雙氯芬酸鈉在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及雙氯芬酸鈉在制藥領(lǐng)域新的用途，具體涉及雙氯芬酸鈉在制備抑制腫 瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙氯芬酸鈉通過抑制環(huán)氧合酶從而減少前列腺素的合成，以及一定程度上抑制脂 氧酶而減少白三烯、緩激肽等產(chǎn)物的生成而發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛及抗炎作用。主要用于：
[0003] 1.炎性和退行性風(fēng)濕病：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強直性脊 椎炎、骨關(guān)節(jié)炎和脊椎關(guān)節(jié)炎。脊椎痛性綜合征。
[0004] 2.非關(guān)節(jié)性風(fēng)濕性病，如肩痛，腱鞘炎，滑囊炎，肌痛及運動后損傷性疼痛等。 [0005] 3.痛風(fēng)急性發(fā)作。
[0006] 4.創(chuàng)傷后及術(shù)后炎癥性疼痛如：創(chuàng)傷后，勞損后，牙痛，頭痛等；婦科中出現(xiàn)的疼 痛或炎癥，例如：原發(fā)性痛經(jīng)或附加炎。
[0007] 5.對耳、鼻、喉的嚴重痛性感染可作為輔助治療藥，例如：咽扁桃體炎，耳炎。原發(fā) 疾病可根據(jù)一般治療原則給予適當(dāng)?shù)闹委煛?br>[0008] 6.對成年和兒童的發(fā)熱有解熱作用。
[0009] 現(xiàn)有公開文獻中尚未發(fā)現(xiàn)雙氯芬酸鈉的其他藥理作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種雙氯芬酸鈉在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散 的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 技術(shù)方案：雙氯芬酸鈉在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 優(yōu)選地，所述腫瘤細胞為結(jié)腸癌細胞。
[0013] 優(yōu)選地，其中雙氯芬酸鈉的濃度為40uM~60uM。
[0014] 發(fā)明人通過細胞層面的實驗研宄發(fā)現(xiàn)，雙氯芬酸鈉對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力有一定 的抑制作用。目前針對現(xiàn)有的適應(yīng)癥給藥途徑為口服腸溶片，作為常規(guī)，最初每日劑量為 100-150mg，對輕度病人或需長期治療的病人，每日劑量為75-100mg。
[0015] 本發(fā)明需要根據(jù)現(xiàn)有的制劑服用方法為參考依據(jù)，在現(xiàn)有的細胞層面實驗基礎(chǔ)上 根據(jù)新的適應(yīng)癥療效以及后續(xù)相關(guān)實驗設(shè)計確定新的臨床給藥方法及劑量。
[0016] 本發(fā)明通過將腫瘤細胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細胞，觀察細胞形態(tài)、并定量 分析細胞層的面積，即細胞能夠與其他細胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細胞的擴散能力。細 胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。細胞迀移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細胞外的信號分子。內(nèi)部因素則指細胞的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)和執(zhí)行運動的細胞骨架和分 子馬達，還有參與粘著斑形成的各種分子。細胞外信號結(jié)合胞膜受體完成其使命后，需要 細胞內(nèi)信號分子接力，將運動信息進一步傳給細胞迀移的執(zhí)行單位一一細胞骨架和分子馬 達。種類繁多的細胞內(nèi)信號分子會相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結(jié)構(gòu)和活性，達 到精細調(diào)整細胞運動的目的。由此可見，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，與細胞本身以及細胞之間的關(guān)系 緊密。
[0017] 癌細胞與其同源正常組織相比，細胞間的粘著性降低，故癌細胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細胞外被中的纖粘連蛋白是一種細胞外粘著糖蛋白，它增強了細胞與細胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細胞與基質(zhì)之間和細胞與細胞之間的粘著，因此癌細胞具有易于侵潤組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細胞的面積的增大增強了各個細胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0018] 雖然腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導(dǎo)致的，但是以細胞層的面積，即細 胞能夠與其他細胞接觸的面積作為細胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細胞間連接強度的 測定的方法，具有成本低廉、操作簡便、結(jié)果易判的優(yōu)點，其表現(xiàn)出來的細胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過加藥刺激后對細胞間連接分子E-cadherin蛋白質(zhì)進 行免疫染色，繼而進行定量測定。細胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。
[0019] 本發(fā)明以為雙氯芬酸鈉為實驗對象，評估考量其在抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的能力評 價。具體以藥物刺激前后細胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0020] 有益效果：1、本發(fā)明利用雙氯芬酸鈉制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑 制，雙氯芬酸鈉為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用其 他相關(guān)腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細胞 毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的雙氯芬酸鈉 為成藥庫的現(xiàn)有藥物化合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。
【附圖說明】
[0021] 圖1為10uM濃度雙氯芬酸鈉處理后的結(jié)腸癌細胞圖；
[0022] 圖2為40uM濃度雙氯芬酸鈉處理后的結(jié)腸癌細胞圖；
[0023] 圖3為50uM濃度雙氯芬酸鈉處理后的結(jié)腸癌細胞圖；
[0024] 圖4為60uM濃度雙氯芬酸鈉處理后的結(jié)腸癌細胞圖；
[0025] 圖5為80uM濃度雙氯芬酸鈉處理后的結(jié)腸癌細胞圖
[0026] 圖6為陽性對照組，由10uM濃度nocodazole處理后的結(jié)腸癌細胞圖；
[0027] 圖7為陰性對照組。
【具體實施方式】
[0028] 下面通過附圖對本發(fā)明技術(shù)方案進行詳細說明，但是本發(fā)明的保護范圍不局限于 所述實施例。
[0029] 實施例1 :雙氯芬酸鈉在制備抑制結(jié)腸癌細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。具體 實驗方案如下：
[0030] 1、實驗材料
[0031] 本發(fā)明實驗階段采用的是結(jié)腸癌細胞（HT29)，陽性對照采用的藥物是 nocodazole (實驗濃度為10uM)。陰性對照組沒有經(jīng)過任何處理。
[0032] 其中實驗采用雙氯芬酸鈉化合物C14H1QCl 2NNa02，CAS NO?為15307-79-6,濃度分別 為 80uM，60uM，50uM，40uM，10uM。
[0033] 2、實驗方法
[0034] 對培養(yǎng)24小時的結(jié)腸癌細胞（細胞密度：105)進行藥物刺激2小時處理：
[0035] (1)將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結(jié)腸癌細胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細胞懸浮液；
[0036] (2)取細胞懸液計數(shù)，按照105的密度加入24孔盤中，放入37°C的C02培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)；
[0037] (3)24小時后，換液，培養(yǎng)液中加入相應(yīng)量的雙氯芬酸鈉化合物配置到實驗所需濃 度，以及陽性對照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時；
[0038] (4)培養(yǎng)2小時后將細胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分鐘，再進行熒光染色。
[0039] 3、實驗結(jié)果處理
[0040] 對熒光染色后的結(jié)腸癌細胞觀察，將觀察的圖片用ImageJ處理并計算其細胞面 積在加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實驗組與陰性對照組的比值。結(jié)果見表1。
[0041] 表1雙氯芬酸鈉對HT29細胞刺激2小時后的面積大小
[0042]
【主權(quán)項】
1. 雙氯芬酸鈉在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中腫瘤細胞為結(jié)腸癌細胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中雙氯芬酸鈉的濃度為40uM~60uM。
【專利摘要】本發(fā)明公開雙氯芬酸鈉在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用雙氯芬酸鈉制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑制，雙氯芬酸鈉為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用其他相關(guān)腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細胞毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡。
【IPC分類】A61K31-196, A61P35-04
【公開號】CN104622859
【申請?zhí)枴緾N201510068123
【發(fā)明人】董梅
【申請人】南京格耀生物科技有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月9日