阿魏極性分離部位在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物藥物領域，具體涉及阿魏極性分離部位在制備抗腫瘤藥物中的應 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿魏，別名：臭阿魏、細葉阿魏，傘形科、阿魏屬植物，是新疆一種獨特的藥材。高 50-100厘米，全株披白色絨毛，根肥大，圓柱形或紡錘形，有時分杈，表皮紫黑色，有臭氣，開 黃色小花。圓莖阿魏與它相比，植株要高一倍，莖直立。功能主治：消積，殺蟲，治癥瘕痞塊， 蟲積，肉積，心腹冷痛，瘧疾，痢疾。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的利用阿魏通過極性分離得到的有效部位進行抗腫瘤藥物的研制。
[0004] 阿魏極性分離部位在制備抗腫瘤藥物中的應用，所述極性分離部位為用極性溶劑 分離提取阿魏所得到的部位。
[0005] 進一步，所述極性溶劑為乙醇或石油醚。
[0006] 乙醇提取得的部位進一步用乙酸乙酯、正丁醇或甲醇極性溶劑分離。
[0007] 進一步，所述極性分離部位為先用乙醇提取阿魏，得到的提取液再用乙酸乙酯、正 丁醇或甲醇萃取得到的部位。
[0008] 進一步，所述極性分離部位為先用乙醇提取阿魏，得到的提取液再用乙酸乙酯或 正丁醇萃取得到的部位。
[0009] 進一步，所述極性分離部位為先用乙醇提取阿魏，得到的提取液再用乙酸乙酯萃 取得到的部位。
[0010] 進一步，所述腫瘤為肝癌、胃癌和/或結(jié)腸腺癌。
[0011] 阿魏極性分離部位，通過阿魏用極性溶劑提取，提取液干燥，得到所述阿魏極性分 離部位，所述極性溶劑為乙醇或石油醚。
[0012] 進一步，用乙醇提取得到提取液先用乙酸乙酯、正丁醇或甲醇萃取，所得萃取液再 經(jīng)干燥得到所述阿魏極性分離部位。
[0013] 進一步，提取液與硅藻土拌和后，再用乙酸乙酯、正丁醇或甲醇萃取。
[0014] 阿魏極性分離部位的制備方法，阿魏先用乙醇提取，所得提取液與硅藻土拌和均 勻后，再用乙酸乙酯、正丁醇或甲醇萃取，所得萃取液干燥，即得阿魏極性分離部位。
【附圖說明】
[0015] 圖1為新疆阿魏不同極性分離部位對結(jié)腸癌Caco-2的凋亡作用流式圖，其中，A : 正常對照組，B~E分別為石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、甲醇部位；
[0016] 圖2為新疆阿魏不同極性部位對胃癌MFC的凋亡作用流式圖，其中，A :正常對照 組，B~E分別為石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、甲醇部位；
[0017] 圖3為新疆阿魏不同極性分離部位對肝癌H印G2的凋亡作用流式圖，其中，A :正常 對照組，B~E分別為石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、甲醇部位；
[0018] 圖4為阿魏乙酸乙酯部位對HCT116荷瘤裸鼠的生長曲線圖。
[0019] 具體實施例方式
[0020] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。
[0021] 一、新疆阿魏極性分離部位的制備
[0022] 藥材：新疆阿魏藥材
[0023] 試劑：正丁醇（分析級，西安化學試劑廠，批號20081008)，乙醇（分析級，95%，天 津市富宇精細化工有限公司，批號20121009)，乙酸乙酯（天津市致遠化學試劑有限公司）， 石油醚（餾程：30-60°C，天津市富宇精細化工有限公司，20120103)，無水甲醇（天津市富宇 精細化工有限公司，20111227)，硅藻土（青島海洋，20081118)。
[0024] 新疆阿魏（400g)，用2000mL石油醚超聲提取40min，控溫在40°C以下，過濾，提取 液濃縮，60°C干燥至無氣泡產(chǎn)生，即得石油醚部位。
[0025] 將新疆阿魏經(jīng)石油醚提取過濾后的殘渣用乙醇超聲提取40min (料液比為I :5，g/ ml)，控溫在40°C以下，過濾，提取液減壓濃縮，濃縮液用硅藻土拌和均勻后（以硅藻土將濃 縮液吸干，成粗粉狀即可），依次用乙酸乙酯、正丁醇、無水甲醇超聲萃取5min，濾過，濾液 濃縮干燥，分別得乙酸乙酯部位、正丁醇部位、甲醇部位。
[0026] 上述乙醇提取液濃縮后，如采用傳統(tǒng)的水相-有機相進行萃取，乙醇提取物與水 接觸后會產(chǎn)生乳白色油狀物，為避免該問題以及保證成分的穩(wěn)定，本發(fā)明優(yōu)先將濃縮液與 硅藻土進行干粉拌樣。
[0027] 二、新疆阿魏極性分離部位對腫瘤細胞的抑制作用
[0028] 在初期的抗腫瘤藥物篩選和研宄中，藥物體外腫瘤細胞抑制研宄扮演著非常重要 的角色。在體外腫瘤細胞抑制方法篩選抗腫瘤藥物時，檢測的有效指標常針對細胞的生存 能力和生存狀態(tài)兩個方面，前者的是指對腫瘤細胞的直接增殖抑制作用的測定，常用的檢 測方法的有MTT法與SRB法。而后者是指對腫瘤細胞促使凋亡的作用的測定，常用的有流 式細胞術(shù)、ELISA法等。本研宄將通過SRB與流式細胞術(shù)的檢測分析新疆阿魏極性分離部 位干預下，人肝癌細胞HepG2、小鼠胃癌細胞MFC、人結(jié)腸腺癌細胞Cac〇-2的增殖抑制和凋 亡作用情況。
[0029] 2. 1實驗儀器與材料
[0030] 2. L 1實驗儀器
[0031] 超凈工作臺（中國上海智誠ZHJH-C1112B)，酶標儀（美國Thermo公司），二氧化 碳培養(yǎng)箱（美國Thermo公司），流式細胞儀（美國MILLP0RE公司，GUAVAEASYCYTE 8HT)， IOmL移液管，5mL移液管，IOOmm細胞培養(yǎng)皿，6孔板，96孔細胞培養(yǎng)板（美國COSTAR公司）， 移液器（德國eppendorf公司）。
[0032] 2. L 2實驗材料
[0033] 藥材：上述阿魏各極性分離部位。
[0034] 細胞株：人肝癌細胞H印G2、小鼠胃癌細胞MFC、人結(jié)腸腺癌細胞Caco_2(購自上海 中科院細胞研宄所，試驗使用在5-10代之間）。
[0035] 試劑：DMEM 高糖、RPMI1640 培養(yǎng)液（美國 Gibco 公司，批號 1346370U237839)， 胎牛血清（美國Hyclone公司批號F120121)，青鏈霉素混合液（美國Hyclone公司，批號 J120051)，0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液（北京Solarbio公司，批號120913)，DMSO(美 國 Sigma 公司，批號 67685TT)，PBS (美國 Hyclone 公司，批號 NYC0830)，SRB (美國 Sigma 公 司，批號20223FAV)，三氯乙酸（分析級，天津市百世化工有限公司，批號20100102)，冰乙酸 (分析級，天津市百世化工有限公司，批號20121103)。
[0036] 2.2實驗方法
[0037] 2. 2. I SRB法測定新疆阿魏不同極性分離部位對結(jié)3種腫瘤細胞的增殖抑制作用
[0038] 2