用于治療或預(yù)防心力衰竭的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或其亞序列的治療性施劑的制作方法
【專利說明】用于治療或預(yù)防心力衰竭的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或其亞序列的治 療性施劑
[0001] 本申請是2009年7月17日提交的200980136079. 8號同名發(fā)明專利申請的分案 申請。 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 發(fā)明領(lǐng)域涉及治療心力衰竭。更特別是，本發(fā)明針對改善的劑量方案，其維持和/ 或增強(qiáng)施用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白（例如神經(jīng)膠質(zhì)生長因子2(GGF2)或其片段）的治療性益處，而 最小化任何潛在副作用。 【【背景技術(shù)】】
[0003]與給有需要的患者施用藥療相關(guān)的根本性的挑戰(zhàn)是耐受性與功效之間的關(guān)系。治 療指數(shù)是可施用于患者的物質(zhì)的有效的劑量與檢測到對患者的不期望的副作用的劑量之 間的范圍。一般而言，有效的劑量與副作用起始的劑量之間的差異越大，物質(zhì)越是良性，及 越可能被患者耐受。
[0004] 心力衰竭（特別是充血性心力衰竭（CHF))是工業(yè)化國家中死亡的主導(dǎo)原因之一。 成為充血性心力衰竭的基礎(chǔ)的因素包括：高血壓，缺血性心臟病，暴露于心臟毒性化合物 (例如蒽環(huán)類抗生素），輻射暴露，物理創(chuàng)傷及與增加的心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的遺傳缺陷。由 此，CHF常由由于高血壓，來自慢性缺血，心肌梗塞，病毒疾病，化學(xué)毒性，輻射的對心肌的損 傷及其他疾?。ɡ缬财げ。┑膶π呐K的增加的工作負(fù)荷所致。這些病情導(dǎo)致心臟的抽泵 能力的進(jìn)行性降低。起初，由高血壓或收縮性組織的損失所致的增加的工作負(fù)荷誘導(dǎo)補(bǔ)償 性心肌細(xì)胞肥大及左心室壁加厚，由此增強(qiáng)收縮性及維持心臟功能。經(jīng)時，但是，左心室膨 脹，心臟收縮泵功能惡化，心肌細(xì)胞經(jīng)歷凋亡性細(xì)胞死亡，及心肌功能進(jìn)行性惡化。
[0005] 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白（NRGs)及NRG受體包括涉及神經(jīng)，肌肉，上皮，及其他組織中器官 發(fā)生及細(xì)胞發(fā)育的細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生長因子-受體酪氨酸激酶系統(tǒng)（Lemke，Mol.Cell. Neurosci. 7:247-262, 1996andBurdenetal.,Neuron18:847-855,1997)。NRG家族由編 碼含表皮生長因子（EGF)-樣，免疫球蛋白（Ig)，及其他可識別結(jié)構(gòu)域的多種配體的4種基 因構(gòu)成。多種分泌的及附接膜的異構(gòu)體在此信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中發(fā)揮配體的作用。人中NRG配 體的受體是EGF受體（EGFR)家族的全部成員，及分別包括EGFR(或ErbBl)，ErbB2，ErbB3， 及ErbB4,也被稱為HERl~HER4(Meyeretal.,Development124:3575-3586, 1997 ; Orr-UrtregeretaI. ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:1867-71, 1993；Marchionni etal.，Nature362:312-8，1993;Chenetal.，J.Comp.Neurol. 349:389-400, 1994 ; Corfasetal.,Neuron14:103-115, 1995；Meyeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:1064-1068, 1994；andPinkas-Kramarskietal. ,Oncogene15:2803-2815, 1997) 〇
[0006] 4種NRG基因，NRG-1，NRG-2,NRG-3,及NRG-4,定位于不同染色體座位 (Pinkas-Kramarskietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:9387-91, 1994；Carraway etal.,Nature387:512-516,1997；Changetal.,Nature387:509-511,1997；and Zhangetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:9562-9567, 1997)，及共同編碼NRG蛋白 的種種陣列。NRG-I的基因產(chǎn)物，例如，包括一組大致15種不同的結(jié)構(gòu)上-相關(guān)的異 構(gòu)體（Lemke，Mol.Cell.Neurosci.7:247-262，1996andPelesandYarden，BioEssays 15:815-824, 1993)。首先鑒定的NRG-I的亞型包括Neu分化因子（NDF;Pelesetal.,Cell 69,205-216，1992andWenetal.，Cell69, 559-572, 1992)，神經(jīng)生長因子（HRG;Holmes etal.，Science256:1205-1210, 1992)，誘導(dǎo)活性的乙酰膽堿受體（ARIA;Fallset al.，Cell72:801-815, 1993)，及神經(jīng)膠質(zhì)生長因子GGF1，GGF2,及GGF3(Marchionniet al.Nature362:312-8, 1993)〇
[0007]NRG-2 基因通過同源性克?。–hangetal.,Nature387:509-512, 1997;Carrawayetal. ,Nature387:512-516, 1997;andHigashiyamaetal. ,J. Biochem. 122:675-680, 1997)及通過基因組方法（Busfieldetal.,Mol.Cell. Biol. 17:4007-4014, 1997)鑒定。NRG-2cDNA也已知為神經(jīng)-及胸腺-來源的ErbB激酶活 化子（NTAK;Genbank登錄號No.AB005060)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白趨異劑（Don-I)，及小腦-來源 的生長因子（CDGF;PCT申請WO97/09425)。實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示，表達(dá)ErbB4或ErbB2/ErbB4組 合的細(xì)胞可能顯示針對NRG-2的特別穩(wěn)健的應(yīng)答（?；[111^8-1(四1]^181^6七31.，]\1〇1.〇611. Biol. 18:6090-6101，1998)。NRG-3 基因產(chǎn)物（Zhang等人，supra)也已知結(jié)合及活化ErbB4 受體（Hijazietal.，Int.J.Oncol. 13:1061-1067, 1998) 〇
[0008] EGF-樣結(jié)構(gòu)域存在于全部形式的NRG的核心，及需要結(jié)合及活化ErbB受體。3種 基因中編碼的EGF-樣結(jié)構(gòu)域的推斷的氨基酸序列大致是30~40%相同（比對）。而且，NRG-I及NRG-2中似乎有至少2種亞型的EGF-樣結(jié)構(gòu)域，其可賦予不同生物活性及組織-特 異性潛力。
[0009] 對NRG的細(xì)胞應(yīng)答通過表皮生長因子受體家族的NRG受體酪氨酸激酶EGFR， ErbB2,ErbB3,及ErbB4介導(dǎo)。全部NRG的高-親和力結(jié)合主要經(jīng)或者ErbB3或ErbB4介 導(dǎo)。NRG配體的結(jié)合導(dǎo)致與其他ErbB亞基的二聚化及通過對特異性酪氨酸殘基的磷酸化反 式激活。在某些實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，ErbB受體的幾乎全部組合似乎能響應(yīng)NRG-I異構(gòu)體的結(jié)合形 成二聚體。但是，看起來ErbB2是可在穩(wěn)定配體-受體復(fù)合物中起重要的作用的優(yōu)選的二 聚化偶體。ErbB2不結(jié)合其自身上的配體，但必需與其他受體亞型之一異源配對。ErbB3確 實(shí)具有酪氨酸激酶活性，但是其他受體的磷酸化的靶。NRG-1，ErbB2,及ErbB4的表達(dá)已知 必要于小鼠發(fā)育期間心室心肌的小梁形成。
[0010] 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白刺激補(bǔ)償性肥大性生長及抑制經(jīng)歷生理應(yīng)激的心肌細(xì)胞的凋亡。 根據(jù)這些觀察，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的施用對于防止，最小化，或翻轉(zhuǎn)由作為基礎(chǔ)的因素（例如 高血壓，缺血性心臟病，及心臟毒性）所致的充血性心臟病有用。見，例如，美國專利號 (USPN) 6, 635, 249,將其整體并入本文。
[0011] 從一般人群中心力衰竭的高發(fā)病率來看，仍有未滿足的對阻止或最小化此疾病進(jìn) 展（例如通過抑制心臟功能損失或通過改良心臟功能）的需求。
[0012] 【發(fā)明概述】
[0013] 本發(fā)明包括治療或預(yù)防哺乳動物的心力衰竭的方法。方法基于驚人的發(fā)現(xiàn)，包括 表皮生長因子-樣（EGF-樣）結(jié)構(gòu)域的肽的治療性益處可通過不維持穩(wěn)定-狀態(tài)的神經(jīng)調(diào) 節(jié)蛋白施用（例如通過用以或超過48,72,96或更多小時的施用間隔給哺乳動物施用治療 有效量的肽）的劑量方案實(shí)現(xiàn)。因此，本方法要求給哺乳動物含EGF-樣結(jié)構(gòu)域的肽的間歇 的或不連續(xù)的施用（每48~96小時，或甚至更長間隔），其中所述EGF-樣結(jié)構(gòu)域由神經(jīng)調(diào) 節(jié)蛋白基因編碼，及其中肽的施用是以對于治療或預(yù)防哺乳動物的心力衰竭有效的量。不 維持穩(wěn)定-狀態(tài)濃度的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白施用的劑量方案與更頻繁的劑量方案同樣有效，然而 無可產(chǎn)生自更頻繁的施用的不便，成本或副作用。本文所用的術(shù)語，間歇的或不連續(xù)的施用 包括以至少48小時，72小時，96小時，1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天，10天， 11天，12天，13天，14天、1周，2周，4周，1個月，2個月，3個月，4個月，或其任何組合或增 量的間隔的施劑方案，只要間隔/方案至少為48小時，72小時，96小時，1天，2天，3天，4 天，5天，6天，7天，8天，9天，10天，11天，12天，13天，14天、1周，2周，4周，1個月，2個月， 3個月，4個月。本文所用的術(shù)語間歇的或不連續(xù)的施用包括以不小于48小時，72小時，96 小時，1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天，10天，11天，12天，13天，14天、1周， 2周，4周，1個月，2個月，3個月，4個月，或其任何組合或增量的間隔的施劑方案，只要間隔 /方案不小于48小時，72小時，96小時，1天，2天，3天，4天，5天