專利名稱：腸出血性大腸桿菌感染的預(yù)防和治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及因感染了腸出血性大腸桿菌(下文稱作EHEC)而導(dǎo)致的傳染性疾病的預(yù)防和治療，特別是預(yù)防和治療因EHEC O157導(dǎo)致的出血性結(jié)腸炎及其并發(fā)癥，如溶血性尿毒癥綜合癥和中樞神經(jīng)紊亂。
在美國1982年的傳染病大流行中首次分離出了EHEC O157。自那以后，由此細(xì)菌導(dǎo)致的傳染病的發(fā)生率主要增長于北美和歐洲。特別是在英國和美國，這種傳染病被認(rèn)為是一種需要緊急監(jiān)護(hù)的“急性傳染病”，并認(rèn)為針對其的預(yù)防措施是非常重要的。
EHEC感染會引起出血性結(jié)腸炎并伴隨有腹瀉和便血，有時(shí)還會導(dǎo)致并發(fā)癥如溶血性尿毒癥綜合征(HUS)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。由EHEC產(chǎn)生的維羅(Vero)細(xì)胞毒素與這些疾病密切相關(guān)，因此治療EHEC感染的關(guān)鍵在于開發(fā)出一種中和維羅(Vero)細(xì)胞毒素的方法。
迄今已提出的治療EHEC傳染病的方法如下所述，有(1)使用抗菌素治療(Japanese Journal of Bacteriology，52(1)，2016，2017和2018，1997)使用抗菌素存在抗菌素抗性菌株增加的問題。據(jù)說在1996年主要發(fā)生于日本堺(Sakai)市的EHEC感染大流行中有95．9％的患者用抗菌素進(jìn)行了治療。據(jù)報(bào)道在那時(shí)最廣泛使用的抗菌素是磷霉素(FOM)(使用包含84％抗菌素的FOM)。根據(jù)后來的研究，F(xiàn)OM不能很好地抑制Vero細(xì)胞毒素的產(chǎn)生。相反，F(xiàn)OM殺死了EHEC細(xì)胞但卻導(dǎo)致結(jié)合在細(xì)菌細(xì)胞上的Vero細(xì)胞毒素釋放。因此給患者服用抗菌素FOM是成問題的。(2)使用商業(yè)上可獲得的人免疫球蛋白制劑免疫球蛋白制劑已用于治療EHEC感染的患者，但它們的效果還不確定。Komiya等人(Japanese Journal of Bacteriology，52(1)，3124，1997)從5個(gè)生產(chǎn)廠家隨機(jī)地抽取了用于靜脈注射的13組丙種球蛋白制劑作為樣品，并測定了抗Vero細(xì)胞的細(xì)胞毒作用的中和抗體效價(jià)水平和小鼠致死毒性以觀察這些制劑是否有中和EHEC VT1或VT2的抗體。
另外，Takeda檢驗(yàn)了由進(jìn)口血液制成的丙種球蛋白制劑樣品中和EHEC VT1或VT2的能力。他報(bào)告說，這些制劑可中和VT1，但不能中和VT2，這對癥狀有不利影響(Newsflash of Jiji Press，2月21日，1997)。
由此可見，使用人免疫球蛋白制劑很可能對EHEC感染的治療作用很小。(3)使用牛初乳免疫球蛋白Pirro，F(xiàn)．等人(Veterinary Microbiology 43，131-141，1995)在德國匯集了225份牛初乳隨機(jī)樣品和40份血清隨機(jī)樣品，檢驗(yàn)每份初乳和血清中是否有針對EHEC VT1或VT2的抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有69．3％的初乳有針對VT1的抗毒素抗體，14．7％有針對VT1和VT2的抗體。在血清中可以觀察到相同的趨勢。毒素中和抗體的同型是IgG1。由這些數(shù)據(jù)可以斷定在德國按常規(guī)飼養(yǎng)的牛有EHEC，因此食用被污染牛的肉和奶的人比預(yù)期的危險(xiǎn)更高。在加拿大報(bào)道了相似的流行病學(xué)數(shù)據(jù)。
Lissner，R．等人(Infection24，No．5，44-49，1996)在德國采集了至少100頭常規(guī)飼養(yǎng)的牛在分娩后10小時(shí)內(nèi)的初乳。通過常規(guī)脫脂并去除酪蛋白得到乳清，將其噴霧干燥，從約100kg初乳制得2-5kg乳清粉末(LactobinTM)。利用Pirro等人的方法(1995)，在體外檢測所得的乳清粉末以確定其中所含的抗體(IgG1)是否特異性中和EHEC VT1和VT2。他們發(fā)現(xiàn)該乳清粉末含有中和VT1和VT2的高抗體效價(jià)。Lissner，R．等人指出這一結(jié)果提醒了通過給EHEC感染的患者口服匯集乳清來減輕腹瀉和HUS病情的可能性。但是，干燥乳清能否用于治療目的還未得到實(shí)驗(yàn)確證。也就是說，當(dāng)給EHEC感染模型動物口服這種干燥乳清時(shí)，并不清楚其是否能預(yù)防由EHEC感染引起的死亡，是否能阻止EHEC在腸中的增生，或者是否能抑制腸中的VT1和VT2。
另外，由于分娩后初乳中的抗體效價(jià)一般隨著產(chǎn)生時(shí)間迅速下降，所以上述方法對于制備抗體是無效的，因此采集的時(shí)間是有限的，僅能回收小量的預(yù)期抗體。而且僅僅是具有EHEC的牛才能產(chǎn)生含有針對VT1和VT2的抗體的初乳，但正如Pirro，F(xiàn)．(1995)指出的那樣，這增加了使用可能已被EHEC污染的初乳作為原料來回收抗體時(shí)感染的危險(xiǎn)。因此，利用上述方法所得到的乳清粉末不適合用于人的治療目的。
如上所述，還未提出治療腸出血性大腸桿菌O157感染的有效方法，這是目前的主要問題。
抗菌素療法使得維羅(Vero)細(xì)胞毒素釋放和抗茵素抗性的菌株增加。人免疫球蛋白制劑對Vero細(xì)胞毒素VT2沒有中和活性。EHEC污染的牛的初乳具有抗EHEC抗體，但是感染EHEC的危險(xiǎn)也將增加。
本發(fā)明的目的是提供治療和預(yù)防腸出血性大腸桿菌O157感染的有效和安全的藥物組合物。
此前本發(fā)明人研制了一種利用雞蛋來大量并廉價(jià)地制備針對特定抗原的特異性抗體的方法，并應(yīng)用該方法來制備針對引起哺乳的豬和腓腸的大腸桿菌病的腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)的特異性抗體。他發(fā)現(xiàn)所得抗體可有效地治療和預(yù)防大腸桿菌病(日本專利申請公開No．7-53669)。具體地說，用菌毛抗原(987p，K88和K99抗原)對母雞進(jìn)行免疫接種，該抗原是ETEC的粘附因子，將已轉(zhuǎn)移到蛋黃中的抗體回收。由ETEC感染導(dǎo)致腹瀉的機(jī)理是細(xì)菌定居于腸中并在此生長，由細(xì)菌產(chǎn)生的腸毒素(LT，ST)使電解平衡破壞。上述方法的目的是通過利用對抗粘附因子的特異性抗體來預(yù)防和治療大腸桿菌病，粘附因子對該細(xì)菌在腸中的定居來說是必需的。
另一方面，導(dǎo)致出血性結(jié)腸炎、HUS或中樞神經(jīng)紊亂的因素是EHEC感染中的Vero細(xì)胞毒素。與ETEC不同，在EHEC中沒有發(fā)現(xiàn)粘附因子。因此，通過研制能使由EHEC感染而在腸中產(chǎn)生的Vero細(xì)胞毒素在與靶細(xì)胞結(jié)合前被抑制的口服被動免疫接種療法而預(yù)防和緊急治療EHEC感染是有可能的。
不過，為了評定所得抗體的作用必需要有EHEC感染模型。由于常規(guī)小鼠的腸中有正常菌叢，因此小鼠不能僅通過口頭接種EHEC培養(yǎng)物而感染EHEC。當(dāng)小鼠預(yù)先用硫酸鏈霉素和絲裂霉素C進(jìn)行處理，它們就可通過口服接種而感染EHEC并顯示出臨床癥狀如嗜睡，失重，四肢麻痹，和因感染死亡。不過，用這些物質(zhì)進(jìn)行預(yù)處理不適于檢測藥物的效能，因?yàn)槠淇赡苡绊懮锉Ｗo(hù)系統(tǒng)。
本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，給無菌小鼠口服接種EHEC培養(yǎng)物可不需預(yù)處理就可感染上EHEC并產(chǎn)生致死狀況，并已開發(fā)出適于評定用于預(yù)防或治療EHEC感染的藥物的效能的EHEC感染模型。本發(fā)明人基于此發(fā)現(xiàn)，利用這樣的感染模型完成了本發(fā)明，所說的發(fā)現(xiàn)是接種了滅活EHEC的母雞產(chǎn)的蛋含有足夠能中和維羅(Vero)細(xì)胞毒素的抗體，在預(yù)防和治療EHEC感染中是有效的。
本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的藥物組合物，其含有作為活性成分的特異性抗體，該抗體是由以腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由EHEC產(chǎn)生的Vero細(xì)胞毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。本發(fā)明還提供了一種含有作為添加劑的上述抗體的食品。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療腸出血性大腸桿菌O157的藥物組合物，其含有作為活性成分的特異性抗體，該抗體是由以腸出血性大腸桿菌O157的滅活細(xì)胞作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。該特異性抗體能夠凝集特定的大腸桿菌O157細(xì)胞并具有中和由該細(xì)菌產(chǎn)生的維羅(Vero)毒素的活性。
從接種了EHEC細(xì)胞的母雞產(chǎn)的蛋得到的上述抗體可與至少一種選自乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌的細(xì)菌一起用于預(yù)防或治療由EHEC，特別是EHEC O157引起的傳染病。
為了生產(chǎn)針對EHEC的特異性抗體，給母雞接種抗原。用于給母雞接種的抗原包括通過培養(yǎng)EHEC如EHEC O157 T001，T002，T003，T004和T005并向該培養(yǎng)物中加入福爾馬林而得到的滅活細(xì)胞。另一方面，將多粘菌素B加入細(xì)胞懸液(1×1010-1×1011CFU／ml)(PBS，pH7．2)中使細(xì)胞溶解得到類毒素抗原，從該細(xì)胞中提取Vero細(xì)胞毒素并向Vero毒素中加入福爾馬林以制備可用的類毒素。
利用合適的途徑如皮下或肌內(nèi)注射給母雞接種抗原可以使母雞對抗原產(chǎn)生免疫。優(yōu)選合適的佐劑與抗原一起給藥以增強(qiáng)免疫作用。用于這一目的的佐劑是弗氏完全(不完全)佐劑(Difco)，霍亂毒素BB(Sigma)，Titer Max(CytRx Corp．)等。
抗原的劑量根據(jù)抗原和佐劑的類型以及給藥途徑而定，以這樣的給藥方式可以使母雞產(chǎn)生免疫，而母雞中的抗原不會產(chǎn)生過量毒性。
通常，在接種(初次免疫接種)后的幾周內(nèi)，母雞變得對抗原敏感，即對抗原免疫了。針對抗原的特異性抗體在母雞體內(nèi)生成，母雞產(chǎn)的蛋，特別是蛋黃中含有特異性抗體。
在對母雞初次接種了抗原后，為了維持母雞體內(nèi)的高抗體效價(jià)可以給其服用一種或多種合適劑量濃度的加強(qiáng)劑量。
母雞和雞蛋中針對抗原的特異性抗體的存在和效價(jià)水平可以用免疫學(xué)分析領(lǐng)域中的技術(shù)人員熟知的任何方法進(jìn)行確認(rèn)，如ELISA或利用凝集反應(yīng)的方法。
抗維羅毒性抗體的效價(jià)可以用Pirro等人(1995)的方法，利用Vero細(xì)胞的懸液進(jìn)行測定。當(dāng)確認(rèn)了免疫后的母雞產(chǎn)的蛋中存在足夠效價(jià)的特異性抗體之后，收集這些雞蛋并分離出預(yù)期抗體。
本發(fā)明的特異性抗體可以用整個(gè)雞蛋或蛋黃制備。大多數(shù)抗體包含在蛋黃中，通常將蛋黃分離出來用于制備抗體，在某些情況下也可使用整個(gè)雞蛋。
整個(gè)雞蛋或蛋黃可以不經(jīng)分離即使用。另一方面，也可將整個(gè)雞蛋或蛋黃進(jìn)行分離或精制，例如，可以用合適的方法進(jìn)行脫脂如利用鄰苯二甲酸羥丙甲基纖維素、聚乙二醇等將蛋黃中的脂質(zhì)成分除去。如果需要，還可以任何已知的方法進(jìn)行進(jìn)一步純化，包括已知的蛋白質(zhì)純化方法如用硫酸銨或硫酸鈉進(jìn)行鹽析，或用冷乙醇沉淀等。
未經(jīng)分離或經(jīng)過分離或純化的整個(gè)雞蛋或蛋黃可直接使用或進(jìn)行加工。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將整個(gè)雞蛋或蛋黃攪拌或勻化成乳液并用常規(guī)技術(shù)如噴霧干燥或冷凍干燥法干燥成粉末。因此，根據(jù)不同目的可以使用不同形式的抗體。
即使將EHEC整個(gè)細(xì)胞用作抗原，所得對EHEC有特異性的抗體也具有足夠中和Vero細(xì)胞毒素的活性。而且，利用EHEC感染模型動物進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)也證明了這一點(diǎn)，即給模型動物口服本發(fā)明的特異性抗體使得腸中的EHEC細(xì)胞的數(shù)量減少了，且抑制了Vero毒素的產(chǎn)生，因此降低了死亡率。
當(dāng)將由雞蛋得到的針對EHEC的特異性抗體與至少一種選自乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌的細(xì)菌一起口服給藥時(shí)可以得到對EHEC感染的更好的保護(hù)作用。對于乳酸細(xì)菌的給藥來說，Ogawa等人(JapaneseJournal of Bacteriology 52(1)，ppl57，2006(1997))和Koga等人(Japanese Journal of Bacteriology52(1)，pp301，3126(1997))報(bào)道說，乳酸細(xì)菌在某種程度上抑制了EHEC的生長并具有中和Vero細(xì)胞毒素的活性，并提出這是由于乳酸細(xì)菌產(chǎn)生了有機(jī)酸如乙酸或乳酸所致。不過，當(dāng)乳酸細(xì)菌與本發(fā)明的特異性抗體一起使用時(shí)是不可能出現(xiàn)顯著功效的。
因此，本發(fā)明的特異性抗體可用于預(yù)防和治療EHEC感染，并可用作預(yù)防EHEC感染的食品的添加劑，可單獨(dú)使用或與乳酸細(xì)菌和／或雙歧細(xì)菌結(jié)合使用。
用于本發(fā)明的乳酸細(xì)菌的實(shí)例包括嗜酸乳桿菌，乳乳桿菌，保加利亞乳桿菌，干酪乳桿菌，糞腸球菌，尿腸球菌等。用于本發(fā)明的雙歧細(xì)菌的實(shí)例包括短雙歧桿菌，雙歧雙歧桿菌，嗜熱雙歧桿菌，長雙歧桿菌，嬰兒雙歧桿菌，青春雙歧桿菌等。
當(dāng)本發(fā)明的特異性抗體用于預(yù)防或治療傳染病時(shí)，該抗體可以含有抗體和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物的形式常規(guī)給藥。在藥物組合物的制備中，可以加入解酸藥(如碳酸氫鈉，碳酸鎂，沉淀碳酸鈣，或偏硅鋁酸鎂)。該藥物組合物可以用任何已知方法進(jìn)行制備。
用于預(yù)防或治療傳染病的藥物組合物可通過口服途徑給藥。本發(fā)明抗體的劑量可根據(jù)用法、目的和癥狀輕重而定。當(dāng)抗體用于預(yù)防EHEC感染時(shí)，優(yōu)選每天服用0．25-20．0mg／kg純抗體。在治療由EHEC引起的傳染病時(shí)，優(yōu)選服用1．25-125mg／kg純抗體。當(dāng)選用乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌與抗體一起給藥時(shí)，它們優(yōu)選以每天107-1010可存活細(xì)胞的量給藥。
當(dāng)本發(fā)明的抗體用作預(yù)防EHEC感染的食品的添加劑時(shí)，該抗體以純抗體計(jì)，以0．01-0．1wt％，優(yōu)選以0．05wt％(食品)的量加入食品中。乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌可以每1克食品106-109個(gè)的量加入食品中。實(shí)施例1該實(shí)施例說明了用免疫后的母雞的蛋制備含有特異性抗體的雞蛋粉末。滅活抗原的制備從EHEC患者的腹瀉糞便中分離出EHEC T001，并接種于201Tripticase大豆肉湯中。有氧培養(yǎng)18小時(shí)后，以3％(培養(yǎng)物)的量向該培養(yǎng)物中加入福爾馬林以滅活細(xì)胞。確認(rèn)培養(yǎng)物中的細(xì)胞已滅活后，將該培養(yǎng)物以12，000×g的速度離心20分鐘，并用PBS(pH7．2)洗滌3次，得到用于免疫接種的抗原。免疫接種用PBS將滅活的細(xì)胞調(diào)整到含有1010-1011CFU／ml，并與油性佐劑混合制備免疫原。將該免疫原注射入16-18周大的白萊亨(White Leghorn)雞的胸肌，每次注射0．5ml(初始注射)。初始接種8周后，以相同的方式相同的劑量用相同的免疫原注射作為增強(qiáng)劑量給藥。
如下所述，利用96孔微量滴定板測定蛋黃的抗體效價(jià)。將每個(gè)雞蛋的蛋黃與蛋白分離，向蛋黃中加入重量相等的PBS。向該混合物中加入等體積的氯仿，然后進(jìn)行振搖。該混合物離心后，分離上清液(水溶部分)作為測定抗體效價(jià)的樣品。向每0．25ml連續(xù)兩倍稀釋的樣品的PBS稀釋物中加入已調(diào)節(jié)到在560nm處具有O．D．值0．45的用于凝集反應(yīng)的等體積抗原，該混合物進(jìn)行振搖。將微量滴定板的表面密封后，在37℃進(jìn)行敏化2小時(shí)。將該微量滴定板在4℃放置約18小時(shí)并評定凝集的出現(xiàn)。凝集抗體效價(jià)用相應(yīng)的顯示出完全凝集的樣品的最高稀釋度來表示。增強(qiáng)劑量注射后兩周，從每只母雞獲取的樣品的抗體效價(jià)為1280-5120，此時(shí)開始收集雞蛋。用蛋黃制備抗體將免疫的雞蛋清洗并消毒后，將蛋黃與蛋白分離開，將多個(gè)雞蛋的蛋黃合并，分成每8kg一組，并儲存于-20℃以下直到使用。如下進(jìn)行純化向作為起始物質(zhì)的7．5kg蛋黃中加入10倍量(重量)的蒸餾水以引起脫脂。向上清液中加入硫酸銨以產(chǎn)生40％飽和度。將該混合物攪拌并離心得到小丸。將該小丸溶于鹽水，在溶解和振搖的同時(shí)，在-20℃下逐漸加入乙醇使產(chǎn)生50％終濃度。在4℃離心后，將小丸溶于鹽水并過濾去除細(xì)菌，并冷凍干燥。結(jié)果，用7．5kg蛋黃得到了約15g淺黃白色粉末?？贵w的回收率為50％，IgG的純度為95％，含水量為2％。實(shí)驗(yàn)1該實(shí)驗(yàn)是為了研究蛋黃抗體粉末抑制Vero細(xì)胞毒素(VT1，VT2)的能力。利用Pirro等人(1995)的方法，如下進(jìn)行某些改進(jìn)后測定抑制Vero細(xì)胞毒素的能力。將1g抗體粉末溶于10ml無菌蒸餾水中，然后用PBS制成連續(xù)兩倍稀釋的溶液。向每孔中加入等體積的已調(diào)整到具有10 CD50毒素單位的維羅細(xì)胞毒素，在37℃下敏化60分鐘。然后向每孔中加入已調(diào)整到含有5×104細(xì)胞的維羅細(xì)胞懸液，在CO2恒溫箱中，在37℃下孵育96小時(shí)。用顯示出細(xì)胞毒素抑制作用的相應(yīng)最高稀釋度來表示抗毒素抗體效價(jià)。
蛋黃抗體粉末對VT1的中和抗體效價(jià)為2560，對VT2的為640。凝集抗體效價(jià)為20480。因此，所制得的蛋黃抗體粉末可中和兩種類型的Vero細(xì)胞毒素并可凝集細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)2在本實(shí)驗(yàn)中研究與細(xì)菌培養(yǎng)物混合的蛋黃抗體，以及其結(jié)合物用于無菌小鼠的EHEC感染模型時(shí)的功效，該無菌小鼠已口服接種了EHEC培養(yǎng)物使其感染。將這些小鼠分成4組，每組由10只4周大的無菌BALB／c雄性小鼠組成。在第I組中，每只小鼠口服溶于10ml無菌蒸餾水的1g從蛋黃制得的抗體粉末。第II組中的每只小鼠口服通過在37℃下在Briggs肝肉湯中培養(yǎng)18小時(shí)得到的人嗜酸乳桿菌(JCM1028)，短雙歧桿菌(JCM1192T)，和雙歧雙歧桿菌(JCM1209)的混合細(xì)菌培養(yǎng)物。第III組中的每只小鼠口服上述抗體溶液和混合培養(yǎng)物的1∶1混合物。第IV組中的每只小鼠口服無菌Briggs肝肉湯。每只小鼠每天的給藥量為0．5ml，一天一次，連續(xù)三天。
抗體或其他物質(zhì)首次給藥3小時(shí)后，用1×107CFU的EHEC T001(O157；H7)激發(fā)每只小鼠。激發(fā)后7天內(nèi)觀察臨床應(yīng)答。將仍存活和快死的小鼠處死。檢測每只小鼠結(jié)腸中EHEC細(xì)胞的數(shù)目并利用測定維羅細(xì)胞毒素的試劑盒檢測維羅毒素的存在。
表1顯示了給藥組和對照組中小鼠結(jié)腸中細(xì)胞的數(shù)目，出現(xiàn)的維羅細(xì)胞毒素，四肢麻痹情況(％)，以及死亡率。將給藥組與對照組進(jìn)行比較，III組(給予從雞蛋制得的抗體和細(xì)菌的混合培養(yǎng)物的結(jié)合物)的功效最高，I組(從雞蛋制得的抗體)有相當(dāng)高的功效。II組的功效較低。
值得注意的是，在第III組中，盡管結(jié)腸中的EHEC未完全消除，但只檢測到少量Vero細(xì)胞毒素。相信這是因?yàn)楸景l(fā)明的蛋黃抗體可有效地防止臨床癥狀(四肢麻痹)并降低死亡率。
由于在該實(shí)驗(yàn)中所用的從蛋黃制得的抗體粉末在體外中和了維羅細(xì)胞毒素，因此可以認(rèn)為小鼠體內(nèi)由EHEC的生長產(chǎn)生的Vero細(xì)胞毒素通過服用抗體得到了中和。另一方面，有報(bào)道說乳酸細(xì)菌在某種程度上具有在體外和體內(nèi)抑制EHEC生長和抑制維羅細(xì)胞毒素的活性。但是，從表1中可以看出，混合細(xì)菌培養(yǎng)物本身的作用不足。而混合培養(yǎng)物和本發(fā)明的特異性抗體的結(jié)合物可遏止因感染EHECO157引起的疾病，并顯著降低小鼠的死亡率。
表1在感染EHEC的小鼠中蛋黃抗體和混合細(xì)菌培養(yǎng)物的作用
由此可清楚地看出，用EHEC的整個(gè)細(xì)胞或其維羅毒素的類毒素作為抗原對母雞進(jìn)行免疫接種，用其產(chǎn)的蛋制得的特異性抗體在預(yù)防或治療EHEC感染，特別是EHEC O157感染中是有效的。該特異性抗體是利用雞蛋制備的，因此可通過簡單的方法來大量并廉價(jià)地生產(chǎn)特異性抗體，且所得的蛋黃抗體是安全和沒有副作用的。
權(quán)利要求
1．一種用于預(yù)防或治療由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的藥物組合物，包含作為活性成分的針對腸出血性大腸桿菌的特異性抗體，和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，該抗體是用以整個(gè)腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由該細(xì)菌產(chǎn)生的Vero毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。
2．一種用于預(yù)防或治療由腸出血性大腸桿菌O157引起的傳染病的藥物組合物，其包含作為活性成分的針對腸出血性大腸桿菌O157的特異性抗體和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，該特異性抗體是用以腸出血性大腸桿菌O157的滅活細(xì)胞作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的，其能夠特異性凝集該細(xì)菌細(xì)胞并具有抑制該細(xì)菌產(chǎn)生的維羅細(xì)胞毒素的活性。
3．一種用于預(yù)防或治療由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的藥物組合物，其包含(a)針對腸出血性大腸桿菌的特異性抗體，(b)至少一種選自乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌的細(xì)菌，和(c)藥學(xué)上可接受的載體和稀釋劑，該抗體是用以整個(gè)腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由該細(xì)菌產(chǎn)生的Vero毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。
4．按照權(quán)利要求3的藥物組合物，其中的腸出血性大腸桿菌是腸出血性大腸桿菌O157。
5．一種用于預(yù)防由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的食品，其含有針對腸出血性大腸桿菌的特異性抗體，該抗體是用以整個(gè)腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由該細(xì)菌產(chǎn)生的Vero毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。
6．一種用于預(yù)防由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的食品，其含有針對腸出血性大腸桿菌的特異性抗體，和至少一種選自乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌的細(xì)菌，該抗體是用以整個(gè)腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由該細(xì)菌產(chǎn)生的Vero毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。
7．按照權(quán)利要求5或6的食品，其中的腸出血性大腸桿菌是腸出血性大腸桿菌O157。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療由腸出血性大腸桿菌引起的傳染病的藥物組合物,和用于預(yù)防該疾病的食品。該組合物包含作為活性成分的針對腸出血性大腸桿菌的特異性抗體,該抗體是用以整個(gè)腸出血性大腸桿菌細(xì)胞或由該細(xì)菌產(chǎn)生的維羅(Vero)毒素的類毒素作為抗原進(jìn)行了免疫接種的母雞產(chǎn)的蛋制得的。至少一種選自乳酸細(xì)菌和雙歧細(xì)菌的細(xì)菌可以與上述抗體一起給藥。
文檔編號A61K39/40GK1203819SQ9810888
公開日1999年1月6日 申請日期1998年4月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月23日
發(fā)明者兒玉義勝, 橫山英明, 古賀泰裕, 田中和生, 相場勇志 申請人:株式會社源