一種燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體凍干粉及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于緩控釋制劑領(lǐng)域，特別涉及一種燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體凍干粉及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]燈盞花素是從燈盞花中提取的黃酮類有效成分，主要成分為燈盞乙素、少量燈盞甲素及其他黃酮苷類成分，系治療心腦血管、心絞痛等系列疾病的有效藥物，在臨床上主要治療腦血栓、腦梗塞、中風(fēng)后癱瘓、冠心病、心絞痛等疾病，療效確切。燈盞花素中主要成分燈盞乙素水溶性差，口服生物利用度較低，據(jù)報道，Beagle犬隨機口服燈盞乙素，口服絕對生物利用度僅(0.40±0.19) %，幾乎不吸收。燈盞花素注射液一般是在偏堿性條件下配制而成，臨床給藥時容易產(chǎn)生沉淀等問題給臨床用藥帶來了不安全因素，而且，燈盞花素靜注半衰期短，為(52 ±29) min，需要頻繁給藥。燈盞花素主要用于心腦血管領(lǐng)域慢性病的治療，需要長期用藥，無論是注射還是口服，長期頻繁給藥都會帶來病人依從性差的問題。
[0003]多囊脂質(zhì)體是一種結(jié)構(gòu)特殊的脂質(zhì)體制劑，由英國學(xué)者kim于1983年首先制得并命名，其結(jié)構(gòu)具有許多非同心的類脂及磷脂雙分子層所分割的水性囊泡，這種脂質(zhì)體裝載藥物后，注射進入人體即形成藥物儲庫，藥物釋放需要透過類脂及磷脂雙分子層的層層阻隔，產(chǎn)生良好的緩釋作用。目前已有硫酸嗎啡多囊脂質(zhì)體、阿糖胞苷多囊脂質(zhì)體及布比卡因多囊脂質(zhì)體先后獲FDA批準(zhǔn)上市，顯示了多囊脂質(zhì)體作為藥物緩釋給藥載體的巨大潛力，盡管如此，多囊脂質(zhì)體作為藥物的緩釋載體仍然存在一些不足，首先，目前研宄的多囊脂質(zhì)體多為混懸液，粒徑較大，通常為Ι-lOOMffl，貯存過程中容易沉降聚集，不利于保存和運輸；冷凍干燥可以使脂質(zhì)體混懸液固態(tài)化，臨用前加水復(fù)溶來形成脂質(zhì)體混懸液，避免脂質(zhì)體作為混懸液保存時的諸多不穩(wěn)定性，通常被用來提高脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性。然而對于多囊脂質(zhì)體而言，由于其粒徑較普通脂質(zhì)體大，結(jié)構(gòu)中含有許多水性囊泡，其包封的水相體積約占整個多囊脂質(zhì)體體積的95%，因此冷凍干燥對多囊脂質(zhì)體的破壞較為嚴(yán)重，凍干過程藥物滲漏嚴(yán)重，凍干后難以恢復(fù)至凍干前的狀態(tài)，這便是目前研宄的多囊脂質(zhì)體多為混懸液的原因。其次，多囊脂質(zhì)體內(nèi)部囊泡在體內(nèi)外也會出現(xiàn)部分破裂、合并而導(dǎo)致藥物滲漏。
[0004]因此，如果采取措施改善多囊脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，減少多囊脂質(zhì)體冷凍干燥過程中藥物的滲漏，提供一種體內(nèi)外穩(wěn)定、包封率高的燈盞花素多囊脂質(zhì)體凍干制劑，使燈盞花素緩慢釋放，對于心腦血管領(lǐng)域慢性病的治療或輔助治療意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題就是針對目前燈盞花素口服吸收差，注射半衰期短，多囊脂質(zhì)體作為緩控釋給藥載體的穩(wěn)定性差的缺陷，提供一種含有燈盞花素的內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體凍干制劑，包封率高、釋放燈盞花素緩慢，體外穩(wěn)定性好，大大減少用藥次數(shù)和頻率。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種含有燈盞花素的內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體凍干粉，其成分包括下列重量份的各組分:燈盞花素I份、中性磷脂0.95-1.18份、負(fù)電荷磷脂0.025-0.25份、膽固醇0.25-1份、三酸甘油酯0.15-0.25份、蔗糖0.125-1份、內(nèi)水相輔助乳化劑0.163-0.263份、泊洛沙姆407 9.5-11份、泊洛沙姆188 0.25-1.75份、葡萄糖0.5-1.25份、外水相輔助乳化劑0.1-0.15份、支持劑6_14份。
[0007]本發(fā)明中，泊洛沙姆188與泊洛薩姆407屬于溫敏性凝膠材料，其包封于多囊脂質(zhì)體內(nèi)水相可發(fā)揮兩方面作用:一方面，在生理溫度下可形成凝膠，發(fā)揮多囊脂質(zhì)體內(nèi)部囊泡的內(nèi)相支撐作用，減少囊泡的聚合、破裂，提高多囊脂質(zhì)體穩(wěn)定性及釋藥平穩(wěn)性；另一方面，多囊脂質(zhì)體冷凍干燥過程中，隨內(nèi)部囊泡水分的升華，聚合物在囊泡內(nèi)部析出并形成一種網(wǎng)格樣骨架結(jié)構(gòu)，藥物被包裹于這種骨架結(jié)構(gòu)中，滲漏少，提高多囊脂質(zhì)體冷凍干燥過程中的穩(wěn)定性。
[0008]本發(fā)明中，所述中性磷脂是指處于中性pH時整個分子的凈電荷為零的磷脂。所述的中性磷脂可以是卵磷脂、大豆磷脂、氫化大豆磷脂、磷脂酰膽堿、腦磷脂、鞘磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一種或幾種。
[0009]本發(fā)明中，所述負(fù)電荷磷脂是指處于中性pH時整個分子帶負(fù)電荷的磷脂，負(fù)電荷磷脂可以是磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、磷脂酸二棕櫚酰磷脂酸和二硬脂酰磷脂酸中的一種或幾種，優(yōu)選為磷脂酰甘油。
[0010]本發(fā)明中，三酸甘油酯參與形成多囊脂質(zhì)體拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，其在多囊脂質(zhì)體內(nèi)部囊泡之間起支架作用，所述的三酸甘油酯選自三油酸甘油酯、三辛酸甘油酯中的一種或兩種。
[0011]本發(fā)明中內(nèi)水相輔助乳化劑與外水相乳化劑發(fā)揮膜穩(wěn)定作用，減少多囊脂質(zhì)體制備過程中復(fù)乳的聚合、破裂，所述的內(nèi)水相輔助乳化劑及外水相輔助乳化劑均選自賴氨酸、甘氨酸、組氨酸、聚乙烯醇、右旋糖酐、羥甲基淀粉、羥乙基淀粉、明膠、海藻酸鈉和聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。
[0012]本發(fā)明中支持劑是多囊脂質(zhì)體冷凍干燥過程中的保護劑，所述支持劑選自山梨醇、甘露醇、蔗糖、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖中的一種或幾種。
[0013]本發(fā)明還提供燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，其特征在于:包括下列步驟:
1、按重量份計將中性磷脂0.95-1.18份、負(fù)電荷磷脂0.025-0.25份、膽固醇0.25-1份、三酸甘油酯0.15-0.25份溶解于氯仿-乙醚(1:1)，作為脂質(zhì)相，使中性磷脂在脂質(zhì)相中的濃度為 19-23.5mg/ml ；
2、按重量份計將蔗糖0.125-1份、內(nèi)水相輔助乳化劑0.163-0.263份、泊洛沙姆4079.5-11份、泊洛沙姆188 0.25-1.75份、燈盞花素I份溶解于水中，調(diào)Ph7.0作為內(nèi)水相，使燈盞花素的終濃度為20mg/ml ；
3、按重量份計將葡萄糖0.5-1.25份、外水相輔助乳化劑0.1-0.15份溶解于水中，作為外水相，使葡萄糖濃度為5-12.5mg/ml ；
4、將內(nèi)水相緩慢加入脂質(zhì)相上層，所述內(nèi)水相和脂質(zhì)相的體積比為1:(1-1.2)，高速剪切形成油包水型乳液； 5、將上述乳液加入到外水相中，所述乳液與外水相的體積比為1:(1-2)，高速剪切形成水包油包水型復(fù)乳；
6、將復(fù)乳氮氣吹干除去其中的氯仿、乙醚，即得燈盞花素多囊脂質(zhì)體混懸液；
7、將步驟6所得燈盞花素多囊脂質(zhì)體混懸液1500rpm條件下離心，每次用2倍于步驟5所用外水相體積的生理鹽水沖洗，共沖洗3次，得燈盞花素多囊脂質(zhì)體；
8、按重量份計將6-14份支持劑溶解于水中，與步驟7燈盞花素多囊脂質(zhì)體混合，使支持劑終濃度為30mg/ml-70mg/ml，冷凍干燥。
[0014]本發(fā)明中，所述高速剪切條件為:高速剪切勻漿機在1000rpm的轉(zhuǎn)速下作用8min0
[0015]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，其具有以下優(yōu)點(I)延緩藥物釋放。本發(fā)明燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體進入體內(nèi)后，遇生理溫度，內(nèi)水相即形成凝膠，藥物釋放需要通過凝膠的擴散和磷脂雙分子層的層層阻隔，釋藥緩慢；(2)提高體內(nèi)穩(wěn)定性。本發(fā)明燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體進入體內(nèi)后，遇生理溫度，內(nèi)水相即形成凝膠，囊泡內(nèi)部凝膠的形成降低了囊泡內(nèi)水相的流動性，同時形成了支撐磷脂雙分子層的實體結(jié)構(gòu)，降低磷脂雙分子層流動性，減少囊泡破裂及相互融合；(3)降低滲透壓對藥物釋放的影響。內(nèi)相膠凝降低了磷脂雙分子層膜內(nèi)外流動性，減弱了滲透壓變化對藥物釋放的影響，提高了藥物釋放的穩(wěn)定性。
(4)提高多囊脂質(zhì)體冷凍干燥過程中的穩(wěn)定性。冷凍干燥過程中，隨內(nèi)部囊泡水分的升華，聚合物在囊泡內(nèi)部析出并形成一種網(wǎng)格樣骨架結(jié)構(gòu)，藥物被包裹于這種骨架結(jié)構(gòu)中，滲漏少，有望實現(xiàn)多囊脂質(zhì)體混懸液的粉末化。
【附圖說明】
[0016]圖1為實施例1制得的多囊脂質(zhì)體400倍光學(xué)顯微鏡下外觀形態(tài)圖。
[0017]圖2為實施例1制得的多囊脂質(zhì)體經(jīng)激光粒度儀分析的粒徑分布示意圖。
[0018]圖3為效果實施例1中燈盞花素內(nèi)相凝膠化多囊脂質(zhì)體體外累積釋放曲線圖。
[0019]圖4為對比實施例1中燈盞花素普通多囊脂質(zhì)體體外累積釋放曲線圖。
【具體實施方式】
[0020]下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。
[0021]對以下實施例制備的多囊脂質(zhì)體進行質(zhì)量檢測如下。
[0022]1.色譜條件
色譜柱:kromasil C18柱(250 X 4.6mm，5 μ m);流動相:甲醇:乙腈:水:磷酸(40:
10: 50: 0.1);檢測器:紫外檢測器;檢測波長:335nm ;柱溫:室溫；流速:lml/min ;進樣量:20 μ Lo
[0023]2.包封率測定
將多囊脂質(zhì)體凍干粉加適量注射用水復(fù)溶得多囊脂質(zhì)體混懸液，取等量的多囊脂質(zhì)體混懸液兩份，一份混懸液置于離心機中于1500r/min離心，收集上層清液，高效液相色譜法測定藥物濃度Cl，另一份用流動相溶解破乳，高效液相色譜法測定藥物濃度C2，包封率按下式計算:包封率=1- (C1/C2) X 100%ο
[0024]3.粒子形態(tài)及粒徑分布
將多囊脂質(zhì)體凍干粉加適量注射用水復(fù)溶得多囊脂質(zhì)體混懸液，激光粒度儀測量平均粒徑與粒徑分布，光學(xué)顯微鏡觀察粒子形態(tài)。
[0025]4.燈盞花素長效乳劑體外釋放度測定
將多囊脂質(zhì)體凍干粉加適量注射用水復(fù)溶得多囊脂質(zhì)體混懸液，取等量的燈盞花素長效乳劑混懸液兩份，一份混懸液適量置于透析袋中(截留分子量500000)，透析袋兩端扎緊置于等滲釋放介質(zhì)中(Ph7.2磷酸鹽緩沖液，含0.5%Vc及0.01%疊氮鈉)，37°C水