)洗滌有機(jī)層，并在MgSO4上干燥之。蒸發(fā)除去溶液。將粗殘留物溶解在熱EtOAc(30毫升)中，并加入戊烷(200毫升)。在-4℃冰箱中將澄清的溶液冷卻3小時(shí)。過濾所得到的白色固體物，并用冷戊烷淋洗。在真空中干燥該固體，得到15.3g(70％產(chǎn)率)所需的化合物1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,2H),7.2(s,1H)；4.92(m,2H)；1.82(d,2H,J=2.5Hz)；1.52(d,6H,J=6.5Hz)；1.35(s,9H)。
(R,S)-5-叔丁基-1,3-苯基-[2-乙醇，2’-乙烷-叔丁基二甲基甲硅烷基醚](58)用己烷(2×10毫升)洗滌氫化鈉(2.75g,60％礦物油混合物)，將其懸浮于THF(200毫升)中，并在強(qiáng)烈攪拌下加入5-叔丁基-1,3-苯-2,2’-二乙醇(12.69g；57毫摩爾)。室溫下將混合物攪拌45分鐘得到白色漿液，然后一次加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(8.61g,57毫摩爾)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，并加入水(25毫升)。用EtOAc(350毫升)萃取混合物。用飽和NH4Cl溶液(100毫升)、水(2×100毫升)、鹽水(2×100毫升)洗滌有機(jī)層，并在MgSO4上干燥之。蒸發(fā)掉溶劑，并在硅膠上經(jīng)閃蒸色譜法純化殘留物，得到所需的油狀單甲硅烷基化的產(chǎn)物(14.45g；75％產(chǎn)率)(回收到2.14g起始物)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,1H),7.28(s,1H)；7.12(2s,1H)；4.92(m,2H)；1.85(s,1H)；1.5(d,3H,J=6.5Hz)；1.43(d,3 H,J=6.5Hz)；1.35(s,9H)；0.9(s,9H)；0.05(s,6H)。
(R,S)-3-(乙基-2-叔丁基二甲基甲硅烷基醚)-5-叔丁基乙酰苯(59)將氯鉻酸吡啶鎓(15.0g；69毫摩爾)和硅藻土(30g)混入DCM(500毫升)中，同時(shí)于強(qiáng)烈攪拌下加入5-叔丁基-1,3-苯-(2-乙醇，2’-乙烷-叔丁基二甲基甲硅烷基醚)(14.45g；44毫摩爾)在DCM(100毫摩爾)制成的溶液。室溫下反應(yīng)3小時(shí)后，通過硅膠短濾熱(2″×4″)過濾混合物，并用DCM(500L)洗脫。蒸發(fā)除去溶劑，得到所需的酮(14.4g,99％產(chǎn)率)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm)；7.89(s,1H),7.73(s,1H)；7.65(s,1H)；4.94(q,1H,J=6.3Hz)；2.63(s,3H)；1.45(d,3H,J=6.3Hz)；1.37(s,9H)；0.96(s,9H)；0.12(s,3H)；-0.05(s,3H)。
5-叔丁基-1-(2-乙醇)-3-(2-[2-甲基丙-1-醛)-苯(60)在火焰干燥的三頸園底燒瓶內(nèi)裝入THF(90毫升)，并冷卻到-78℃。緩慢加入n-BuLi(12.0毫升2M溶液；24毫摩爾)并將混合物攪拌10分鐘。加入溶于THF(15毫升)的N-亞芐基二乙基氨甲基膦酸酯(6.14g；24毫摩爾)，并于-78℃將所得混合物攪拌60分鐘。向上述溶液內(nèi)加入溶于THF(15毫升)的N-亞芐基二乙基氨甲基膦酸酯(N-benzylidene diethyl aminomethyl phosphonate)(6.14g；24毫摩爾)的溶液，將所得混合物在-78℃下攪拌60分鐘。將5-叔丁基-3-(乙烷-2-叔丁基二甲基甲硅烷基乙醚)乙酰苯(7.0g,20.9毫摩爾)在THF(15毫升)中的溶液加入上述溶液中，使此混合物升溫到室溫，攪拌30分鐘，然后回流2小時(shí)。使混合物冷卻到室溫并蒸發(fā)掉溶劑。加入二乙醚(400毫升)，并用氯化鈉(200毫升)洗滌此溶液。用乙醚(200毫升)萃取水層，用鹽水(200毫升)洗滌合并的有機(jī)層，并在MgSO4上干燥。蒸發(fā)除去溶劑，得到黃色殘留物，于高真空(1mmHg)下將其干燥1小時(shí)。向該殘留物中加入THF(90毫升)，并冷卻到-78℃。緩慢加入n-BuLi(12.0毫升2M溶液，24毫摩爾)，并將帶深顏色的溶液攪拌60分鐘。加入甲基碘(6.52毫升)，使所得混合物升溫至室溫并攪拌4小時(shí)。用HCl(3N,100毫升)使反應(yīng)混合物驟冷，并于室溫下將兩相溶液攪拌16小時(shí)。加入EtOAc(300毫升)，分離出有機(jī)層，用水(2×100毫升)、鹽水(2×100毫升)洗滌，然后在MgSO4上干燥之。蒸發(fā)除去溶劑后，得到殘留物，其經(jīng)硅膠色譜法純化，即得到3.3克所得需的醛(產(chǎn)率65％)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):9.5(s,1H),7.33(s,1H)；7.17(s,1H)；7.11(s,1H)；4.91(m,1H)；1.80(d,1H,J=3.4Hz)；1.5(d,3 H,J-6.3Hz)；1.47(s,3H)；1.32(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-甲基丙-1-醇)乙酰苯(61)將5-叔丁基-1-(2-乙醇)-3-(2-[2-甲基丙-1-醛])苯(1.77克，7.53毫摩爾)在MeOH(50毫升)中制成的溶液冷卻到0℃，并分批加入NaBH4(300毫克，7.93毫摩爾)。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，并攪拌30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并使殘留物重新溶解在EtOAc(50毫升)中，然后用HCl(10％,3×10毫升)、水(3×20毫升)和鹽水(3×20毫升)洗滌。MgSO4上干燥有機(jī)層，并蒸發(fā)至干，得到所需的二醇(1.76g；99％產(chǎn)率)、將該二醇(1.65g,6.78毫摩爾)溶解在DCM(20毫升)中，并一次加入MnO2(18.7克，0.17毫摩爾)。將反應(yīng)混合物強(qiáng)烈攪拌4小時(shí)，然后在硅藻土短濾墊上過濾。蒸發(fā)除去溶劑得到1.63克所需的酮(產(chǎn)率97％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.8(s,1H)；7.63(s,1H)；3.64(d；2H,J=4.5Hz)；2.6(s,3H)；1.38(s,6H)；1.35(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])乙酰苯(5-tert-butyl-3-(2-[2-methylpropan-l-tert-butyl diphenyl silylether]acetophenone)(62)向5-叔丁基-3-(2-甲基丙-1-醇)乙酰苯(1.63克；6.96毫摩爾)在DCM(30毫升)中形成的溶液內(nèi)，加入咪唑(500毫克，7.35毫摩爾)、一滴DMF和叔丁基二苯甲硅烷基氯(2.01g；7.33毫摩爾)。將混合物室溫?cái)嚢柽^夜，并用過量飽和NH4Cl使之驟冷。加入DCM(50，毫升)，并用水(3×20毫升)和鹽水(3×20毫升)洗滌有機(jī)層。在MgSO4上干燥有機(jī)層，并蒸發(fā)至干，得到殘留物，經(jīng)硅膠色譜法純化該殘留物，得到所需的醚(2.77克，83％產(chǎn)率):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.76(s,1H)；7.63(s,1H)；7.48-7.25(mm,10H)；3.62(s,2H)；2.56(s,3H)；1.38(s,6H)；1.33(s,9H)；0.94(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(2E)-3-(2-丁烯腈)-苯(63)于0℃下向溶于THF(30毫升)的氰甲基膦酸二乙酯(1.7g,9.55毫摩爾)溶液內(nèi)，加入n-BuLi(4.64毫升，溶于己烷的2.0M溶液)。攪拌10分鐘后，加入5-叔丁基-3-(2-[2,2’-二甲基丙-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])乙酰苯在THF(10毫升)中形成的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，并用飽和NH4Cl溶液使之驟冷。加入EtOAc(50毫升)，并用水(3×20毫升)和鹽水(3×20毫升)洗滌有機(jī)層。在MgSO4上干燥有機(jī)層，并蒸發(fā)至干得到殘留物，其經(jīng)硅膠色譜法純化后，得到所需腈，其為反式順式混合物(經(jīng)1HNMR分析約為4∶1)。經(jīng)硅膠色譜法純化后得到所需的反式異構(gòu)體(1.70g,63％產(chǎn)率)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.48-7.22(mm,13H,ArH)；5.5(s,1H)；3.59(s,2H),2.43(s,3H)；1.35(s,6H)；1.27(s,9H)；0.94(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚)-1-(2E)-(3-[2-丁烯醛)苯(64)將5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(3-[3-甲基-2-丙烯腈)苯(1.7g,3.42毫摩爾)在無水DCM(20毫升)中形成的溶液冷卻至-78℃，并逐滴加入Dibal(3.5毫升在甲苯中形成的1M溶液)。于-78℃下將反應(yīng)混合物攪拌60分鐘，用過量Rochelle鹽使之驟冷，然后將其升溫至室溫。加入EtOAc(50毫升)，并用水(3×20毫升)和鹽水(3×20毫升)洗滌此混合物。在MgSO4上干燥有機(jī)層，再蒸發(fā)至干后得到殘留物，經(jīng)硅膠色譜法純化后，得到1.25g所需的醛(74％產(chǎn)率):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):10.17(d,1H；J=8Hz),7.48-7.22(mm,13H,ArH)；6.36(d,1H,J=8Hz)；3.60(s,2H)；2.54(s,3H)；1.37(s,6H)；1.32(s,9H)；0.94(s,9H)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醇)]-1′-苯)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(66)將3-乙氧基羰基-2-甲基丙-2-烯基膦酸二乙酯(1.20g,4.52毫摩爾)在無水THF(200毫升)中形成的溶液泠卻至0℃，并加入無水DMPU(3.5毫升)和n-BuLi在己烷中制成的溶液(2.15毫升2.0M溶液，4.50毫摩爾)。在此溫度下將混合物攪拌20分鐘，然后冷卻到-78℃。緩慢加入5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(3-[3-甲基-2-丙烯醛)苯(1.25g,2.52毫摩爾)在THF(10.0毫升)中形成的溶液，并于-78℃下將反應(yīng)混合物繼續(xù)攪拌60分鐘。攪拌下使反應(yīng)混合物升溫至23℃，保持1小時(shí)。加入氯化銨的飽和溶液(5毫升)，并使用EtOAc(3×10毫升)萃取混合物。用水(2×25毫升)和鹽水(50毫升)洗滌有機(jī)層，在MgSO4上干燥并濃縮之。在短硅膠色譜柱上純化殘留物，得到1.35g(86％產(chǎn)率)所需的酯(65)。將上述甲硅烷基醚(1.05g,1.68毫摩爾)溶解于THF(20毫升)中，并加入氟化四丁基銨(17毫升溶于THF的1M溶液)。室溫下將反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)，加入EtOAc(50毫升)，然后用水(2×20毫升)和鹽水(20毫升)洗滌。分離出有機(jī)層，在MgSO4上干燥，并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠色譜法純化殘留物，得到479毫克(80％產(chǎn)率)所需的醇1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.9(d,1H；J=16Hz,2順式異構(gòu)體；～15％)；7.34(s,2H)；7.29(s,1H)；7.03(dd,1H,J=16Hz)；6.53(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=16Hz)；5.72(s,1H)；5.68(s,1H,2順式異構(gòu)體～15％)；4.15(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s,2H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.6(br.s:1H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(67)向強(qiáng)烈攪拌的氯鉻酸吡啶鎓(350毫克，1.39毫摩爾)和硅藻水(750毫克)在DCM(20毫升)中的混合物內(nèi)，加入(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醇)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(330毫克，0.889毫摩爾)在DCM(10毫升)中形成的溶液。室溫下將混合物攪拌3小時(shí)，并通過硅膠短濾墊過濾。蒸發(fā)除去溶劑并經(jīng)硅膠色譜法純化，得到290毫克(87％產(chǎn)率)所需的醛1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):9.5(s,1H)；7.9(d,1H；J=16Hz,2順式異構(gòu)體；～15％)；7.34(s,2H)；7.29(s,1H)；7.03(dd,1H,J=16Hz)；6.53(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=16Hz)；5.79(s,1H)；5.68(s,1H,2順式異構(gòu)體～15％)；4.15(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s 2H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯對(duì)甲苯磺酰腙(68)向(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(250毫克，0.67毫摩爾)在乙醇(5毫升)中的溶液內(nèi)加入對(duì)甲苯磺酰肼(137毫克，0.73毫摩爾)和大約10毫升濃鹽酸。在40-45℃下將混合物加熱15分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并經(jīng)硅膠色譜法純化殘留物，以得到330毫克所需產(chǎn)物(產(chǎn)率89％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.82(d,2H；J=7.4Hz),7.5(2s,2H)；7.3(d,2H,J=7.4Hz)；7.18(s,1H),7.05(s,1H)；7.0(dd,1H,J=16Hz)；6.45(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=12Hz)；5.82(s,1H)；4.2(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s 2H)；2.42(s,3H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(69)**向(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯對(duì)甲苯磺酰脘(68)(80毫克)在乙酸(2.0毫升)中形成的溶液內(nèi)，分批加入氫硼化鈉*(80毫克)。于50℃下將混合物加熱1小時(shí)，冷卻至室溫，并加到冰中；然后使之升溫至室溫，并用EtOAc(3×10毫升)萃取。用水(3×10毫升)、NaHCO3(2×10毫升)、水(3×10毫升)、鹽水(3×10毫升)洗滌有機(jī)層，在MgSO4上干燥并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠色譜法純化殘留物以得到所需的酯。將該酯(20毫克)溶解于EtOH中，并加入KOH(1M,1毫升)，然后將混合物加熱回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用HCl(10％)中和，并用EtOAc萃取。用水(3×10毫升)、鹽水(3×10毫升)洗滌有機(jī)層，在MgSO4上干燥，并蒸發(fā)，得到所需的酸。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解到，可采用上述方法，以標(biāo)記的和放射性標(biāo)記的NaBnH4(n=1,2,3)生成如合成路線6中所示的標(biāo)記的(即氚標(biāo)記的)化合物。
此上，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可理解到，可于NaCNBnH3(n=1,2,3)和ZnCl2存在下，經(jīng)在甲醇中加熱8小時(shí)，然后進(jìn)行皂化(KOH,EtOH)，而從腙(68)制得同樣標(biāo)記的(氚和氚)化合物(69)。在另一個(gè)可選用的實(shí)施方案中，用放射性標(biāo)記的NaBnH4(n=1,2,3)還原醛(67)，然后將所得到的醇氧化成相應(yīng)的氚化醛。使這種醛轉(zhuǎn)化成其甲苯磺酰腙，然后在甲醇中用氰基氫硼化鈉和ZnCl2還原，并皂化產(chǎn)生相應(yīng)的酸(參見合成路線6的化合物68至69)。類視黃酸受體亞族活性的估測利用Evans等人(Science 240:889-95(May 13,1988)，其公開內(nèi)容列于此作為本文參考)所述的“順-反”或“其轉(zhuǎn)染”檢測法，試驗(yàn)本發(fā)明的類視黃酸化合物，并發(fā)現(xiàn)具有很強(qiáng)的作為RAR激動(dòng)劑、選擇性RXR激動(dòng)劑，或RAR和RXR受體之全激動(dòng)劑活化劑的特異活性。美國專利4,981,784號(hào)和5071,773(其公開內(nèi)容列于此作為參考)中詳細(xì)描述了這一檢測法。
共轉(zhuǎn)染檢測法提供了鑒定那些模擬或抑制天然激素之作的功能激動(dòng)劑或拮抗劑，并定量檢測它們對(duì)反應(yīng)性IR蛋白的活性。在這方面，共轉(zhuǎn)染檢測法可在實(shí)驗(yàn)室中模擬體內(nèi)系統(tǒng)。重要的是，共轉(zhuǎn)染檢測中測得的活性與已知的體內(nèi)活性密切相關(guān)，因而共轉(zhuǎn)染檢測法具有定性和定量預(yù)測被檢化合物體內(nèi)藥理學(xué)活性的功能(參見T.Berger et al,41.J.Steroid Biochem.Molec.Biol.773(1992)，其列入本文作為參考)。
在共轉(zhuǎn)染檢測法中，通過轉(zhuǎn)染(一種誘導(dǎo)細(xì)胞攝入外來基因的方法)將處于組成型啟動(dòng)子(如SV40啟動(dòng)子)控制下的克隆的IR(如人體RARα、RARβ、RXRr)的cDNA導(dǎo)入實(shí)質(zhì)上沒有內(nèi)源性IR的本底細(xì)胞中。該被導(dǎo)入的基因指導(dǎo)接受體細(xì)胞制造感興趣的IR蛋白質(zhì)。還將第二個(gè)基因以與IR基因接合的方式導(dǎo)入(共轉(zhuǎn)染)到同樣的細(xì)胞中。由含有激素反應(yīng)元件(HRE)的適當(dāng)?shù)募に胤磻?yīng)性啟動(dòng)子控制含有編碼報(bào)導(dǎo)蛋白質(zhì)如蟲螢光素(LUC)之cDNA的第二個(gè)基因。該報(bào)導(dǎo)質(zhì)粒具有報(bào)告靶IR之轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的功能。因此，該報(bào)導(dǎo)蛋白可作為由處于靶受體和其天然激素控制下的基因正常表達(dá)之產(chǎn)物(mRNA，然后是蛋白質(zhì))的代用品。
共轉(zhuǎn)染檢測法可檢測靶IR的小分子激動(dòng)劑或拮抗劑。使被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞暴露于激動(dòng)劑配體化合物可提高被轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的報(bào)導(dǎo)蛋白活性?？梢苑奖愕貦z測該活性，例如可根據(jù)螢光素酶產(chǎn)生量的增加來完成這一檢測，螢光素酶產(chǎn)生量增加反映了化合物依賴性的、IR介導(dǎo)的報(bào)導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄能力的增加。為了檢測拮抗劑，于恒定濃度靶IR(例如RARα的全反式視黃酸)激動(dòng)劑(已知其可誘導(dǎo)限定的報(bào)導(dǎo)信號(hào))的存在下完成共轉(zhuǎn)染檢測。增加推測的拮抗劑的濃度將降低報(bào)導(dǎo)信號(hào)(例如螢光素酶產(chǎn)生量)。因此共轉(zhuǎn)染檢測法可用于檢測特異性IR的激動(dòng)劑和拮抗劑。此外，其不僅可確定某化合物是否與特定IR相互作用，而且可確定這種相互作用是否模擬(激動(dòng))或阻斷(拮抗)靶基因表達(dá)的天然調(diào)節(jié)分子的作用，以及確定這種相互作用的特異性及強(qiáng)度。
按照下文實(shí)施例23舉例描述的共轉(zhuǎn)染檢測法估測本發(fā)明類視黃酸化合物的活性。
實(shí)施例23共轉(zhuǎn)染檢測法于添加了10％活性炭樹脂解吸之胎牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEH)存在下，培養(yǎng)CV-1細(xì)胞(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞)，然后在轉(zhuǎn)染前一天轉(zhuǎn)移到96孔微量滴定板中。
為了檢測本發(fā)明化合物的RAR和/或RXR激動(dòng)劑活性，按照Bevger等人[41.J.Steroid Biochem,Mol.Biol.,733(1992)]的方法，用下列受體表達(dá)質(zhì)粒pRShRARα[Giguere et al.,330 Nature,624(1987)]、pRShRARβ和pRShRARr[Ishikawa et al.,4 Mol.Endocrin.837(1990)]、pRShRXRα[Mangelsdorf et al.,345 Nature 224(1990)]及pRSmRXRβ和pRSmRXRr[Mangelsdorf et al.,6 Gene & Devel.,239(1992)](這些公開內(nèi)容均列入本文作為參考)，經(jīng)磷酸鈣共沉淀瞬對(duì)轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞。用于轉(zhuǎn)染的各個(gè)這些受體表達(dá)質(zhì)粒的濃度為5ng/孔，同時(shí)基本報(bào)導(dǎo)質(zhì)粒濃度為100ng/孔，內(nèi)部控制質(zhì)粒pRS-β-Gal濃度為50ng/孔，且填充DNA即pGEM濃度為45ng/孔。
在RAR轉(zhuǎn)染中使用基本報(bào)導(dǎo)質(zhì)粒D-MTV-LUC[Hollenberg andEvans,55 Cell,899(1988)，其內(nèi)容列入本文作為參考]，該質(zhì)粒含有如Umesono等人[336 Nature,262(1988)，其公開內(nèi)容列入本文作為參考]描述的TRE-回文序列反應(yīng)元件的兩個(gè)拷貝；而在RXR轉(zhuǎn)染中則使用報(bào)導(dǎo)質(zhì)粒CRBPIIFKLUC，該質(zhì)粒含有如Mangelsdorf等人[66 Cell,555(1991)，其公開內(nèi)容列入本文作為參考]描述的RXRE(類視黃酸X受體反應(yīng)元件)。這些報(bào)導(dǎo)質(zhì)粒均含有編碼蟲螢光素酶(LUC)的cDNA，而該cDNA則處于包含適當(dāng)RAR或RXR反應(yīng)元件的組成型啟動(dòng)子控制之下。如上文指出的，其中包含編碼組成性表達(dá)大腸桿菌β半乳糖苷酶(β-Gal)的pRS-β-Gal，以其作為內(nèi)部控制質(zhì)粒用以估計(jì)轉(zhuǎn)染效率和化合物毒性。
轉(zhuǎn)染后6小時(shí)，除去培養(yǎng)基，并用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗細(xì)胞。向細(xì)胞內(nèi)加入含有濃度范圍為10-12至10-5M之本發(fā)明化合物的培養(yǎng)基。同樣，以相似的濃度加入?yún)⒖蓟衔锶词揭朁S酸(ATRA))(SigmaChemical公司生產(chǎn)；已知的RAR選擇性化合物)和9-順式視黃酸(9-cis)(按Heymanttal.,Cell,397-406(1992)中所述方法合成，為RXR有已知活性的化合物)，以便為分析本發(fā)明化合物的活性提供參考點(diǎn)。用反相高效液相色譜法證實(shí)類視黃酸純度大于99％。將類視黃酸溶解于二甲亞砜中用于轉(zhuǎn)錄激活試驗(yàn)。每種樣品均重復(fù)測四份。
40小時(shí)后，用PBS洗細(xì)胞，用基于Triton X-100的緩沖液裂解細(xì)胞，并分別使用發(fā)光計(jì)或分光光度計(jì)檢測LUC和β-Gal活性。對(duì)于每種重復(fù)樣品，均按下式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化反應(yīng)(NR)LUC反應(yīng)/β-Gal比率其中βGal比率=β-Gal·1×10-5/β-Gal保溫時(shí)間計(jì)算NR的平均值和平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)。用所得數(shù)據(jù)作圖，在劑量反應(yīng)曲線范圍內(nèi)將本發(fā)明的反應(yīng)與參考化合物相比較。就本發(fā)明的激動(dòng)劑化合物來說，定量檢測產(chǎn)生50％最大反應(yīng)(EC50)的有效濃度。
下列表1中顯示了經(jīng)選擇的本發(fā)明類視黃酸化合物的效力(nM)。
表1本發(fā)明選擇的類視黃酸化合物對(duì)RARα、β、r和RXRα、β、r的效力，其中將本發(fā)明的化合物與已知的RAR活性類視黃酸化合物全反式視黃酸(ATRA)和RXR活性類視黃酸化合物9-順式視黃酸(9-cis)相比較，并與比較實(shí)施例化合物A、B、C和D比較
na=無活性(效力＞10,000和/或效率＜20％)如從表1中看到的，化合物9、39、41和47是能力極強(qiáng)的RAR活性化合物，化合物9對(duì)RARγ表現(xiàn)出亞毫微摩爾活性，而化合物47則對(duì)RARβ和RARr表現(xiàn)有選擇性。事實(shí)上，這些化合物對(duì)RAR的反應(yīng)能力比已知的RAR活性化合物ATRA強(qiáng)10至100倍以上。同樣，化合物28是能力強(qiáng)的和選擇性好的RXR活性化合物。此外，全激動(dòng)劑化合物10和43表現(xiàn)有比已知的RXR活性全激動(dòng)劑化合物9-順式視黃酸更強(qiáng)的效力。雖然表1中沒有展示效率，但那些表現(xiàn)小于20％效率的化合物被認(rèn)為是無類視黃酸激活劑(效力限定為＞10,000)活性的，盡管這些化合物展示有臨界(marginal)效力。在這方面，除作用于RARβ的比較化合物A外，其余比較實(shí)例化合物均表現(xiàn)出小于20％的效率。
其他已知的結(jié)構(gòu)上相似的化合物沒有展示出本發(fā)明的化合物對(duì)RAR和/或RXR受體的類視黃酸活性。如表1中進(jìn)一步顯示的，結(jié)構(gòu)上與本發(fā)明的化合物相似的比較實(shí)例化合物，例如M.J.Aurell等人(49 Tetrahedron,6089(1993)，流程2，化合物d和e)所述的(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(A)和(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(4-甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(B)，美國專利No.4,534,979(實(shí)施例17)中公開的(2E,4E,6E)-2-甲基-7-(2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯基)庚-2,4,6-三烯酸(C)，以及美國專利No.5,320,833(化合物80)中公開的(2E,4E,6E)-3-甲氧基-7-(4-叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(D)對(duì)任何RAR或RXR均沒有或?qū)嶋H上沒有活性。
實(shí)施例24除了實(shí)施例15的共轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)外，還按照M.F.Boehm等人[“新類視黃酸X受體選擇性類視黃酸的合成以及結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系”，37 J.Med.Chem.,2930(1990)；“高比活性[3H]-9-cis視黃酸的合成及其以特異的結(jié)合性能用于鑒定類視黃酸”37 J.Med.Chem.,408(1994)]和E.A.Allegretto等人[“Characteriztion and comparison of Hormone-Binding andTransactivation Properties of Retinoic Acid and Retinoid X ReceptorsExpressedin Mamnialiam Cells and Yeast”,268 J.Biol.Chem.,22625(1993)](這些文獻(xiàn)均列入本文作為參考)所述的方法研究了本發(fā)明選擇的化合物與RAR和RXR受休的結(jié)合。
非特異性結(jié)合定義為在500nM適當(dāng)?shù)奈礃?biāo)記化合物存在下所保留的結(jié)合。保溫時(shí)間結(jié)束時(shí)，將結(jié)合的化合物與游離配體分離開。用液體閃爍計(jì)數(shù)法檢測等分(700毫升)的上層清液或羥基磷灰石沉淀物(hydroaylapatitepellet)以確定結(jié)合的氚化類視黃酸的量。
校正非特異性結(jié)合后，確定IC50值。IC50值定義為使特異性結(jié)合降低50％所需的競爭配體的濃度。對(duì)數(shù)據(jù)制作對(duì)對(duì)數(shù)座標(biāo)圖以確定IC50值。將IC50值、標(biāo)記的配體濃度和標(biāo)記之配體的Kd值代入Cheng-Prussof方程式算出Ki值。
下列表2中顯示本發(fā)明選擇的類視黃酸化合物和參考化合物ATRA與9-cisRA的結(jié)合活性(以nM為單位的Kd值)結(jié)果。
表2本發(fā)明選擇的化合物對(duì)RARα、β、r和RXRα、β、r蛋白質(zhì)的結(jié)合，并與已知的RAR活性類視黃酸化合物全反式視黃酸(ATRA)和RXR活性類視黃酸化合物9-順式視黃酸(9-cis)的結(jié)果相比較
從表2中可看出，本發(fā)明的化合物9和10具有與已知的RAR活性化合物ATRA及已知的RXR活性化合物9-cis相等或更強(qiáng)結(jié)合活性。相比之下，實(shí)施例14的所有比較實(shí)例化合物則顯示對(duì)所有類視黃酸受體完全沒有結(jié)合，一個(gè)例外是比較實(shí)例化合物A，該化合物在312nM濃度時(shí)顯示對(duì)RARα有微弱結(jié)合。
實(shí)施例25
本發(fā)明化合物的類視黃酸活性的另一種已確定的檢測法是最先由Verma和Boutwell(33 Cancer Research，2196(1997)，其內(nèi)容列入本文作為參考)描述的鳥氨酸脫羧酶檢測法。在Verma和Boutwell最初使用視黃酸完成的工作中，證實(shí)了烏氨酸脫羧酶(ODC)活性增加與多胺生物合成有關(guān)。另外，以前也已證實(shí)多胺生物合成量增加與細(xì)胞增殖相關(guān)。因此，如果能夠抑制ODC活性，即可能調(diào)節(jié)細(xì)胞的過度增殖。雖然還不知道增加ODC活性的所有原因，但已知12-鄰-十四酰佛波(phorbor)-13-乙酸酯(TPA)可誘導(dǎo)ODC活性。更重要的是，視黃酸可抑制TPA對(duì)ODC的這種誘導(dǎo)作用。
使用基本上與35 Cancer Reserch,1662(1975)(其公開內(nèi)容列于此作為參考)中提出的方法相同的ODC檢測法，證明本發(fā)明化合物對(duì)TPA誘導(dǎo)的ODC增加的抑制作用。下列表3中顯示了對(duì)本發(fā)明選擇的實(shí)例化合物，和參考化合物ATRA及已知的RAR活性化合物(E)-4-[2-(5,6,7,8-四氫-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)-1-丙烯基]苯甲酸(TTNPB)所做此檢測的結(jié)果。所有數(shù)值均以抑制TPA誘導(dǎo)之ODC增加達(dá)80％抑制率所需的各化合物的濃度(即以nM為單位的IC-80值)。
表3化合物7、8、9和10，及參考化合ATRA和TTNBP抑制所觀察到的TPA對(duì)ODC的誘導(dǎo)作用達(dá)到80％所需的抑制濃度(ODCIC80,nM)
其中包括分別為化合物9和10之酯的化合物7和8，以顯示這些酯類似物表現(xiàn)有類視黃酸活性。雖然并不拘泥于理論，但據(jù)信這些酯可以在體內(nèi)起到前體藥物的作用，這可能是由于這些酯在體內(nèi)被裂解成本發(fā)明化合物的活性酸形式。
實(shí)施例26研究選擇的本發(fā)明化合物對(duì)已認(rèn)定的腫瘤細(xì)胞系RPMI8226、ME180和A毫升-193[均得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC,Rockvill,MD]的體外影響。
RPMI8226是得自患多發(fā)性骨髓瘤病人之外周血的人造血細(xì)胞系，并且是已認(rèn)定的研究多發(fā)性骨髓瘤和相關(guān)惡性疾病的細(xì)胞模型(Y.Matsuoka,G.E.Moore,Y.Yagi and D.Pressman,“Production of free lightchains of immunoglobulin by a hematopoietic cell line derived from a patientwith multiple myeloma”,125 Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1246(1967)其內(nèi)容列入本文作為參考)。該細(xì)胞類似于其他人淋巴細(xì)胞系的淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞并分泌免疫球蛋白的λ-型輕鏈。RPMI8226細(xì)胞培養(yǎng)于添加了10％胎牛血清、谷氨酰胺和抗生素的RPMI培養(yǎng)基(Gibco)中。作為生長于37℃，合5％ CO2的濕氣環(huán)境中的懸浮培養(yǎng)物維持細(xì)胞生長。每周兩次將細(xì)胞稀釋到1×105個(gè)/毫升的濃度。
ME180是得自子宮頸的人表皮樣癌細(xì)胞系，并且是已認(rèn)定的鱗狀細(xì)胞癌和相關(guān)惡性疾病的細(xì)胞模型(J.A.Sykes,J.Whitescarver,P.Jernstrom,J.F.Nolan and P.Byatt,“Some properties of a new epithelial cell line ofhuman origin”,45MH-Adenoviridae J.Natl.Cancer Inst.,107(1970)；其內(nèi)容列入本文作為參考)。此腫瘤是有不規(guī)則細(xì)胞簇的高侵犯性鱗狀細(xì)胞癌并且沒有明顯的角化。將ME180細(xì)胞培養(yǎng)并維持于添加了10％胎牛血清、谷氨酰胺和抗生素的McCoy氏5a培養(yǎng)基(Gibco)中。細(xì)胞作為生長于37℃，含5％ CO2之濕氣環(huán)境中的單層培養(yǎng)物得到維持。
A毫升-193細(xì)胞系是由患白血病之病人的母細(xì)胞建立的并被分類為M5急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞，其為已認(rèn)定的白血病和相關(guān)惡性疾病的細(xì)胞模型(G.Rovera et al.,139 J.Immunol.,3348(1987)，其內(nèi)容并入本文作為參考〕。經(jīng)免疫熒光檢測，這些細(xì)胞中75％以上是骨髓單核細(xì)胞抗原CS15呈陽性反應(yīng)的。細(xì)胞生長于含5μg/毫升運(yùn)鐵蛋白、5μg/毫升胰島素和2ng/毫升rh GM-CSF的Iscove氏改良的Dulbecco氏培養(yǎng)基中。該細(xì)胞作為生長于37℃，含5％ CO2之濕氣環(huán)境中的懸浮培養(yǎng)物得以維持。每周兩次將細(xì)胞稀釋到1×105個(gè)/毫升的濃度。3H-胸苷的摻入檢測摻入上述細(xì)胞系中的放射性標(biāo)記胸苷水平，以直接檢測本發(fā)明化合物的抗增殖性質(zhì)。用于檢測放射性標(biāo)記胸苷摻入的方法是采用如S.Shrivastar等人(“An in vitro assay procedure 40 test chemotherapeuticdrugs on cells from human solid tumors”40 Cancer Res.,4438(1980)，其內(nèi)容列入本文作為參考)描述的方法。將RPMI8226或A毫升-193細(xì)胞以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度鋪敷在96孔園底微滴定板(costar)中。以所指出的終濃度向適當(dāng)?shù)目變?nèi)加入類視黃酸試驗(yàn)化合物，達(dá)到150μL/孔的終體積。于37℃，在含5％ CO2的濕氣環(huán)境中將滴定板保溫96小時(shí)。然后，向各孔內(nèi)加入1μCi溶于25μL培養(yǎng)基中的[5′-3H]-胸苷(Amersham,U.K,43Ci/毫摩爾比活性)，并將細(xì)胞繼續(xù)保溫6小時(shí)。繼續(xù)按下述方法處理培養(yǎng)物。
以每孔2000個(gè)細(xì)胞的密度將通過胰酶消化收獲的ME180細(xì)胞鋪敷在96孔平底微量滴定板(Costar)中。按上述處理RPMI8226細(xì)胞的方法處理此培養(yǎng)物，但其中包括如下改動(dòng)即保溫之后，小心除去上清液，并用加于磷酸鹽緩沖鹽水中的0.5mM胸苷溶液洗細(xì)胞。用50μL 2.5％胰蛋白酶筒單地處理ME180細(xì)胞，以從平板中移出細(xì)胞。然后按下述步驟處理兩細(xì)胞系使用SKATRON多孔細(xì)胞收獲器(Skatron Instruments,Sterling VA),用10％三氯乙酸使細(xì)胞DNA沉淀于玻璃纖維濾墊上。以液體閃爍計(jì)數(shù)法檢測作為細(xì)胞生長之直接指標(biāo)的摻入到DNA中的放射活性。測定三個(gè)重復(fù)孔已摻入胸苷的每分鐘平均衰變率。下列表4、5和6分別顯示了利用RPMI8226、ME180和A毫升-193細(xì)胞系檢測的本發(fā)明化合物9和10，以及參考化合物ATRA和TTNBP的IC50值(即抑制50％最大胸苷摻入量所需的nM濃度值)。存活性還檢測了本發(fā)明選擇的化合物對(duì)上述細(xì)胞系的細(xì)胞毒性。所用方法基本上與T.Mosmann(“Rapid colorimetric assay for cellular growth andsurvival:application to proliferation and cytotoxicity assays”,65 J.Immunol.Meth.,55(1983)，其內(nèi)容列入本文作為參考)所述的檢測法相同，只是稍加改動(dòng)。以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度將RPMI8226或A毫升-193細(xì)胞鋪敷在96孔圓底微量滴定板(Costar)中。以所指出的終濃度向適當(dāng)?shù)目變?nèi)加入類視黃酸試驗(yàn)化合物，達(dá)到每孔150μL的終體積。于37℃下在含5％CO2的濕氣環(huán)境中，將滴定板保溫96小時(shí)。然后，向各孔內(nèi)加入15μL濾膜除菌的、溶于磷酸鹽緩沖鹽水的四唑染料(Promega,Madison,WI)，并將細(xì)胞繼續(xù)保溫4小時(shí)。按下述方法對(duì)培養(yǎng)物作進(jìn)一步處理。
以每孔2000個(gè)細(xì)胞的密度將通過胰酶消化收獲的ME180細(xì)胞鋪敷在96孔平底微量滴定板(Costar)中。按照上述處理RPMI8226的方法處理該培養(yǎng)物。
保溫4小時(shí)后，向各孔內(nèi)加100μL加溶/中止溶液(Promega,Madison,WI)。在濕氣環(huán)境中將平板于37℃放置過夜。使用Biomek ELISA平板讀數(shù)器(Beckman Intruments)記錄各孔在570-600nm波長處的吸光率。下列表4、5和6中分別顯示了利用RPMI8226、ME180和A毫升-193細(xì)胞系檢測的本發(fā)明化合物9和10，以及參考化合物ATRA及TTNBP的IC50值(即抑制50％線粒體功能，以及最終的細(xì)胞存活性所需的nM濃度值)。
表4化合物9和10，以及參考化合物ATRA和TTNBP在RPMI8226細(xì)胞系中抑制50％最大放射性標(biāo)記胸苷摻入量所需的抑制濃度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％線粒體功能所需的抑制濃度(MTS IC50)(nM)
表5化合物9和10，以及參考化合物ATRA和TTNBP在ME180細(xì)胞系中抑制50％最大放射性標(biāo)記胸苷摻入量所需的抑制濃度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％線粒體功能所需的抑制濃度(MTS IC50)(nM)
表6化合物9和10，以及參考化合物ATRA和TTNBP在A毫升-193細(xì)胞系中抑制50％最大放射性標(biāo)記胸苷摻入量所需的抑制濃度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％線粒體功能所需的抑制濃度(MTS IC50)(nM)
實(shí)施例27下列實(shí)施例舉例說明藥物組合物配方。使用下列成分制備硬明膠膠囊量(毫克/膠囊)化合物9 140干燥的淀粉100硬脂酸鎂 10總量 250毫克混合上述成分，并以250毫克的量裝入硬明膠膠囊內(nèi)。使用下述成分制備片劑
量(毫克/片)化合物9 140微晶纖維素200霧化的二氧化硅10硬脂酸10總量 360毫克混合上述成分，并以每片360毫克的量壓制成片劑。
如下制造每片含60毫克活性成分的片劑量(毫克/片)化合物9 60淀粉 45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(在水中的10％溶液)4羧基甲基淀粉鈉(SCMS) 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石粉1.0總量 150毫克使活性成分、淀粉和纖維素通過45號(hào)目美國標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，并徹底混合之。將PVP的溶液與所得粉末混合，然后通過14號(hào)目美國網(wǎng)篩。于50℃干燥如此產(chǎn)生的顆粒，并通過18號(hào)目美國網(wǎng)篩。然后將預(yù)先已通過60號(hào)目美國網(wǎng)篩的SCMS、硬脂酸鎂和滑石粉加到上述顆粒中，混合后在壓片機(jī)上壓成每片重150毫克的片劑。
用下列成分制造每劑含225毫克活性成分的栓劑化合物9 225毫克飽和脂肪酸甘油酯2000毫克總量2225毫克使活性成分通過60號(hào)目美國網(wǎng)篩，并懸浮于預(yù)先已用最小加熱溫度熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物倒入常規(guī)2克容積的栓模中，并使之冷卻。
如下制備靜脈內(nèi)給藥制劑化合物9 100毫克等滲鹽水1000毫升甘油100毫升將化合物溶解在甘油中，然后用等滲鹽水慢慢稀釋該溶液。上述成分的溶液可以以每分鐘1毫升的速率靜脈注射給病人。
本文雖然已按照專利法律提供了有關(guān)優(yōu)選實(shí)施方案和制備條件的描述，但本發(fā)明的范圍并不只限于這些。對(duì)本發(fā)明所做的各種改動(dòng)和替換對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的，且并未背離本發(fā)明范圍和精神。
因此為了了解本發(fā)明的范圍，須參考下列權(quán)利要求。
權(quán)利要求
1．一種化合物，其具有下列結(jié)構(gòu)式
或
或
或
或
其中R1、R2和R4各自分別是氫、芳基、雜芳基、CF3或可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3、和/或13CD3選擇性取代的C2-C6烷基、氟烷基或全氟烷基；R3和R5各自分別是氫、CF3、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或全氟烷基、或OR6，其中R6是氫、CF3、C1-C2烷基或C1-C2氟烷基或全氟烷基，但條件是當(dāng)R3是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基時(shí)，R1和R5不能是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基；R7是可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3選擇性取代的C1-C4烷氫或者是CH2OR8，其中R8代表氫、C1-C6烷基、可被C1-C4烷基、F、Cl、Br、I、OH、CF3、OR6、NR6選擇性取代的C3-C7飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中R6具有上文給出的定義；R9是C1-C4烷基；R10至R15各自分別是氫、C1-C6烷基或CF3；X是COOR16、CONR17、或CONR17R18，其中R16代表氫或C1-C6烷基，且其中R17和R18各自分別代表C1-C6烷基、或可被OH、F、Br、Cl或I選擇性取代的芳基或雜芳基，但條件是R17和R18不能都是芳基或雜芳基；Y是C、O、S或N，條件是當(dāng)Y是O時(shí)，則R14和R15不存在，且當(dāng)Y是N時(shí)，則R14和R15不能是CF3另外當(dāng)Y是S時(shí)，則R14和R15可獨(dú)自或一起代表O，或者可能都不存在；W是N或CR16，這里R16具有如上文給出的同樣定義；R19是可被選自由氫、F、Cl、Br、I或C1-C6烷基組成的基團(tuán)組的一個(gè)或多個(gè)取代基選擇性取代的芳基或雜芳基，其中X具有上文給出的同樣定義；n是0、1或2；虛線表示選擇性的雙鍵；波狀線表示呈順式或反式構(gòu)型的碳-碳鍵，但條件是當(dāng)R1、R2、R4和R5都是氫時(shí)，R3不能是芳基。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1、R2和R4各自代表C3-C6支鏈烷基、氟烷基或全氟烷基。
3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2和R4各自代表C3-C6支鏈烷基、氟烷基或全氟烷基，且R1、R3和R5都是氫。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2和R4各自代表異丙基、叔丁基或CF3，且R1、R3和R5都是氫。
5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其選自包括(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基〕3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氫吡喃-4-亞基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、2E,4E,6E)-7-(3,5-二-異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-異丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-環(huán)己基(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸、以及(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸在內(nèi)的化合物組。
6．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物構(gòu)成類視黃酸化合物。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物在濃度小于100nM時(shí)表現(xiàn)出對(duì)一種或多種類視黃酸受體有50％最大激活效力。
8．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物在濃度小于50nM時(shí)表現(xiàn)出對(duì)一種或多種類視黃酸受體有50％最大激活效力。
9．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物在濃度小于20nM時(shí)表現(xiàn)出對(duì)一種或多種類視黃酸受體有50％最大激活效力。
10．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物在濃度小于10nM時(shí)表現(xiàn)出對(duì)一種或多種類視黃酸受體有50％最大激活效力。
11．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物表現(xiàn)有作為選擇性RAR激動(dòng)劑的活性。
12．根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高2倍以上。
13．根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高5倍以上。
14．根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高10倍以上。
15．根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高100倍以上。
16．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物表現(xiàn)有作為選擇性RXR激動(dòng)劑的活性。
17．根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中該化合物作為RXR激活劑比作為RAR激活劑的效力至少高2倍以上。
18．根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高5倍以上。
19．根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高10倍以上。
20．根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中該化合物作為RAR激活劑比作為RXR激活劑的效力至少高100倍以上。
21．根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中該化合物表現(xiàn)有作為RAR和RXR之激活劑的全激動(dòng)劑活性。
22．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物以從每公斤體重大約1微克到每公斤體重大約500毫克的劑量單位投用于病人。
23．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物以從每公斤體重大約10微克到每公斤體重大約250毫克的劑量單位投用于病人。
24．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物以從每公斤體重大約20微克到每公斤體重大約100毫克的劑量單位投用于病人。
25．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物在治療皮膚相關(guān)疾病和狀態(tài)、癌的和癌前期的狀態(tài)、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神經(jīng)變性疾病、涉及調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡的疾病、免疫系統(tǒng)疾病、腦垂體功能異常、涉及人乳頭狀瘤病毒的疾病、創(chuàng)傷愈合或恢復(fù)頭發(fā)生長中是有效的。
26．一種藥物組合物，其含有一種權(quán)利要求1所述的化合物和一種藥學(xué)上可接受之載體。
27．根據(jù)權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中該組合物是為口服、局部、靜脈內(nèi)、作為栓劑或胃腸道外給藥而配制的。
28．根據(jù)權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中該化合物以從每公斤體重大約1微克到每公斤體重大約500毫克的劑量單位投用于病人。
29．根據(jù)權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中該化合物以從每公斤體重大約10微克到每公斤體重大約250毫克的劑量單位投用于病人。
30．根據(jù)權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中該化合物以從每公斤體重大約20微克到每公斤體重大約100毫克的劑量單位投用于病人。
31．根據(jù)權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其中該組合物在治療皮膚相關(guān)疾病和狀態(tài)、癌的和癌前期的狀態(tài)、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神經(jīng)變性疾病、涉及調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡的疾病、免疫系統(tǒng)疾病、腦垂體功能異常、涉及人乳頭狀瘤病毒的疾病、創(chuàng)傷愈合或恢復(fù)頭發(fā)生長中是有效的。
32．一種影響RAR和/或RXR活性的方法，其包括體內(nèi)投用根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
33．一種調(diào)節(jié)由RAR和/或RXR受體介導(dǎo)之過程的方法，其包括給病人投用有效量的根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物。
34．一種醫(yī)治需進(jìn)行類視黃酸治療之病人的方法，其包括給病人投用藥學(xué)上有效量的根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物。
35．根據(jù)權(quán)利要求34所述的醫(yī)治病人的方法，其中該化合物在治療皮膚相關(guān)疾病和狀態(tài)、癌的和癌前期的狀態(tài)、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神經(jīng)變性疾病、涉及調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡的疾病、免疫系統(tǒng)疾病、腦垂體功能異常、涉及人乳頭狀瘤病毒的疾病、創(chuàng)傷愈合或恢復(fù)頭發(fā)生長中是有效的。
36．一種醫(yī)治需要進(jìn)行類視黃酸治療的病人的方法，其包括給病人投用藥學(xué)上有效量的根據(jù)要求26所述的藥物組合物。
37．根據(jù)權(quán)利要求36所述的醫(yī)治病人的方法，其中該組合物在治療皮膚相關(guān)疾病和狀態(tài)、癌的和癌前期的狀態(tài)、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神經(jīng)變性疾病、涉及調(diào)節(jié)編程性細(xì)胞死亡的疾病、免疫系統(tǒng)疾病、腦垂體功能異常、涉及人乳頭狀瘤病毒的疾病、創(chuàng)傷愈合或恢復(fù)頭發(fā)生長中是有效的。
38．一種檢測樣品中是否存在一種或多種RAR和/或RXR受體的方法，其包括將根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物與含有一種或多種未知類視黃酸受體的樣品混合，并檢測所說的化合物是否與樣品中的受體結(jié)合。
39．一種配體-類視黃酸受體復(fù)合物，其由根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物與RAR和/或RXR受體結(jié)合所形成。
40．一種純化類視黃酸受體的方法，其包括將根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物與含有RAR和/或RXR受體的樣品混合在一起，使所說的化合物與所說的受體結(jié)合，并分離出所說的化合物和所說的RAR和/或RXR受體結(jié)合之組合體。
41．一種制造氚標(biāo)記的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，即結(jié)構(gòu)Ⅰ化合物的方法，其包括(a)使具有下結(jié)構(gòu)式
的三烯酯醛與芳基磺酰肼偶聯(lián)，以產(chǎn)生相應(yīng)的腙，并且(b)用氚化物還原該腙，以產(chǎn)生相應(yīng)的氚標(biāo)記的三烯酯，其中R1和R2至R10具有如權(quán)利要求1中給出的定義。
42．根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其還包括皂化氚標(biāo)記的三烯酯以產(chǎn)生具有下列結(jié)構(gòu)式的相應(yīng)的三烯酸
其中R1和R2至R10具有如權(quán)利要求1中給出的定義。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有視黃酸受體和類視黃酸X受體活性的新的三烯類視黃酸化合物,還提供了含有這些化合物的藥物組合物及其使用方法。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1220656SQ95197736
公開日1999年6月23日 申請(qǐng)日期1995年12月21日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月30日
發(fā)明者馬庫斯·F·貝姆, 張 林, 尤塞夫·L·本納尼, 亞歷克斯·M·納德贊 申請(qǐng)人:配位體藥物股份有限公司