專利名稱：具有生長激素釋放特性的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的化合物、包含它們的組合物，以及它們在治療因缺乏生長激素而導(dǎo)致的醫(yī)學(xué)病癥方面的用途。
背景技術(shù)：
生長激素是刺激所有能夠生長的組織生長的激素。此外，還已知生長激素對新陳代謝過程具有多種作用，例如刺激蛋白質(zhì)的合成和游離脂肪酸的動員，并使能量代謝由碳水化合物轉(zhuǎn)向脂肪酸的代謝。生長激素的缺乏可以導(dǎo)致多種嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)病癥，如侏儒癥。
垂體釋放生長激素。這種釋放是受到嚴(yán)密控制的，直接或間接地釋放多種激素和神經(jīng)遞質(zhì)。生長激素的釋放可以受生長激素釋放激素(GHRH)的激勵和生長激素抑制素的抑制。兩種情況下激素均由下丘腦釋放，但其作用主要由位于垂體中的特定受體調(diào)節(jié)。也描述了刺激垂體釋放生長激素的其它化合物。例如，精氨酸、L-3,4-二羥基苯基丙氨酸(L-多巴)、胰高血糖素、后葉加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶活化肽)、蠅蕈堿受體顯效劑和一種合成的六肽、GHRP(生長激素釋放肽)，通過直接作用于垂體或影響下丘腦的GHRH和/或生長激素抑制素的釋放，而釋放內(nèi)原性的生長激素。
在需要增加生長激素水平的疾病或病癥中，生長激素的蛋白質(zhì)性質(zhì)使除不經(jīng)胃腸給藥以外的任何給藥途徑都不適用。而且，其它直接起作用的天然促分泌素，如GHRH和PACAP，是更長的多肽，正是由于這種原因，所以優(yōu)選不經(jīng)胃腸給藥。
在此之前，已經(jīng)提出了某些化合物在增加哺乳動物生長激素水平方面的用途，例如在EP18072、EP83864、WO8302272、WO8907110、WO8901711、WO8910933、WO8809780、WO9118016、WO9201711、WO9304081、WO9413696、WO9517423、WO9514666、WO9615148、WO9622997、WO9635713、WO9700894、WO9722620、WO9723508、WO9740023和WO9810653中。
對于生長激素釋放化合物的組合物來說，其生長激素釋放效能和生物利用度是重要的。因此，本發(fā)明的目的是提供具有生長激素釋放特性的新穎化合物。而且，提供新穎的生長激素釋放化合物(生長激素促分泌劑)也是本發(fā)明的目的，該化合物是專一性和/或選擇性的，沒有或基本上沒有副作用，如釋放LH、FSH、TSH、ACTH、后葉加壓素、催產(chǎn)素、皮質(zhì)醇和/或催乳激素。提供具有良好口服生物利用度的化合物是本發(fā)明的又一目的。本發(fā)明的另一目的是提供具有較短血漿消除半衰期的化合物。本發(fā)明的更進一步的目的是提供同時具有良好口服生物利用度和較短血漿消除半衰期的化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供新穎的化合物，該化合物在標(biāo)準(zhǔn)的體外實驗條件下直接作用于垂體細胞，從中釋放生長激素。
這些生長激素釋放化合物可用作獨特的體外研究手段，以了解其中的生長激素的分泌在垂體水平上是如何調(diào)節(jié)的。
此外，本發(fā)明的生長激素釋放化合物還可以體內(nèi)給藥，以增加內(nèi)原性生長激素的釋放。
發(fā)明詳述因此，本發(fā)明涉及通式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式Ⅰ其中R1和R2獨立地為氫或C1-6-烷基，所述的烷基任選地被芳基取代；a和b獨立地為1或2；G為 或 J為 或 其中R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36獨立地為氫、鹵素、芳基、C1-6-烷基或C1-6-烷氧基；D為R7-NH-(CR8R9)p-(CH2)m-M-(CHR10)q-(CH2)n-其中R7、R8、R9和R10獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被鹵素、氨基、羥基或芳基取代；R7與R8或R7與R9或R8與R9可以任選地形成-(CH2)i-U-(CH2)j-，其中i和j獨立地為1或2，而U為-O-、-S-或價鍵；m和n獨立地為0、1、2或3；p和q獨立地為0或1；M為-CR11=CR11a-、亞芳基、-O-或-S-；R11和R11a獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被芳基取代；E為-CONR12R13，其中R12為C1-6-烷基；R13為雜芳基(hetaryl)或雜芳基取代的C1-6-烷基。
而且，式Ⅰ的化合物可以包括其任何旋光異構(gòu)體，該異構(gòu)體可以是分離的、純的或部分純化的旋光異構(gòu)體，或者其外消旋的混合物。只要出現(xiàn)一個或多個手性碳原子，這種手性中心就可以是R-和/或S-構(gòu)型，或R和S構(gòu)型的混合物。
此外，式Ⅰ的化合物可以具有一個或多個碳碳雙鍵，可能存在幾何異構(gòu)體，因此，本發(fā)明的范圍中還包括可能的立體異構(gòu)體(E或Z異構(gòu)體)，除非具體地指出某一特定的幾何異構(gòu)體。
在式Ⅰ化合物的一個實施方案中，R1為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，R2為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，a為1。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，b為1。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，G為 或 其中R27、R28、R29、R30和R31獨立地為氫、鹵素、芳基、C1-6-烷基或C1-6-烷氧基。一個實施方案中R27為氫。第二個實施方案中R28為氫。第三個實施方案中R29為氫。又一個實施方案中R30為氫。又一個實施方案中R31為氫。在上面式Ⅰ的化合物中，G優(yōu)選為苯基或萘基，尤其是2-萘基。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，J為 或 其中R32、R33、R34、R35和R36獨立地為氫、鹵素、芳基、C1-6-烷基或C1-6-烷氧基。一個實施方案中R32為氫。第二個實施方案中R33為氫。第三個實施方案中R34為氫。又一個實施方案中R35為氫。又一個實施方案中R36為氫。在上面式Ⅰ的化合物中，J優(yōu)選為萘基、噻吩基或苯基，尤其是苯基。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，D為R7-NH-(CR8R9)p-(CH2)m-M-(CHR10)q-(CH2)n-其中R7、R8、R9和R10獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被鹵素、氨基、羥基或芳基取代；
m和n獨立地為0、1、2或3；p和q獨立地為0或1；M為-CR11=CR11a-、芳基、-O-或-S-；R11和R11a獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被芳基取代。一個實施方案中R7為氫。第二個實施方案中R7為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。第三個實施方案中R8為氫。又一個實施方案中R8為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。又一個實施方案中R9為氫。又一個實施方案中R9為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。又一個實施方案中R10為氫。又一個實施方案中R10為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。又一個實施方案中n為0。又一個實施方案中q為0。又一個實施方案中m為1。又一個實施方案中p為1。又一個實施方案中M為-CR11=CR11a-。又一個實施方案中M為-CH=CH-。又一個實施方案中M為-C(CH3)=CH-。又一個實施方案中R11為氫。又一個實施方案中R11為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。又一個實施方案中R11a為氫。又一個實施方案中R11a為C1-6-烷基，如C1-4-烷基，特別是甲基。在上面式Ⅰ的化合物中，D優(yōu)選為NH2-C(CH3)2-CH2-CH=CH-，尤其是NH2-C(CH3)2-CH2-CH=CH-的E型異構(gòu)體。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，E為-CONR12R13，其中R12為C1-6-烷基；R13為雜芳基(hetaryl)或雜芳基取代的C1-6-烷基。一個實施方案中R12為C1-4-烷基，特別是甲基。第二個實施方案中R13為吡啶基取代的C1-6-烷基，如吡啶基取代的C1-4-烷基，尤其是吡啶基取代的乙基。第三個實施方案中R13為2-吡啶基取代的乙基。又一個實施方案中R13為4-吡啶基取代的乙基。在上面式Ⅰ的化合物中，E優(yōu)選為CON(CH3)R13，其中R13為2-(4-吡啶基)-乙基或2-(2-吡啶基)-乙基。
在式Ⅰ化合物的另一個實施方案中，D為NH2-C(CH3)2-CH2-CH=CH-；而且E為CON(CH3)R13，其中R13為吡啶基取代的C1-6-烷基。
本文中所描述的兩種或多種實施方案的任何可能的組合，均包括在本優(yōu)選的本發(fā)明的式Ⅰ化合物是(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(2-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基)氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]酰胺及其藥學(xué)上可接受的鹽 (2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-(2-(4-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基]酰胺及其藥學(xué)上可接受的鹽。 一般方法下面圖解Ⅰ中闡述的方法，絕對不是對本發(fā)明的任何限制，而只應(yīng)視為如何制備本發(fā)明化合物的指導(dǎo)。圖解Ⅰ 式Ⅰ型的化合物，可以通過下面類型的胺(其中t為0、1、2、3、4、5或6) 與適宜的受保護的酸在合適溶劑如N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中偶聯(lián)來合成，反應(yīng)中使用或不使用如1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-氮雜苯并三唑或3-羥基-1,2,3-苯并三唑-4(3H)-酮等的偶聯(lián)劑，和如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或二異丙基碳二亞胺等試劑(參考圖解Ⅰ)。由此得到的產(chǎn)物可以于所述酸的氮上脫去保護基團，所用的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，并記載于如T.W.Greene和P.G.M.Wuts的Protective Groups inOrganic Synthesis(有機合成中的保護基團)，第二版，Wiley,New York的文獻中。得到的產(chǎn)物再與適宜的受保護的酸在合適溶劑如N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中偶聯(lián)，使用或不使用如1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-氮雜苯并三唑或3-羥基-1,2,3-苯并三唑-4(3H)-酮等的偶聯(lián)劑，和如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或二異丙基碳二亞胺的試劑?？梢匀コa(chǎn)物上的所有保護基團，所用的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，并記載于如T.W.Greene和P.G.M.Wuts的Protective Groups in Organic Synthesis(有機合成中的保護基團)，第二版，Wiley,New York的文獻中。
式Ⅰ的化合物顯示出抗酶致蛋白質(zhì)水解降解性能的改善，因為它們是非天然的化合物，特別是因為天然的酰胺鍵被類似的非天然酰胺鍵所代替。與已知的激素釋放肽相比，本發(fā)明的化合物的抗蛋白質(zhì)水解降解性能增加了；與現(xiàn)有文獻中提出的肽相比，可預(yù)料到這種抗蛋白質(zhì)水解降解性能的增加會提高它們的生物利用度。
在上述結(jié)構(gòu)式和整個說明書中，下面的術(shù)語具有指定的意義上面規(guī)定的C1-6-烷基、C1-6-亞烷基、C1-4-烷基或C1-4-亞烷基基團，包括那些具有指定長度的直鏈、支鏈或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基或亞烷基基團。直鏈烷基的實例是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基及其相應(yīng)的二價部分，如亞乙基。支鏈烷基的實例是異丙基、仲丁基、叔丁基、異戊基和異己基及其相應(yīng)的二價部分，如亞異丙基。環(huán)烷基的實例是C3-6-環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基及其相應(yīng)的二價部分，如亞環(huán)丙基。
上面規(guī)定的C1-6-烷氧基基團，包括那些具有指定長度的直鏈、支鏈或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷氧基基團。直鏈烷氧基的實例是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。支鏈烷氧基的實例是異丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、異戊氧基和異己氧基。環(huán)烷氧基的實例是C3-6-環(huán)烷氧基，如環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基。
本文中，術(shù)語“芳基”包括一價的碳環(huán)芳環(huán)部分，既可以是單環(huán)或雙環(huán)的，也可以是多環(huán)的，例如選自苯基和萘基，可任選地被一個或多個C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、鹵素、氨基或芳基取代。
本文中，術(shù)語“亞芳基”包括二價的碳環(huán)芳環(huán)部分，既可以是單環(huán)或雙環(huán)的，也可以是多環(huán)的，例如選自亞苯基和亞萘基，可任選地被一個或多個C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、鹵素、氨基或芳基取代。
本文中，術(shù)語“雜芳基”包括一價的雜環(huán)芳環(huán)部分，既可以是單環(huán)或雙環(huán)的，也可以是多環(huán)的，例如選自吡啶基、1-H-四唑-5-基、噻唑基、咪唑基、吲哚基、嘧啶基、噻二唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻吩基、喹啉基、吡嗪基或異噻唑基，可任選地被一個或多個C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、鹵素、氨基或芳基取代。
術(shù)語“鹵素”包括氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)和碘(I)。
本發(fā)明的化合物可以任選地為其藥學(xué)上可接受的鹽，如式Ⅰ化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，包括式Ⅰ的化合物與無機酸或有機酸反應(yīng)生成的鹽，所述的無機酸和有機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、乙酸、磷酸、乳酸、蘋果酸、馬來酸、苦杏仁酸、苯二甲酸、檸檬酸、戊二酸、葡萄糖酸、甲磺酸、水楊酸、琥珀酸、酒石酸、苯磺酸、三氟乙酸、氨基磺酸或富馬酸和/或水。
式Ⅰ的化合物可以以藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的形式給藥，如果合適，也可以以堿金屬或堿土金屬或低級烷基銨鹽的形式給藥。據(jù)信，這種鹽形式顯示出幾乎與游離堿形式同級別的活性。
另一方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，包括作為活性成分的通式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物可以通過常規(guī)的方法制備，如Remington′s Pharmaceutical Sciences,1985或Remington:The Science andPractice of Pharmacy,19th Edition(1995)中所描述的方法。所述的組合物可以呈通常的劑型，例如膠囊、片劑、氣溶膠、溶液、懸浮液或局部涂藥。
所使用的藥物載體或稀釋劑可以是常規(guī)的固體或液體載體。固體載體的實例是乳糖、石膏粉、蔗糖、環(huán)糊精、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯樹膠、硬脂酸鎂、硬脂酸或纖維素的低級烷基醚。液體載體的實例是糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯或水。
同樣地，所述的載體或稀釋劑可以包括本領(lǐng)域已知的任何持續(xù)釋放的材料，如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯，單獨或與蠟混合使用。
如果固體載體用于口服給藥，制劑可以制成片劑，以粉末或小片的形式置于硬明膠膠囊中的膠囊劑，也可以是糖錠或錠劑的形式。固體載體的用量變化很大，但通常為約25毫克至1克。如果使用液體載體，制劑可以是糖漿、乳劑、軟質(zhì)明膠膠囊或無菌注射液，如含水或不含水的液體懸浮液或溶液。
典型的由普通壓片方法制備的片劑，可以包含核心活性化合物(游離化合物或其鹽) 10毫克膠體二氧化硅(Aerosil)1.5毫克微晶纖維素(Avicel) 70毫克改性羧甲基纖維素鈉(Ac-Di-Sol)7.5毫克硬脂酸鎂包衣HPMC 約9毫克*Mywacett 9-40 T約0.9毫克*乙?；瘑胃视王?，用作薄膜包衣的增塑劑。
對于鼻腔給藥，制劑可以包含溶解或懸浮于液體載體、特別是含水載體中的式Ⅰ的化合物，應(yīng)用于氣溶膠。所述的載體可以包含添加劑，如增溶劑，例如丙二醇，表面活性劑，吸收強化劑如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精、或防腐劑如對羥基苯甲酸酯。
已經(jīng)證實，通式Ⅰ的化合物能夠在體內(nèi)釋放內(nèi)原性生長激素。因此，所述的化合物可以用于治療需要提高血漿生長激素水平的病癥，如用于生長激素缺乏的人群，或用于年紀(jì)較大的病人，或用于家畜。此外，通式Ⅰ的化合物具有高的口服功效。
于是，本發(fā)明特別涉及一種藥物組合物，用來刺激垂體釋放生長激素，所述的組合物包括作為活性成分的通式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
另一方面，本發(fā)明涉及刺激垂體釋放生長激素的方法，該方法包括將有效量的通式Ⅰ的化合物或藥學(xué)上可接受的鹽，給藥于需要的患者。
再一方面，本發(fā)明涉及通式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制備刺激垂體釋放生長激素的藥物。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知，人類生長激素的現(xiàn)行和潛在的用途是多種多樣的。這樣，式Ⅰ的化合物可以給藥以刺激垂體釋放生長激素，因而具有與生長激素本身相似的效果和用途。式Ⅰ的化合物可用于刺激年紀(jì)較大者體內(nèi)生長激素的釋放，預(yù)防糖皮質(zhì)激素的分解代謝的副效應(yīng)，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥，治療慢性疲勞綜合癥(CFS)，治療急性疲勞綜合癥和選擇性手術(shù)之后的肌肉損失，激勵免疫系統(tǒng)，加速傷口愈合，加速骨折修復(fù)，加速復(fù)雜骨折如分散性骨折的骨生成，治療骨折繼發(fā)性消瘦，治療發(fā)育遲緩，治療因腎衰竭或腎機能不全而導(dǎo)致的發(fā)育遲緩，治療心肌病，治療與慢性肝疾病有關(guān)的消瘦，治療血小板減少癥，治療與克羅恩氏(Crohn)病相關(guān)的發(fā)育遲緩，治療短腸綜合癥，治療與慢性的障礙性肺部疾病(COPD)有關(guān)的消瘦，治療與移植有關(guān)的并發(fā)癥，治療生理性身材矮小，包括生長激素缺乏的兒童和與慢性疾病有關(guān)的身材矮小，治療肥胖癥和與肥胖癥有關(guān)的發(fā)育遲緩，治療厭食癥，治療與Prader-Willi綜合癥和Turner綜合癥有關(guān)的發(fā)育遲緩；增加具有局部生長激素遲鈍綜合癥的病人的生長速度，加速燒傷病人的康復(fù)和減少其住院治療；治療子宮內(nèi)的發(fā)育遲緩、骨骼發(fā)育不良、皮質(zhì)醇過多癥和Cushing綜合癥；誘導(dǎo)脈動性的生長激素的釋放；代替受壓抑病人的生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良、Noonan綜合癥、精神分裂癥、抑郁癥、Alzheimer疾病、遲發(fā)的傷口愈合和社會心理的喪失，治療與肺部功能障礙和呼吸器依賴有關(guān)的分解代謝；治療心力衰竭或相關(guān)的血管功能障礙，治療損傷的心臟功能，治療或預(yù)防心肌梗死，降低血壓，防止心室功能紊亂或預(yù)防再灌注；治療成人的慢性透析；降低大手術(shù)之后的蛋白質(zhì)代謝反應(yīng)，降低因慢性疾病如癌癥或愛滋病而引起的惡病體質(zhì)和蛋白質(zhì)損失；治療高胰島素血癥包括胰島細胞增殖癥，輔助治療排卵誘導(dǎo)；刺激胸腺的發(fā)育并預(yù)防與年齡相關(guān)的胸腺功能的衰退，治療免疫反應(yīng)受到抑制的病人；治療sarcopenia，治療與愛滋病有關(guān)的消瘦；提高肌肉的力量、靈活性，維持年紀(jì)較大的虛弱者的皮膚厚度、新陳代謝的自動調(diào)節(jié)和腎臟的自身穩(wěn)定，刺激成骨細胞、骨再造和軟骨的生長；調(diào)節(jié)食物的攝取；刺激寵物的免疫系統(tǒng)和治療寵物的老化病癥，促進家畜的發(fā)育和激勵羊毛的生長，增加家畜的奶產(chǎn)量，治療新陳代謝綜合癥(綜合癥X)，治療哺乳動物如人的抗胰島素癥，包括NIDDM，治療心臟的抗胰島素癥，改善睡眠質(zhì)量并調(diào)整由于衰老而造成的生長激素相對過少的病癥，因為生長激素在REM睡眠中高增加，在REM潛伏期下降，治療低體溫癥，治療與老化有關(guān)的虛弱，治療充血性的心衰竭，治療髖部骨折，治療具有較低T4/T8細胞比的個體的免疫缺陷，治療肌肉萎縮癥，治療年紀(jì)較大者的肌肉與骨骼的損傷，強化蛋白質(zhì)激酶B(PKB)的活性，提高總體性的肺功能，治療睡眠障礙，治療與哮喘有關(guān)的發(fā)育遲緩，治療與青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的發(fā)育遲緩，和治療與全身(systic)纖維化有關(guān)的發(fā)育遲緩。
對于上面指出各種病癥，給藥量將取決于所使用的式Ⅰ化合物，取決于給藥方式和所需要的療法。但是，一般給病人和動物給藥每日0.0001至100毫克/千克體重的劑量，以有效地釋放內(nèi)原性生長激素。另外，按上述劑量水平給藥時，式Ⅰ的化合物沒有或基本上沒有副作用，如釋放LH、FSH、TSH、ACTH、后葉加壓素、催產(chǎn)素、皮質(zhì)醇和/或催乳激素等的副作用。通常，適于通過口、鼻、肺或皮膚給藥的劑量，包含約0.0001至約100毫克、優(yōu)選約0.001至約50毫克的式Ⅰ化合物，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明的化合物的劑量宜為0.01-500毫克/天，例如約5至50毫克，如給患者如人給藥每劑量10毫克的藥品。
任選地，本發(fā)明的藥物組合物可以包含一種式Ⅰ的化合物和一種或多種具有不同活性的化合物，如抗生素或其它藥物活性物料。
給藥途徑可以是有效傳遞所述活性化合物至作用的合適或所需位置的任何途徑，如通過口、鼻、肺、皮膚或胃腸之外的途徑給藥，優(yōu)選通過口腔的途徑給藥。
除藥物上的用途之外，式Ⅰ的化合物可以用作研究調(diào)節(jié)生長激素釋放的體外手段。
式Ⅰ的化合物還可以用作評價垂體釋放生長激素能力的體內(nèi)手段。例如，可以化驗給藥這些化合物前后所取的血清樣品中的生長激素。對比每種血清樣品中的生長激素，便會直接確定該病人的垂體釋放生長激素的能力。
式Ⅰ的化合物可以給藥于有重要商業(yè)價值的動物，以便提高它們的生長速度和限度，增加奶和羊毛的產(chǎn)量。
促進生長激素分泌的式Ⅰ化合物，可以進一步與其它促分泌劑，如GHRP(2或6)、GHRH及其類似物、生長激素及其類似物或生長調(diào)節(jié)素包括IGF-1和IGF-2，結(jié)合起來使用。
藥理方法可以在體外評價式Ⅰ化合物用于大鼠垂體原始培養(yǎng)物釋放生長激素的功效和潛能，而且這種評價可按下述方法進行。
大鼠垂體細胞，是按1985年O.Sartor等人的內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)116中925-927頁的改進方法分離的。雄性白化Sprague-Dawley大鼠(250±25克)，自M llegaard,Lille Skensved,Denmark購得。大鼠分籠圈養(yǎng)(4只/籠)，并置于12小時光照周期的房間中。室溫19-24℃，濕度為30-60％。
殺死大鼠并分割出垂體。取出神經(jīng)中間葉，剩下的組織立即置于冰冷卻的分離緩沖劑中(Gey介質(zhì)(Gibco 041-04030)，其補充了0.25％的D-葡萄糖、2％的非基本的氨基酸(Gibco 043-01140)和1％牛血清蛋白(BSA)(SigmaA-4503))。將所述的組織切成小片，并轉(zhuǎn)移至分離緩沖劑中，所述緩沖劑補充了3.8毫克/毫升的胰蛋白酶(Worthington #3707 TRL-3)和330毫克/毫升的脫氧核糖核酸酶(Sigma D-4527)。該混合物于70轉(zhuǎn)/分鐘和37℃下，在95/5％的O2/CO2氣氛中培養(yǎng)30分鐘。然后用上述緩沖劑沖洗該組織三次。其后，用標(biāo)準(zhǔn)的巴斯德吸管將該組織吹打成單個分散的細胞。分散之后，通過尼龍過濾器(160mm)過濾所述的細胞，去除未消化的組織。用補充了胰蛋白酶抑制劑(0.75毫克/毫升，Worthington #2829)的分離緩沖劑沖洗該細胞懸浮液三次，最后將細胞再懸浮于培養(yǎng)介質(zhì)中；向DMEM(Gibco 041-01965)中補充25mM的HEPES(Sigma H-3375)、4mM的谷氨酰胺(Gibco 043-05030H)、0.075％的碳酸氫鈉(Sigma S-8875)、0.1％的非基本的氨基酸、2.5％胎牛血清(FCS,Gibco 011-06290)、3％的馬血清(Gibco 034-06050)、10％的新鮮大鼠血清、1nM的T3(Sigma T-2752)和40毫克/升pH為7.3的地塞米松(Sigma D-4902)，至2×105個細胞/毫升的密度。將所述的細胞接種于微滴板(Nunc.Denmark)上，200ml/孔，在37℃和8％CO2下培養(yǎng)三天。
化合物試驗培養(yǎng)之后，細胞用刺激緩沖劑(Hanks Balaliced Salt Solution,Gibco 041-04020)(Gibco 041-04020)沖洗兩次，所述緩沖劑補充了1％的BSA(Sigma A-4503)、0.25％的D-葡萄糖(Sigma G-5250)和25mM的HEPES(Sigma H-3375,pH7.3)的刺激緩沖劑，并在37℃下預(yù)培養(yǎng)1小時。將所述的緩沖劑與90毫升的刺激緩沖劑(37℃)交換。加入10毫升試驗化合物，培養(yǎng)板在37℃和5％CO2下培養(yǎng)15分鐘。傾析出介質(zhì)，并在rGH SPA測試裝置上分析GH的含量。
在10pM至100mM的劑量范圍內(nèi)測試全部的化合物。用Hill公式建立劑量-反應(yīng)的關(guān)系(圖P,Biosoft)。所述的功效(釋放出的最大GH,Emax)用GHRP-6的Emax的百分數(shù)來表示。所述的潛能(EC50)按引起GH釋放的最大刺激的一半時的濃度來確定。
可以用下述步驟評價式Ⅰ化合物的代謝穩(wěn)定性。
按1毫克/毫升的濃度，將化合物溶解于水中。將25毫升該溶液加到175毫升相應(yīng)的酶溶液中(使酶∶基質(zhì)的比例(w/w)接近1∶5)。將得到的溶液在37℃下過夜。使用流注式電噴霧質(zhì)譜(ESMS)，通過選擇的分子離子監(jiān)測技術(shù)，并對照相應(yīng)的空白樣品，分析10毫升不同的降解溶液。如果信號較空白樣下降超過20％，余下的溶液就用HPLC和質(zhì)譜來分析，以便精確地確定降解的程度和位置。
穩(wěn)定性試驗中包括幾種標(biāo)準(zhǔn)肽(ACTH 4-10,血管緊縮素1-14和胰高血糖素)，以便確認不同溶液降解肽的能力。
所述的標(biāo)準(zhǔn)肽(血管緊縮素1-14,ACTH 4-10和胰高血糖素)購自Sigma,MO,USA。
所述的酶(胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，彈性蛋白酶，氨基肽酶M和羧肽酶Y與B)全部購自Boehringer Mannheim GmbH(Mannheim,Germany)。
胰酶混合物胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶于pH為8.0的100nM碳酸氫銨中(所有的濃度均為0.025毫克/毫升)。
羧肽酶混合物羧肽酶Y和B于pH為4.5的100nM乙酸銨中(所有的濃度均為0.025毫克/毫升)。
氨基肽酶M溶液氨基肽酶M(0.025毫克/毫升)于pH為8.0的100nM碳酸氫銨中。
用兩種不同的質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析。一種是Sciex APIⅢ型的三重四極LC-MS儀(Sciex instrument,Thomhill,Ontario)，裝有電噴霧離子源，另一種是Bio-lon 20型的飛行時間等離子體解吸質(zhì)譜儀(Bio-lon Nordic AB,Uppsala,Sweden)。
所述化合物(降解前后)的定量化是在APIⅢ儀器上完成的，使用了所述帶有分析物流動注入的分子離子的單離子監(jiān)測設(shè)備。所述的液體(甲醇∶水為1∶1)流速被ABI 140B型的HPLC單元(Perkin-Elmer Applied BiosystemsDivision,Foster City,CA)控制為100毫升/分鐘。將儀器參數(shù)設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)的操作條件，而SIM的監(jiān)測用最強的分子離子(大多數(shù)情況下相當(dāng)于帶有雙倍電荷的分子離子)來進行。
降解產(chǎn)物的鑒別還使用了標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置的等離子體解吸質(zhì)譜(PDMS)，將樣品施用于涂敷了硝酸纖維素的靶上和儀器按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定。由此所測得的質(zhì)量的精確度一般優(yōu)于0.1％。
用HY-TACH C-18型的4.6×105毫米的逆相HPLC柱(Hewlett-PackardCompany,Palo Alto,CA)來完成降解產(chǎn)物的分離，所述的HPLC柱帶有標(biāo)準(zhǔn)的己腈∶TFA分離梯度。所使用的HPLC系統(tǒng)是HP 1090M(Hewlett-PackardCompany,Palo Alto,CA)。
+穩(wěn)定的(在降解溶液中24小時之后的SIM信號降低小于20％)-不穩(wěn)定(在降解溶液中24小時之后的SIM信號降低大于20％)這里所描述的任何新穎特性或特性的組合，都是本發(fā)明所必不可少的。
實施例在下面的實施例中，進一步闡述式Ⅰ化合物和含式Ⅰ化合物的制劑的制備方法，但是這些實施例不是對本發(fā)明的限制。
化合物的結(jié)構(gòu)由元素分析(MA)和核磁共振(NMR)或質(zhì)譜(MS)來確定。NMR位移(δ)以百萬分之若干份(ppm)的形式給出，而且只給出選定峰的NMR位移。mp為熔點，單位是℃。柱色譜分析，用W.C.Still等人于J.Org.Chem.1978,43,2923-2925中所描述的方法，于硅膠60上進行。用作原料的化合物，或者是已知的化合物，或者是通過本身是已知的方法可以容易制備的化合物。
HPLC-分析方法A1RP-分析用UV檢測來進行，即在218TP54型4.6mm×250mm 5m C-18的二氧化硅柱子(The Seperations Group,Hesperia)上于214、254、276和301納米處進行UV檢測，所述的柱子以1毫升/分鐘的速度于42℃洗脫。該柱子用5％的己腈在含有0.1M的硫酸銨的緩沖劑中的溶液來平衡，并用4M的硫酸調(diào)節(jié)所述緩沖劑的pH至2.5。樣品注入之后，按相同緩沖劑中5％至60％的乙腈梯度于50分鐘內(nèi)洗脫樣品。
方法B1RP-分析用UV檢測來進行，即在218TP54型4.6mm×250mm 5m C-18的二氧化硅柱(The Seperations Group,Hesperia)上于214、254、276和301納米處進行UV檢測，所述的柱子以1毫升/分鐘的速度于42℃洗脫。該柱子用0.1％的THA水溶液中的5％的(己腈+0.1％THA)來平衡。樣品注入之后，按相同含水緩沖劑中5％至60％的(己腈+0.1％THA)梯度于50分鐘內(nèi)洗脫樣品。
縮寫TLC薄層色譜DMSO二甲亞砜min分鐘h小時Boc叔丁氧基羰基DMF二甲基甲酰胺THF四氫呋喃EDAC鹽酸N-甲基-N′-二甲基氨基丙基碳化二亞胺HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑DIEA二異丙基乙胺THA三氟乙酸結(jié)構(gòu)單元下面實施例中所使用的N-甲基化的氨基酸，按Can.J.Chem.1977,55,906中的制備方法制備。
3-羥基-1,1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯 在0℃，將氯甲酸乙酯(1.10ml,11.5mmol)滴加到3-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基丁酸(2.50g,11.5mmol)和三乙胺(1.92ml,13.8mmol)的四氫呋喃(10ml)溶液中。將該溶液在0℃攪拌40分鐘。濾出所生成的沉淀并用四氫呋喃(20ml)洗滌。立即將濾液冷卻至0℃。滴加2M的硼氫化鋰的四氫呋喃(14.4ml,28.8mmol)溶液。將該溶液在0℃攪拌2小時，然后在4小時的期間內(nèi)加熱至室溫。將它冷卻至0℃。小心地加入甲醇(5ml)。加入1N的鹽酸(100ml)。用乙酸乙酯萃取該溶液(2×100ml,3×50ml)。用飽和的碳酸氫鈉溶液(100ml)洗滌合并的有機層，并通過硫酸鎂干燥。真空中除去有機溶劑。粗產(chǎn)品于用1∶2乙酸乙酯/庚烷洗脫的硅膠柱(110g)上進行色譜分離，得到1.84g的3-羥基-1,1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.33(s,6H)；1.44(s,9H)；1.88(t,2H)；1.94(br,1H)；3.75(q,2H)；4.98(br,1H)。
3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁醛 將DMSO(1.22ml,17.2mmol)加到-78℃的草酰氯(1.1ml,12.9mmol)二氯甲烷(15ml)溶液中。在-78℃下攪拌該混合物15分鐘。在15分鐘的時間內(nèi)，滴加完3-羥基-1,1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(1.75ml,8.6mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。將該溶液在-78℃下再攪拌15分鐘。加入三乙胺(6.0ml,43mmol)。將該溶液在-78℃下再攪拌5分鐘，然后加熱至室溫。用二氯甲烷(100ml)稀釋該溶液，并用1N的鹽酸(100ml)萃取。用二氯甲烷(50ml)萃取水相。合并有機層，用飽和的碳酸氫鈉溶液(100ml)洗滌，然后用硫酸鎂干燥。真空中除去有機溶劑。粗產(chǎn)品通過用1∶3乙酸乙酯/庚烷洗脫的硅膠柱色譜(140g)純化，得到1.10g的3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁醛。MHz-1H-NMR(CDCl3):δ1.39(s,6H)；1.45(s,9H)；2.85(d,2H)；4.73(br.1H)；9.80(t,1H)。
(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯 將膦酰乙酸三乙酯(triethylphosphonoacetate,1.96ml,9.8mmol)溶解于四氫呋喃(30ml)。加入叔丁醇鉀(1.10g,9.8mmol)。將該溶液在室溫下攪拌40分鐘。加入3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁醛(1.10g,5.5mmol)的四氫呋喃(6ml)溶液。將該溶液在室溫下攪拌75分鐘。用乙酸乙酯(100ml)和1N的鹽酸(100ml)稀釋該溶液。將兩相分離。用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水相。合并有機相，用飽和的碳酸氫鈉溶液(60ml)洗滌，然后用硫酸鎂干燥。真空中除去有機溶劑。粗產(chǎn)品通過用1∶4乙酸乙酯/庚烷洗脫的硅膠柱(90g)色譜純化，得到1.27g的(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.30(s,6H)；1.30(t,3H)；1.46(s,9H)；2.62(d,2H)；4.27(q,2H)；4.42(br,1H)；5.88(d,1H)；6.94(td,1H)。(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸 將(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯(1.233g,4.54mmol)溶解于二噁烷(20ml)。加入固體的氫氧化鋰(0.120g,5.00mmol)。加水(10ml),直至溶液達到澄清為止。室溫下攪拌該溶液16小時。用水(70ml)稀釋該溶液，并用叔丁基甲基醚(2×100ml)萃取。水相用1N的硫酸氫鈉溶液(pH=1)酸化，然后用叔丁基甲基醚(3×70ml)萃取。合并有機相，并用硫酸鎂干燥。真空中除去有機溶劑，得到1.05g的(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸。粗產(chǎn)品用于進一步的合成。1H-NMR(DMSO d6):δ1.15(s,6H)；1.35(s,9H)；2.53(d,2H)；5.75(d,1H)；6.57(br,1H)；6.75(td,1H)；12.15(s,1H)。
步驟3N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯 將(2R)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(11.2g,34mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(5.2g,38mmol)和鹽酸N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亞胺(6.9g,36mmol)溶解于二氯甲烷(100ml)。攪拌反應(yīng)混合物15分鐘。加入乙基二異丙基胺(7.0ml,41mmol)。加入溶解于二氯甲烷(20m1)中的(2R)-N-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基-N-(2-(2-吡啶基)乙基)丙酰胺(7.9g,27mmol)。攪拌反應(yīng)混合物16小時。將反應(yīng)混合物加到氨基甲基樹脂(17.3g,13.5mmol)中。攪拌反應(yīng)混合物6小時。過濾反應(yīng)混合物。用飽和的碳酸氫鈉水溶液(2×150ml)洗滌有機層。用硫酸鎂干燥有機層。真空中除去溶劑。粗產(chǎn)品通過快速硅膠(400g)色譜純化，用乙酸乙酯作洗脫劑，得到14.9g的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.07,1.15,1.33和1.40(全s，9H)；1.80-3.75(m，共17H)；5.00,5.35,5.59,5.70和5.85(m，共2H)；6.85-7.80(m，共15H)；8.40-8.57(m，共1H)。
步驟4(2R)-N-甲基-2-(甲基氨基)-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}-3-(2-萘基)丙酰胺 將N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(14.9g,24.5mmol)溶解于二氯甲烷(75ml)。將三氟乙酸(75ml,0.978mol)加到攪拌的溶液中。攪拌反應(yīng)混合物40分鐘。真空中除去有機溶劑。將產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(50ml)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40ml)。用固體碳酸氫鈉中和該混合物。加入二氯甲烷(100ml)，并用二氯甲烷(2×150ml)萃取水相。合并有機層，并用硫酸鎂干燥。真空中除去溶劑，得到11.9g的(2R)-N-甲基-2-(甲基氨基)-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}-3-(2-萘基)丙酰胺。1H-NMR(CDCl3):δ1.77,1.87和d1.97(全s，共4H)；2.60(s,3H)；2.70-3.20(m,共9H)；3.52,3.70和d4.10(t,m和dm，共2H)；5.72-5.89(m,1H)；6.90-7.80(m，共15H)；8.50(dd,1 H).
步驟5((3E)-1,1-二甲基-4-{N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯
將(2E)5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(2.87g,11.8mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(1.6g,11.8mmol)和鹽酸N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亞胺(2.26g,11.8mmol)溶解于二氯甲烷(30ml)。攪拌反應(yīng)混合物15分鐘。加入乙基二異丙基胺(2.0ml,11.8mmol)。加入溶解于二氯甲烷(10ml)中的(2R)-N-甲基-2-(甲基氨基)-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}-3-(2-萘基)丙酰胺(6.0g,11.8mmol)。攪拌反應(yīng)混合物16小時。用飽和的碳酸氫鈉水溶液(100ml)洗滌反應(yīng)混合物。水相用二氯甲烷(100ml)萃取。合并的有機層用硫酸鎂干燥。真空中除去溶劑。粗產(chǎn)品通過快速硅膠(400g)色譜純化，用乙酸乙酯作洗脫劑，得到5.28g的((3E)-1,1-二甲基-4-{N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲?；鶀丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.17-1.29(m,6H)；1.40(s,9H)；2.40-3.10(m，共16H)；3.37-3.75(m，共3H)；4.40(br m,1H)；5.55-5.37(m，共2H)；6.03-6.19(m,1H)；6.70-7.80(m，共15H)；8.36-8.55(m，共1H)。
步驟6將((3E)-1,1-二甲基-4-{N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲?；鶀丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(5.28g,7.2mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)。將該溶液冷卻至-10℃。將三氟乙酸(50ml)加到攪拌的溶液中。于-10℃下攪拌反應(yīng)混合物45分鐘。將反應(yīng)混合物加到冰、碳酸氫鈉和水的溶液中。用碳酸氫鈉中和反應(yīng)混合物。加入二氯甲烷(400ml)。用二氯甲烷(300ml)萃取水相。合并的有機層用硫酸鎂干燥。在真空中除去溶劑。粗產(chǎn)品通過快速硅膠(40g)色譜純化，用15％的7％銨的乙醇溶液于二氯甲烷中的溶液作洗脫劑，得到3.2g的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3):δ0.80-1.20(m，共6H)；2.05-3.10(m，共17H)；3.25-3.70(m，共3H)；5.62,5.70和d5.85(m,m和dm，共2H)；6.03-6.17(m,1H)；6.80-7.78(m，共15H)；8.38-8.58(m,1H)MS:634.2
HPLC:28.243分鐘28.963分鐘對于生物學(xué)試驗，所述的標(biāo)題化合物通過冷凍干燥法用0.5M的乙酸溶液(100ml)轉(zhuǎn)化成它的乙酸鹽。
實施例2(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-(2-(4-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]酰胺 該標(biāo)題化合物按實施例1的方法(步驟3除外，見下文)，用4-[2-(甲基氨基)乙基]吡啶、(2R)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基氨基)-3-苯基丙酸、(2R)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸和(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸制備。1H-NMR(CDCl3):δ1.15(m，共6H)；1.95-3.70(m，共20H)；5.59,5.88和d6.15(全m，共3H)；6.78-8.56(m，共16H)。
MS:634.4HPLC:27.597分鐘28.949分鐘步驟3N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯 將(2R)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(1.33g,4mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(549mg,4mmol)和鹽酸N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亞胺(775mg,4mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)。攪拌反應(yīng)混合物15分鐘。加入乙基二異丙基胺(0.692ml,4mmol)。加入溶解于二氯甲烷(15ml)中的(2R)-N-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基-N-(2-(2-吡啶-4-基)乙基)丙酰胺(1.2g,4mmol)。攪拌反應(yīng)混合物16小時。加入二氯甲烷(100ml)。用飽和的碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌有機層。用二氯甲烷(2×50ml)萃取水相。合并的有機層用硫酸鎂干燥。真空中除去溶劑。粗產(chǎn)品通過快速硅膠(40g)色譜純化，用乙酸乙酯作洗脫劑，得到1.16g的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)氨基甲酰基]-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。
對比例將實施例1的化合物與WO9723508所公開的實施例408中的化合物對比。結(jié)果如下化合物結(jié)構(gòu)口服生物利用度血漿半衰期Fpo[％] T1/2[h]
可以看出，與WO9723508中的實施例408相比，實施例1的化合物顯示出更好的口服利用度和較短的血漿半衰期。
藥物代謝動力學(xué)數(shù)據(jù)是通過下列方法得到的。
用禁食的獵犬研究試驗化合物的藥物代謝動力學(xué)數(shù)據(jù)。
試驗化合物的5％葡萄糖溶液，通過靜脈和口腔給藥的間隔為一個星期。
給藥之前(計時為0)，和在給藥之后0.08、0.25、0.50、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0立即采集血樣。
血漿樣品凍(＜-18℃)起來貯存，待分析。
帶有固相萃取的HPLC方法和UV檢測法，用于確定血漿中化合物的含量。
化合物的藥物代謝動力學(xué)參數(shù)，用帶有1.1版的藥物代謝動力學(xué)軟件WinNonlin(Scientific Consulting Inc.,Apex,NC,USA)的PC機，通過非間隔的方法計算(Scientifc Consulting Inc.,Apex,NC，美國)。
權(quán)利要求
1．下面通式Ⅰ的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式Ⅰ其中R1和R2獨立地為氫或C1-6-烷基，所述的烷基任選地被芳基取代；a和b獨立地為1或2；G為 或 J為 或 其中R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36獨立地為氫、鹵素、芳基、C1-6-烷基或C1-6-烷氧基；D為R7-NH-(CR8R9)p-(CH2)m-M-(CHR10)q-(CH2)n-其中R7、R8、R9和R10獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被鹵素、氨基、羥基或芳基取代；R7與R8或R7與R9或R8與R9可以任選地形成-(CH2)i-U-(CH2)j-，其中i和j獨立地為1或2，而U為-O-、-S-或價鍵；m和n獨立地為0、1、2或3；p和q獨立地為0或1；M為-CR11=CR11a-、亞芳基、-O-或-S-；R11和R11a獨立地為氫或C1-6-烷基，該烷基任選地被芳基取代；E為-CONR12R13，其中R12為C1-6-烷基；R13為雜芳基或雜芳基取代的C1-6-烷基。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為甲基。
3．權(quán)利要求1或2的化合物，其中所述的R2為甲基。
4．權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中a為1。
5．權(quán)利要求1-4中任一項的化合物，其中b為1。
6．權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中G為萘基。
7．權(quán)利要求1-6中任一項的化合物，其中J為苯基。
8．權(quán)利要求1-7中任一項的化合物，其中M為-CR11=CR11a-。
9．權(quán)利要求1-8中任一項的化合物，其中D為NH2-C(CH3)2-CH2-CH=CH-。
10．權(quán)利要求1-9中任一項的化合物，其中E為-CON(CH3)R13，這里R13為吡啶基取代的乙基。
11．權(quán)利要求1的化合物，其中D為NH2-C(CH3)2-CH2-CH=CH-，并且E為-CON(CH3)R13，這里R13為吡啶基取代的C1-6-烷基。
12．權(quán)利要求1的化合物，選自(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-(2-(2-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽 (2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸的N-甲基-N-[(1R)-1-(N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-(2-(4-吡啶基)乙基)氨基甲?；鵠-2-苯基乙基}氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基]酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽
13．一種藥物組合物，包含作為活性成分的前述化合物權(quán)利要求中任一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
14．一種刺激哺乳動物垂體釋放生長激素的方法，該方法包括將有效量的前述化合物權(quán)利要求中任一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者前述組合物權(quán)利要求中任一項的組合物，給藥于所述的哺乳動物。
15．前述化合物權(quán)利要求中任一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于刺激哺乳動物垂體釋放生長激素的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的化合物、包含它們的組合物,以及它們在治療因缺乏生長激素而導(dǎo)致的醫(yī)學(xué)障礙方面的用途。
文檔編號A61P25/18GK1325408SQ99812866
公開日2001年12月5日 申請日期1999年11月3日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月3日
發(fā)明者邁克爾·安克森, 盧茲·S·瑞奇特 申請人:諾沃挪第克公司