含有病毒的配制物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物學(xué)活性材料如基于病毒的材料（例如病毒、病毒顆粒、病毒疫 苗……）的配制物，或者更精確地，涉及適于其貯存的配制物的領(lǐng)域。本發(fā)明還涉及這種配 制物的制備。更精確地，本發(fā)明涉及一種配制物，其包含（i)基于病毒的材料，（ii)選自聚 乙烯吡咯烷酮及其衍生物的至少一種聚合物，（iii)至少一種糖，（iv)至少兩種不同的氨 基酸，（V)至少兩種藥物可接受的鹽，其中至少一種所述鹽是磷酸鹽，及任選地，（Vi)藥物 學(xué)可接受的緩沖液。更特別地，本發(fā)明的配制物適于干燥加工，更特別是冷凍干燥加工。本 發(fā)明進(jìn)一步涉及獲得的干燥產(chǎn)物，及更特別是獲得的冷凍干燥的產(chǎn)物。本發(fā)明的配制物和 干燥產(chǎn)物可用作疫苗以預(yù)防和/或治療疾病如癌癥、自身免疫疾病和感染性疾病。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 在例如制藥工業(yè)中使用的生物學(xué)活性材料的貯存和運輸存在問題，因為這些材料 容易降解，特別是熱降解。特別地，這在生物學(xué)活性材料如疫苗的情況中確實如此，所述疫 苗可在世界范圍內(nèi)分布，并且因此需要根據(jù)分布的國家而經(jīng)受不同溫度或者經(jīng)受轉(zhuǎn)運期間 的溫度變化。這進(jìn)一步限制了所述生物學(xué)材料在基礎(chǔ)設(shè)施有限的發(fā)展中國家的分布。
[0004] 基于病毒的材料，包括病毒、病毒顆粒、病毒疫苗的治療活性要求在貯存和/或運 輸期間保持其結(jié)構(gòu)完整性，以使其具有感染性和/或生物學(xué)活性。
[0005] 基于病毒的材料的結(jié)構(gòu)完整性在配制過程中通常被損害，因此妨礙其治療應(yīng)用。 所述治療活性進(jìn)一步要求病毒滴度喪失及特別是感染性滴度喪失是有限的。
[0006] 因此開發(fā)新的方法或配制物以使用于工業(yè)化應(yīng)用如疫苗的生物學(xué)活性材料穩(wěn)定、 改善這些生物學(xué)材料的貯存和運輸能力是制藥工業(yè)的持續(xù)目標(biāo)。
[0007] 已經(jīng)提出的一種方案是將生物學(xué)活性材料維持在特定溫度范圍內(nèi)，特別是在較低 溫度，即低于〇°C，特別是直至-30°c及更優(yōu)選直至-80°c。這種超低溫貯存不僅非常昂貴， 而且產(chǎn)生顯著的貯存、轉(zhuǎn)運和臨床應(yīng)用的不便。因此，開發(fā)可以在冷藏條件貯存的配制物是 必需的。
[0008] 根據(jù)一種選擇，已經(jīng)提議所述生物學(xué)活性材料與動物或人來源添加劑，如白蛋白、 蛋白胨、明膠或尿素交聯(lián)明膠，一起配制。然而，這些成分的使用由于安全性問題而受限，如 過敏反應(yīng)的危險或感染性物質(zhì)（例如BSE (牛海綿狀腦病））污染或傳播的危險。此外，這 種方案通常是昂貴的，因此與工業(yè)化生產(chǎn)不相容。
[0009] 此外，假設(shè)基于病毒的材料當(dāng)以液體形式在冷藏條件下貯存很長時間不保持其感 染性。結(jié)果，關(guān)于在冷藏條件下以液體形式配制和貯存病毒尚無報道的研宄。因此，仍需要 長期貯存穩(wěn)定的病毒制備物配制物。
[0010] 另一選擇是以干燥形式保存生物學(xué)活性材料，特別是基于病毒的材料。在可利用 的干燥生物材料的技術(shù)中，冷凍干燥（也稱作凍干法）代表生產(chǎn)生物學(xué)藥物如疫苗的關(guān)鍵 步驟。冷凍干燥使得干燥的生物學(xué)產(chǎn)物在大約4°C -8°c是穩(wěn)定的，及在一些情況中在直至 大約25°C是穩(wěn)定的。凍干法已經(jīng)廣泛用于改良各種病毒疫苗和重組蛋白質(zhì)產(chǎn)物的穩(wěn)定性。
[0011] 冷凍干燥方法包括以下連續(xù)步驟，冷凍生物學(xué)材料的溶液或懸浮液及隨后進(jìn)行初 級和次級干燥步驟（參見Adams, 2007, Methods Mol. Biol. 368, 15-38)。基本上，這種技術(shù) 基于水在零下溫度在真空下的升華而無溶液熔化。然而，水蒸氣從冷凍的生物學(xué)材料中的 擴(kuò)散速率非常低，因此該程序很耗時。此外，冷凍和干燥階段引入脅迫例如鹽濃度、沉淀/ 結(jié)晶、剪應(yīng)力、極端pH、通過冷凍干燥方法保留的殘余水分……），其迫使生物學(xué)材料經(jīng)歷明 顯的化學(xué)和物理改變，及對于一些生物學(xué)材料如基于病毒的材料造成極大損害。因此適合 的配制物以在干燥期間及有利地進(jìn)一步在貯存和/或運輸期間保存該生物學(xué)活性材料是 必需的。
[0012] 現(xiàn)有技術(shù)領(lǐng)域提供了用于冷凍干燥生物學(xué)材料、更精確地是基于病毒的材料的配 制物的實例。
[0013] 為了限制脊髓灰質(zhì)炎病毒制備物的感染性滴度喪失，W089/06542提議在37°C在 存在由10%海藻糖作為唯一防護(hù)劑的穩(wěn)定化溶液的條件下干燥病毒原液。然而，感染性滴 度的下降仍很大且高于對非干燥的疫苗的觀測結(jié)果。
[0014] EP 0 872 249描述了重組病毒載體制備物，其包含谷氨酸或其鈉鹽和葡萄糖的組 合。
[0015] WO 95/10601揭示了水性重組病毒溶液，其包含糖、高分子量結(jié)構(gòu)添加劑、氨基酸、 緩沖液和水。
[0016] WO 03/053463揭示了痘苗病毒配制物，其包含蔗糖、葡聚糖、谷氨酸和無磷酸鹽的 緩沖液。
[0017] WO 2005/066333描述了一種病毒組合物，其包含尿素、糖、鹽、緩沖液、分散劑以及 必需和非必需氨基酸的混合物。
[0018] WO 2007/056847揭示了含有病毒的配制物，其包含蔗糖、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷 酮、尿素、TRIS緩沖液、谷氨酸一鈉及另一氨基酸如精氨酸、丙氨酸、絲氨酸或甘氨酸。
[0019] W02008/114021和W02011/121306描述了病毒組合物，其包含聚乙烯亞胺化合物， 任選地，與一或多種糖組合。
[0020] 然而，仍需要一種新的配制物，使得可以穩(wěn)定生物學(xué)材料，特別是基于病毒的材 料，使得可以工業(yè)化應(yīng)用、貯存而不影響產(chǎn)物的生物學(xué)活性，更特別是避免病毒滴度喪失。
[0021] 本發(fā)明提供了含有基于病毒的材料的配制物，更特別是適于冷凍干燥的水性配制 物。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的配制物在如后文定義的長期穩(wěn)定性測試中，更特別是在 貯存期間在溫度高于〇°C，特別是在大約4°C -30°c之間，優(yōu)選在大約4°C -25°c之間，更優(yōu)選 在大約2°C -8°C之間及更優(yōu)選在大約4°C -5°C之間（例如冷藏溫度）是穩(wěn)定的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0022] 配制物
[0023] 根據(jù)第一個實施方案，本發(fā)明涉及一種配制物，其包含（i)至少一種基于病毒的 材料，（ii)選自聚乙烯吡咯烷酮及其衍生物的至少一種聚合物，（iii)至少一種糖，（iv)至 少兩種不同的氨基酸，（V)至少兩種藥物可接受的鹽，其中至少一種所述鹽是磷酸鹽，及任 選地，（vi)藥物可接受的緩沖液。
[0024] 除非另外指出，在本申請中使用的如下術(shù)語具有如下含義。
[0025] 在本文中"和/或"包括"和"、"或"及"該術(shù)語聯(lián)系的要素的所有或任何其它組合" 的含義。
[0026] "包含（comprising) "和"包含（comprise) "是指材料、產(chǎn)物、配制物、組合物和方 法包括引用的成分或步驟，但是不除外其它。"基本由…組成（consisting essentially of)"和"基本由…組成（consist essentially of)"當(dāng)用于定義產(chǎn)物、組合物和方法時， 是指排除任何本質(zhì)意義的其它成分或步驟。因此，例如基本由所列舉的成分組成的組合物 不排除微量的污染物和藥物可接受的載體。"由…組成（consisting of)"和"由…組成 (consist of) "是指排除超過微量要素的其它成分或步驟。
[0027] 如本文使用，"大約"或"近似"是指在指定數(shù)值或范圍的10%，更優(yōu)選在5%以內(nèi)。 根據(jù)這個定義的特定實施方案，"大約X"也包括X。
[0028] 根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的配制物是水性配制物。這種配制物，特別是冷凍干 燥的，適于貯存在冷藏溫度或者貯存在非冷藏溫度（例如室溫）。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明，"基于病毒的材料或產(chǎn)物"是指病毒、病毒顆粒、病毒載體和病毒疫 苗。這些術(shù)語是同義詞且可互換使用。該術(shù)語包括野生型病毒、殺滅、活的減毒的、失活的 和重組的病毒。其進(jìn)一步包括基于病毒的產(chǎn)物，如病毒載體、病毒顆粒如病毒樣顆粒（VLPs) 或核殼體。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明，"病毒"優(yōu)選涉及在疫苗中使用的那些病毒，更優(yōu)選DNA病毒，如腺病 毒科、皰瘆病毒科和痘病毒科。
[0031] 根據(jù)更優(yōu)選的實施方案，"病毒"是指痘病毒載體。本發(fā)明的痘病毒更優(yōu)選是指 脊索痘病毒（Chordopoxvirus)(脊椎動物痘病毒）。脊索痘病毒包括但不限于正痘病毒、 副痘病毒、禽痘病毒、羊痘病毒、兔痘病毒（Lepripoxvirus)、豬痘病毒、軟琉痘病毒或者 亞塔痘病毒。本發(fā)明優(yōu)選的脊索痘病毒是正痘病毒。根據(jù)另一個優(yōu)選的實施方案，其選 自痘苗病毒，合適的痘苗病毒包括但不限于Copenhagen毒株（Goebel et al.，1990，Vir ol. 179, 247-266and517-563 Johnson et al.，1993, Virol. 196, 381-401)、Wyeth 毒株、 Elstree、Western Reserve (WR)、IHDJ，及其衍生的高度減毒的病毒包括MVA、NYVAC(見 TO 92/15672-Tartaglia et al·，1992, Virology, 188, 217-232)。所述載體也可以得自痘 病毒科任何其它成員，特別是鳥痘病毒（例如TR0VAC，見Paoletti et al，1995, Dev Biol Stand.，84, 159-163)、金絲雀痘病毒（例如 ALVAC, WO 95/27780, Paoletti et al, 1995, Dev Biol Stand.，84, 159-163)、鴿子痘病毒、豬痘病毒等。
[0032] 根據(jù)一個實施方案，所述病毒載體是能復(fù)制的載體，其能感染哺乳動物細(xì)胞，特別 是分裂細(xì)胞（即溶瘤載體），及更特別是選自痘苗病毒毒株Copenhagen或WR的能復(fù)制的痘 病毒載體（見例如 W02009/065547、W02009/065546 或 W09531105)。
[0033] 根據(jù)另一個實施方案，所述病毒載體是減毒的痘病毒，特征在于其在人細(xì)胞系中 再生性復(fù)制能力喪失。
[0034] 根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的基于病毒的材料是選自痘苗病毒（VV)和修飾的 痘苗病毒安卡拉（MVA)的病毒或病毒顆粒。
[0035] 優(yōu)選的 VV 可以是如專利申請 W02009/065546、W02009/065547 或 W095/31105 中描 述的VV，上述申請描述了具有免疫刺激細(xì)胞因子GM-CSF或者具有自殺基因的VV。
[0036] 本發(fā)明優(yōu)選用修飾的痘苗病毒安卡拉（MVA)進(jìn)行（Sutter et al.，1994, Vaccine, 12, 1032-40)。典型的MVA毒株是MVA 575,其保藏在歐洲動物細(xì)胞培養(yǎng) 物保藏中心，保藏號為ECACC V00120707。根據(jù)本發(fā)明可用的MVA毒株的其它例子是保藏在 CNCM的保藏號為N° 1-721的MVA毒株，保藏在ECACC的保藏號為V00083008. MVA 11/85的 MVA-BN，保藏在ECACC的保藏號為V94012707的MVA-572,或者任一這種病毒的衍生物。
[0037] 如前文定義，本發(fā)明的病毒可以是野生型、減毒的或重組病毒，更優(yōu)選是重組痘病 毒。
[0038] 術(shù)語"重組"病毒是指這樣的病毒，特別是痘病毒，其包含插入其基因組中的外源 序列。如本文所用，外源序列是指不天然存在于親代病