乳香提取物在制備維持血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)藥物中的應用
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳香提取物在制備預防和治療血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)失調(diào)藥物中的應用，屬于 醫(yī)藥技術(shù)領域。
【背景技術(shù)】
[0002] 血管內(nèi)皮細胞是介于血流和血管壁組織之間的一層單核細胞，可通過分泌、內(nèi)分 泌、旁分泌三種途徑分泌一系列NO，PGI2，ET-I等血管活性物質(zhì)發(fā)揮調(diào)節(jié)血管緊張性、抗 血栓形成、抑制平滑肌細胞增殖及血管壁炎癥反應等功能。血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)的破壞與生活環(huán) 境及生活方式密切相關(guān)。肥胖、吸煙、不良生活習慣及慢性應激均可導致血管內(nèi)皮受損。內(nèi) 皮細胞結(jié)構(gòu)和功能的改變是多種心血管疾病的共同病理基礎，高血壓、冠心病等患者內(nèi)皮 結(jié)構(gòu)和功能嚴重受損。目前，修復內(nèi)皮損傷的主要藥物包括鈣離子拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換 酶抑制劑和血管緊張素受體阻斷劑。遺憾的是，頻發(fā)的毒副作用限制了他們的應用。在血 管內(nèi)皮損傷和血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)破壞的初期，尚未發(fā)生高血壓或冠心病等嚴重器質(zhì)性病變的情 況下，尚缺乏有效且毒副作用小的治療藥物，因此研發(fā)維護血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)的新藥物是當前 研宄的前沿課題和熱點領域。
[0003] 乳香是橄欖科植物乳香樹及同屬植物的樹干切口中滲出的堅硬膠狀樹脂。在我 國，乳香之名始載于《名醫(yī)別錄》，后《本草拾遺》、《本草綱目》均有記載并沿用至今，認為其 辛散溫通，具有活血行氣、通經(jīng)止痛、消腫生肌、追毒之功效?，F(xiàn)代藥理學研宄顯示，乳香的 主要成分有樹脂(約含60?70%)，樹膠(約含27?35%)，揮發(fā)油（約含3?8%)等，主治氣血 凝滯、心腹疼痛、癰瘡腫毒、跌打損傷、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血刺痛，及具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗腫瘤 等作用。乳香提取物由于其有效成分為水不溶性，目前乳香及其復方臨床常用劑型為丸劑、 膠囊劑、片劑、散劑、膏劑等口服或外用制劑，無靜脈給藥劑型，這使得藥物吸收和生物利用 度等大大降低，極大的限制了該藥的臨床應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供乳香提取物在制備維持血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)藥物中的應用。
[0005] 血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)失調(diào)為肥胖、長期抽煙、喝酒等不了生活習慣及慢性應激所致的血 管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)破壞和功能失調(diào)，包括高血壓、高脂血癥、動脈粥樣硬化、高血糖、缺血再灌 注損傷、血管成形術(shù)后再狹窄，以及菌血癥、敗血癥、膿血癥和毒血癥引起的血管內(nèi)皮損傷。
[0006] 所述提取物為乳香乙醇提取物，其提取方法參照文獻（P. R. SakuntalaDevi，K. Adilaxmammaj G. SrinivisaRaoj ect. Safety Evaluation of AlcoholicExtract of Boswelliaovalifoliolata Stem-bark in Rats, 2012，Toxicol Int. ,19 (2) : 115 -120.)。使用時，將其制備成注射用乳劑、注射水針劑、注射油針劑、注射用粉針劑、注射用微 乳或注射用脂質(zhì)體。
[0007] 注射劑按重量計，乳香提取物5-40%，表面活性劑10-45%，水介質(zhì)添至100%，注射 劑中還含有甘油三酯或甘油，助乳化劑脂肪酸、脂肪醇及其鈉鹽，膽酸、脫氧膽酸及其鈉鹽， 抗氧化劑生育酚或L-抗壞血酸棕櫚酸酯，其中甘油三酯包括植物油或中鏈甘油三酯，必要 時可添加乙醇增溶。所述表面活性劑選自泊洛沙姆系列、植物磷脂、動物磷脂、合成磷脂、丙 二醇、脂肪酸甘油酯、s〇lut 〇lHS15、labrosol、吐溫類、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙二醇衍生物 系列、羥丙基β-環(huán)糊精、羥丙基γ-環(huán)糊精。
[0008] -種較優(yōu)的配方是，按重量計，乳香提取物10-30%、乙醇1-5%、卵磷脂10-30%、精 制大豆油5-25%、油酸0. 5-6. 5%、生育酚0. 01-1. 0%、注射用生理鹽水添至100%。
[0009] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：1)本發(fā)明屬于中藥制劑，成分純天然，毒副作用低；2)本發(fā) 明能有效預防和治療血管內(nèi)皮損傷；3)本發(fā)明能有效延緩進行性心腦血管病變的發(fā)展；4) 本發(fā)明注射劑生物利用度高。5)本品制備工藝簡單，易于規(guī)范化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0010] 圖1為乳香乳劑對大鼠血管內(nèi)皮的作用。數(shù)據(jù)顯示，模型組可見明顯的血管內(nèi)皮 損傷，乳香乳劑可有效預防和對抗血管內(nèi)皮損傷； 圖2為乳香乳劑對血管內(nèi)皮釋放NO和cGMP的調(diào)節(jié)作用。數(shù)據(jù)顯示，模型組血漿中NO含 量明顯降低，乳香乳劑可有效升高血漿中NO和cGMP含量，數(shù)據(jù)均表示為mean土SD (n=6), #P〈0. 05 vs 模型組； 圖3為乳香乳劑對內(nèi)皮細胞一氧化氮合酶（eNOS)的作用。數(shù)據(jù)顯示，模型組血管內(nèi) 皮細胞中磷酸化的eNOS表達顯著降低，乳香乳劑可有效增加 eNOS在血管內(nèi)皮細胞中的表 達； 圖4為乳香乳劑對臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC)的作用。數(shù)據(jù)顯示，乳香乳劑有效抑制氧 糖剝奪（OGD)誘導的HUVEC死亡，#P〈0. 05 vs氧糖剝奪組。
【具體實施方式】
[0011] 乳香醇提取物乳劑的制備：乳香提取物10-30%、乙醇1-5%、卵磷脂10-30%、精致大 豆油5-25%、油酸0. 5-6. 5%、生育酚0. 01-1. 0%、注射用生理鹽水添至100%。
[0012] 上述注射用乳香提取物制備方法為：在10-30%乳香提取物中加入1-5%乙醇、 5-25%精制大豆油、0. 01-1. 0%生育酚和0. 5-6. 5%油酸，并快速攪拌制成油相；將10-30%卵 磷脂與注射用生理鹽水配制成水相，油水兩相混合，高速攪拌制成初乳；加之注射用生理鹽 水至100%，調(diào)節(jié)pH至5. 0-7. 0,至高壓乳勻機中，反復乳化至乳滴平均粒徑彡0. 5 μ m ;取上 述乳劑過濾后，充氮氣灌裝，滅菌即得。
[0013] 本發(fā)明乳香提取物可用于防治血液高凝狀態(tài)，并采用以下方法進行驗證乳香乳 劑改善血瘀證大鼠高凝狀態(tài)，保護血管內(nèi)皮，調(diào)節(jié)血管活性的作用：雄性SD大鼠，體重 220-280g，，乳香乳劑靜脈注射（3各劑量水平200,100,50 mg/kg)，給藥3天后，皮下注射 鹽酸腎上腺素〇.8mgl/kg，間隔4 h再注射一次。首次注射鹽酸腎上腺索后2h后，進行1次 寒冷刺激，將大鼠在冰水浴中（〇-2°C)浸泡5 min，從而造成大鼠急性血瘀證模型。最后一 次給藥30分鐘內(nèi)，用3. 5%水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主動脈取血2ml，以3. 8%的枸櫞酸鈉抗凝， 2500r/min離心15min，取血衆(zhòng)測定凝血酶原時間（PT)、活化部分凝血酶時間（APTT)、凝血 酶時間（TT)、纖維蛋白原（FIB)、NO和cGMP的含量。取頸動脈，置于10%福爾馬林液中固 定，石蠟包埋，切片，行蘇木素-伊紅（HE)染色。
[0014] 本發(fā)明乳香提取物可用于防治血管內(nèi)皮損傷，并采用以下方法進行驗證乳香乳劑 保護血管內(nèi)皮的作用：臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC培養(yǎng)至70-80%，棄去細胞培養(yǎng)液，用PBS清洗 3次，更換培養(yǎng)液為PBS，然后放入含95 %N2+5 % 〇)2的37°0孵箱中120 min，氧糖剝奪后， 更換PBS為DMEM (10%FBS)培養(yǎng)液，放入37°C，5%C02孵箱，24 h后檢測HUVEC的存活率。
[0015] 實施例1 取乳香提取物200mg，加入無水乙醇100 μ 1，精致大豆油200mg，油酸80mg，生育酷lmg， 于50°C下高速攪拌使其溶解均勻，制成油相；卵磷脂200mg溶于適量注射用生理鹽水中， 于50°C下高速攪拌使其溶解均勻制成水相；油水兩相混合于60°C高速攪拌制成初乳；加 之注射用生理鹽水至2mL，調(diào)節(jié)pH至5. 0-7. 0,至高壓乳勻機中，反復乳化至乳滴平均粒徑 < 0. 5 μm。取上述乳劑過濾后，充氮氣灌裝，滅菌即得。
[0016] 實施例2 將上述乳香乳劑置于室溫、高溫和光照，分別考察〇天，5天和10天的性狀、pH值、不溶 性微粒和可見異物。結(jié)果見表1 :制劑穩(wěn)定