一種知母降血糖提取物的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥制備方法，特別是涉及一種知母降血糖提取物的制備方法。
【背景技術】
[0002] 知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖，始載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱瀉火、滋陰潤燥的功效。用于外感熱病，高熱煩渴，肺熱燥咳，骨蒸 潮熱，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘等癥。知母歷代的主流炮制品種為鹽知母，即將知母飲片加鹽水 用文火共同炒制至干，鹽知母最早見于宋代，記有"鹽水炒研末"。歷版《中國藥典》收載的知 母的炮制品種均為鹽知母，傳統(tǒng)理論認為"入鹽走腎臟仍仗軟堅"，知母經(jīng)鹽炙后能夠"引藥 入腎經(jīng)，增強滋陰降火的作用"。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載：知母"主消渴，熱中…"，表 明知母具有降血糖作用。現(xiàn)代研宄亦有報道知母中芒果苷、皂苷、多糖等有降血糖的作用。
[0003] 我們課題組在進行知母鹽制前后藥效學對比研宄時，首次發(fā)現(xiàn)了知母鹽炙后降血 糖作用顯著增強，特別是鹽知母高劑量組，降血糖作用高效且持久，明顯優(yōu)于知母組，且優(yōu) 于格列本脲陽性對照組。于是，在前期研宄基礎上，我們對鹽知母的降血糖作用進行了深入 研宄，對鹽知母不同極性部位進行降血糖作用比較研宄。本技術的發(fā)明，可以使提高知母的 降血糖作用，尋找到了鹽知母降血糖的有效部位，可進一步開發(fā)為降血糖藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的，是提供一種知母降血糖提取物的制備方法，本制備方法明確了鹽 知母降血糖作用的最佳部位，為研發(fā)新藥提供基礎。本方法獲得的鹽知母提取物，對II型糖 尿病，具有良好的降糖作用。
[0005] 采用的技術方案是：
[0006] 一種知母降血糖提取物的制備方法，包括下述步驟：
[0007] 1.鹽知母的制備
[0008] 知母飲片加鹽水拌勻，悶潤至鹽水被吸盡，在140°C?170°C下炒制7-9分鐘。每 IOOg知母飲片加入2_4g的鹽。
[0009] 2.取步驟1制備的鹽知母粉碎成粗粉，加60-80%乙醇回流提取2-3次，每次 I. 5-2. 5h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，得醇浸膏。浸膏以適量水分散，依次 用的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑得到石油醚萃取物（I )，氯仿萃取物 (II )，乙酸乙酯萃取物（III)，正丁醇萃取物（IV )以及剩余部分（V )。
[0010] 3脂肪乳的制備
[0011] 每IOOmL脂肪乳含15-25g豬油，3-8g膽固醇，8-12g果糖，8-12g蔗糖，8-12mL吐 溫 80,8-12mL 甘油。
[0012] 4.造模與給藥
[0013] SD大鼠適應性喂養(yǎng)一周左右后，隨機取8只作空白對照組，正常飲食，余下組大鼠 除正常飲食外每天ig脂肪乳，4周后，禁食12h，腹腔注射STZ (35mg/kg)。72h后測定空腹血 糖值，選擇空腹血糖大于等于12. lmmol/L的大鼠作為II型糖尿病模型。將造模成功的糖尿 病大鼠，隨機分為模型對照組、阿卡波糖組（0. 2g/kg)、及I?V提取物組（折合生藥I. 4g/ kg)。給藥組每天ig相應藥液10mL/kg，對照組和模型組ig等體積蒸餾水，連續(xù)14d。
[0014] 5檢測指標
[0015] 5.1-般生理指標觀察
[0016] 觀察大鼠一般生理狀況，包括攝食量，飲水量及活動狀態(tài)等。
[0017] 5. 2空腹血糖值（FBG)及葡萄糖耐量（OGTT)的測定
[0018] 于給藥7d、14d后，采用剪尾取血法，檢測各組大鼠空腹血糖水平。末次給藥后，禁 食4h，灌胃給予20 %葡萄糖溶液（2g/kg)，分別測定0、0. 5h、lh、2h血糖水平，梯形法計算 曲線下面積。
[0019] 5. 3糖化血紅蛋白（HbAlc)和血清胰島素（FINS)測定
[0020] 末次給藥后，禁食12h，眼眶取血，取EDTA抗凝全血按試劑盒操作說明，測定糖化 血紅蛋白（HbAlc);放射免疫法測定血清胰島素（FINS)，按公式計算胰島敏感指數(shù)ISI及 Homa胰島素抵抗指數(shù)（Homa-IR) 〇
[0021] 6實驗結(jié)果
[0022] 6. 1 -般生理指標觀察
[0023] 造模后大鼠攝食量、飲水量和尿量明顯增加，體重明顯下降，出現(xiàn)"三多一少"的癥 狀。對照組攝食量和飲水量均衡，體重增長，反應靈敏，皮毛有光澤；模型組大鼠反應遲鈍、 皮毛枯萎，體重增長緩慢；給藥組大鼠的狀態(tài)有不同程度的好轉(zhuǎn)，活動量增加。
[0024] 6. 2對糖尿病大鼠 FBG的影響
[0025] 與模型組相比，給藥7d后，各給藥組大鼠的FBG均顯著降低（p〈0. 01或p〈0. 05)， 14d后，阿卡波糖、II及V提取物組大鼠的FBG顯著降低（p〈0. 01)。表明鹽知母II及V提取 物具有明顯降低糖尿病大鼠空腹血糖的作用，且較其它提取物作用持久。結(jié)果見表1。
[0026]
【主權(quán)項】
1. 一種知母降血糖提取物的制備方法，其特征在于：將知母飲片加鹽水拌均勻，每 IOOg知母飲片加入2-4g的鹽，悶潤至鹽水被吸盡，在140°C?170°C下炒制7-9分鐘，取鹽 知母粉碎成粗粉，加60-80 %乙醇回流提取2-3次，每次I. 5-2. 5h，濾過，合并濾液，減壓回 收乙醇至無醇味，得醇浸膏；醇浸膏以適量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取 物，蒸干，即得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種知母降血糖提取物的制備方法，其特征在于：制得的知 母降血糖提取物，能夠明顯降低II型糖尿病的空腹血糖值、糖化血紅蛋白、血清胰島素、胰 島素抵抗指數(shù)，升高胰島敏感指數(shù)，改善糖耐量。
【專利摘要】一種知母降血糖提取物的制備方法，其特征在于：將知母飲片加鹽水拌均勻，每100g知母飲片加入2-4g的鹽，悶潤至鹽水被吸盡，在140℃～170℃下炒制7-9分鐘，取鹽知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，得醇浸膏；醇浸膏以適量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。本發(fā)明能夠明顯降低Ⅱ型糖尿病的空腹血糖值、糖化血紅蛋白、血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)，升高胰島敏感指數(shù)，改善糖耐量。
【IPC分類】A61K36-8964, A61P3-10, A61K125-00
【公開號】CN104606459
【申請?zhí)枴緾N201410842076
【發(fā)明人】高慧, 吳瑩, 宋澤璧, 張爽, 賈天柱, 史輯, 鞠成國, 林桂梅, 張凡, 黃金宇
【申請人】遼寧中醫(yī)藥大學
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年12月29日