延胡索總生物堿治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疼痛的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取的中草藥中活性成分的醫(yī)藥用途，具體涉及延胡索及其延胡索總生物堿在制備防治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及疼痛的藥物中的應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種累及多關(guān)節(jié)滑膜炎病變的自身免疫性疾病，全世界發(fā)病率大約1%，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，受遺傳和環(huán)境因素的影響。RA的基本病變是滑膜細(xì)胞增生，襯里層增厚，多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管翳形成及軟骨與骨組織的破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。
[0004]臨床上傳統(tǒng)用于治療RA的藥物有三大類，即非留體抗炎藥(NSAID)、疾病調(diào)理性抗風(fēng)濕藥(DMARD)以及糖皮質(zhì)激素類藥物。近年來(lái)，學(xué)界已經(jīng)愈發(fā)認(rèn)識(shí)到及早采用DMARD與NSAID或糖皮質(zhì)激素聯(lián)合治療是一種較為理想的RA治療策略。甲氨蝶呤是一較老的非甾體抗炎藥，是目前絕大多數(shù)聯(lián)合用藥方案的基本組分。由于傳統(tǒng)非留體抗炎藥顯效緩慢且有較強(qiáng)的副反應(yīng)，耐受性不佳，難以長(zhǎng)期使用，治療所致藥源性疾病的發(fā)病率更高。因此，有必要進(jìn)一步尋找安全高效的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物。
[0005]現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的RA、風(fēng)濕熱、神經(jīng)痛、面癱、肌炎、痛風(fēng)等均可按痹癥進(jìn)行辨證論治。關(guān)于“痹癥”，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹，其風(fēng)氣勝者為行痹，寒氣勝者為痛痹，濕氣勝者為著痹也”的記載，張仲景在《傷寒論》中稱其為“歷節(jié)病”，并且給出治療方劑，如桂枝附子湯、甘草附子湯等，中國(guó)現(xiàn)存最早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載70多種治療痹癥的藥物，目前研究的僅有白芍、丹參、山茱萸和菊花等幾種，其他的鮮有報(bào)道，所以治療RA的天然藥物具有開(kāi)發(fā)潛力。
[0006]延胡索為S粟科(Papaveraeeae)紫堇屬(Corydalis)植物延胡索(Corydalisyanhusuo ff.T.Wang)的干燥塊莖,是著名的“浙八味”之一。延胡索又名延胡、玄胡索、元胡索、元胡，味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有活血散瘀、行氣止痛的功效。延胡索始載于《本草拾遺》，作為傳統(tǒng)鎮(zhèn)痛藥和活血化瘀藥在我國(guó)醫(yī)藥學(xué)的應(yīng)用中已有兩千多年的歷史，古代和現(xiàn)代中醫(yī)用延胡索主要用于氣血瘀滯諸痛證，主治胸痹心痛，脘腹疼痛，腰痛，疝氣痛，痛經(jīng)，經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀滯腹痛，跌打損傷等。
[0007]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供了延胡索及其延胡索總生物堿的新用途，即在制備抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及疼痛的藥物中的用途。
[0009]本發(fā)明還提供了用于防治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及疼痛的一種藥物組合物。它是由延胡索總生物堿為活性成分，加入藥學(xué)可接受的輔料制備成常用的藥物制劑。
[0010]延胡索總生物堿是從中藥材延胡索中提取得到的生物堿。
[0011]延胡索總生物堿的制備
取延胡索生藥，加入酸溶液加熱提取。合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH值至堿性，繼而用乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯層，繼而用石油醚萃取，棄去石油醚層，回收溶劑至干，得延胡索總生物堿。
[0012]延胡索總生物堿的優(yōu)選制備工藝:
取延胡索生藥l_3kg，加入5-24L的1-5%硫酸水溶液40_80°C加熱提取2_4次。合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮至2-9L，加入l-10%Na0H溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至9_11，繼而用乙酸乙酯1-16 L萃取2-4次。合并乙酸乙酯層，繼而用石油醚1-16 L萃取2_4次，棄去石油醚層，回收溶劑至干，得延胡索總生物堿。
[0013]精制:上述延胡索總生物堿以粗硅膠(100-200目)拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:1 ~ 1:1)。將二氯甲烷-甲醇(100:1 ~ 1:1)洗脫部分經(jīng)C18反相ODS色譜分離(以甲醇-水(5% -100%)梯度洗脫)，收集25-55%的甲醇洗脫部位，經(jīng)葡聚糖凝膠S印hadex LH-20分離(以甲醇-水(5% -100%)梯度洗脫；洗脫液流速lml/min)，收集75-95%甲醇洗脫餾分，回收溶劑后，溶解于甲醇溶液中，重結(jié)晶得化合物去氫延胡索甲素。
[0014]去氫延胡索甲素在延胡索中含量很低，通過(guò)本發(fā)明能高效地制備去氫延胡索甲素。
[0015]有文獻(xiàn)報(bào)道〈延胡索中分離出的去氫延胡索堿的抗炎作用〉，但是，沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道延胡索中分離出的去氫延胡索甲素的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及疼痛作用
一種抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及疼痛的組合物:綠原酸l_20mg，去氫延胡索甲素10-40mg，所述的制劑是口服制劑。
[0016]延胡索總生物堿片劑的制備
處方:延胡索總生物堿0.5-2g，淀粉50-150g，糊精30-100g，硫酸鈣30_200g，硬脂酸鎂 l_6g。
[0017]制法:取延胡索總生物堿，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0018]
去氫延胡索甲素片劑的制備
處方:去氫延胡索甲素10-40mg，淀粉50-150g，糊精30_100g，硫酸鈣30_200g，硬脂酸鎂 l_6g。
[0019]制法:取去氫延胡索甲素，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0020]綠原酸去氫延胡索甲素片劑的制備
處方:綠原酸l_20mg，去氫延胡索甲素10-40mg，淀粉50_150g，糊精30_100g，硫酸鈣30-200g，硬脂酸鎂 l-6g。
[0021]制法:取去氫延胡索甲素，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0022]
本發(fā)明的延胡索總生物堿、去氫延胡索甲素，抑制炎癥，調(diào)節(jié)免疫，顯著提升關(guān)節(jié)炎大鼠的淋巴細(xì)胞，降低中性細(xì)胞，降低受試動(dòng)物體內(nèi)炎癥因子和炎癥介質(zhì)的含量，通過(guò)調(diào)控炎癥網(wǎng)絡(luò)而緩解大鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀。
[0023]
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1.延胡索總生物堿的制備
取延胡索生藥1kg，加入5L的2%硫酸水溶液50°C加熱提取4次。合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮至4L，加入5%Na0H溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至10，繼而用乙酸乙酯2L萃取4次。合并乙酸乙酯層，繼而用石油醚2L萃取4次，棄去石油醚層，回收溶劑至干，得延胡索總生物堿。
[0025]
實(shí)施例2
取延胡索生藥1kg，加入5L的2%硫酸水溶液50°C加熱提取4次。合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮至4L，加入5%Na0H溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至10，繼而用乙酸乙酯2L萃取4次。合并乙酸乙酯層，繼而用石油醚2L萃取4次，棄去石油醚層，回收溶劑至干，得延胡索總生物堿。
[0026]精制:上述延胡索總生物堿以粗硅膠(200目)拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:1 ~ 1:1)。將二氯甲烷-甲醇(20:1)洗脫部分經(jīng)C18反相ODS色譜分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫)，收集45%的甲醇洗脫部位，經(jīng)葡聚糖凝膠S印hadexLH-20分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫；洗脫液流速lml/min)，收集80%甲醇洗脫餾分，回收溶劑后，溶解于甲醇溶液中，一 4°C重結(jié)晶得化合物去氫延胡索甲素。
[0027]
實(shí)施例3
取延胡索生藥1kg，加入6L的3%硫酸水溶液70°C加熱提取2次。合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮至6L，加入6%Na0H溶液適量，調(diào)節(jié)pH值至11，繼而用乙酸乙酯3 L萃取3次。合并乙酸乙酯層，繼而用石油醚2L萃取4次，棄去石油醚層，回收溶劑至干，得延胡索總生物喊 L 875g。
[0028]精制:上述延胡索總生物堿以粗硅膠(200目)拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:1 ~ 1:1)。將二氯甲烷-甲醇(20:1)洗脫部分經(jīng)C18反相ODS色譜分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫)，收集45%的甲醇洗脫部位，經(jīng)葡聚糖凝膠S印hadexLH-20分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫；洗脫液流速lml/min)，收集80%甲醇洗脫餾分，回收溶劑后，溶解于甲醇溶液中，一 4°C重結(jié)晶得化合物去氫延胡索甲素。
[0029]
實(shí)施例4延胡索總生物堿片劑的制備
處方:延胡索總生物堿0.5g，淀粉150g，糊精100g，硫酸鈣200g，硬脂酸鎂2g。
[0030]制法:取延胡索總生物堿，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0031]實(shí)施例5 去氫延胡索甲素片劑的制備
處方:去氫延胡索甲素20mg，淀粉150g，糊精100g，硫酸鈣200g，硬脂酸鎂2g。
[0032]制法:取去氫延胡索甲素，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0033]實(shí)施例5綠原酸去氫延胡索甲素片劑的制備
處方:綠原酸2mg，去氫延胡索甲素20mg，淀粉150g，糊精100g，硫酸鈣200g，硬脂酸鎂2g。
[0034]制法:取去氫延胡索甲素，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0035]
實(shí)施例6延胡索總生物堿、去氫延胡索甲素、綠原酸去氫延胡索甲素組合對(duì)完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠的作用實(shí)驗(yàn)方法
將大鼠分組，即正常組、模型組、陽(yáng)性藥組(雙氯芬酸鈉10 mg/kg)、實(shí)施例1制備得到的延胡索總生物堿組(5mg/kg)、實(shí)施例2制備得到的去氫延胡索甲素組(0.lmg/kg)、實(shí)施例6制備得到的綠原酸去氫延胡索甲素組(0.01+0.lmg/kg)。在大鼠(正常組除外)右后足部皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑致炎。從致炎第二天起灌胃給藥，每天給藥一次，每次1ml，持續(xù)28天。分別在給藥第7天、第14天、第