一種傳染性支氣管炎病卵黃抗體口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于禽類(lèi)用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液 及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雞傳染性支氣管炎是傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸 道傳染病，屬冠狀病毒科冠狀病毒屬。本病毒對(duì)環(huán)境抵抗力不強(qiáng)，對(duì)普通消毒藥過(guò)敏，對(duì)低 溫有一定的抵抗力。傳染性支氣管炎病毒具有很強(qiáng)的變異性，目前世界上已分離出30多個(gè) 血清型。這些毒株中多數(shù)能使氣管產(chǎn)生特異性病變，有些毒株能引起腎臟病變和生殖道病 變。主要通過(guò)空氣傳播，也可以通過(guò)飼料、飲水、墊料等傳播。臨診特征是呼吸困難、發(fā)出羅 音、咳嗽、張口呼吸、打噴嚏。本病廣泛流行于世界各地，是養(yǎng)雞業(yè)的重要疫病。
[0003] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG，但結(jié)構(gòu) 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。卵黃抗體具有很多優(yōu)越性。（1)由于鳥(niǎo) 類(lèi)與哺乳類(lèi)動(dòng)物種系發(fā)生學(xué)的差距，鳥(niǎo)類(lèi)更適于生產(chǎn)抗哺乳動(dòng)物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會(huì)激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，不與抗哺乳動(dòng)物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng)，不與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的Fc 受體結(jié)合，這在免疫診斷中具有重要意義。（2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白，在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過(guò)程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項(xiàng)試驗(yàn)表明，IgY 具有較好的穩(wěn)定性，耐酸、耐堿、耐熱。卵黃抗體較易保存，4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個(gè)月對(duì)抗體活性無(wú)明顯影響。（3)卵黃抗體量大，成本低，便于規(guī)?；a(chǎn)。卵黃 中抗體濃度能長(zhǎng)期維持在相當(dāng)于甚至超過(guò)血清抗體濃度的水平上?？偟膩?lái)講，卵黃抗體對(duì) 動(dòng)物沒(méi)有毒副作用，用卵黃抗體治療動(dòng)物疾病不但避免了血清價(jià)格昂貴、產(chǎn)量低的缺點(diǎn)，可 以避免血清在治療過(guò)程中引起的副作用。因此，卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預(yù)防的應(yīng) 用越來(lái)越多。目前卵黃抗體的制備及生產(chǎn)工藝已經(jīng)成熟，可以保質(zhì)保量的生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液及其制備方法，解決注射用的傳 染性支氣管炎卵黃抗體使用不方便的問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下形式實(shí)現(xiàn)的： 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液，包括以下按照體積比計(jì)算的原料：含卵黃抗體 的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單 位/暈升口服液的青鏈霉素。
[0006] 制備步驟是： 1) 采用雞傳染性支氣管炎滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí)，進(jìn)行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化，乳化時(shí)間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時(shí)； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-28°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過(guò)濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞 的體積比為（95-105) : (0.2-0. 3) : (0.2-0. 3) : (0.01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000單位/暈升口服液； 6) 分裝，保存。
[0007] 步驟4)過(guò)濾時(shí)依次通過(guò)1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
[0008] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理后得到澄清卵黃抗體口 服液。本發(fā)明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中，可以直接在臨床上進(jìn)行口服使用，蛋清中含 有大量的各類(lèi)蛋白質(zhì)，可充分利用高免蛋的價(jià)值，提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力和應(yīng)激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影響的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 實(shí)施例1 : 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的配方包括以下原料：由含卵黃抗體的全蛋水溶 液95L、辛酸0.2L、甲醛0.3L、硫柳汞0.02L，以及1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。 [0010] 其制備方法包括以下步驟： 1)采用市售的雞傳染性支氣管炎滅活疫苗（H120株)進(jìn)行強(qiáng)化免疫，每只雞每次疫苗用 量為2ml，每次間隔10天，進(jìn)行三次免疫程序，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 :256時(shí)，開(kāi)始收集高免蛋。
[0011] 2)將收集高免蛋整理，0. 2%新潔爾滅消毒，備用。
[0012] 3)水稀釋法酸化處理：將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內(nèi)進(jìn)行充分乳化，乳化時(shí) 間7min，然后將乳化后的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍，混勻，放置4°C環(huán)境中18小時(shí)靜置沉淀，取上清液；其中，鹽酸酸化 水是在水中加入鹽酸使其PH值達(dá)到4. 2。
[0013] 4)辛酸處理；將步驟3)的上清液，即含卵黃抗體的全蛋水溶液進(jìn)行稱(chēng)量，升溫到 25°C，加入辛酸，充分混勻lh，然后靜置10h;其中，按體積比，上層清液：辛酸=95 :0. 2 ; 5) 對(duì)步驟4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過(guò)濾，留取濾液； 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素；按體積比，含卵黃抗體的全蛋全蛋 水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈霉素在該口服液中的含量為1000單 位/毫升； 7) 分裝，保存。
[0014] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期，做了以下試驗(yàn)：將本品保存在 37°C培養(yǎng)箱中，保存24個(gè)月，分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用瓊脂擴(kuò)散(AGP)法，測(cè)定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣品的卵黃抗體效價(jià)變化，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0015] 表1.常溫放置口服液不同時(shí)間段效價(jià)的變化
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液，其特征在于：包括以下按照體積比計(jì)算的原 料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還 包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
2. -種如權(quán)利要求1所述傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于具 體步驟是： 1) 采用雞傳染性支氣管炎滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí)，進(jìn)行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化，乳化時(shí)間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時(shí)； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-28°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過(guò)濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于： 步驟4)過(guò)濾時(shí)依次通過(guò)1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液及其制備方法。其配方在于，包括以下按照體積比計(jì)算的原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。制備時(shí)采用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法制備的卵黃抗體口服液不僅使生產(chǎn)過(guò)程中損失少、免疫活性物質(zhì)強(qiáng)多、生物活性高、無(wú)臨床副作用，同時(shí)，含有蛋清中大量的各種蛋白質(zhì)，可以減少口服時(shí)對(duì)抗體的不良影響。
【IPC分類(lèi)】A61P31-14, A61K9-00, A61K39-42, A61P37-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104524569
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410762568
【發(fā)明人】徐進(jìn), 李建正, 郭俊清
【申請(qǐng)人】鄭州后羿制藥有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月14日