順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及順鉑在制藥領(lǐng)域新的用途，具體涉及順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和 擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 順鉑，外文縮寫DDP，是中心以二價(jià)鉑同兩個(gè)氯原子和兩個(gè)氨分子結(jié)合的重金屬絡(luò) 合物，類似于雙功能烷化劑，可抑制DNA的復(fù)制過(guò)程。DDP細(xì)胞最敏感，高濃度時(shí)抑制RNA及 蛋白質(zhì)合成。順鉑對(duì)乏氧細(xì)胞作用，進(jìn)入人體后可擴(kuò)散通過(guò)帶電的細(xì)胞膜。目前認(rèn)為，DDP 主要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基。作用與用途：順鉑屬細(xì)胞周期非特異性藥物，具 有細(xì)胞毒性，可抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制過(guò)程，并損傷其細(xì)胞膜上結(jié)構(gòu)，有較強(qiáng)的廣譜抗癌作 用。
[0003] DDP具有抗癌譜廣、作用強(qiáng)、與多種抗腫瘤藥有協(xié)同作用、且無(wú)交叉耐藥等特點(diǎn)，臨 床用于卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、惡性淋巴瘤、頭頸部鱗癌、甲狀腺 癌及成骨肉瘤等多種實(shí)體腫瘤均能顯示療效。
[0004] 為治療多種實(shí)體瘤的一線用藥。與VP - 16聯(lián)合（EP方案）為治療SCLC或NSCLC 一線方案，聯(lián)合MMC、IFO (MP方案)，或NVB等方案為治療NSCLC常用方案，以DDP為主的 聯(lián)合化療亦為晚期卵巢癌、骨肉瘤及神經(jīng)母細(xì)胞瘤的主要治療方案，與ADM、CTX等聯(lián)用對(duì) 多部位鱗狀上皮癌、移行細(xì)胞癌有效，如頭頸部、宮頸、食管及泌尿系腫瘤等。
[0005] 現(xiàn)有公開(kāi)文獻(xiàn)中尚未發(fā)現(xiàn)順鉑的其他藥理作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥 物中的應(yīng)用。
[0007] 技術(shù)方案：順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 優(yōu)選地，所述腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
[0009] 優(yōu)選地，其中順鉑的濃度為5uM~10uM。
[0010] 發(fā)明人通過(guò)細(xì)胞層面的實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn)，順鉑對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有一定的抑制 作用。目前針對(duì)現(xiàn)有的適應(yīng)癥定性其為靜脈注射或靜脈滴注：每次20~30mg或20mg/m2,溶 于生理鹽水20~30ml中靜脈注射，或溶于5%葡萄糖注射液250~500ml中靜脈滴注，胸腹腔 注射：胸腔7~10日1次，每次30~60mg。腹腔每次100~160mg。動(dòng)脈注射：每次20~30ml，中 由插管推注，連用5日為1周期，間隔3周可重復(fù)。動(dòng)脈灌注主要用于頭頸部腫瘤。
[0011] 本發(fā)明需要根據(jù)現(xiàn)有的制劑服用方法為參考依據(jù)，在現(xiàn)有的細(xì)胞層面實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上 根據(jù)新的適應(yīng)癥療效以及后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定新的臨床給藥方法及劑量。
[0012] 本發(fā)明通過(guò)將腫瘤細(xì)胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)、并定量 分析細(xì)胞層的面積，即細(xì)胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散能力。細(xì) 胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。細(xì)胞迀移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細(xì)胞外的信號(hào)分子。內(nèi)部因素則指細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)和執(zhí)行運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞骨架和分 子馬達(dá)，還有參與粘著斑形成的各種分子。細(xì)胞外信號(hào)結(jié)合胞膜受體完成其使命后，需要 細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子接力，將運(yùn)動(dòng)信息進(jìn)一步傳給細(xì)胞迀移的執(zhí)行單位一一細(xì)胞骨架和分子馬 達(dá)。種類繁多的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子會(huì)相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結(jié)構(gòu)和活性，達(dá) 到精細(xì)調(diào)整細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的目的。由此可見(jiàn)，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，與細(xì)胞本身以及細(xì)胞之間的關(guān)系 緊密。
[0013] 癌細(xì)胞與其同源正常組織相比，細(xì)胞間的粘著性降低，故癌細(xì)胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細(xì)胞外被中的纖粘連蛋白是一種細(xì)胞外粘著糖蛋白，它增強(qiáng)了細(xì)胞與細(xì)胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細(xì)胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細(xì)胞與基質(zhì)之間和細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘著，因此癌細(xì)胞具有易于侵潤(rùn)組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細(xì)胞的面積的增大增強(qiáng)了各個(gè)細(xì)胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0014] 雖然腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導(dǎo)致的，但是以細(xì)胞層的面積，即細(xì) 胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積作為細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細(xì)胞間連接強(qiáng)度的 測(cè)定的方法，具有成本低廉、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易判的優(yōu)點(diǎn)，其表現(xiàn)出來(lái)的細(xì)胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過(guò)加藥刺激后對(duì)細(xì)胞間連接分子Ε-cadherin蛋白質(zhì)進(jìn) 行免疫染色，繼而進(jìn)行定量測(cè)定。細(xì)胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。
[0015] 本發(fā)明以為順鉑為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，評(píng)估考量其在抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力評(píng)價(jià)。具體 以藥物刺激前后細(xì)胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0016] 有益效果：1、本發(fā)明利用順鉑制備的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑制，順鉑 為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過(guò)程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其他相關(guān)腫瘤藥 物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，在殺死 腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的順鉑為成藥庫(kù)的現(xiàn)有藥物化 合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為0. 5uM濃度順鉑處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖； 圖2為IuM濃度順鉑處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖； 圖3為5uM濃度順鉑處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖； 圖4為IOOuM濃度順鉑處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖； 圖5為陽(yáng)性對(duì)照組，由10 uM濃度nocodazole處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖； 圖6為陰性對(duì)照組。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面通過(guò)附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于 所述實(shí)施例。
[0019] 實(shí)施例1:順鉑在制備抑制結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。具體實(shí)驗(yàn)方 案如下： 1、實(shí)驗(yàn)材料 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)階段采用的是結(jié)腸癌細(xì)胞（HT29)，陽(yáng)性對(duì)照采用的藥物是nocodazole (實(shí) 驗(yàn)濃度為IOuM)。陰性對(duì)照組沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何處理。
[0020] 其中實(shí)驗(yàn)采用順鉑化合物Cl2H6N2Pt, CAS NO.為15663-27-1，濃度分別為10uM， 5uM，luM，0. 5uM。
[0021] 2、實(shí)驗(yàn)方法 對(duì)培養(yǎng)24小時(shí)的結(jié)腸癌細(xì)胞(細(xì)胞密度：105)進(jìn)行藥物刺激2小時(shí)處理： (1) 將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結(jié)腸癌細(xì)胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液； (2) 取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，按照IO5的密度加入24孔盤中，放入37° C的CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； (3) 24小時(shí)后，換液，培養(yǎng)液中加入相應(yīng)量的順鉑化合物配置到實(shí)驗(yàn)所需濃度，以及陽(yáng) 性對(duì)照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)； (4) 培養(yǎng)2小時(shí)后將細(xì)胞于2%的PFA溶液下37° C固定10分鐘，再進(jìn)行熒光染色。
[0022] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理 對(duì)熒光染色后的結(jié)腸癌細(xì)胞觀察，將觀察的圖片用Image J處理并計(jì)算其細(xì)胞面積在 加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的比值。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0023] 表1順鉑對(duì)HT29細(xì)胞刺激2小時(shí)后的面積大小
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中順鉑的濃度為5uM~10uM。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)順鉑在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用順鉑制備的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑制，順鉑為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過(guò)程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其他相關(guān)腫瘤藥物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡。
【IPC分類】A61K33-24, A61P35-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104586887
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510068024
【發(fā)明人】滕文臣
【申請(qǐng)人】江蘇澳格姆生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年5月6日
【申請(qǐng)日】2015年2月9日